有机化合物的组合的制作方法

专利名称：有机化合物的组合的制作方法
有机化合物的组合本发明涉及药物组合，该药物组合包含嘧M氨基苯曱酰胺化合物和 组蛋白脱乙酰酶抑制剂，以及该组合的用途，例如在增殖性疾病例如胂瘤、 骨髓瘤、白血病、银屑病、再狭窄、硬化性皮炎和纤维变性中的用途。除了对于增殖性疾病的:患者具有多种治疗选择，仍然需要有效和安全 的抗增殖剂和它们在组合治疗中的优选用途。 组蛋白的可逆乙酰化u因表达的主要调节，其通过改变转录因子与DNA的可接近性而起作用。在正常的细胞中，组蛋白脱乙酰酶(HDAC)和 组蛋白乙酰转移酶一起控制组蛋白的乙酰化水平以保持平衡。HDAC的抑 制引起高度乙酰化的組蛋白的聚集，从而引起多种细胞响应。已经研究了 HDAC抑制剂对癌细胞的治疗作用。最# HDAC抑制剂研究领域的发 展已经提供了适合治疗肿瘤的高度有效并且稳定的活性化合物。 发明概述现在已经发现包含至少一种嘧^氨基苯曱酰胺化合物和HDAC抑 制剂(例如以下定义的)的组合对增殖性疾病例如肺瘤、骨髓瘤、白血病、 4艮屑病、再狭窄、硬化性皮炎和纤维变性具有有益作用。发明详述嘧M氨基笨甲酰胺化合物本发明涉及式(I)的嘧^^氨基苯甲酰胺化合物以及该化合物的N-氧 化物或可药用盐在制备用于治疗激S^赖性疾病的药物组合物中的用途其中R表示氢、低级烷基、低级烷氧基-低级烷基、酰ltj^低级烷基、羧基-低级烷基、低级烷氧基g-低级烷基或苯基-低级烷基；R2表示氢、任选被一个或多个相同的或不同的基团R3取代的低级烷基、环烷基、苯并环烷基、杂环基、芳基或包含0、 1、 2或3个环氮原子 和0或1个氧原子和0或1个硫原子的单-或二环杂芳基，在各种情况中所 述的基团是未取代的或是单-或多取代的；并且Rs表示羟基、低级烷lL&、 酰氧基、羧基、低级烷氧基羰基、氨基甲酰基、N-单-或N，N-二取代的氨 基甲酰基、氨基、单-或二取代的M、环烷基、杂环基、芳基或包含0、 1、 2或3个环氮原子和0或1个氧原子和0或1个减源子的单-或二环杂芳基， 在各种情况中所述的基团是未取代的或是单-或多取代的，或者!^和R2—^^示具有4、 5或6个碳原子任选被低级烷基、环烷基、 杂环基、苯基、羟基、低级烷氧基、氨基、单-或二取代的氨基、氧代、吡 咬基、吡溱基或嘧W单-或二取代的亚烷基；具有4或5个碳原子的苯亚 烷基；具有1个氧原子和3或4个碳原子的氧杂亚烷基；或具有l个氮原 子和3或4个碳原子的氮杂亚烷基，其中氮是未取代的或被低级烷基、苯 基-低级烷基、低级烷氧基羰基-低级烷基、羧基-低级烷基、氨基甲酰基-低级烷基、N-单-或N，N-二取代的氨基甲酰基-低级烷基、环烷基、低级烷 氧基羰基、氣基、苯基、取代的苯基、吡M、嘧梵基或吡溱基取代；R4表示氢、低级烷基或卣素。上下文所用的通用术语优选具有在本/>开上下文范围内的以下含义， 除非另外i兌明前缀"低级"指的是具有至多并且包括最大值7个、尤其是至多并且 包括最大值4个碳原子的基团，所述的基团是直链的或是具有单个或多个 分支的支链的。当复数形式用于化合物、盐等时，其也表示单数化合物、盐等。 任何不对称碳原子可以以(R)-、 (S)-或(R，S)-构型存在，优选以(R)-或(S)-构型存在。因此，化合物可以作为异构体的混合物或作为纯的异构体存在，优选作为对映异构体-纯的非对映异构体存在。本发明还涉及式(I)化合物的可能的互变异构体。低级烷基优选具有从并且包括1至并且包括7、优选从并且包括1至并且包括4个碳原子的烷基，并且其是直链的或支链的；优选的低级烷基 是丁基例如正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基，丙基例如正丙基或异丙基， 乙基或甲基。优选的低级烷基是甲基、丙基或叔丁基。 低级酰基优选甲酰基或低级烷基羰基，特别是乙酰基。 芳基是通过位于基团芳环碳原子上的键与分子连接的芳族基团。在优选的实施方案中，芳基是具有6至14个碳原子的芳族基团，尤其是苯基、 萘基、四氢萘基、芴基或菲基，并且其是未冬代的或被一个或多个、优选 至多3个、尤其是1个或2个取代基取代，所述的取代基尤其选自M、 单-或二取代的M、鹵素、低级烷基、取代的低级烷基、低级链烯基、低 级炔基、苯基、羟基、醚化或酯化的羟基、硝基、氰基、羧基、酯化的羧 基、烷酰基、苯曱酰基、M曱酰基、N-单或N,N-二取代的M甲酰基、 脒基、胍基、脲基、巯基、> ^i《suIfo)、低级烷硫基、苯硫基、苯基-低级 烷硫基、低级烷基^^t基、低级烷基亚磺酰基、苯基亚磺酰基、苯基-低级 烷基亚磺酰基、低级烷基苯基亚磺酰基、低级烷基磺酰基、苯基磺酰基、 苯基-低级烷基磺酰基、低级烷基苯基磺酰基、卤素-低级烷基巯基、卤素-低级烷基磺酰基例如尤其是三氟甲磺酰基、二羟基硼(-B(OH)2)、杂环基、 单-或二环杂芳基和在环的相邻的C-原子上连接的低级亚烷基二氧基例如 亚甲基二氧基。芳基更优选苯基、萘基或四氢萘基，在各种情况中其是未 取代的或独立地被一个或两个选自下列的取代基取代卤素，尤其是氟、 氯或溴；羟基；被低级烷基例如甲基，被卤素-低级烷基例如三氟甲基或被 苯基醚化的羟基；与两个相邻的C-原子连接的低级亚烷基二氧基，例如亚 曱基二氧基，低级烷基，例如甲基或丙基；卤素-低级烷基，例如三氟甲基; 羟基-低级烷基，例如羟基曱基或2-羟基-2-丙基；低级烷氧基-低级烷基， 例如甲氧基曱基或2-曱氧基乙基；低级烷氧基羰基-低级烷基，例如甲氧基 羰基甲基；低级炔基，例如l-丙炔基；酯化的羧基，尤其是低级烷lL&羰 基，例如甲H&a^、正丙氧基g或异丙氧基a^; N-单-取代的M甲 酰基，特别是被低级烷基例如甲基、正丙基或异丙基单取代的氨基甲酰基;氨基；低级烷基氨基，例如曱基氨基；二-低级烷基氨基，例如二曱基JL^ 或二乙基氨基；低级亚烷基-t^，例如吡咯烷子基或哌啶子基；低级氧杂 亚烷基-氨基，例如吗啉代、低级氮杂亚烷基-氨基，例如哌嗪子基、酰基 氨基，例如乙酰基氨基或苯甲酰基氨基；低级烷基磺酰基，例如甲基磺酰 基；氨磺酰基；或苯基磺酰基。环烷基优选是环丙基、环戊基、环己基或环庚基，并且可以是未取代 的或被一个或多个、尤其是一个或两个选自以上在芳基的取代基中定义的 取代基取代，最优选被以下基团取代低级烷基例如曱基，低级烷氧基例 如甲氧基或乙氧基，或羟基，并且进一步被氧代取代或与苯环稠合例如苯 并环戊基或苯并环己基。取代的烷基是如以上定义的烷基，尤其是低级烷基，优选曱基；其中 可以存在一个或多个、尤其是至多三个取代基，所述的取代基主要选自卣 素特别是氟、氨基、N-低级烷基氨基、N，N-二-低级烷基氨基、N-低级烷酰基氨基、羟基、氰基、羧基、低级烷ll^羰基和苯基-低级烷氧基羰基。尤 其优选三氟甲基。单-或二取代的氨基尤其是被一个或两个各自独立地选自下列的基团取代的氨基低级烷基，例如曱基；羟基-低级烷基，例如2-羟基乙基；低 级烷氧基低级烷基，例如甲氧基乙基；苯基-低级烷基，例如苄基或2-苯基 乙基；低级烷亂基，例如乙酰基；苯曱酰基；取代的苯甲酰基，其中苯基 尤其被一个或多个、优选一个或两个选自硝基、氨基、卣素、N-低级烷基氨基、N，N-二-低级烷基氨基、羟基、氰基、羧基、低级烷氧基羰基、低级 烷酰基和氨基甲酰基的取代基取代；以及苯基-低级烷^L&羰基，其中苯基 是未取代的或尤其被一个或多个、优选一个或两个选自硝基、氨基、卣素、 N-低级烷基M、 N，N-二-低级烷基氨基、羟基、氰基、羧基、低级烷氧基 羰基、低级烷酰基和氨基甲酰基的取代基取代；并且优选N-低级烷基^ 例如N-甲基氨基、羟基-低级烷基氨基例如2-羟基乙基氨基或2-羟基丙基、 低级烷氧基低级烷基例如甲氧基乙基、苯基-低级烷基Jl^例如苄基^J^、 N，N-二-低级烷基M、 N-苯基-低级烷基-N-低级烷基^、 N，N-二-低级烷 基苯基氨基、低级烷酰基氨基例如乙酰基氨基，或选自苯甲酰基氨基和苯基-低级烷IUJl&氨基的取代基，其中在各种情况中苯基是未取代的或尤其4皮硝基或^Jo或被卤素，M、 N-低级烷基M、 N，N-二-低级烷基氨 基、羟基、氰基、羧基、低级烷lL&羰基、低级烷酰基、氨基甲酰基或氨 基羰基"ll^取代。二取代的M也是低级亚烷基-氨基，例如吡咯烷子基、 2-氧代吡咯烷子基或哌啶子基；低级氧杂亚烷基-氨基，例如吗啉代，或低 级氮杂亚烷基-氨基，例如哌溱子基或N-取代的哌嚷子基，例如N-甲基哌 溱子基或N-曱氧基a^哌唤子基。囟素尤其是氟、氯、溴或碘，尤其是氟、氯或溴。醚化的羟基尤其是Cs-C20烷基氧基例如正癸基氧基，低级烷氧基(优选) 例如甲氧基、乙氧基、异丙ltJ^或叔丁氧基，苯基-低级烷氧基例如苄基氧 基、苯基氧基，卣素-低级烷氧基例如三氟甲氧基、2,2,2-三氟乙氧基或 1，1，2，2-四氟乙氧基，或被包含一个或两个氮原子的单-或二环杂芳基取代的 低级烷氧基，优选被以下基团取代的低级烷氧基咪唑基例如lH-咪唑-l-基，吡咯基，苯并咪唑基例如1-苯并咪唑基，吡梵基尤其是2-、 3-或4-吡 梵基，嘧t基尤其是2-嘧梵基，吡溱基，异奮啉基尤其是3-异会啉基，喹 啉基，吲味基或噻哇基。酯化的羟基尤其是低级烷酰基氧基、苯甲酰基氧基、低级烷氧基m^ 氧基例如叔丁氧基羰基氧基或苯基-低级烷氧基羰基氧基例如节基氧基羰酯化的羧基尤其是低级烷IUJl基例如叔丁氧基羰基、异丙氧基羰基、甲氧基氟基或乙lL^羰基，苯基-低级烷氧基H基或苯基氧基羰基。 烷酰基主要是烷基羰基，尤其是低级烷酰基，例如乙酰基。 