专利名称：肉苁蓉提取物在制备治疗帕金森病药剂中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及肉苁蓉提取物的用途，尤其涉及肉苁蓉提取物在在制药中的 新的用途。
背景技术：
肉苁蓉(Herba Cistanchis)是列当科肉苁蓉属植物，始载于《祌农本草经》, 属中医补益药物中的常用品种，具有补肾益精、润肠通便的功效。肉苁蓉主 治肾虚阳痿，遗精早泄，女子不孕，肝肾不足之筋骨痿弱，腰膝冷痛老年 病后，产后，津液不足，肠燥便秘。目前从肉苁蓉中提取肉苁蓉总苷(苯乙 醇苷类成分，又称苁蓉总苷)。而制成市售的肉欢蓉总苷药剂主要用来治疗 老年性痴呆疾病。
帕金森病(PD)是中老年人神经系统常见疾病。其特征性病理改变是 中脑黑质多巴胺能神经元变性减少，导致纹状体内多巴胺浓度明显下降，目 前治疗主要依赖多巴胺替代疗法。直到目前，左旋多巴制剂治疗是最有效的 治疗措施，然而，还是在本药开始临床应用的最初几年，人们就己经发现， 该药在长期应用后，疗效会逐渐降低，并出现剂末现象、开关现象等副反应， 且不能阻止病情的进展。多巴胺受体激动剂的应用也未能根本上改变这一状 况。曾一度唤起人们巨大希望的神经保护药物，诸如司兰吉林等药物，经大 规模的临床试验，也未发现能够显著起到延缓病情进展的作用。因此，进行 天然药物的筛选，具有迫切的现实意义。
发明内容
本发明的目的在于提供肉苁蓉提取物肉苁蓉总苷在制药中的新的应用。 实现本发明目的技术方案是肉苁蓉总苷在制备治疗帕金森病药剂中的 应用。一种肉苁蓉的提取物在制备治疗帕金森病药剂中的应用，所述肉双蓉的 提取物是由按下述方法制备的
肉苁蓉在切片后用70%乙醇回流两次，提取上清，并将提取液水浮后， 得到上清液，将上清液过大孔树脂，先用水洗脱，再用甲醇洗脱，其中甲醇 洗后的溶液进行蒸干，再用正丁醇溶解蒸干后的产物，得到水相和醇相，将 醇相蒸干后用无水乙醇精制，可得到肉苁蓉总苷即为所述肉苁蓉的提取物。
一种肉苁蓉的提取物在制备治疗帕金森病药剂中的应用，所述肉双蓉的 提取物是由按下述方法制备的
将lg肉苁蓉粉末加60ml甲醇进行超声波破碎浸提，浸提液过滤后得滤 液和滤渣,滤液减压浓縮至膏状,用10ml水混悬后过大孔吸附树脂，先用水洗
脱，然后再用甲醇洗脱，将甲醇洗脱液集中，减压浓縮后即得肉灰蓉总苷。
上述的肉苁蓉总苷的三种主要成分为松果菊苷、异毛蕊花糖苷和毛蕊 花糖苷。
上述的肉苁蓉的提取物在制备治疗帕金森病药剂的应用，其中，可在肉 苁蓉总苷中加入矫味剂或溶剂制成口服液剂、片剂、丸剂、冲剂、胶囊剂、 注射剂、滴丸剂、糖浆剂、膏剂。
由于肉苁蓉提取物肉苁蓉总苷可以用来制备治疗帕金森病的药剂，能有 效改善帕金森病患者的运动功能及延缓帕金森病病程进展，给中医药治疗帕 金森病带来了新的希望。
图1为苁蓉总苷干预治疗对MPTP小鼠纹状体酪氨酸羟化酶阳性纤维的 影响；
图2为苁蓉总苷干预治疗对MPTP小鼠黑质多巴胺能神经元数量的影响 的试验中各试验组阳性神经元照片；
图3为苁蓉总苷干预治疗对MPTP小鼠黑质多巴胺能神经元数量的影
响；
图4为苁蓉总苷干预治疗对MPTP小鼠黑质多巴胺能神经元a -突触核 蛋白表达的影响的试验中各试验组的黑质神经元a-突触核蛋白的免疫染色照片；
图5苁蓉总苷干预治疗对MPTP小鼠黑质多巴胺能神经元a -突触核蛋 白表达的影响。
具体实施例方式
下面对本发明作进一步的说明。
一、 制备方法
为当前的提取肉灰蓉总苷的常规方法。
制备方法l:肉苁蓉在切片后用70%乙醇回流两次，提取上清，并将提 取液水浮后，得到上清液，将上清液过大孔树脂DM-130，先用水洗脱，再 用甲醇洗脱，其中甲醇洗后的溶液进行蒸干，再用正丁醇溶解蒸干后的产物， 得到水相和醇相，将醇相蒸干后用无水乙醇精制，即可得到肉灰蓉总苷。该 肉苁蓉总苷的三种主要成分为松果菊苷、异毛蕊花糖苷和毛蕊花糖苷。
