专利名称：一种用于肿瘤血管靶向治疗的疏水剂及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种用于肿瘤血管靶向治疗的疏水剂，及其制备方法和在肿瘤血管附近利用界面浸润性来控制血管的营养从而抑制肿瘤细胞生长甚至杀死癌细胞的用途。
背景技术：
国内外治疗癌症的药品种类繁多，但绝大多数对实体癌症没有明显的疗效，主要原因是该类药物在杀伤癌细胞的同时亦能杀伤正常细胞，对患者骨髓和消化道造成严重损伤，因而，许多病人常因毒性反应严重而中断治疗。此外，还有许多病人在接受过手术、放疗、化疗，基本痊愈出院后，仍面临着复发和转移的危险。
近年来，应用靶向技术向肿瘤区域精确递送药物的“靶向治疗”和利用肿瘤特异的信号传导或特异代谢途径控制的“靶点治疗”成为肿瘤研究的热点。
根据靶向部位的不同，又可以将肿瘤“靶向治疗”分为二大类，即肿瘤细胞靶向治疗和肿瘤血管靶向治疗。肿瘤细胞靶向治疗是利用肿瘤细胞表面的特异性抗原或受体作为靶向，这种方法虽然可以针对肿瘤细胞的单克隆抗体的靶向特性在某种程度上提高了局部肿瘤组织内的浓度，但由于这些药物大分子物质要到达肿瘤细胞靶区，仍然需要通过血管内皮细胞屏障，这一过程是相对缓慢的。而肿瘤血管靶向治疗则是利用肿瘤区域新生毛细血管内皮细胞表面的特异性抗原或受体起作用。这类药物在给药后可以迅速积聚在靶标部位，具有很大的优势。
恶性肿瘤的生长和转移与肿瘤区域的血管密切相关，肿瘤区域的新生毛细血管是肿瘤赖以生长和生存的物质基础，肿瘤细胞需要新生血管为迅速生长的肿瘤提供营养和排出代谢废物。早在七十年代初就有人提出把抑制肿瘤血管的形成作为肿瘤治疗的一个途径，随后这种以肿瘤血管为靶标的治疗策略——肿瘤血管靶向治疗(Tumorvascular targetingtherapy)逐步发展成为当今肿瘤领域研究的主攻方向之一。血管靶向治疗的前提就是在肿瘤新生血管内皮细胞表面必须存在组织特异的分子作为靶向治疗的靶标，而通过这些靶标，抑制肿瘤区域的血管形成从而可以控制肿瘤的生长。
但是现有的肿瘤血管靶向治疗措施尚处于实验研究或临床试用阶段，还存在着不少问题；如用抗血管生成治疗后，肿瘤细胞可以产生耐受性，停止用药后，肿瘤便又开始复发生长，另外，抗血管生成剂还有一些不良反应作用，如影响伤口愈合等，且其疗效的综合评价也还有待于长期的临床观察证实。
发明内容
本发明的目的在于克服现有的肿瘤血管靶向治疗使用的抗血管生成剂会使肿瘤细胞产生耐受性，停止用药后肿瘤又复发，且抗血管生成剂还有一些不良反应的缺陷，从而提供一种仅仅借助于不同浸润条件下表面张力存在差异的原理来控制肿瘤细胞营养，目标性强，用量较低，副作用低，不会产生耐药性的用于肿瘤血管靶向治疗的疏水剂，及其制备方法和用途。
本发明的目的是通过如下的技术方案实现的本发明提供一种用于肿瘤血管靶向治疗的疏水剂，它是由生物相容性载体、疏水剂以及相应的抗体组成，所述的疏水剂与生物相容性载体按摩尔比10-6～10-2∶1以化学键的方式连接；所述的抗体与生物相容性载体按摩尔比10-7～10-2∶1以物理或者化学的相互作用连接。
所述的生物相容性载体为聚乙烯醇、硬脂酰葡聚糖、N-异丙基丙烯酰胺、壳聚糖及其衍生物、1，6-己二异氰酸酯胆固醇单酯、聚二甲基硅氧烷基甲基丙烯酸酯、聚丙交脂(PLA)、聚已交脂(PGA)、聚己内脂(PCL)、聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)、纤维素、纤维素-聚乙烯、聚羟基丙酸脂、明胶以及它们之间的共聚物、或聚甲基丙烯酸羟乙酯-聚丁二烯共聚物等含有亲水与疏水基团的天然产物、合成产物以及不同单体的共聚物。