N-单-或N，N-二取代的氨基甲酰基尤其被一个或两个独立地选自下列 的取代基取代低级烷基、苯基-低级烷基和羟基-低级烷基，或低级亚烷 基、氧杂-低级亚烷基或任选在末端氮原子被取代的氮杂-低级亚烷基。包含0、 1、 2或3个环氮原子和0或1个氧原子和0或1个硫原子的 单-或二环杂芳基，在各种情况中该基团是未取代的或单-或多取代的，指 的是将杂芳基与式(I)分子的其余部分连接的环是不饱和的杂环基并且优选 环，其中在连接环中，但是也任选在任何稠合环中，至少一个碳原子被选自氮、氧和>^的杂原子代替；其中连接环优选具有5至12、更优选5或6个环原子；并且其可以是未取代的或被一个或多个、尤其是一个或两个选 自以上在芳基的取代基中定义的基团的取代基取代，最优选被低级烷基例 如甲基，低级烷氧基例如曱氧基或乙氧基，或羟基取代。优选单-或二环杂芳基选自2H-p比咯基、吡咯基、咪唑基、苯并咪喳基、吡唑基、吲唑基、 噤呤基、吡>^基、吡唤基、嘧"^基、峻溱基、4H-查噪基、异会啉基、会 啉基、2,3-二氮杂萘基、1，5-二氮杂萘基、喹喔啉基、喹唑啉基、会啉基 (quiimolinyl)、蝶錄、中氮茚基、3H-吲咮基、吲味基、异吲味基、嗜、唑 基、异哺、唑基、噻唑基、异噻唑基、三唑基、四唑基、呋咱基、苯并[d] 吡唑基、噻吩基和呋喃基。更优选的单-或二环杂芳基选自吡咯基、咪唑基 例如lH-咪唑-l-基、苯并咪唑基例如1-苯并咪唑基、吲唑基尤其是5-吲唑 基、吡》^基尤其是2-、 3-或4-吡咬基、嘧梵基尤其是2-嘧t基、吡溱基、 异会啉基尤其是3-异会啉基、会啉基尤其是4-或8-会啉基、吲咪基尤其是 3-吲味基、噻哇基、苯并[dl吡唑基、噻吩基和呋喃基。在本发明的一个优 选的实施方案中，吡^&在氮原子的邻位被羟基取代并且因此至少部分以 相应的互变异构体形式存在，其为吡咬-(lH)2-酮。在另外优选的实施方案 中，嘧^在2和4位被羟基取代并且因此以多种互变异构体形式存在， 例如作为嘧吱-(lH，3H)2，4-二酮。杂环基尤其是具有一个或两个选自氮、氧和石克的杂原子的五、六或七 元杂环系，其可以是不饱和的或完全或部分饱和的，并且是未取代的或尤 其被以下基团取代低级烷基例如甲基，苯基-低级烷基例如节基，氧代或 杂芳基例如2-哌溱基；杂环基尤其是2-或3-吡咯烷基、2-氧代-5-吡咯烷基、 哌啶基、N-节基-4-哌咬基、N-低级烷基-4-哌咬基、N-低级烷基-艰溱基、 吗啉基例如2-或3-吗啉基、2-氧代-lH-氮杂萆-3-基、2-四氢呋喃基或2-甲 基-l，3-二氧戊环-2-基。盐尤其是式(I)化合物的可药用盐。此类盐例如作为酸加成盐，优选是与有机或无机酸从具有碱性氮原子 的式(I)化合物形成的，尤其是可药用盐。适合的无机^A例如g酸例如盐 酸、硫酸或磷酸。适合的有机酸是例如羧酸、膦酸、磺酸或M磺酸，例如乙酸、丙酸、辛酸、癸酸、十二烷酸、羟基乙酸、乳酸、富马酸、琥珀 酸、己二酸、庚二酸、辛二酸、壬二酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、M 酸例如谷氨酸或天冬氨酸、马来酸、羟基马来酸、曱基马来酸、环己烷羧酸、金刚烷羧酸、苯甲酸、水杨酸、4-tJ^Ic杨酸、苯二甲酸、苯基乙酸、 扁桃酸、肉桂酸、甲磺酸或乙磺酸、2-羟基乙磺酸、乙烷-l，2-二磺酸、苯 磺酸、2-M酸、1，5-萘-二磺酸、2-、 3-或4-甲基M酸、甲^i^危酸、乙基 硫酸、十二烷基硫酸、N-环己基氨基磺酸、N-甲基-、N-乙基-或N-丙基-M磺酸或其它有机质子酸，例如抗坏血酸。在负电荷基团例如g或磺基的存在下，盐也可以与碱形成，例如金 属盐或铵盐，例如碱金属盐或碱土金属盐，例如钠盐、钾盐、镁盐或钙盐， 或与氨或适合的有机胺(例如叔单胺，例如三乙胺或三(2-羟基乙基)胺)或杂 环碱(例如N-乙基-哌啶或N，N，-二甲基哌,)形成的铵盐。当碱性基团和酸性基团存在于同 一分子中时，式(I)化合物也可以形成 内盐。对于分离和纯化目的，也可以应用不可药用盐，例如苦味酸盐或高氯 酸盐。对于治疗用途，仅可以应用可药用盐或游离化合物(其可以以药物制 剂的形式应用)，并且因此这些是优选的。由于游离形式的新化合物和它们的盐(包括那些例如在新化合物的纯 化或鉴别中可以用作中间体的盐)形式的新化合物的紧密关系，上下文中任 何涉及游离化合物的适当并且有利地将被理解为也涉及相应的盐。在式(I)范围内的化合物和制备它们的方法公开于在2004年1月15日 公布的WO 04/005281中，将其并入本申请作为参考。优选的化合物是4-甲基-3-[[4-(3-吡咬基)-2-嘧咬基l氨基-N-[5-(4-甲基-lH-咪唑-l-基)-3-(三氟 甲基)苯基苯甲酰胺，其具有结构(II),下文"化合物(II)":<formula>formula see original document page 12</formula>(II)HADC抑制剂化合物特别感兴趣用于本发明组合的HDAC化合物是式(III)描述的异羟肟酸 (hydroxamate)化合物或其可药用盐
<formula>formula see original document page 12</formula>
其中R,是H;囟素；或直连C广C6烷基，尤其是甲基、乙基或正丙基，其 中甲基、乙基和正丙基取代基是未取代的或被一个或多个在以下烷基取代 基中描述的取代基取代；R2选自H; d-do烷基，优选d-C6烷基，例如甲基、乙基或 -CH2CH2-OH; C4-C9环烷基；C4-C9杂环烷基；C4-C9杂环烷基烷基；环 烷基烷基，例如环丙基曱基；芳基；杂芳基；芳基烷基，例如节基；杂芳 基烷基，例如吡咬基曱基；-(CH2)nC(0)R6; -(CH2)nOC(0)R6;氨基酰基； HON-C(O)-CH-C(RO-芳基-烷基-;~-(CH2)nR7;R3和R4是相同的或不同的并且独立地是H; C广C6烷基；酰基；或酰 基氛基；或者R3和R4与它们所连接的碳一^4示C-0、 C:S或C-NRs;或者 R2与它所连接的氮以及R3与它所连接的碳一起可以形成C4-C9杂环烷基；杂芳基；聚杂芳基；非芳族聚杂环；或混合的芳基和非芳基聚杂环；Rs选自H; d-C6烷基；OC9环烷基；0<:9杂环烷基；酰基；芳基； 杂芳基；芳基烷基，例如苄基；杂芳基烷基，例如吡咬基甲基；芳族聚环； 非芳族聚环；混合的芳基和非芳基聚环；聚杂芳基；非芳族聚杂环；和混 合的芳基和非芳基聚杂环；n、 Hi、 ii2 和113是相同的或不同的并且独立地选自0至6，当n,是l 至6时，每个碳原子可以任选并且独立地被R3和/或Rt取代；X和Y是相同的或不同的并且独立地选自H;卤素；d-C4烷基，例 如CH;j和CF3; N02; C(O)R，； OR9; SR9; CN;和NR，oR";R6选自H; d画C6烷基；<:4-<:9环烷基；CrC9杂环烷基；环烷基烷基， 例如环丙基曱基；芳基；杂芳基；芳基烷基，例如节基和2-苯基乙烯基； 杂芳基烷基，例如吡梵基曱基；OR12;和NRuR";R7选自OR^; SR15; S(0)R16; S02R17; NR13R14;和NR12S02R6;Rs选自H; ORis; NR13R"; C广C6烷基；0<:9环烷基；C4-C9杂环 烷基；芳基；杂芳基；芳基烷基，例如苄基；和杂芳基烷基，例如吡# 甲基；R9选自Crd烷基，例如CH3和CF3; C(O)-烷基，例如C(0)CH3; 和C(0)CF3;Rio和Rii是相同的或不同的并且独立地选自H; d-Ci烷基；和-C(O)-烷基；Ru选自H; d-C6烷基；0<:9环烷基；0<:9杂环烷基；Q-C9杂环 烷基烷基；芳基；混合的芳基和非芳基聚环；杂芳基；芳基烷基，例如节 基；和杂芳基烷基，例如吡咬基甲基；R"和R"是相同的或不同的并且独立地选自H; d-C6烷基；C4-C9 环烷基；CVC9杂环烷基；芳基；杂芳基；芳基烷基，例如节基；杂芳基 烷基，例如吡咬基甲基；IL^酰基；或R^和R"与它们所连接的氮一起是C4-C9杂环烷基；杂芳基；聚杂芳 基；非芳族聚杂环；或混合的芳基和非芳基聚杂环；Ris选自H; C广Q烷奉；<:4-<:9环烷基；Q画C9杂环烷基；芳基；杂芳基；芳基烷基；杂芳基烷基；和(CH2)mZF^;R，6选自d-C6烷基；CVC9环烷基；CVC9杂环烷基；芳基；杂芳基； 聚杂芳基；芳基烷基；杂芳基烷基；和(CH2)mZR"Rn选自d-C6烷基；CrC9环烷基；C4-C9杂环烷基；芳基；芳族聚 环；杂芳基；芳基烷基；杂芳基烷基；聚杂芳基和NR13R14;m是选自0至6的整数；并且Z选自O; NR13; S;和S(O)。适当地，"未取代的"指的是没有取代基或仅有的取代基是氢。 卣素取代基选自氟、氯、溴和碘，优选氟或氯。烷基取代基包括直链和支链CrCe烷基，除非另外指出。适合的直链 和支链C广C6烷基取代基的实例包括曱基、乙基、正丙基、2-丙基、正丁 基、仲丁基、叔丁基等。除非另外指出，烷基取代基包括未取代的烷基和 被一个或多个适合的取代基取代的烷基，所述的取代基包括不饱和，即具 有一个或多个双或三C-C键；酰基；环烷基；卤素；氧基烷基；烷基M; HS^烷基；酰基M;和OR^，例如烷M。优选的烷基取代基包括卣素、 羟基、烷氧基、氧基烷基、烷基氨基和氨基烷基。