制备方法2:将lg肉苁蓉粉末加60ml甲醇进行超声波破碎浸提(600W 破碎20min)浸提液过滤后得滤液和滤渣，滤液减压浓縮至膏状，用10ml水 混悬后过大孔吸附树脂(AB-8)，先用水洗脱,然后再用甲醇洗脱。将甲醇洗脱 液集中，减压浓縮后即得肉灰蓉总苷。
二、 使用方法
市售杏辉天力(杭州)药业的天力再生牌苁蓉总苷胶囊用于治疗帕金森 病临床推荐用量是1日3次，2粒/次，0.3g/粒。小鼠62.5mg/kg-100mg/kg, 成人按60kg计算，3.75g-6g。
三、 实施例
肉苁蓉的提取物肉苁蓉总苷可制成口服液剂、片剂、丸剂、冲剂、胶 囊剂、注射剂、滴丸剂、糖浆剂、膏剂。上述这些剂型中的主要成分为肉灰 蓉总苷。
实施例1
制成片剂、丸剂、冲剂、糖浆剂、膏剂。除肉苁蓉总苷外可根据需要添 加矫味剂。该片剂、丸剂、冲剂、糖浆剂、膏剂成分为包括 肉苁蓉总苷 5%-90% (重量比)矫味剂 0.1-1% (重量比)
上述矫味剂可选自a -环糊精(a -CD)、 0 -环糊精(0 -CD)、 N-LOK变 性淀粉、蔗糖、木糖醇、高果糖、甜蜜素、甜菊糖和蛋白糖中的一种或多种。 实施例2制成胶囊剂。该胶囊剂成分为包括 肉苁蓉总苷15%-30% (重量比) 矫味剂 0.5-10% (重量比)
上述矫味剂主要有羟丙基甲基纤维素(HPMC)、聚乙二醇(PEG)、丙烯
酸树脂等。
实施例3制成注射剂、滴丸剂。该注射剂、滴丸剂成分包括 肉苁蓉总苷 20%-30% (重量比) 溶剂 适量 四、治疗机理
肉苁蓉提取物在制备治疗帕金森病药剂中的治疗机理 当代中医学者通常采用"辨证求因"的传统方法来推知帕金森病的中医 机理。多数学者认为帕金森病的病机特点为:本虚标实。导致本虚的原因繁 多，择其要者大致有(1)年龄因素:帕金森病多发于老年人,周氏[1'2]认为中年 以后阴气自半，会出现肝肾自虚的生理性虚衰，兼加劳顿、色欲之消耗,而致 阴精虚少,形体衰败。(2)情志因素:有作者[3]指出,五志过激皆能化火,五志化 火,灼伤阴津，能够使人出现精血暗耗。(3)久病及肾,高年多病重叠,致使肝肾 交亏[2]。以上诸因素导致患者的肝肾阴虚、气血两虚作为本病最根本的病理 基础,也是形成内风痰火瘀的基本根源。周氏指出肝风之起,乃由肝肾亏虚所 致在肝肾亏虚的基础上,痰瘀内生，阻滞脑络，更加剧了内风暗动[2]。王氏认为: 肝肾阴虚,可致虚火内生兼加痰湿内蕴、五志化火等热邪因素，从而形成风火、 痰火、瘀火等，进一步加重病情[4]。王永炎等依据自已的临床观察，强调筋脉 失养，血瘀阻络的重要性[5]。潘氏根据对3例伴有意识迟钝的老年患者的辨治 经验[6],提出了帕金森病与老年性痴呆有一定内在联系的命题，认为帕金森 病一病存在心营虚损、内风煽动的病理表现。王坤山等认为脾阳虚弱，气血 生化乏源又加脾虚湿聚痰生，也能导致震颤[3]。总之，中医认为帕金森病一病 的病理实质在于肝肾阴虚，也涉及心脾两脏。表现为颤振、僵直、行动徐缓等症状的原因是由于本虚基础上形成了内风痰火瘀等病理改变的结果。内风 痰火瘀是相互影响的病理因素,其相互影响的共同通路是经脉，其最终的病理 结局是筋脉失养。
近年来，越来越多的研究表明肉苁蓉及其所含有的一些化学成分具有神 经保护作用。蒲小平等m发现肉苁蓉内提取的单体Campneoside II预先孵育 大鼠小脑颗粒细胞,可以对抗^ ^+ (化学名l-甲基-4-苯基吡啶)诱导的细 胞凋亡。邓敏等[8]发现运用肉苁蓉另一有效成分松果菊苷处理的神经细胞， 其存活率提高，凋亡发生率显著降低降，并且caspase-3活性不断降低，呈 现出与松果菊苷的剂量依赖性关系。迄今，约有近70种化合物从肉灰蓉属 植物中分离出来,主要包括苯乙醇苷类、环烯醚萜及其苷类、木脂素及其苷 类、以及生物碱和糖类等成分。