所述的疏水剂为氟硅烷、氟代有机硅氧烷(CnF2n+1X)2N[CH2CH2N(CnF2n+1X)]yCH2CH2CH2Si(OR)3，其中y＝0，1或2，n＝2～10的整数，R＝-CH3或-C2H5，X＝-CH2CH2-或-SO2NR1CH2CH2-，R1为H或C1～C4的烷基；硅酸酯(CH3)mSi(OR4)4-m，其中R4＝-CH3或-C2H5，m＝0，1或2；全卤代烷、大于C7的长链羧酸、氟烷基烷氧基硅烷、丙烯酸聚合物改性蜡、氟化丙烯酸等。
所述的全卤代烷为CF2ClCFCl2，CF2ClCF2Cl，CFCl2CFCl2，或CF3CCl3。
所述的抗体为低密度脂蛋白、叶酸及其衍生物、以半乳糖为端基的糖蛋白、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、血小板源性生长因子(PDGF)、抗体AA98、抗体(OX-26)融合蛋白、蛋白质、磷脂、脂质体、胶原蛋白、或单克隆抗体等。
本发明提供一种上述用于肿瘤血管靶向治疗的疏水剂的制备方法，包括如下的步骤1)将浓度为10-6～10-1mg/ml的疏水剂溶液和0.05～5mg/ml的生物相容性载体溶液进行混合，所加入的疏水剂与所加入的生物相容性载体的摩尔比为10-5～10-1∶1，在40～70℃下老化1～5小时，生物相容性载体和疏水剂之间以化学键的方式紧密连接；2)然后将步骤1)得到的混合液冷却至室温，加入0.001～1mg/ml的抗体溶液，所加入的抗体与步骤1)中加入的生物相容性载体的摩尔比为10-6～10-1∶1，搅拌均匀，室温下老化1～3个小时，抗体与生物相容性载体间通过物理或者化学的相互作用进行连接；3)在常温下将混合液的总体积减压浓缩到原来体积的1/2，滤出其中的固体，冷冻干燥，得到本发明中用于肿瘤血管靶向治疗的疏水剂。
本发明提供的靶向疏水剂可以用于制备肿瘤血管靶向治疗药物。其原理在于本发明提供的靶向疏水剂将疏水剂与相应的抗体同时键合于生物相容性的载体上，通过靶向疏水剂上的抗体去特异性地结合肿瘤新生血管内皮细胞表面的靶标，这样就能利用载体上键合的疏水剂在血管内形成亲疏水的界面，然后根据亲疏水界面的压强差可以控制肿瘤部分的血液供应，以此控制肿瘤生长所需的营养，从而达到抑制肿瘤细胞生长或者“饿死”癌细胞的目的，实现防癌抗癌的功效。
选取不同管径的人工血管来评价本发明提供的用于肿瘤血管靶向治疗的疏水剂的效果，具体步骤如下1)采用常规的浸渍提拉法使用抗原或者受体在端部修饰人工血管，将不同管径的人工血管浸渍在0.1～4.0mg/ml的抗原或者受体溶液中，提拉速度为2～10mm/s，然后在20～38℃下老化10～200分钟，再将修饰好的人工血管垂直固定在有刻度的面板上，修饰端朝下；所述的人工血管的材料为聚对苯二甲酸甲酯、聚四氟乙烯、硅橡胶、聚氨酯、涤纶、聚乙醇酸、聚乳酸，其管径为1～300μm；所述的抗原或者受体为酪氨酸激酶受体、低密度脂性光敏剂、叶酸受体、去唾液酸糖蛋白受体、血管内皮黏附分子CD146、转铁蛋白受体；2)将本发明的靶向疏水剂配成0.0001～1mol/l的溶液，把人工血管的修饰端在上述的靶向疏水剂溶液中浸泡10分钟，然后在室温下老化30分钟，使得抗体与抗原进行特异性结合，这样疏水剂就会在特定的目标区域富集；再把pH值为7的磷酸缓冲溶液(PBS)从人工血管的未修饰端慢慢加入到带有疏水剂的管中就会在管内形成亲疏水的界面，当人工血管修饰端滴出第一滴液体时，记录管中的溶液高度；3)根据压强公式P＝ρgh可以计算出浸润界面可以阻挡的流体压力。