环烷基取代基包括C3-C9环烷基，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基等，除非另外说明。除非另外指出，环烷基取代基包括未取代的环烷 基和被一个或多个适合的取代基取代的环烷基，所述的取代基包括CrC6 烷基、卤素、羟基、M烷基、氧基烷基、烷基氨基和OR,5，例如烷氧基。 优选的环烷基取代基包括g素、羟基、烷氧基、氧基烷基、烷基氨基和氨基坑基。以上讨论的烷基和环烷1^代基也应用于其它取代基的烷基部分，例 如但不限于烷氧基、烷基胺、烷基酮、芳基烷基、杂芳基烷基、烷基磺酰 基和烷基酯取代基等。杂环烷基取代基包括3至9元脂族环，例如4至7元脂族环，包含l 至3个选自氮、疏、氧的杂原子。适合的杂环烷基取代基的实例包括吡咯 烷基，四氢呋喃基、四氬嚷吩基，旅梵基，哌唤基，四氢吡喃基，吗啉代， 1，3-二氮杂环庚烷，1，4-二氮杂环庚烷，1,4-氧杂氮杂环庚烷和1，4-氧杂硫杂环庚烷。除非另外指出，环是未取代的或在碳原子上被一个或多个适合的取代基取代，所述的取代基包括CrC6烷基；CrC9环烷基；芳基；杂芳基； 芳基烷基，例如节基；杂芳基烷基，例如吡咬基甲基；卤素；氨基；烷基 J^和ORm，例如烷氧基。除非另外指出，氮杂原子是未取代的或被H， d-C4烷基；芳基烷基，例如节基；杂芳基烷基，例如吡咬基甲基；酰基； M酰基；烷基磺酰基；和芳基磺酰g代。环烷基烷基取代基包括式-(CH2)ns-环烷基化合物，其中n5是1至6的 数字。适合的烷基环烷基取代基包括环戊基甲基、环戊基乙基、环己基甲 基等。此类取代基是未取代的或在烷基部分或在环烷基部分被适合的取代 基取代，所述的取代基包括以上在烷基和环烷基中列出的。芳基取代基包括未取代的苯基和被一个或多个适合的取代基取代的苯 基，所述的取代基包括C!-C6垸基；环烷基烷基，例如环丙基甲基；O(CO) 烷基；氧基烷基；卣素；硝基；M;烷基U; M烷基；烷基酮；腈； 羧基烷基；烷基磺酰基；Jl&磺酰基；芳基磺酰基和01115，例如烷氧基。 优选的取代基包括d-C6烷基；环烷基，例如环丙基曱基；烷氧基； 烷基；卤素；硝基；M;烷基^; tt烷基；烷基酮；腈；g烷基； 烷基磺酰基；芳基磺酰基和M磺酰基。适合的芳基的实例包括d-C4烷 基苯基、d-C4烷氧基苯基、三氟甲基苯基、甲氧基苯基、羟基乙基苯基、 二甲基氨基苯基、氨基丙基苯基、乙酯基苯基、曱磺酰基苯基和甲苯基磺芳族聚环包括萘基和被一个或多个适合的取代基取代的萘基，所述的取代基包括d-C6烷基；烷基环烷基，例如环丙基甲基；氧基烷基；卤素； 硝基；氨基；烷基氨基；氨基烷基；烷基酮；腈；羧基烷基；烷基磺酰基； 芳基磺酰基；^J^磺酰基和OR^，例如烷氧基。杂芳基取代基包括具有5至7元芳族环的化合物，其包含一个或多个 杂原子，例如1至4个杂原子，所述的杂原子选自N、 O和S。代表性的 杂芳基取代基包括吠喃基、嚷吩基、吡咯、吡唑、三唑、瘗唑、噁唑、吡 啶、嘧啶、异噁喳基、吡嗪等。除非另外指出，杂芳1^M^&是未取代的 或在碳原子上被一个或多个适合的取代基取代，所述的取代基包括烷基，上述烷基取代基以及其它杂芳基取代基。氮原子是未取代的或取代的，例如被Ru取代；尤其有用的N取代基包括H、 d-C4烷基、酰基、氨基酰 基和磺酰基。芳基烷基取代基包括式-(CH^5-芳基、-(012)115_1-(<:11-芳基)-(012)115-芳基或-(CH2)^CH(芳基)(芳基)基团，其中芳基和n5在以上定义。此类芳 基烷基取代基包括千基、2-苯基乙基、l-苯基乙基、曱苯基-3-丙基、2-苯 基丙基、二苯基甲基、2-二苯基乙基、5，5-二甲基-3-苯基戊基等。芳基烷基 取代基是未取代的或在烷基或芳基或二者中如在以上烷基和芳基取代基中 描述的被取代。杂芳基烷基取代基包括式-(CH2)。5-杂芳基基团，其中杂芳基和n5在以上定义并且桥连基团与杂芳基部分的碳或氮连接，例如2-、 3-或4-吡1^ 甲基、咪喳基甲基、奮啉基乙基和吡咯基丁基。杂芳g代基是未取代的 或如在以上杂芳基和烷基取代基中描述的被取代。絲酰基取代基包括式-C(0)-(CH2VC(H)(NRuR")-(CH2)n-Rs基团， 其中n、 R13、 Rw和Rs在以上描述。适合的氮基酰基取代基包括天然的和 非天然的氨基酸，例如甘氨酰基、D-色氨酰基、L-赖氨酰基、D-或L-高丝 氨酰基、4-氨基丁酰基和±-3-#^-4-己烯酰基。非芳族聚环取代基包括二环和三环稠合环系，其中每个环可以是4至 9元并且每个环可以包含0、 l或多个双键和/或三键。非芳族聚环的实例包 括萘烷、八氢化茚、全氢苯并环庚烯和全氢苯并-[f]-奠。此类取代基是未取 代的或如在以上环烷基中描述的被取代。混合的芳基和非芳基聚环取代基包括二环和三环稠合环系，其中每个 环可以是4至9元并且至少一个环是芳族的。混合的芳基和非芳基聚环的 适合的实例包括亚曱基二l^苯基、二亚甲基二ltj^苯基、1，2，3，4-四氢化 萘、二苯并环庚烷、二氢化蒽和9H-药。此类取代基是未取代的或被硝基 或如在以上环烷基中描述的被取代。聚杂芳基取代基包括二环和三环稠合环系，其中每个环可以独立地是 5或6元并且包含一个或多个杂原子，例如l、 2、 3或4个杂原子，所述 的杂原子选自O、 N或S，以便稠合的环系是芳族的。聚杂芳基环系的适合的实例包括会淋、异会啉、吡咬并吡唤、吡咯并吡咬、呋喃并吡咬、吲 哚、苯并呋喃、苯并噻吩、苯并吲咪、苯并 恶唑、吡咯并会啉等。除非特 别指出，聚杂芳基取代基是未取代的或在碳原子上被一个或多个适合的取 代基取代，所述的取代基包括烷基、上述烷基取代基和式-CKCIKH-CI^CBbXCH^wH取代基。氮原子是未取代的或取代的，例 如被Ru取代，尤其有用的N取代基包括H、 C广C4烷基、酰基、 基和磺酰基。非芳族聚杂环取代基包括二环和三环稠合环系，其中每个环可以是4 至9元，包含一个或多个杂原子，例如l、 2、 3或4个杂原子，所述的杂 原子选自O、 N或S并且包含O或一个或多个C-C双键或三键。非芳族聚 杂环的适合的实例包括己糖醇、顺-全氢-环庚烷并[b吡啶基、十氢-苯并 [fjl，4氧杂氮杂萆基、2，8-二氧杂二环3.3,0辛烷、六氢-瘗吩并[3，2-b噢吩、 全氢吡咯并[3，2-b吡咯、全氩-l，5-二氮杂萘、全氢-lH-二环戊烷并[b，e吡喃。 除非另外指出，非芳族聚杂环取代基是未取代的或在碳原子上被一个或多 个取代基取代，所述的取代基包括烷基和上述烷基取代基。氮原子是未取 代的或取代的，例如被Ru取代，尤其有用的N取代基包括H、 d-C4烷 基、酰基、JL&酰基和磺酰基。混合的芳基和非芳基聚杂环取代基包括二环和三环稠合环系，其中每 个环可以是4至9元，包含一个或多个杂原子，所述的杂原子选自O、 N 或S，并且至少一个环必须是芳族的。混合的芳基和非芳基聚杂环的适合 的实例包括2，3-二氢吲哚、1，2，3，4-四氢壹啉、5，11-二氢-10H-二苯并[b，e[1，4
二氮杂萆、5H-二苯并[b，e[l，41二氮杂萆、1，2-二氨吡咯并[3，4-b[l，5苯并二 氮杂萆、1，5-二氢-吡啶并[2，3-bl，4二氮杂萆-4-酮、1，2，3，4，6，11-六氢-苯并 [b吡啶并[2，3-e][l，4]二氮杂萆-5-酮。除非另外指出，混合的芳基和非芳基 聚杂环取代基是未取代的或在碳原子上被一个或多个适合的取代基取代， 所述的取代基包括-N-OH、 =N-OH、烷基和上述烷基取代基。氮原子是未 取代的或取代的，例如被Ru取代；尤其有用的N取代基包括H、 CrC4 烷基、酰基、M酰基和磺酖基。氨 基取代基包括伯、仲和叔胺以及盐形式的季胺。氨J^取代基的实例包括单-和二-烷基氨基、单-和二-芳基氨基、单-和二-芳基烷基氨基、芳基-芳基烷基氨基、烷基-芳基氨基、烷基-芳基烷基氨基等。磺酰基取代基包括烷基磺酰基和芳基磺酰基，例如甲磺酰基、苯磺酰 基、甲M酰基等。酰基取代基包括式画C(O)-W、 -OC(O)画W、画C(O)-O画W或画C(0)NRi3R" 基团，其中W是R!6、 H或环烷基烷基。酰基氨基取代基包括式-N(R12)C(0)-W 、 -N(R12)C(0)-0-W和 -N(R12)C(0)-NHOH取代基并且R12和W在以上定义。R2取代基HON-C(O)-CENC(R!)-芳基-烷基-是下式基团<formula>formula see original document page 18</formula>优选每个取代基包括以下 Rj是H、卤素或直链d-C4烷基；R2选自H、 d-C6烷基、CrC9环烷基、CrC9杂环烷基、环烷基烷基、 芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、-(CH2)nC(0)R6、氨基酰基和 (CH2)nR7;R3和R4是相同的或不同的并且独立地选自H和d-C6烷基，或R3和R4与它们所连接的碳一^^示C=0、 C=S或C=NR8;Rs选自H、 d-C6烷基、CrC9环烷基、Q-C9杂环烷基、芳基、杂芳 基、芳基烷基、杂芳基烷基、芳族聚环、非芳族聚环、混合的芳基和非芳 基聚环、聚杂芳基、非芳族聚杂环以及混合的芳基和非芳基聚杂环；n、 ni、 112和n3是相同的或不同的并且独立地选自0至6，当im是1 至6时，每个碳原子是未取代的或独立地被R3和/或r4取代；X和Y是相同的或不同的并且独立地选自H、卣素、C广C4烷基、CF3、 N02、 C(O)R!