研究发现，MPTP可以在体或离体导致选择性的多巴胺能神经元的丧失 [9，。因此，目前MPTP诱导的帕金森模型被公认为是最好的模型。MPTPHCL 是人工合成的化合物，具有较高的脂溶性,容易透过血脑屏障，给动物腹腔注 射MPTP后，会被转移到脑内，在神经胶质细胞内被单胺氧化酶B (monoamine oxidase B)代谢转化为l-甲基-4-苯基吡啶(MPP+) [11']2]。 MPP+ 是真正的的神经毒剂，可以被多巴胺能神经元选择性的摄取[13]，并进而导致 多巴胺能神经元的死亡。慢性MPTP小鼠模型会出现运动迟缓、肢体抖动等 神经行为[14]、以及黑质和纹状体的病理改变[15]。这样建立的慢性MPTP小 鼠模型在行为学、以及黑质和纹状体病理改变都与国内外的研究一致，能部 分模拟人类帕金森病的病理生理变化，可用作筛选和发现对帕金森病有潜在 治疗价值的药物及研究其治疗机理。a-突触核蛋白是一个由140个氨基酸 组成的酸性蛋白[9]，研究发现《-突触核蛋白的改变可是导致帕金森病的重要因素。
为了观察肉苁蓉提取物能否在体内(invivo)抑制MPTP诱导的多巴胺 能神经细胞的死亡，在慢性MPTP (化学名甲基-苯基四氢吡啶)模型上 观察了该提取物的作用和影响。
材料与方法
1、材料1.1实验动物
雄性C57BL小鼠，8周龄，体重20-25g,有中国科学院上海实验动物中 心提供。小鼠每笼3只，均侍养于室温22-25° C的环境中，12h昼夜节律, 自由进食和饮水。
1.2主要试剂
兔抗细胞色素c氧化酶亚单位IV抗体(cytochrome c oxidase subunit IV， COX IV) (Cell Signaling, Danvers, MA, U.S.A);
绵羊抗a -突触核蛋白抗体(识别a -突触核蛋白的第108-120位氨基酸， 专供免疫组化分析用，Chemicon， Temecula, CA, U.S.A);
兔抗酪氨酸羟化酶抗体(Chemicon, Temecula， CA， U.S.A.);
辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG抗体((Zymed, South San Francisco, CA， U.S.A.);
荧光素标记的山羊抗兔IgG抗体(Rockland, Gilbertsville, PA， U.S.A); 罗丹明标记的驴抗绵羊IgG抗体(Rockland, Gilbertsville, PA, U.S.A);
苁蓉总苷(杏辉公司，中国)该苁蓉总苷的三种主要成分为松果菊苷、 异毛蕊花糖苷和毛蕊花糖苷。或按上述2中制备方法提取的苁蓉总苷。 1.3主要仪器
自制爬杆架选择长85cm，直径1.5cm的不锈钢钢管，外紧裹棉纱防 滑，上端覆以直径2cm的球形突起，试验时作为小鼠的附着点，然后将其 固定于木制地座，放置在鼠笼中，底座用锯末覆盖。
Leica冰冻切片机 德国Leica公司
低温台式离心机 低温高速离心机 Leica激光共聚焦显微镜 Leica图像分析系统 电子天平 pH计 2、方法
2.1小鼠帕金森病模型的建立及动物分组
德国Eppendorf公司 德国Beckman公司 德国Leica公司 德国Leica公司 Mettler Toledo上海有限公司 Mettler Toledo上海有限公司首先对即将入组的小鼠进行爬杆试验训练4天，剔除具有行动障碍的小 鼠。然后将筛选入组的小鼠随机分为，模型组、欢蓉总苷高剂量组、灰蓉总 苷中剂量组、灰蓉总苷低剂量组和正常对造组。
模型组、苁蓉总苷高剂量组、苁蓉总苷中剂量组和灰蓉总苷低剂量组采 用MPTP慢性模型，模型的建立方法同第一部分。对照组小鼠仅接受生理盐 水腹腔注射。