采用上述方法，可知本发明提供的靶向疏水剂阻挡流体压力的范围为10～35mmHg。根据表1所列数值可以看出，本发明提供的靶向疏水剂可以阻挡毛细血管中的血流，起到阻碍甚至切断肿瘤细胞生长所需要的营养，从而达到控制肿瘤细胞的生长，甚至杀死癌细胞的目的。
表1不同血管中血压的平均值
(摘自《生理学基础实验》，J.G.毕晓普，H.L.多尔曼，科学出版社，1985年，P120)与现有技术相比，本发明使用具有生物相容性的载体、疏水剂和相关抗体形成靶向疏水剂，首次提供了一种可以利用界面浸润性来控制细胞营养，从而达到抗癌目标的新型药物，其优点在于(1)该发明仅仅通过物理的方法，借助于不同浸润条件下表面张力存在差异的原理来控制肿瘤细胞营养，不仅能够降低增殖性疾病的发病率和死亡率，而且还降低了由治疗引起的副作用；(2)通过调节靶向疏水剂的种类或者用量，以此调节肿瘤血管中血液的流量，控制肿瘤细胞生长所需要的营养，可以达到抑制肿瘤细胞的生长，甚至杀死癌细胞的目的；(3)本发明采用靶向技术确定肿瘤区域，目标性强，同时不需要键合抗癌药物，特别适合于对药物治疗具有耐药性的肿瘤患者，大大降低了现有治疗方法引起的副作用；(4)本发明还适合于预防肿瘤的转移性扩散和微转移的生长或发展，从而达到抗癌防癌的目的；(5)本发明采用的靶向疏水剂的用量较低，使用的频率也较低，这符合患者的期望和要求。
具体实施例方式
实施例1将0.0005mg/ml的正癸烷基酸(疏水剂)的乙醇溶液和0.05mg/ml的壳聚糖(生物相容性载体)的醋酸溶液进行混合，二者的体积比为0.001∶1(所加入的正癸烷基酸与所加入的壳聚糖的摩尔比为10-5∶1)，在40℃下老化5小时，生物相容性载体和疏水剂之间以化学键的方式紧密连接；然后将此混合液冷却至室温，加入1mg/ml的低密度脂蛋白胆固醇溶液(抗体)，所加入的抗体与混合液中壳聚糖的摩尔比为10-6∶1，搅拌均匀，室温下老化3个小时，胆固醇与壳聚糖间通过物理或者化学的相互作用进行连接；在常温下将混合液的总体积减压浓缩到原来体积的1/2，滤出其中的固体，冷冻干燥，得到本发明中用于肿瘤血管靶向治疗的疏水剂。
采用前述的浸渍提拉法修饰管径为100μm聚乙醇酸人工血管，将聚乙醇酸人工血管浸渍在含有2.0mg/ml的低密度脂性光敏剂的细胞溶液中，提拉速度为2mm/s，然后在25℃下老化30分钟，再将修饰好的人工血管垂直固定在有刻度的面板上，修饰端朝下；将本实施例得到的靶向疏水剂用醋酸配成0.001mol/l的溶液，再用稀碱溶液将pH值调到6，把人工血管的修饰端在上述的靶向疏水剂溶液中浸泡10分钟，然后在室温下老化30分钟；本发明提供的靶向疏水剂由于低密度脂蛋白胆固醇和低密度脂性光敏剂的特异性结合，而富集到修饰好的人工血管端部，其上的正癸烷基酸可以与人工血管内的流体形成亲疏水的界面；再将pH值为7的磷酸缓冲溶液(PBS)慢慢加入管中，当人工血管修饰端滴出第一滴液体时，记录管中的溶液高度；根据压强公式P＝ρgh可以计算出浸润界面可以阻挡的流体压力为17mmHg，即本发明提供的靶向疏水剂阻挡流体压力的范围为17mmHg。根据表1所列数值可以看出，本发明提供的靶向疏水剂可以阻挡毛细血管中的血流，起到阻碍甚至切断肿瘤细胞生长所需要的营养，从而达到控制肿瘤细胞的生长，甚至杀死癌细胞的目的。