、 OR9、 SR9、 CN和NR，oR";R6选自H、 d-C6烷基、OC9环烷基、CrC9杂环烷基、烷基环烷基、 芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、ORu和NRuR";R7选自OR15、 SR15、 S(0)R16、 S02R17、 NR13R14和NR12S02R6; Rs选自H、 OR15、 NR13R14、 C广C6烷基、CrC9环烷基、C4-C9杂环 烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基和杂芳基烷基； R9选自d-C4烷基和C(0)-烷基；R^和Ru是相同的或不同的并且独立地选自H、 d-d烷基和-C(O)-烷基；Ru选自H、 C广C6烷基、CVC9环烷基、CrC9杂环烷基、芳基、杂芳 基、芳基烷基和杂芳基烷基；Ru和R"是相同的或不同的并且独立地选自H、 C广C6烷基、C4-C9 环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和氨基 酰基；1115选自H、 d-C6烷基、CrC9环烷基、CVC9杂环烷基、芳基、杂芳 基、芳基烷基、杂芳基烷基和(CH2、ZRu;Rw选自d-C6烷基、CrC9环烷基、CrC9杂环烷基、芳基、杂芳基、 芳基烷基、杂芳基烷基和(CH2)mZRu;Rn选自C广C6烷基、CrC9环烷基、Ci國C9杂环烷基、芳基、杂芳基、 芳基烷基、杂芳基烷基和NR13R14;m是选自0至6的整数；并且Z选自O、 NR13、 S和S(O);或其可药用盐。有用的式(I)化合物包括那些其中每个Ri、 X、 Y、 R3和Rt是H的式 (I)化合物，包括那些其中n2和n3之一是0并且另 一个是1的式(I)化合物， 尤其是那些其中R2是H或-CHrCH2-OH的式(I)化合物。一类适合的异羟肟酸化合物是那些式(IIIa)化合物或其可药用盐其中n4是0至3;R2选自H、 d-C6烷基、CrC9环烷基、OC9杂环烷基、环烷基烷基、 芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、-(CH2)nC(0)R6、氨基酰基和 -(CH2)nR7;并且Rs是杂芳基；杂芳基烷基，例如吡梵基甲基；芳族聚环；非芳族聚环； 混合的芳基和非芳基聚环；聚杂芳基或混合的芳基；和非芳基聚杂环。 另 一类适合的异羟將酸化合物是那些式(nia)化合物或其可药用盐o("la)其中114是0至3;R2选自H、 d-C6烷基、CrC9环烷基、C4-Q杂环烷基、环烷基烷基、 芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、-(CH2)nC(0)R6、氨基酰基和 (CH2)nR7;Rs，是芳基；芳基烷基；芳族聚环；非芳族聚环和混合的芳基；和非芳 基聚环，尤其是芳基，例如对-氟苯基、对-氯苯基、对-0-d-C4烷基苯基 例如对-甲氧基苯基和对-d-C4烷基苯基；和芳基烷基例如节基，邻-、间-或对-氟节基、邻_、间-或对-氯爷基，邻-、间-或对-单、二-或三-0-C广C4 烷基千基例如邻-、间-或对-甲氧基千基、间，对-二乙氧基节基、邻，间，对-三甲氧基苄基以及邻-、间-或对-单、二-或三-C广C4烷基苯基例如对-曱基，间，间-二乙基苯基。另外感兴趣的一类是式(IIIb)化合物或其可药用盐o(陽)其中R 选自H; CVC6烷基；C4-C6环烷基；环烷基烷基，例如环丙基甲基；(CH2)2_4OR21，其中Rm是H、曱基、乙基、丙基和异丙基；并且 Rs"是未取代的1H-吲哚-3-基、苯并呋喃-3-基或会#^-基，或取代的lH-巧l咮-3-基例如5-氟-lH-P引咮-3-基或5-甲氧基-lH-吲咮-3-基、苯并呋喃-3-基或奮啉-3-基。另外感兴趣的一类异羟肟酸化合物是式(IIIc)化合物或其可药用盐(mc)其中包含Z,的环是芳族的或非芳族的，其中非芳族环是饱和的或不饱和的，Z!是O、 S或N-R2。；R!s是H;卣素；C广Q烷基(甲基、乙基、叔丁基)；(:3-<:7环烷基；芳 基，例如未取代的苯基或被4-OCHb或4-CF3取代的苯基；或杂芳基，例 如2-呋喃基、2-塞喻基或2-、 3-或4-吡梵基；R2o是H; C广C6烷基；d-Q烷基-<:3-(:9环烷基，例如环丙基甲基； 芳基；杂芳基；芳基烷基，例如千基；杂芳基烷基，例如吡咬基甲基；酰 基，例如乙酰基、丙酰基和苯甲酰基；或磺酰基，例如甲磺酰基、乙磺酰 基、^t酰基和甲^t酰基；A,是l、 2或3个取代基，其独立地是H; C广C6烷基；-OR19;卤素； 烷基M; M烷基；卤素；或杂芳基烷基，例如吡^甲基；Rw选自H; C广C6烷基；<:4-(:9环烷基；0<:9杂环烷基；芳基；杂芳 基；芳基烷基，例如千基；杂芳基烷基，例如吡啶基甲基和 (CH2CH=CH(CH3)(CH2))13H;R2选自H、 d-C6烷基、OC9环烷基、CrC9杂环烷基、环烷基烷基、 芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、-(CH2)nC(0)R6、氨基酰基和 (CH2)nR7;v是0、 l或2; p是0至3;并且 q是l至5并且r是0;或 q是O并且r是l至5; 其它多种取代基如以上定义的。尤其有用的式(IIIc)化合物是那些其中R2是H或-(CH2)pCH20H，其 中p是1至3的式(IIIc)化合物，尤其是那些其中R是H的式(IIIc)化合物； 例如那些其中R是H并且X和Y各自是H,并且其中q是l至3并且r 是0或其中q是0并且r是1至3的式(IIIc)化合物，尤其是那些其中Zj 是N-R2o的式(IIIc)化合物。在这些化合物中，R2优选H或-CH2-CH2-OH 并且q和r的总和优选是1。另外感兴趣的一类异羟肟酸化合物是式(IIId)化合物或其可药用盐<formula>formula see original document page 22</formula>其中Zi是O、 S或N-R加；R化是H;卤素；d-C6烷基(甲基、乙基、叔丁基)；QpC7环烷基；芳 基，例如未取代的苯基或被4-OCH3或4-CF3取代的苯基；或杂芳基；R加是H; C广C6烷基，CrC6烷基-C3-C9环烷基，例如环丙基甲基； 芳基；杂芳基；芳基烷基，例如苄基；杂芳基烷基，例如吡咬基甲基；酰 基，例如乙酰基、丙酰基和苯曱酰基；或磺酰基，例如曱磺酰基、乙磺酰 基、辆酰基、甲絲酰基；A!是l、 2或3个取代基，其独立地是H、 C广C6烷基、-ORw或卣素；Rw选自H; d-C6烷基；<:4-(:9环烷基；CrC9杂环烷基；芳基；杂芳 基；芳基烷基，例如节基；和杂芳基烷基，例如吡咬基甲基；p是0至3;并且q是l至5并且r是0;或q是0并且r是l至5;其它多种取代基如以上定义的。尤其有用的式(IIId)化合物是那些其中R2是H或-(CH2)pCH20H,其 中p是l至3的式(HId)化合物，尤其是那些其中R是H的式(IIId)化合物； 例如那些其中R是H并且X和Y各自是H,并且其中q是l至3并且r 是0或其中q是0并且r是l至3的式(IIId)化合物。在这些化合物中， R2优选是H或-CH2-CH2-OH并且q和r的总和优选是1。本发明进一步涉及式(IIIe)化合物或其可药用盐多种取代基如以上定义的。尤其有用的式(IIIe)化合物是那些其中R^是H、氟、氯、溴、CrC4 烷基、取代的d-C4烷基、CVC7环烷基、未取代的苯基、在对位取代的苯 基或杂芳基，例如吡咬基环的式(IIIe)化合物。另外一组有用的式(IIIe)化合物是那些其中R2是H或-CH2)pCH20H， 其中p是l至3的式(IIIe)化合物，尤其是那些其中Rt是H的式(IIIe)化合 物；例如那些其中Ri是H并且X和Y各自是H，并且其中q是l至3并 且r是0或其中q是0并且r是1至3的式(IIIe)化合物。在这些化合物中， R2优选是H或-CH2-CH2-OH并且q和r的总和优选是1。在这些化合物 中，p优选是l并且R3和R4优选是H。另外一组有用的式(IIIe)化合物是那些其中R^是H、甲基、乙基、叔 丁基、三氟甲基、环己基、苯基、4-曱H^苯基、4-三氟甲基苯基、2-呋喃 基、2-瘗吩基或2-、 3-或4-吡咬基，其中2-呋喃基、2-瘗吩基和2-、 3-或 4-吡^取代基是未取代的或如以上在杂芳基环中描述的被取代；R2是H 或-(CH2)pCH20H，其中p是l至3的式(IIIe)化合物；尤其是那些其中R！是H并且X和Y各自是H，并且其中q是l至3并且r是0或其中q是O 并且r是1至3的式(IIIe)化合物。在这些化合物中，R2优选是H或 -CH2-CH2-OH并且q和r的总和优选是1。那些式(IIIe)化合物(其中R加是H或d-C6烷基，尤其是H)是以上描 述的式(Ie)化合物的各个亚类中的重要成员。N一羟基-3-[4-[[(2-羟基乙基)[2-(lH-吲哚-3-基)乙基-氨基曱基苯 基-2E-2-丙烯酰胺、N-羟基-3-[4-[[[2-(lH-吲哚-3-基)乙基-氨基]曱基苯 基-2E-2-丙烯酰胺和N-羟基-3-[4-[[[2-(2-甲基-lH-吲哚-3-基)-乙基-氨基