苁蓉总苷高剂量组、苁蓉总苷中剂量组和苁蓉总苷低剂量组在腹腔注射 MPTP之前的3天开始苁蓉总苷灌胃，计量参照文献[l]分别为高剂量组苁 蓉总苷400mg/kg/日；中剂量组苁蓉总苷200mg/kg/日和低剂量组灰蓉总苷 100mg/kg/日。模型组和正常对造组小鼠每日灌胃同样体积的生理盐水。
2.2行为学试验
试验采用爬杆法，运用计时的方法进行评价。试验时首先手持小鼠尾巴， 令其倒立于爬杆的顶端，用秒表记录小鼠自杆顶爬至杆底(前爪触底)所用 时间。小鼠适应训练4天，记录第一次MPTP注射前1天，第一次MPTP 注射后7、 14天的爬杆时间。每次记录前，先让小鼠适应爬行2次后进行测 量， 一般测量3次，记录连续爬行时间最短的一次进行统计；如遇小鼠出现 中途停顿或返向攀爬，则重新测量，时间计数包括小鼠在爬杆顶端的运动启 动时间。
2.3冰冻组织切片制备
2.4酪氨酸羟化酶的免疫组织化学染色
2.5 a-突触核蛋白的免疫组织化学染色
1) 从原位杂交保护液中选取脑片用0.01MPBS漂洗3次，每次5min。
2) 在0.3%H2O2中室温孵育30min。取出后用0.01 M PBS漂洗3次， 每次5min。
3) 在含10%小牛血清，0.2%Triton的0.01MPBS溶液孵育lh
4) 在含1%小牛血清，0.2%Triton的0.01M PBS溶液中加入绵羊抗a -突触核蛋白一抗(1:200)， 37° C温箱中孵育2小时，然后移至4° C冰箱中 过夜。取出后用0.01MPBS漂洗3次，每次5min。
5) 在含1%小牛血清，0.2%Triton的0.01M PBS溶液中加入HRP标记的抗绵羊IgG抗体孵育，37° C温箱中孵育1小时。取出后用0.01M PBS 漂洗3次，每次5min。
6) 0.1M Tris-HCI pH7.5漂洗5min。
7) DAB显色10分钟。DAB配制按照中杉公司DAB显色试剂盒的操作 步骤进行。
8) 贴片，晾干，常规脱水，中性树胶封片。 2.6免疫组织化学阴性对照
不加一抗，其余步骤同相应各组免疫组织化学染色。 2. 7图像分析及定量
2. 8统计分析
所有数据均用平均数士标准差表示。两组数据的比较用t检验。多组数 据用方差分析(ANOVA)，有显著性意义是再用Q检验。数据用SPSSIO.O 软件处理。PO.05定为有显著性差异。
3、 实验结果
3.1小鼠神经行为学的试验结果 3.11对自主活动的影响
小鼠在注射MPTP前后的行为学变化。小鼠在MPTP腹腔注射后0.5h, 各组小鼠均出现不同程度的运动障碍，表现为动作迟缓、震颤、竖毛、竖尾 和活动减少等，但苁蓉总苷干预的各组这种现象明显减轻，而腹腔注射生理 盐水的正常对照组则不存在上述改变。部分模型组小鼠在MPTP腹腔注射后 0.5h内出现全身震颤、静止不动的现象， 一般持续0.5h后方能缓解，而灰 蓉总苷干预的各组均未出现上述现象。与模型组比较,灰蓉总苷干预的各组 小鼠毛色光亮，模型组小鼠的毛发则变的杂乱并失去光泽。
3.12爬杆试验结果
各组小鼠爬杆时间数值见表1。本数据为各组建模后不同时间点爬杆时 间减去建模前爬杆时间，即得一差值(建模后变化值)，其中建模后爬杆时间 延长用正值表示，縮短用负值表示。结果显示在MPTP第一次注射后7天和 14天测试，模型组小鼠爬杆时间明显延长，与正常组相比统计有显著意义 (PO.Ol)。与模型组相比，苁蓉总苷各组的爬杆时间均有改善；但只有苁
10蓉总苷高剂量组与模型组相比，统计有显著差异(P<0.01)。并且在MPTP 第一次注射后7天，苁蓉总苷低剂量组与正常对照组相比，爬杆时间延长， 统计有显著意义(P<0.05),在MPTP第一次注射后14天，苁蓉总苷中、低 两个剂量组与正常对照组相比，爬杆时间均显著延长(PO.Ol)。表l.