实施例2将0.000001mg/ml的全氟硅烷(疏水剂)的乙醇溶液和1mg/ml的聚乙烯醇(生物相容性载体)溶液进行混合，二者的体积比为0.0001∶1(所加入的全氟硅烷与所加入的聚乙烯醇的摩尔比为10-6∶1)，在60℃下老化5小时，生物相容性载体和疏水剂之间以化学键的方式紧密连接；然后将此混合液冷却至室温，加入0.5mg/ml以半乳糖为端基的糖蛋白溶液(抗体)，所加入的抗体与混合液中聚乙烯醇的摩尔比为10-7∶1，搅拌均匀，室温下老化4个小时，抗体与载体间通过物理或者化学的相互作用进行连接；在常温下将混合液的总体积减压浓缩到原来体积的1/2，滤出其中的固体，冷冻干燥，得到本发明中用于肿瘤血管靶向治疗的疏水剂。
采用前述的浸渍提拉法修饰管径为100μm聚四氟乙烯人工血管，将聚四氟乙烯人工血管浸渍在含有4.0mg/ml的去唾液酸糖蛋白溶液中，提拉速度为3mm/s，然后在25℃下老化30分钟，再将修饰好的人工血管垂直固定在有刻度的面板上，修饰端朝下；将本实施例得到的靶向疏水剂用乙醇配成0.0001mol/l的溶液，把人工血管的修饰端在上述的靶向疏水剂溶液中浸泡10分钟，然后在室温下老化30分钟；本发明提供的靶向疏水剂由于抗体与受体的特异性结合，而富集到修饰好的人工血管端部，其上的全氟硅烷可以与人工血管内的流体形成亲疏水的界面；再将pH值为7的磷酸缓冲溶液(PBS)慢慢加入管中，当人工血管修饰端滴出第一滴液体时，记录管中的溶液高度；根据压强公式P＝ρgh可以计算出浸润界面可以阻挡的流体压力为13mmHg，即本发明提供的靶向疏水剂阻挡流体压力的范围为13mmHg。根据表1所列数值可以看出，本发明提供的靶向疏水剂可以阻挡毛细血管中的血流，起到阻碍甚至切断肿瘤细胞生长所需要的营养，从而达到控制肿瘤细胞的生长，甚至杀死癌细胞的目的。
实施例3将0.1mg/ml的硅酸脂(疏水剂)的溶液和5mg/ml的聚羟基丙酸脂(生物相容性载体)溶液进行混合，二者的体积比为0.001∶1(所加入的硅酸脂与所加入的聚羟基丙酸脂的摩尔比为10-2∶1)，在40℃下老化5小时，生物相容性载体和疏水剂之间以化学键的方式紧密连接；然后将此混合液冷却至室温，加入0.001mg/ml的叶酸溶液(抗体)，所加入的抗体与混合液中聚羟基丙酸脂的摩尔比为10-2∶1，搅拌均匀，室温下老化3个小时，抗体与载体间通过物理或者化学的相互作用进行连接；在常温下将混合液的总体积减压浓缩到原来体积的1/2，滤出其中的固体，冷冻干燥，得到本发明中用于肿瘤血管靶向治疗的疏水剂。
采用前述的浸渍提拉法修饰管径为80μm硅橡胶人工血管，将硅橡胶人工血管浸渍在含有0.1mg/ml的叶酸受体溶液中，提拉速度为2mm/s，然后在25℃下老化30分钟，再将修饰好的人工血管垂直固定在有刻度的面板上，修饰端朝下；将本实施例得到的靶向疏水剂用高纯水配成1mol/l的溶液，把人工血管的修饰端在上述的靶向疏水剂溶液中浸泡10分钟，然后在室温下老化30分钟；本发明提供的靶向疏水剂由于抗体与受体的特异性结合，而富集到修饰好的人工血管端部，其上的硅酸脂可以与人工血管内的流体形成亲疏水的界面；再将pH值为7的磷酸缓冲溶液(PBS)慢慢加入管中，当人工血管修饰端滴出第一滴液体时，记录管中的溶液高度；根据压强公式P＝ρgh可以计算出浸润界面可以阻挡的流体压力为17.7mmHg，即本发明提供的靶向疏水剂阻挡流体压力的范围为17.7mmHg。根据表1所列数值可以看出，本发明提供的靶向疏水剂可以阻挡毛细血管中的血流，起到阻碍甚至切断肿瘤细胞生长所需要的营养，从而达到控制肿瘤细胞的生长，甚至杀死癌细胞的目的。