甲基苯基l-2E-2-丙烯酰胺或其可药用盐是重要的式(IIIe)化合物。本发明进一步涉及式(IIIf)化合物或其可药用盐多种取代基如以上定义的。有用的式(IIIf)化合物包括那些其中R2是H或-(CH2)pCH20H,其中p 是l至3的式(IIIf)化合物，尤其是那些其中Ri是H的式(IIIf)化合物；例 如那些其中R是H并且X和Y各自是H，并且其中q是l至3并且r是 0或其中q是0并且r是l至3的式(IIIf)化合物。在这些化合物中，R:优 选是H或-CH2-CH2-OH并且q和r的总和优选是1。^羟基_3-[4-[[[2-(苯并呋喃-3-基)-乙基]-氨基]曱基]苯基-2E-2-丙烯酰 胺或其可药用盐是重要的式(IIIf)化合物。上述化合物通常以可药用盐形式应用。可药用盐包括(适当时)可药用 碱加成盐和酸力卩成盐，例如金属盐，例如碱金属盐和碱土金属盐、铵盐、 有机胺加成盐和^J^酸加成盐以及磺酸盐。酸加成盐包括无机酸加成盐， 例如盐酸盐、硫酸盐和磷酸盐；以及有机酸加成盐，例如烷基磺酸盐、芳 基磺酸盐、乙酸盐、马来酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐和乳酸盐。 金属盐的实例是碱金属盐，例如锂盐、钠盐和钾盐；碱土金属盐，例如镁盐和钓盐，铝盐和锌盐。铵盐的实例是铵盐和四甲基铵盐。有机胺加成盐 的实例是与吗啉和哌啶的盐。M^口成盐的实例是与甘氨酸、苯丙氨酸、 谷氨酸和赖氨酸的盐。磺酸盐包括曱磺酸盐、甲苯磺酸盐和苯磺酸盐。另外的式(I)范围内的HDAI化合物以及它们的合成在2002年3月21 曰公布的WO 02/22577中公开，将其全部并入本文作为参考。在WO 02/22577范围内的两个优选的化合物是OH ON-羟基-l[4-[(2-羟基乙基)口-(lH-吲哚-3-基)乙基-氨基甲基]苯 基-2E-2-丙烯酰胺或其可药用盐，下文"化合物(IV)",和o^羟基-3-[4-[[[2-(2-甲基-111-吲哚-3-基)-乙基卜氨基]甲基]苯基-2E-2-丙烯酰胺或其可药用盐，下文"化合物(V)"。在本发明另外的实施方案中，HDAC抑制剂化合物可以选自抑制組蛋 白脱乙酰酶的任何化合物，例如选自以下的化合物trapoxin和其它四肽， 例如chlamydocin和HC毒素；曲古抑菌素及其类似物，例如曲古抑菌素 A; apicidin;辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA); oxamflatin; MS-275; pyroxamide;丙戊酸(valproic acid); [4-(2-氨基-苯基氨基甲酰基)-节基-氨基甲酸吡咬-3-基甲酯及其衍生物； 缩肽FR901228; CI-994; 丁酸苯酯； 丁酸钠；丁酸；在J. Med. Chem. 45(9):1778-84 (Apr 25， 2002)中公开的3-(4画 芳酰基-lH-2吡咯基-N-羟基-丙烯酰胺；ADHA化合物8; -(-)D叩udecin; Scriptaid; 和Sirtinol。在上述专利申请的引用的各种情况中，涉及化合物的主题并入本申请作为参考。例如包括其可药用盐、相应的外消旋体、非对映异构体、对映 异构体、互变异构体以及以上公开的化合物存在的相应的结晶修饰，例如 其中公开的溶剂化物、7jC合物和多晶型物。在本发明组合中用作活性成分 的化合物可以分别如在引用的文献中描述的制备和施用。在本发明的范围 内也包括多于两种不同上述活性成分的组合，即本发明范围内的药物组合 可以包括三种或更多种活性成分。根据本发明的特别发现，提供了1. 药物组合，该药物组合包含a) 式(I)的嘧M氨基苯甲酰胺化合物；和b) 至少一种HDAC抑制剂。2. 在需要的个体中治疗或预防增殖性疾病的方法，该方法包括给所述 个体共施用例如同时或顺序施用治疗有效量的式(I)的嘧^&氨基苯甲酰胺 化合物和HDAC抑制剂，例如以上〃>开的。增殖性疾病的实例包括例如肺瘤、白血病、银屑病、再狭窄、硬化性 皮炎和纤维变性。3. 在以上l)项下定义的药物组合，其例如用于在以上2)项下定义的方法。4. 在以上l)项下定义的药物组合，其用于制备用于在以上2)项下定义 的方法的药物。以上说明的方法中本发明组合的用途可以在动物试验方法以及临床中 例如才艮据下文描述的方法进行说明。现在令人惊奇地发现嘧^氨基苯曱酰胺化合物和HDAC抑制剂的 组合具有治疗性质，这使其作为增殖性疾病的治疗特别有用。在另外的实施方案中，本发明提供了治疗增殖性疾病的方法，该方法 包括给需要该治疗的哺乳动物施用治疗有效量的嘧^氨基苯甲酰胺化合 物和HDAC抑制剂或它们的可药用盐或前药的组合。本发明优选提供治疗患有增殖性疾病的哺乳动物、特别是人类的方法， 该方法包括给需要该治疗的哺乳动物施用抑制量的嘧M氨基苯曱酰胺化 合物和HDAC抑制剂或它们的可药用盐的组合。在本描述中，术语"治疗，，包括预防性或防止性治疗以及治愈或疾病 抑制治疗，包括处于接触疾病危险中或怀疑已经接触疾病的患者以及患病 患者的治疗。该术语进一步包括延迟疾病进程的治疗。本文所用的术语"治愈"指的是有效治疗涉及增殖性疾病的进行性发作。术语"预防性"指的是防止涉及增殖性疾病的疾病的发作或复发。 本文所用的术语"延迟进程"指的是给处于待治疗疾病前期或早期的 患者施用活性化合物，其中患者例如相应疾病前形式^皮诊断或患者例如在 药物治疗中患有病症或患有由意外引起的病症，在该病症下可能相应的疾 病会发展。该性质不能预料的范围指的是嘧咬基氨基苯甲酰胺化合物和HDAC 抑制剂的组合的用途特别令人感兴趣用于制备治疗增殖性疾病的药物。为了说明嘧^&氨基苯曱酰胺化合物和HDAC抑制剂的组合特别适 用于治疗增殖性疾病并且具有良好的治疗窗和其它益处，临床试验可以以 技术人员已知的方法进行。A.組合的治疗适合的临床研究是例如在患有增殖性疾病的患者中进行开放标记、剂 量增加研究。该研究特别证明了本发明组合的活性成分的协同作用。该有 益作用可以直接通过这些研究的结果确定，所述的这些研究是本领域技术 人员已知的。该研究特别适用于将应用活性成分的单一治疗与本发明组合 的作用进行比较。优选的是，试剂(a)的剂量增加直至达到最大耐受剂量， 并且试剂(b)以固定剂量施用。可选择的是，试剂(a)以固定剂量施用并且试 剂(b)的剂量增加。每个患者每天或间歇接受试剂(a)的剂量。治疗的作用可 以在该研究中确定，例如在12、 18或24周后通过每6周评价症状分数确 定。与仅应用本发明组合中所用的药物活性成分之一的单一治疗相比，施 用本发明药物组合不仅产生有益的作用，例如协同治疗作用，例如关于减 轻、延迟进程或抑制症状，而且产生进一步令人惊奇的有益作用，例如更 低的副作用、改善生活质量或降低发病率。另外的益处是可以应用更低剂量的本发明组合的活性成分，例如剂量 需要不仅经常更少而且应用的更不频繁，这可以降低副作用的发生或严重 程度。这是根据待治疗患者的期望和要求。本文所用的术语"共施用"或"组合施用"等指的是包括给单一患者 施用选择的治疗剂，并且旨在包括治疗方案，在所述的治疗方案中不需要 通it4目同的施用途径或在相同时间施用试剂。本发明的一个目标是提供药物组合物，该药物组合物包含在靶向或预 防增殖性疾病中共同治疗有效量的本发明组合。在该组合物中，试剂(a)和 试剂(b)可以以一个组合单位剂型或以两个不同的单位剂型一起施用、先后 施用或分别施用。单位剂型也可以是固定的组合。用于分别施用试剂(a)和试剂(b)或用于以固定组合施用的药物组合物， 即包含至少两种组合成员(a)和(b)的单一盖伦组合物，根据本发明可以应用 本身已知的方法制备并且是适合肠道(例如口服或直肠)和非肠道施用于哺 乳动物(温血动物，包括人类)的，该组合物包含治疗有效量的至少一种单 独的药理学活性组合成员，例如如上述，或与一种或多种可药用栽体或稀 释剂、尤其是适合肠道或非肠道应用的栽体或稀释剂组合。适合的药物组合物包含例如约0.1至约99.9%、优选约1%至约60% 活性成分。用于肠道或非肠道施用组合治疗的药物制剂是例如那些单位剂 型，例如糖包衣片剂、片剂、胶嚢剂或栓剂或安瓿剂。如果没有另外说明， 它们以本身已知的方法制备，例如通过常规的混合、制粒、糖包衣、溶解 或冻千方法。值得重视的是在各个剂型的单剂量中包含的组合成员的单位 含量本身不需要形成有效量，因为所需的有效量可以通过施用多个剂量单 位而实现。特别的是，治疗有效量的各个本发明组合的组合成员可以同时施用或 依次并且以任何顺序施用，并且组分可以分别或作为固定组合施用。例如 本发明预防或治疗增殖性疾病的方法可以包括(i)施用游离或可药用盐形 式的第一种试剂(a);并且(ii)施用游离或可药用盐形式的试剂(b)，同时或 依次以任何顺序施用，以共同治疗有效量，优选以协同有效量施用，例如 以相应于本文描述的量的日剂量或间歇剂量施用。本发明组合的单一组合成员可以在治疗过程中在不同时间分别施用或以分开或单一的组合形式同 时施用。另外，术语施用也包括应用在体内转化为组合成员的组合成员的 前药。因此，本发明将被理解为包括所有同时或交互治疗的方案并且因此 术语"施用"将被解释。应用于本发明组合的各个组合成员的有效剂量可以取决于所应用的特 别的化合物或药物组合物、施用方式、待治疗的病症、待治疗病症的严重 程度而不同。因此，本发明组合的剂量方案根据多种因素而选择，所述的 因素包括施用途径和患者肾和肝的功能。具有普通技术的临床医生或内科 医生可以容易地确定并且开出减轻、逆转或阻止病症进程所需的有效量的 单一活性成分。