苁蓉总苷干预治疗对MPTP小鼠建模前后爬杆时间变化的影响组注射后7天注射后14天
平均爬杆时平均爬杆时间
间的变化试的变化试验
验
控制80.75±1.040.89±0.99
MPTP84.75±1.75**5.63土2.45:j::i:
400mg/kg/d TCM+ MPTP81.38土0.92卞卞2.13±1.25"
200mg/kg/d TCM+ MPTP82.88±1.813.50士l.5l:[:
訓mg/kg/d TCM+ MPTP83.38±1.69*3.75±1.49$
** PO.01禾P * PO.05对控制组；忖P O.01对在MPTP第一次注射后 7天的模型组；tt P<0.01和J PO.05对控制组；▲ <0.01对在MPTP第
一次注射后14天的模型组。
3.13小鼠神经行为学的试验结论
在MPTP第一次注射后7天和14天测试，模型组小鼠爬杆时间明显延 长，与正常组相比统计有显著意义(PO.Ol)。与模型组相比，苁蓉总苷各 组的爬杆时间均有改善；但只有苁蓉总苷高剂量组与模型组相比，统计有显 著差异(PO.Ol)。
3.2对纹状体酪氨酸羟化酶阳性纤维的影响
分别于第一次MPTP注射后的7和14天，运用免疫组织化学的方法观 察了苁蓉总苷对纹状体酪氨酸羟化酶阳性纤维的影响(11=5)，结果显示3个 剂量组的苁蓉总苷在两个时间点上均能明显提高纹状体酪氨酸羟化酶的表 达(P<0.05)。
图1 MPTP注射后纹状体酪氨酸羟化酶(TH-IR IOD of striatum)的表达的影响。** PO.01对控制组，AAP <0.01对在MPTP第一次注射后7天
的模型组；ttPO.01对在MPTP第一次注射后14天的模型组。A:正常组; B:模型组(MPTP第一次注射后7天);C模型组(MPTP第一次注射后14天); D:400mg/kg/dTCM组(即苁蓉总苷干预组)(MPTP第一次注射后7天)；E: 200mg/kg/d TCM组(MPTP第一次注射后7天)，F: 100mg/kg/d TCM group(MPTP第一次注射后7天)，G: 400mg/kg/d TCM组(MPTP第一次注射 后14天)H: 200mg/kg/d TCM组(MPTP第一次注射后14天)；I: 100mg/kg/d TCM组(MPTP第一次注射后14天)。
3.3肉苁蓉苯乙醇苷类提取物对黑质致密部多巴胺能神经元数量的影
响
分别于第一次MPTP注射后的7和14天，运用免疫组织化学的方法观 察了苁蓉总苷对黑质致密部的酪氨酸羟化酶阳性神经元数量的影响，脑片的 选择以过脚间核平面为核心，前后隔5取一，共得三张脑片，脑片初选后经 认真比对，解剖结构完全匹配后进行研究，以三张脑片阳性神经元数的平均 值进行统计。结果显示，模型组的MPTP第一次注射后7和14天酪氨酸羟 化酶阳性神经元数量与正常对照组相比下降，统计有显著意义(PO.Ol)， 模型组在MPTP第一次注射后14天酪氨酸羟化酶阳性神经元的数量比7天 略有减少，但两者的差别没有统计学意义(P〉0.05)。尽管三个剂量组灰蓉 总苷的干预均能对抗MPTP导致的酪氨酸羟化酶阳性神经元的数量的下降， 但只有苁蓉总苷高剂量组在两个时间点上与模型组比较差别有显著性 (P<0.05)。并且与正常对照组相比，差别不显著(P〉0.05)。
图2-3，苁蓉总苷干预治疗对MPTP小鼠黑质多巴胺能神经元数量的影 响。**P<0.01对控制组，AP0.05对MPTP第一次注射后7天后的模型 组，卞P <0.05对MPTP第一次注射后7天后的模型组。A:正常组；B:模 型组(MPTP 7d); C模型组(MPTP 14d); D: 400mg/kg/d TCM组(MPTP 7d); E: 400mg/kg/d TCM组(MPTP 14d)。