实施例4将0.05mg/ml的全卤代乙烷(疏水剂)的乙醇溶液和0.05mg/ml的丙烯酰胺(生物相容性载体)的醋酸溶液进行混合，二者的体积比为0.01∶1(所加入的全卤代乙烷与所加入的丙烯酰胺的摩尔比为10-4∶1)，在40℃下老化1小时，生物相容性载体和疏水剂之间以化学键的方式紧密连接；然后将此混合液冷却至室温，加入0.1mg/ml的血管内皮细胞生长因子(VEGF)(抗体)，所加入的抗体与混合液中丙烯酰胺的摩尔比为10-3∶1，搅拌均匀，室温下老化3个小时，VEGF与丙烯酰胺间通过物理或者化学的相互作用进行连接；在常温下将混合液的总体积减压浓缩到原来体积的1/2，滤出其中的固体，冷冻干燥，得到本发明中用于肿瘤血管靶向治疗的疏水剂。
采用前述的浸渍提拉法修饰管径为50μm聚氨酯人工血管，将聚氨酯人工血管浸渍在含有1.0mg/ml的酪氨酸激酶受体溶液中，提拉速度为2mm/s，然后在25℃下老化30分钟，再将修饰好的人工血管垂直固定在有刻度的面板上，修饰端朝下；将本实施例得到的靶向疏水剂用高纯水配成0.001mol/l的溶液，把人工血管的修饰端在上述的靶向疏水剂溶液中浸泡10分钟，然后在室温下老化30分钟；本发明提供的靶向疏水剂由于抗体与受体的特异性结合，而富集到修饰好的人工血管端部，其上的全卤代乙烷可以与人工血管内的流体形成亲疏水的界面；再将pH值为7的磷酸缓冲溶液(PBS)慢慢加入管中，当人工血管修饰端滴出第一滴液体时，记录管中的溶液高度；根据压强公式P＝ρgh可以计算出浸润界面可以阻挡的流体压力为19.7mmHg，即本发明提供的靶向疏水剂阻挡流体压力的范围为19.7mmHg。根据表1所列数值可以看出，本发明提供的靶向疏水剂可以阻挡毛细血管中的血流，起到阻碍甚至切断肿瘤细胞生长所需要的营养，从而达到控制肿瘤细胞的生长，甚至杀死癌细胞的目的。
实施例5将0.02mg/ml的氟化丙烯酸(疏水剂)的乙醇溶液和0.05mg/ml的纤维素(生物相容性载体)的乙醇溶液进行混合，二者的体积比为0.01∶1(所加入的氟化丙烯酸与所加入的纤维素的摩尔比为10-3∶1)，在40℃下老化5小时，生物相容性载体和疏水剂之间以化学键的方式紧密连接；然后将此混合液冷却至室温，加入1mg/ml的血小板原性生长因子(PDGF)溶液(抗体)，所加入的抗体与混合液中纤维素的摩尔比为10-3∶1，搅拌均匀，室温下老化3个小时，抗体与载体间通过物理或者化学的相互作用进行连接；在常温下将混合液的总体积减压浓缩到原来体积的1/2，滤出其中的固体，冷冻干燥，得到本发明中用于肿瘤血管靶向治疗的疏水剂。
采用前述的浸渍提拉法修饰管径为30μm涤纶人工血管，将涤纶人工血管浸渍在含有2.0mg/ml的血小板原性生长因子受体(PDGF-α)溶液中，提拉速度为2mm/s，然后在25℃下老化30分钟，再将修饰好的人工血管垂直固定在有刻度的面板上，修饰端朝下；将本实施例得到的靶向疏水剂用乙醇配成0.2mol/l的溶液，把人工血管的修饰端在上述的靶向疏水剂溶液中浸泡10分钟，然后在室温下老化30分钟；本发明提供的靶向疏水剂由于抗体与受体的特异性结合，而富集到修饰好的人工血管端部，其上的氟化丙烯酸可以与人工血管内的流体形成亲疏水的界面；再将pH值为7的磷酸缓冲溶液(PBS)慢慢加入管中，当人工血管修饰端滴出第一滴液体时，记录管中的溶液高度；根据压强公式P＝ρgh可以计算出浸润界面可以阻挡的流体压力为20.6mmHg，即本发明提供的靶向疏水剂阻挡流体压力的范围为20.6mmHg。根据表1所列数值可以看出，本发明提供的靶向疏水剂可以阻挡毛细血管中的血流，起到阻碍甚至切断肿瘤细胞生长所需要的营养，从而达到控制肿瘤细胞的生长，甚至杀死癌细胞的目的。