获得在产生疗效而不产生毒性范围内的活性成分浓度的最 佳精确值需要基于活性成分的对耙位点的利用度的动力学。试剂(a)或(b)的日剂量将当然取决于多种因素而不同，所述的因素例如 所选择的化合物、待治疗的特别病症以及预期的作用。但是，通常通过以 日剂量约0.03至5 mg/kg/天、特别是0.1至5 mg/kg/天、例如0.1至2.5 mg/kg/天作为单剂量或分剂量施用试剂(a)可以获得满意的结果。试剂(a) 和试剂(b)可以通过任何常规途径、特别是肠道(例如口服)例如以片剂、胶 嚢剂、饮用溶液剂的形式施用或非肠道例如以可注射溶液剂或混悬剂的形 式施用。适合口服施用的单位剂型包含约0.02至50mg活性成分、通常为 0.1至30 mg例如试剂(a)或(b)，以及一种或多种可药用稀释剂或载体。因此，试剂(b)可以以日剂量范围0.5至l，000mg施用于人类。适合口 月艮施用的单位剂型包含约0.1至500 mg活性成分，以及一种或多种可药用 稀释剂或载体。与仅应用本发明组合中所用的药物活性成分之一的单一治疗相比，施用本发明药物组合不仅产生有益的作用，例如协同治疗作用，例如关于抑 制造血干细胞的失调的增殖或减緩白血病例如慢性粒细胞白血病(CML)、 急性淋巴细胞白血病(ALL)或急性粒细胞白血病(AML)的进程或肺瘤生 长，而且进一步产生令人惊奇的有益作用，例如减少副作用、改善生活质 量或降^^病率。另外的益处是可以应用更低剂量的本发明组合的活性成分，例如剂量需要不仅经常更少而且应用的更不频繁，或可以应用以便降低副作用的发 生。这是才艮据待治疗患者的期望和要求。嘧M氨基苯甲酰胺化合物和HDAC抑制剂的组合可以是组合的、独 立的或与一种或多种可药用载体和任选一种或多种其它的常规药用辅剂一 起，并且其肠道(例如口服)以片剂、胶嚢剂、胶嚢形片剂等形式施用或非 肠道(例如腹膜内或静脉内)以无菌可注射溶液剂或混悬剂形式施用。肠道 和非肠道组合物可以通过常规方法制备。嘧^氨基苯甲酰胺化合物和HDAC抑制剂的组合可以单独应用或 与至少一种用于这些病理学的其它药物活性化合物组合应用。这些活性化 合物可以在相同的药物制剂中组合或是组合制剂"部分的药盒"形式，就 某种意义而言，组合成员可以独立施用或应用具有不同量的组合成员的不 同的固定组合，即同时或在不同时间点施用。然后，部分的药盒的各个部 分可以同时或按时间顺序交错施用，即部分的药盒的各个部分在不同时间 点并且具有相等或不等的时间间隔施用。可以引用以用于与嘧^氛基苯 甲酰胺化合物和HDAC抑制剂的组合进行组合的化合物的非限制性实例 是细胞毒化疗药物，例如阿糖胞苷、柔红霉素、多柔比星、环磷酰胺、VP-16 或伊马替尼等。另夕卜，嘧^&M苯甲酰胺化合物和HDAC抑制剂的组合 可以与其它信号转导抑制剂或其它癌基因靶向药物组合，希望产生显著的 协同作用。B.待治疗疾病术语"增殖性疾病"包括但不限于肿瘤、4艮屑病、再狭窄、硬化性皮 炎和纤维变性。术语血液恶性特别指的是白血病，尤其是那些表达Bcr-Abl、 c-Kit或 HDAC的白血病，(或那些取决于Bcr-Abl、 c-Kit或HDAC的白血病)并且 包括但不限于CML和ALL，尤其是费城染色体阳性ALL(Ph+ALL)，以 及伊马替尼抗性白血病。本发明的组合尤其优选用于白血病，例如CML、 ALL或AML。最尤其优选用于对伊马替尼具有抗性的疾病。(伊马替尼并 且以名称Gleevec⑧销售)。术语"实体瘤疾病，，尤其指的是卵巢癌、乳腺癌、结肠癌以及通常的胃肠道癌、宫颈癌、肺癌(例如小细胞肺癌和非小细胞肺癌)、头颈癌、膀 胱癌、前列腺癌或卡波西肉瘤。因此，抑制提及的蛋白激酶活性，尤其是上下文提及的酪蛋白激酶的 本发明的组合可以用于治疗蛋白激酶依赖性疾病。蛋白激酶依赖性疾病特 别是增殖性疾病，优选良性或尤其是恶性肿瘤(例如肾癌、脑癌、肝癌、肾 上腺癌、膀胱癌、乳腺癌、胃癌(尤其是胃肿瘤)、卵巢癌、结肠癌、直肠癌、前列腺癌、胰腺癌、肺癌(尤其是SCLC)、阴道癌或甲状腺癌、肉瘤、 多发性骨髓瘤、成胶质细胞瘤和多种头颈肿瘤，以及白血病)；尤其是结肠 癌或结肠直肠腺瘤或头颈肿瘤、上皮过度增殖尤其是4艮屑病、前列腺增生、 瘤形成尤其是上皮特征，优选乳腺癌或白血病。它们能够引起肿瘤衰退并 且预防肺瘤转移的形成和转移(以及^L转移)的生长。它们除了可以用于上 皮过度增殖(例如4艮屑病)外，还可以用于前列腺增生以及治疗瘤形成，尤 其是上皮特征，例如乳腺癌。也可以应用本发明组合治疗免疫系统疾病以 及多种或尤其是涉及单一的酪蛋白激酶的疾病；另外，本发明组合也可以 用于治疗中枢或外周神经系统疾病，所述的疾病涉及通过至少一种酪蛋白 激酶、尤其选自那些特别提及的酪蛋白激酶进行信号传递。在CML中，在造血干细胞(HSC)中相互平衡的染色体异位产生 Bcr-Abl杂合基因。后者编码致癌Bcr-Abl融合蛋白。而Abl编码紧密调用，Bcr-Abl融合基因编码在组成上活化的激酶，该激酶转化HSC以产生 显示失调的克隆增殖、降低的黏附骨髓基质的能力和降低的对诱变刺激的 凋亡响应的表型，其能够进行性积聚更多的恶性转化。产生的粒细胞不能 发展成为成熟淋巴细胞并且释放入循环中，这在成熟细胞中产生缺陷并且 增加了感染的可能性。已经描述Bcr-Abl的ATP竟争抑制剂防止激酶活化 促有丝分裂和抗凋亡途径(例如P-3激酶和STAT5)，引起Bcr-Abl表型细 胞的死亡并且因此提供对抗CML的有效治疗。因此，本发明组合尤其适 于治疗与it^达有关的疾病，尤其是白血病，例如白血病，例如CML或 ALL。在本发明的更广泛的含义中，增殖性疾病包括高增殖性病症，例如白血病、增生、纤维变性(尤其是肺，但也可以是其它类型的纤维变性，例如肾纤维变性)、血管生成、4艮屑病、动脉粥样硬化和血管平滑肌增生，例如 血管成形术后的狭窄或再狹窄。另一方面，本发明組合可以用于治疗关节 炎。本发明组合也可以用于治疗或预防纤维发生障碍，例如硬皮病(系统性 硬化病)；与蛋白聚集和淀粉样蛋白形成有关的疾病，例如亨廷顿舞蹈病； 抑制丙型肝炎病毒复制以及治疗丙型肝炎病毒；治疗与病毒感染有关的肿 瘤，例如人乳头瘤病毒；以友抑制依赖于热休克蛋白的病毒。本发明组合主要抑制血管的生长并且因此例如有效对抗多种与失调的 血管生成有关的疾病，尤其是由眼部新血管形成引起的疾病，尤其是视网 膜病变，例如糖尿病性视网膜病变或年龄相关的黄斑变性，银屑病，成血 管细胞瘤例如血管瘤，肾小球膜细胞增殖障碍例如'匱性或急性肾病，例如 糖尿病性肾病、恶性肾硬化、血栓性微血管综合征或移植排斥反应，或尤 其是炎性肾病例如肾小球肾炎，尤其是肾小球膜增殖性肾小球肾炎、溶血 性尿毒症综合征、糖尿病性肾病、高血压性肾硬化、动脉粥样化、动脉再 狭窄、自身免疫性疾病、糖尿病、子宫内膜异位症、慢性哞喘，以及尤其 是肺瘤疾病(实体瘤，也可以是白血病和其它血液恶性)，例如尤其是乳腺 癌、结肠癌、肺癌(尤其是小细胞肺癌)，前列腺癌或卡波西肉瘤。本发明 組合抑制肿瘤生长并且尤其适合预防肿瘤的转移传4番以及孩i转移的生长。本发明组合特别可以用于治疗(i) 乳腺胂瘤、表皮样瘤，例如表皮样头和/或颈肿瘤或口部肿瘤；肺部 肿瘤，例如小细胞或非小细胞肺部肿瘤；胃肠道肿瘤，例如结肠直肠肺瘤； 或泌尿生殖肺瘤，例如前列腺胂瘤，尤其是激素顽固性前列腺肿瘤；(ii) 对用其它化疗治疗具有顽固性的增殖性疾病；或(iii) 由于多种药物抗性而对用其它化疗具有顽固性的肿瘤。 实施例试剂和抗体化合物(V)和化合物(II)是由诺华制药(Novartis Pharmaceuticals)(EastHanover，NJ)提供的。多克隆抗隱PARP、抗-胱天蛋 白酶-9、抗-胱天蛋白酶-3和抗-p-ERK1/2抗体购自细胞信号转导技术(CellSignaling Technology)(Beverly， MA)。多克隆抗-STAT-5和羊多克隆抗 -Pim-2抗体，以及单克隆抗-c-Myc和抗-Abl抗体购自圣克鲁兹生物技术 (Santa Cruz Biotechnology)(Santa Cruz, CA)。单克隆抗-p-STAT5抗体购 自北部生物技术(Upstate Biotechnology)(Lake Placid, NY)。免疫印迹分析 的抗体p21、 p27、 p-CrkL、 CrkL、 p-AKT、 AKT、 Bim、 Bcl-xL和ERK1/2 如前述获得。细胞系和细胞培养表达Bcr-Abl的CML LAMA-84和K562细胞得 自美国组织培养物保藏中心(American Tissue Culture Collection)(Manassas， VA)并且保持在包含10%胎牛血清的RPMI培养基 中培养并且每周传代两次。小鼠pro_B BaF3细胞在用作为IL-3来源的 10%WEHI培养基补充的完全RPMI-1640培养基中培养。为了本文描述的 研究，将对数生长细胞暴露于指定浓度的化合物(II)和/或化合物(V)中。在 这些处理之后，将细胞或细胞沉淀在进行研究之前洗涤至无药物。位点定向诱变和核转染在本试验中应用三个p210Bcr-Abl建群。p210 Bcr-Abl WT和p210 Bcr-Abl(T315I)建群是产生的。p210 Bcr國Abl(E255K) 突变体是由包含pSVneo建群的Bcr-Abl的位点定向诱变应用QuikChange II XL试剂盒(Stratagene， Cedar Creek, TX)才艮据生产商的介绍产生的，并 且将产生的克隆测序以确定点突变。