3.4苁蓉总苷对a -突触核蛋白表达的影响
选择MPTP第一次注射后的4天作为观察的时间点，主要考虑Western blot分析以及系列的激光共聚焦观察均证实在该时间点上，线粒体上a -突触核蛋白的表达明显上调，而多巴胺能神经元尚未大量死亡。根据病理学研究 中常用的半定量原则，将黑质神经元a-突触核蛋白的免疫染色强度分为三 个等级弱阳性(淡黄)；中度阳性(黄色)；强阳性(棕黄)三个等级。可 在正常小鼠中见到大量弱阳性(淡黄)；中度阳性(黄色)的神经元，在100 倍镜下，统计各组黑质致密部所有细胞形态完整的a -突触核蛋白强阳性神 经元。结果发现，小鼠经MPTP处理后，黑质致密部a-突触核蛋白的免疫 反应明显增强，呈强阳性的神经元明显增多(PO.Ol)，统计显示，经高剂 量苁蓉总苷干预的模型小鼠，其a-突触核蛋白强阳性的神经元与模型组小 鼠相比明显减少(PO.Ol)。图像经高倍放大后可以看到，正常小鼠黑质致 密部的大部分神经元染色较浅，分布均匀；而模型小鼠黑质致密部的大部分 神经元染色较深，并且呈聚集状；经高剂量苁蓉总苷干预的模型小鼠，与模 型组相比，其黑质致密部的神经元染色变浅，分布均匀。
以上实验表明MPTP可以诱导在正常小鼠黑质神经元的线粒体膜上存 在a -突触核蛋白的表达的升高.MPTP小鼠模型中可能存在标志线粒体凋亡 的聚集现象。并且可能线粒体上增高的a -突触核蛋白的表达促进了这种聚 集现象。苁蓉总苷可以有效的改善MPTP小鼠模型的神经行为，抑制MPTP 诱导的小鼠死亡。这种干预作用可能与其抑制了线粒体上增高的ct -突触核 蛋白的表达有关。
图4-5，苁蓉总苷干预治疗对MPTP小鼠黑质多巴胺能神经元a -突触核 蛋白表达的影响。**P<0.01对控制组，AAP0.01对初次注射MPTP后 4天的模型组，(A,D):正常组；(B, E):模型组(MPTP 4d); (C， F): 400mg/kg/d TCM组(MPTP4d)。
以上实施例仅供说明本发明之用，而非对本发明的限制，有关技术领域 的技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，还可以作出各种变换 或变型，因此所有等同的技术方案也应该属于本发明的范畴，应由各权利要 求所限定。
参考文献
1.皋聪，王传社，巫冠中等.苁蓉总苷对小鼠学习记忆障碍的影响 [J].中药新药与临床药理，2005， 16(3): 162-164.2. 樊蓥，周仲瑛.治疗震颤麻痹的经验[J ].中医杂
志，1996 , 37(11) :663
3. 王坤山，王慧艳.试谈震颤麻痹辨治体会[J ].甘肃中医，1993，6
(2) :8
4. 王克勤.震颤麻痹的中医治疗[J ].中医药研究，1991 ，2 :35
5. 王永炎，蒋达树，侯力娜，等.中医药治疗震颤麻痹综合征35例疗效 观察[J ].中医杂志，1986 ，8 :22
6. 潘澄濂.震颤麻痹病的证治探讨[J].浙江中医杂志，1990,11 :483
7. 蒲小平，李晓蓉，李慧浓等.肉苁蓉成分campneosidell对神经毒 素MPP +诱发细胞凋亡的保护作用[".北京大学学报(医学版)，2001， 33
(3) : 217.
8. 邓敏，赵金恒，屠鹏飞等.松果菊苷对TNFa诱导的SH-SY-5Y细胞 凋亡的保护作用[J ].中国药理学通报，2005， 21 (2) : 169.