实施例6将0.005mg/ml的CF3CCl3(疏水剂)的乙醇溶液和1.5mg/ml的硬脂酰葡聚糖(生物相容性载体)溶液进行混合，二者的体积比为0.001∶1(所加入的CF3CCl3与所加入的硬脂酰葡聚糖的摩尔比为10-4∶1)，在40℃下老化1小时，生物相容性载体和疏水剂之间以化学键的方式紧密连接；然后将此混合液冷却至室温，加入1mg/ml的(OX-26)融合蛋白溶液(抗体)，所加入的抗体与混合液中硬脂酰葡聚糖的摩尔比为10-2∶1，搅拌均匀，室温下老化3个小时，抗体与载体间通过物理或者化学的相互作用进行连接；在常温下将混合液的总体积减压浓缩到原来体积的1/2，滤出其中的固体，冷冻干燥，得到本发明中用于肿瘤血管靶向治疗的疏水剂。
采用前述的浸渍提拉法修饰管径为20μm聚乳酸人工血管，将聚乳酸人工血管浸渍在含有2.0mg/ml的转铁蛋白受体溶液中，提拉速度为2mm/s，然后在25℃下老化30分钟，再将修饰好的人工血管垂直固定在有刻度的面板上，修饰端朝下；将本实施例得到的靶向疏水剂用乙醇配成0.15mol/l的溶液，把人工血管的修饰端在上述的靶向疏水剂溶液中浸泡10分钟，然后在室温下老化30分钟；本发明提供的靶向疏水剂由于抗体与受体的特异性结合，而富集到修饰好的人工血管端部，其上的CF3CCl3可以与人工血管内的流体形成亲疏水的界面；再将pH值为7的磷酸缓冲溶液(PBS)慢慢加入管中，当人工血管修饰端滴出第一滴液体时，记录管中的溶液高度；根据压强公式P＝ρgh可以计算出浸润界面可以阻挡的流体压力为25mmHg，即本发明提供的靶向疏水剂阻挡流体压力的范围为25mmHg。根据表1所列数值可以看出，本发明提供的靶向疏水剂可以阻挡毛细血管中的血流，起到阻碍甚至切断肿瘤细胞生长所需要的营养，从而达到控制肿瘤细胞的生长，甚至杀死癌细胞的目的。
实施例7将0.5mg/ml的正癸烷基酸(疏水剂)的乙醇溶液和0.05mg/ml的壳聚糖(生物相容性载体)的醋酸溶液进行混合，二者的体积比为0.001∶1(所加入的正癸烷基酸与所加入的壳聚糖的摩尔比为10-3∶1)，在40℃下老化5小时，生物相容性载体和疏水剂之间以化学键的方式紧密连接；然后将此混合液冷却至室温，加入1mg/ml的AA98溶液(抗体)，所加入的抗体与混合液中壳聚糖的摩尔比为10-6∶1，搅拌均匀，室温下老化3个小时，抗体与载体间通过物理或者化学的相互作用进行连接；在常温下将混合液的总体积减压浓缩到原来体积的1/2，滤出其中的固体，冷冻干燥，得到本发明中用于肿瘤血管靶向治疗的疏水剂。
采用前述的浸渍提拉法修饰管径为20μm聚对苯二甲酸甲脂人工血管，将聚对苯二甲酸甲脂人工血管浸渍在含有2.0mg/ml的血管内皮黏附分子CD46溶液中，提拉速度为2mm/s，然后在25℃下老化30分钟，再将修饰好的人工血管垂直固定在有刻度的面板上，修饰端朝下；将本实施例得到的靶向疏水剂用醋酸配成0.2mol/l的溶液，再用稀碱溶液将pH值调到6，把人工血管的修饰端在上述的靶向疏水剂溶液中浸泡10分钟，然后在室温下老化30分钟；本发明提供的靶向疏水剂由于抗体与受体的特异性结合，而富集到修饰好的人工血管端部，其上的正癸烷基酸可以与人工血管内的流体形成亲疏水的界面；再将pH值为7的磷酸缓冲溶液(PBS)慢慢加入管中，当人工血管修饰端滴出第一滴液体时，记录管中的溶液高度；根据压强公式P＝ρgh可以计算出浸润界面可以阻挡的流体压力为31mmHg，即本发明提供的靶向疏水剂阻挡流体压力的范围为31mmHg。根据表1所列数值可以看出，本发明提供的靶向疏水剂可以阻挡毛细血管中的血流，起到阻碍甚至切断肿瘤细胞生长所需要的营养，从而达到控制肿瘤细胞的生长，甚至杀死癌细胞的目的。