对于p210 Bcr-Abl建群核转染至BaF3 细胞中，将在IOO 核转染溶液V(Amaxa， Gaithersburg， MD)中的500 万BaF3细胞与5照p210 Bcr-Abl WT、 p210 Bcr-Abl(T315I)或p210 Bcr-Abl(E255K)在小池中混合并且应用程序G-16进行核转染。核转染后， 将细胞以浓度lxl(^个细胞/mL在用作为IL-3来源的10。/。WEHI培养基补 充的完全RPMI-1640培养基中培养过夜以恢复。将表达WT的BaF3细胞 的稳定转染子或Bcr-Abl的突变形式(即T315I或E255K)在用10%血清、 1.0 U/mL青霉素、1照/mL链霉素和0.75 mg/mL G418补充的RPMI1640 中保持。然后将稳定表达的细胞通过除去IL-3而进一步选择。通过免疫印 迹分析确定Bcr-Abl表达后，将细胞用于本文描述的研究。原代CML-BC细胞和NBMC:收获并且纯化来自10名患者(满足伊 马替尼抗性Ph染色体阳性CML-BC(伊马替尼抗性费城染色体阳性慢性粒细胞白血病原始细胞危象))的外周血液和/或骨髓的白血病细胞。另外，收获并且纯化NBMC。所有的患者签字同意允许将他们的细胞用于这些试 验，作为由南佛罗里达大学机构审查委员会(University of South Florida Institutional Review Board(IRB))批准的临床方法的部分。CML-BC细胞中Bcr-Abl的测序应用Trizol方法(英骏乂>司 (Invitrogen)， Carlsbad, CA),总RNA从得自2名患者(由于他们对伊马替 尼和化合物(II)的治疗没有响应而被怀疑具有Bcr-Abl T315I突变)的 1000-1500万细胞中分离。总RNA(5照)用第一链cDNA合成试剂盒(英骏 公司)逆转录。将逆转录cDNA用于聚合H^反应(PCR)扩增以扩增Bcr-Abl 片段(包含Bcr连接区域和c-Abl激酶区域)。将扩增的序列进行琼脂糖凝胶 纯化并且克隆至pCR4-TOPO质粒中。将产生的质粒转入大肠杆菌Machl 细胞(英骏公司)中在37"C下过夜。将每个样品的10个集落通过集落PCR 检验并且传代培养以分离质粒。用T3和T7引物将分离的质粒测序^^验 c-Abl激酶区域突变。悬浮培养或集落生长抑制用指定浓度的化合物(II)和/或化合物(V)处 理48小时后，将未处理的细胞和药物处理的细胞在RPMI 1640培养基中 洗涤。然后，将细胞以200 000个细胞/mL的浓度置于悬浮培养基中4天。 在该培养期结束时，确定细胞浓度和细胞数量的增加百分数。可选择的是， 用药物处理后，将在各个条件下处理的约200个细胞再悬浮于包含10% FBS的100 jiL RPMI 1640培养基中，然后根据生产商的方法铺板于每孔 包含1.0 mL Methocult培养基(干细胞技术(Stem Cell Technologies), Vancouver, Canada)的12孔培养板中， 一式两份。将板在37C、具有 5。/。C02的培养箱中放置10天。在该培养后，将每孔包含50或更多细胞的 集落通过倒置显^L镜计数，并且计算与未处理的对照细胞相比的集落生长 抑制百分数。估计非活细胞的百分数将细胞用锥虫蓝(西格玛(Sigma)， St Louis， MO)染色。通过对在血细胞计数器中显示锥虫蓝吸收的细胞进行计数来确 定非活细胞的数目并且以占未处理对照细胞的百分数来净艮告。通过膜联蛋白V染色评价凋亡将未处理和药物处理的细胞用膜联蛋白V和PI染色，并且通过流式细胞仪确定凋亡细胞的百分数。通过Chou 和Talalay的中值剂量-作用分析来分析化合物(II)和化合物(V)在诱导K562 和LAMA-84细胞凋亡中的协同作用，该分析应用可商购的软件(Calcusyn; Biosoft, Ferg訓n， MO)进行。蛋白质印迹分析根据前述方法，应用特别的抗血清和单克隆抗体进 行蛋白质印迹分析，并且在蛋白质印迹上进行水平扫描光密度测定。Bcr-Abl的免疫沉淀和免疫印迹分析在指定的药物处理后，将细胞 在裂解緩冲液(20mMTris [pH8卜150nM氯化钠、1%NP40、 0.1 M氟化 钠、lmMPMSF、 lmM原钒酸钠、2.5照/mL亮抑酶肽、5pg/mL抑蛋 白酶肽)中在水上裂解30分钟，并且通过离心除去核和细胞碎片。将细胞 裂解物(200照)与Abl-特异性单克隆抗体在4'C下一起培养1小时。向其中 加入洗涤的蛋白G琼脂糖珠并且在4X:下培养过夜。将免疫沉淀物在裂解 緩冲液中洗涤3次，并且用SDS上样緩冲液将蛋白洗脱，然后用对抗抗 Abl的特异性抗体或抗磷酸酪氨酸抗体进行免疫印迹分析。统计学分析应用斯氏t检验确定从用不同试验条件处理的白血病细 胞群体中获得的数值之间的显著差异。P值小于0.05的祐:认为具有显著性。化合物(II)和化合物(V)诱导K562和LAMA-84细胞凋亡确定化合物 (11)和/或化合物(V)在培养的以及原代CML-BC细胞中的作用。确定单独 用化合物(V)或化合物(II)处理对K562和LAMA-84细胞的凋亡作用。在剂 量依赖方法中，单独暴露于化合物(V)或化合物(II)诱导K562和LAMA-84 细胞的凋亡。数据也显示了化合物(II)在诱导K562和LAMA-84细胞的凋 亡中的潜能比伊马替尼大约10倍。在剂量依赖方法中，用化合物(II)处理 LAMA-84细胞抑制了酪氨醉磷酸化的Bcr-Abl的水平，而不影响Bcr-Abl 的水平。用化合物(II)处理也抑制了 p-CrkL的水平(见下文)，这表明 AMN107抑制Bcr-Abl的TK活性。用化合物(II)处理削弱了 p-STAT5的 水平，并且降低了 c-Myc和Bcl-xL的表达(这是由STAT5反式激活的)。 用化合物(II)处理也抑制了 p-AKT的水平，而不抑制AKT的水平(其与p27 诱导水平有关)。在暴露于伊马替尼后也观察到了这些。在K562细胞中也 观察到了化合物(II)类似的作用。用化合物(V)和化合物(II)共处理发挥了更好的抗Bcr-Abl活性并且协 同诱导K562和LAMA-84细胞凋亡接着，确定用化合物(V)和化合物(II) 共处理对Bcr-Abl以及Bcr—Abl信号蛋白下游水平的作用。与任一试剂单 独处理相比，相对低浓度的化合物(V)(20 nM)和化合物(11)(50 nM)处理24 小时引起Bcr-Abl的更多消除并且在K562细胞中诱导更高的p27水平。 相反，与单独用化合物(V)处理相比，用化合物(II)和化合物(V)组合处理使 p21水平诱导至相似的程度。用化合物(V)和化合物(II)组合处理也引起更 低的p-CrkL、 Bcl-xL和c-Myc的水平，但i秀导更高的Bim水平。用化合 物(II)和化合物(V)共处理后，同时诱导Bim以及Bcl-xL的降低与更多的 PARP剪切有关，这是由于在凋亡过程中效应器胱天蛋白酶3和7的活性 增强。在对抗LAMA-84细胞中也观察到了化合物(V)和化合物(II)的类似 作用。确定化合物(V)和/或化合物(II)对K562细胞的悬浮培养和集落生长 的凋亡作用。用化合物(II)和化合物(V)共处理比单独用任一药物处理引起 更显著的抑制集落生长(P〈0.05)。在对抗K562细胞的悬浮培养生长中也观 察到了组合的类似作用。确定用化合物(II)和化合物(V)组合处理在K562 和LAMA-84细胞中的凋亡作用(膜联蛋白V-阳性细胞的百分数增加)。值 得注意的是，暴露于化合物(II)和化合物(V)的组合在K562和LAMA-84 细胞中显示出协同凋亡作用，这是由中值剂量-作用等效应图(isobologram) 分析确定的。对于化合物(II)和化合物(V),在每种细胞类型中组合指数值 小于1.0。K562的CI值分别为0.47、 0.36 、 0.45 、 0.45和0.45 ，并且LAMA84 的CI值分别为0.85、 0.22、 0.21和0.16。化合物(II)和/或化合物(V)的作用 也可以在对抗NBMC中确定。尽管化合物(II)没有作用(至多1.0 ^M)，但 是暴露于20和50 nM化合物(V)48小时i秀导NBMC的存活减少13.1%和 15.9%(在一式两份进行的试验中两份样品的平均值)。由于暴露于50 nM化 合物(V)，用化合物(II)共处理没有显著增加NBMC的存活减少(PX).05)。化合物(V)降4氐突变Bcr-Abl水平并且"i秀导表达Bcr-AblT3151或 Bcr-AblE255K的IM抗性BaF3细胞凋亡确定用化合物(V)和/或化合物 (II)处理对具有未突变的Bcr-Abl或点突变的Bcr-AblE255K或 Bcr-AblT3151的异位表达的BaF3细胞的作用。在具有Bcr-Abl内源表达的K562和LAMA824细胞中观察到类似的作用，在剂量依赖方法中化合 物(II)诱导BaF3/Bcr-Abl细胞凋亡。另外，用化合物(II)和化合物(V)共处 理比单独应用任一试剂显著诱导更多的BaF3/Bcr-Abl细胞凋亡。尽管暴露 于伊马替尼诱导BaF3/Bcr-Abl细胞的剂量依赖凋亡，但是 BaF3/Bcr-AblT3151细胞对伊马替尼具有抗性，其水平至多高达IO ^M。 