9. Langston J. W. ， Ballard P., Tetrud J. W. ， et al. Chronic Parkinsonism in h咖ans due to a product of meperidine-analog synthesis [J].科学，1983， 219: 979 - 980.
10. Przedborski S.， Jackson-Lewis V. Mechanisms of MPTP toxicity[J]. Mov. Disord 1998， 13 (Sl)， 35 - 38.
11. Heikkila R. E. ， Hess A., Duvoisin R. C. Dopaminergic neurotoxicity of 1-methyl-4-phenyl-l， 2， 5, 6-tetrahydropyridine in mice [J].科学，1984， 224: 1451 - 1453.
12. Heikkila RE， Manzino Cabbat FS， et al. Inhibition of monoamine oxidase produces protection against the dopaminergic neurotoxicity of 1-methyl-4-phenyl-l, 2，5，6-tetrahydropyridine [J]. 自然，1984, 311: 467 - 469.
13. Javitch J. A. ， D， Amato R. J. ， Strittmatter S. M. ， et al. Parkinsonism-inducingneurotoxin，
N-methyl-4-phenyl-l，2，3,6-tetrahydropyridine: uptake of the metabolite N—methyl—4—phenylpyridine by dopamine neurons explainsselective toxicity [J"]. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1985, 82:2173 - 2177.
14. Mistsumoto Y， Watanabe A， Mori A， et al. Spontaneous regneration of nigrostriatal dopaminergic neurons in MPTP—treated C57BL/6 mice [J]. Biochem Biophys Res Commun， 1998, 248:660-663.
权利要求
1、肉苁蓉总苷在制备治疗帕金森病药剂中的应用。
2、 一种肉苁蓉的提取物在制备治疗帕金森病药剂中的应用，所述肉灰蓉的提取物是由按下述方法制备的肉苁蓉在切片后用70%乙醇回流两次，提取上清，并将提取液水浮后，得到上清液，将上清液过大孔树脂，先用水洗脱，再用甲醇洗脱，其中甲醇 洗后的溶液进行蒸干，再用正丁醇溶解蒸干后的产物，得到水相和醇相，将 醇相蒸干后用无水乙醇精制，可得到肉苁蓉总苷即为所述肉苁蓉的提取物。
3、 一种肉苁蓉的提取物在制备治疗帕金森病药剂中的应用，所述肉灰 蓉的提取物是由按下述方法制备的将lg肉苁蓉粉末加60ml甲醇进行超声波破碎浸提，浸提液过滤后得滤 液和滤渣，滤液减压浓縮至膏状，用10ml水混悬后过大孔吸附树脂，先用水洗 脱,然后再用甲醇洗脱，将甲醇洗脱液集中，减压浓縮后即得肉灰蓉总苷。
4、 如权利要求1-3任一项权利要求所述的肉灰蓉总苷的三种主要成分 为松果菊苷、异毛蕊花糖苷和毛蕊花糖苷。
5、 如权利要求1-3任一项权利要求所述的肉苁蓉的提取物在制备治疗 帕金森病药剂的应用，其中，可在肉苁蓉总苷中加入矫味剂或溶剂制成口服 液剂、片剂、丸剂、冲剂、胶囊剂、注射剂、滴丸剂、糖浆剂、膏剂。
全文摘要
本发明涉及肉苁蓉的提取物肉苁蓉总苷在制备治疗帕金森病药剂中的应用。所述肉苁蓉的提取物是由按下述方法制备的肉苁蓉在切片后用70％乙醇回流两次，提取上清，并将提取液水浮后，得到上清液，将上清液过大孔树脂，先用水洗脱，再用甲醇洗脱，其中甲醇洗后的溶液进行蒸干，再用正丁醇溶解蒸干后的产物，得到水相和醇相，将醇相蒸干后用无水乙醇精制，可得到肉苁蓉总苷即为所述肉苁蓉的提取物。由于肉苁蓉提取物肉苁蓉总苷可以用来制备治疗帕金森病的药剂，能有效改善帕金森病患者的运动功能及延缓帕金森病病程进展，给中医药治疗帕金森病带来了新的希望。
文档编号A61K36/185GK101293016SQ20071004019
公开日2008年10月29日 申请日期2007年4月28日 优先权日2007年4月28日
发明者唐红敏, 李文伟, 杨云柯, 越 范, 蔡定芳, 虹 赵, 顾喜喜 申请人:复旦大学附属中山医院