实施例8将0.0005mg/ml的正癸烷基酸(疏水剂)的乙醇溶液和0.05mg/ml的壳聚糖(生物相容性载体)的醋酸溶液进行混合，二者的体积比为0.001∶1(所加入的正癸烷基酸与所加入的壳聚糖的摩尔比为10-1∶1)，在40℃下老化5小时，生物相容性载体和疏水剂之间以化学键的方式紧密连接；然后将此混合液冷却至室温，加入1mg/ml的低密度脂蛋白胆固醇溶液(抗体)，所加入的抗体与混合液中壳聚糖的摩尔比为10-6∶1，搅拌均匀，室温下老化3个小时，抗体与载体间通过物理或者化学的相互作用进行连接；在常温下将混合液的总体积减压浓缩到原来体积的1/2，滤出其中的固体，冷冻干燥，得到本发明中用于肿瘤血管靶向治疗的疏水剂。
采用前述的浸渍提拉法修饰管径为20μm聚乙醇酸人工血管，将聚乙醇酸人工血管浸渍在含有2.0mg/ml的低密度脂性光敏剂的细胞溶液中，提拉速度为4mm/s，然后在25℃下老化30分钟，再将修饰好的人工血管垂直固定在有刻度的面板上，修饰端朝下；将本实施例得到的靶向疏水剂用醋酸配成1mol/l的溶液，再用稀碱溶液将pH值调到6，把人工血管的修饰端在上述的靶向疏水剂溶液中浸泡10分钟，然后在室温下老化30分钟；本发明提供的靶向疏水剂由于低密度脂蛋白胆固醇和低密度脂性光敏剂的特异性结合，而富集到修饰好的人工血管端部，其上的正癸烷基酸可以与人工血管内的流体形成亲疏水的界面；再将pH值为7的磷酸缓冲溶液(PBS)慢慢加入管中，当人工血管修饰端滴出第一滴液体时，记录管中的溶液高度；根据压强公式P＝ρgh可以计算出浸润界面可以阻挡的流体压力为33mmHg，即本发明提供的靶向疏水剂阻挡流体压力的范围为33mmHg。根据表1所列数值可以看出，本发明提供的靶向疏水剂可以阻挡毛细血管中的血流，起到阻碍甚至切断肿瘤细胞生长所需要的营养，从而达到控制肿瘤细胞的生长，甚至杀死癌细胞的目的。
实施例9将0.0005mg/ml的正癸烷基酸(疏水剂)的乙醇溶液和0.05mg/ml的壳聚糖(生物相容性载体)的醋酸溶液进行混合，二者的体积比为0.001∶1(所加入的正癸烷基酸与所加入的壳聚糖的摩尔比为10-5∶1)，在40℃下老化5小时，生物相容性载体和疏水剂之间以化学键的方式紧密连接；然后将此混合液冷却至室温，加入1mg/ml的低密度脂蛋白胆固醇溶液(抗体)，所加入的抗体与混合液中壳聚糖的摩尔比为10-6∶1，搅拌均匀，室温下老化3个小时，抗体与载体间通过物理或者化学的相互作用进行连接；在常温下将混合液的总体积减压浓缩到原来体积的1/2，滤出其中的固体，冷冻干燥，得到本发明中用于肿瘤血管靶向治疗的疏水剂。
采用前述的浸渍提拉法修饰管径为15μm聚乙醇酸人工血管，将聚乙醇酸人工血管浸渍在含有2.0mg/ml的低密度脂性光敏剂的细胞溶液中，提拉速度为2mm/s，然后在25℃下老化30分钟，再将修饰好的人工血管垂直固定在有刻度的面板上，修饰端朝下；将本实施例得到的靶向疏水剂用醋酸配成1mol/l的溶液，再用稀碱溶液将pH值调到6，把人工血管的修饰端在上述的靶向疏水剂溶液中浸泡10分钟，然后在室温下老化30分钟；本发明提供的靶向疏水剂由于低密度脂蛋白胆固醇和低密度脂性光敏剂的特异性地结合，而富集到修饰好的人工血管端部，其上的正癸烷基酸可以与人工血管内的流体形成亲疏水的界面；再将pH值为7的磷酸缓冲溶液(PBS)慢慢加入管中，当人工血管修饰端滴出第一滴液体时，记录管中的溶液高度；根据压强公式P＝ρgh可以计算出浸润界面可以阻挡的流体压力为35mmHg，即本发明提供的靶向疏水剂阻挡流体压力的范围为35mmHg。根据表1所列数值可以看出，本发明提供的靶向疏水剂可以阻挡毛细血管中的血流，起到阻碍甚至切断肿瘤细胞生长所需要的营养，从而达到控制肿瘤细胞的生长，甚至杀死癌细胞的目的。