相反，BaF3/Bcr-AblT3151细胞与BaF3/Bcr-Abl细胞对于单独用化合物(V) 处理诱导的凋亡同祥敏感。用50 nM化合物(V)处理48小时诱导 BaF3/Bcr-Abl T315I细胞凋亡约30%。 LBH589水平越低有效性越差。相 反，BaF3/Bcr-AblT3151细胞对于化合物(II)具有抗性，其水平高达2,000 nM。值得注意的是，用2,000 nM而非100 nM化合物(II)共处理显著增加 了化合物(V) i秀导的 BaF3/Bcr-AblT3151 细胞凋亡。对抗 BaF3/Bcr-AblE255K细胞，尽管100 nM化合物(II)无效，但是暴露于200 和500nM化合物(II)分别诱导26.0o/o和43.0。/o细胞凋亡。另外，用化合物 (11)(500 nM)和化合物(V)(50 nM)共处理比单独用任一试剂处理显著诱导 更多的BaF3/Bcr-AblE255K细胞凋亡(PO.Ol)，尽管用100 nM化合物(II) 共处理效力更低。用更高艰度的化合物(II)(1.0或2.0 jiM)共处理也增强化 合物(V)诱导的BaF3/Bcr-AblE255K凋亡。化合物(II)和/或化合物(V)的凋 亡作用与它们对 BaF3/Bcr-Abl 、 BaF3/Bcr-AblE255K 和 BaF3/Bcr-AblT3151细胞中Bcr-Abl水平的作用有关。单独用任何水平的 试验化合物(II)处理在3种细胞类型中的任何一种中均不降低Bcr-Abl的水 平。暴露于化合物(II)也不影响p-CrkL或CrkL的水平。相反，暴露于50 nM化合物(V)24小时降低了所有3种BaF3转染子中的Bcr-Abl水平。值 得注意的是，与单独用任一试剂相比，用化合物(V)和化合物(II)共处理诱 导BaF3/Bcr-Abl细胞中Bcr-Abl更多的降低。值得注意的是，用化合物(V) 和化合物(II)的组合处理分别引起BaF3/Bcr-AblT3151和 BaF3/Bcr-AblE255K细胞中Bcr-AblT3151和Bcr-Abl E255K 7JC平的更显 著的降低。在p-CrkL水平上观察到了相似的作用，而在CrkL水平上未 观察到。用化合物(II)和化合物(V)共处理比单独应用任一试剂引起Bcr-Abl更大减少和原代伊马替尼抗性CML细胞生存力的更大降低确定化合物(V) 和/或化合物(II)对抗原代CML细胞(从复发伊马替尼抗性CML-BC的10名患者的外周血液和/或骨髓样品中分离出来)的抗白血病作用。证明这些 样品中的三个具有Bcr-AblT315I表达(样品8、 9和10)。在剩余的IM顽 固性原代CML细胞的样品^样品1至7)中，不能确定Bcr-Abl的突变位点， 因为样品大小不适当。在样品1至7中，化合物(II)和化合物(V)诱导细胞 生存力的降低，该细胞生存力是剂量依赖的。另外，在这些样品中，用化 合物(V)(20或50 nM)和化合物(II)共处理比单独用任一试剂处理诱导细胞 生存力的更大减少。样品7对更低浓度的化合物(II)具有相对抗性，但是样 品7对化合物(V)敏感。在剂量依赖方法中，在具有Bcr-AblT3151突变的 3个样品(样品8、 9和10)中，用化合物(II)处理不增加细胞生存力的降低， 而单独暴露于化合物(V)48小时则显著抑制细胞生存力。值得注意的是， 在这些样品(8、 9和10)中，用50或100 nM化合物(II)共处理不增加化合 物(V)诱导的细胞生存力的降低。在一个样品(9)中，尽管甚至暴露于2.0 化合物(II)是无效的，但是与单独用50nM化合物(V)处理引起42.0。/。的细 胞凋亡相比，用50 nM化合物(V)和2.0 pM化合物(II)共处理资导63.7%的 细胞凋亡。样品5的总细胞裂解物的蛋白质印迹分析显示用50nM化合物 (V)和100 nM化合物(II)共处理24小时比单独用任一试剂处理产生更大的 Bcr-Abl、 p-CrkL和p-STAT5减少。相反，在样品9中，甚至单独用1000 nM化合物(II)处理对Bcr-Abl、 p-CrkL和p-STAT5水平具有很小的作用， 而用50 nM化合物(V)和化合物(V)共处理显著降低Bcr-AblT3151以及 p-CrkL和p-STAT5的水平。这些发现与在具有Bcr-AblT3151异位表达的 BaF3细胞中的发现相似。在这些实施例中，证明了用pan-HDAC抑制剂化合物(V)和Bcr-Abl TK抑制剂化合物(II)的组合处理分别协同诱导培养的具有未突变的 Bcr-Abl异位和外源性表达的小鼠 pro，B BaF3和人CMJL细胞凋亡。在对 抗具有突变Bcr-AblE255K或Bcr-AblT3151的异位表达的BaF3细胞以及 对抗伊马替尼抗性原代CML细胞中，组合也比单独用任一药物更具有活 性。
权利要求
1.药物组合，该药物组合包含a)式(I)的嘧啶基氨基苯甲酰胺化合物；和b)至少一种组蛋白脱乙酰酶抑制剂。
2. 权利要求1的药物组合，其中试剂a)选自式(II)的4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧咬基]氨基l-N-[5-(4-甲基-lH-咪唑-l-基)-3-(三氟甲基)苯基苯 曱酰胺<formula>formula see original document page 2</formula>
3.权利要求2的药物组合，其中试剂b)选自式(IV)的N-羟基-3-[4-[(2-羟基乙基)(2-(lH-吲哚-3-基)乙基-氨基]甲基苯基-2E-2-丙烯酰胺或其可 药用盐<formula>formula see original document page 2</formula>式(V)的1\-羟基-3-[4-[[[2-(2-甲基-111-吲哚-3-基)-乙基-氨基j甲基苯 基l-2E-2-丙烯酰胺或其可药用盐<formula>formula see original document page 3</formula>以及它们的組合。
4. 权利要求2的药物组合，其中试剂b)选自trapoxin、四肽、 chlamydocin、 HC毒素、曲古抑菌素、曲古抑菌素A、 apicidin、辛二酰 苯胺异羟將酸(SAHA)、 oxamflatin、 MS-275、 pyroxamide、丙戊酸、[4画(2國 氨基-苯基氨基甲酰基)-苄基-氨基曱酸吡咬-3-基曱酯及其衍生物、缩肽、 FR901228、 CI-994、 丁酸苯酯、丁酸钠、丁酸、3-(4-芳酰基-lH-2吡咯基 -N-羟基-丙烯酰胺、ADHA化合物8、 -(-)Depudecin、 Scriptaid和Sirtinol。
5. 权利要求l的药物组合在制备用于治疗或预防增殖性疾病的药物中 的用途。
6. 权利要求5的用途，其中疾病是白血病。
7. 权利要求5的用途，其中疾病是慢性粒细胞白血病或急性淋巴细胞 白血病。
8. 在需要的个体中治疗或预防增殖性疾病的方法，该方法包括给所述 个体共施用例如同时或顺序施用治疗有效量的至少一种组蛋白脱乙酰酶抑 制剂和式(I)的嘧^&氨基苯甲酰胺化合物。
9. 权利要求8的方法，其中疾病是白血病。
10. 治疗白血病的方法，该方法包括施用组蛋白脱乙酰酶抑制剂和4-甲基-3-[[4-(3-吡吱基)-2-嘧咬基]氨基I-N-[5-(4-甲基-lH-咪唑-l-基)-3-(三氟 甲基)苯基苯曱酰胺的组合。
11. 治疗白血病的方法，该方法包括施用组蛋白脱乙酰酶抑制剂和式(I) 的嘧^&氨基苯甲酰胺化合物的组合，其中组蛋白脱乙酰酶抑制剂选自式 IV的N-羟基-3-[4-[(2-羟基乙基)(2-(lH-吲哚-3-基)乙基卜氨基甲基]苯 基卜2E-2-丙烯酰胺或其可药用盐<formula>formula see original document page 4</formula>式(V)的N-羟基-3-[4-[[[2-(2-甲基-lH-吲哚-3-基)-乙基]-氨基曱基]苯 基j-2E-2-丙烯酰胺或其可药用盐<formula>formula see original document page 4</formula>以及它们的组合。
12.权利要求10的方法，其中组蛋白脱乙酰酶试剂选自trapoxin和其 它四肽，例如dilamydodn和HC毒素；曲古抑菌素及其类似物，例如曲 古抑菌素A; apicidin;辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA); oxamflatin; MS-275; pyroxamide;丙戊酸；[4-(2-IL^-苯基^J^曱酰基)-千基-氨基甲酸吡咬-3誦 基曱酯及其衍生物；缩肽FR卯1228; CI-994; 丁酸苯酯；丁酸钠；丁酸； 3-(4-芳酰基-lH-2吡咯基-N-羟基-丙烯酰胺；ADHA化合物8; 誦(画)Depudecin; Scriptaid; 和Sirtinol。
全文摘要
本发明提供了药物组合，该药物组合包含a)嘧啶基氨基苯甲酰胺化合物；和b)HDAC抑制剂化合物。本发明还涉及应用该组合治疗或预防增殖性疾病的方法。
文档编号A61K31/4045GK101282728SQ200680037583
公开日2008年10月8日 申请日期2006年8月10日 优先权日2005年8月11日
发明者K·N·巴拉, P·W·曼雷, P·W·阿塔贾 申请人:诺瓦提斯公司