权利要求
1.一种用于肿瘤血管靶向治疗的疏水剂，其为由生物相容性载体、疏水剂以及抗体组成，所述的疏水剂与生物相容性载体的摩尔比为10-6～10-2∶1；所述的抗体与生物相容性载体的摩尔比为10-7～10-2∶1。
2.如权利要求1所述的用于肿瘤血管靶向治疗的疏水剂，其特征在于所述的生物相容性载体为聚乙烯醇、硬脂酰葡聚糖、N-异丙基丙烯酰胺、壳聚糖及其衍生物、1，6-己二异氰酸酯胆固醇单酯、聚二甲基硅氧烷基甲基丙烯酸酯、聚丙交脂、聚己交脂、聚己内脂、聚甲基丙烯酸甲酯、纤维素、纤维素-聚乙烯、聚羟基丙酸脂、明胶以及它们之间的共聚物、或聚甲基丙烯酸羟乙酯-聚丁二烯共聚物。
3.如权利要求1所述的用于肿瘤血管靶向治疗的疏水剂，其特征在于所述的疏水剂为氟硅烷、氟代有机硅氧烷(CnF2n+1X)2N[CH2CH2N(CnF2n+1X)]yCH2CH2CH2Si(OR)3，其中y＝0，1或2，n＝2～10的整数，R＝-CH3或-C2H5，X＝-CH2CH2-或-SO2NR1CH2CH2-，R1为H或C1～C4的烷基；硅酸酯(CH3)mSi(OR4)4-m，其中R4＝-CH3或-C2H5，m＝0，1或2；全卤代烷、大于C7的长链羧酸、氟烷基烷氧基硅烷、丙烯酸聚合物改性蜡、或氟化丙烯酸。
4.如权利要求3所述的用于肿瘤血管靶向治疗的疏水剂，其特征在于所述的全卤代烷为CF2ClCFCl2，CF2ClCF2Cl，CFCl2CFCl2或CF3CCl3。
5.如权利要求1所述的用于肿瘤血管靶向治疗的疏水剂，其特征在于所述的抗体为低密度脂蛋白、叶酸及其衍生物、以半乳糖为端基的糖蛋白、血管内皮细胞生长因子、血小板源性生长因子、抗体AA98、抗体融合蛋白、蛋白质、磷脂、脂质体、胶原蛋白或单克隆抗体。
6.一种权利要求1至5之一所述的用于肿瘤血管靶向治疗的疏水剂的制备方法，包括如下的步骤1)将10-6～10-1mg/ml的疏水剂溶液和0.05～5mg/ml的生物相容性载体溶液进行混合，所加入的疏水剂与所加入的生物相容性载体的摩尔比为10-6～10-2∶1，在40～70℃下老化1～5小时；2)然后将步骤1)得到的混合液冷却至室温，加入0.001～1mg/ml的抗体溶液，所加入的抗体与步骤1)中加入的生物相容性载体的摩尔比为10-7～10-2∶1，搅拌均匀，室温下老化1～3个小时；3)在常温下将混合液的总体积减压浓缩到原来体积的1/2，滤出其中的固体，冷冻干燥，得到本发明中用于肿瘤血管靶向治疗的疏水剂。
7.一种权利要求1至5之一所述的用于肿瘤血管靶向治疗的疏水剂在用于制备肿瘤血管靶向治疗药物中的用途。
全文摘要
本发明涉及一种用于肿瘤血管靶向治疗的疏水剂，其为由生物相容性载体、疏水剂以及相应的抗体组成，所述的疏水剂与生物相容性载体按摩尔比10
文档编号A61K47/24GK101045160SQ20061006689
公开日2007年10月3日 申请日期2006年3月31日 优先权日2006年3月31日
发明者江雷, 樊红雷 申请人:国家纳米科学中心