一种治疗伤痛的中药制剂的质量控制方法

专利名称：：一种治疗伤痛的中药制剂的质量控制方法
技术领域：
：本发明涉及一种中药制剂的质量控制方法，尤其涉及一种治疗伤痛的中药制剂的质量控制方法。
背景技术：
：本发明制剂伤痛宁胶囊具有活血祛瘀，消肿止痛；加快骨痂生长；促进骨折早期愈合；促进创面损伤修复的功效，是对于骨伤的治疗非常有效的一种中药制剂。现有品种中，存在同品种不同剂型的伤痛宁制剂，但对于如何更好的控制它的质量，保证广大患者的用药安全却鲜有人研究。本发明就是为了能够更好的控制本品的质量，达到更好更安全的治疗效果。资料表明，连续服用含有马兜铃酸的中药时间最长不能超过一个月，否则会引起蓄积性中毒反应，这种中毒是隐匿性的，直接损害人体肾脏器官，严重者可能因肾功能衰竭而死亡。关于马兜铃酸造成肾脏损害的报告始于1993年，相继有比利时、英国、波兰、法国、R本等国的媒体披露了因服用含有马兜铃酸的中药治疗湿疹或减肥而导致肾功能异常的病例。经査，罪魁祸首就是关木通和广防己等药材中的马先铃酸。所以，为了保证本发明制剂中所用原料药细辛中不含有马兜铃酸，我们通过含量测定的方法对细辛进行了检查，发现并没有检出马兜铃酸，从而能更好地保证药品的质量和广大患者的用药安全。
发明内容本发明的目的是提供一种治疗伤痛的中药制剂的质量控制方法，它是由原料药制乳香、制没药、甘松、醋制延胡索、细辛、制香附、山柰、白芷所制备的伤痛宁胶囊的质量控制方法，以此来更好的保证药品的稳定性，质量可控性，使用药更为安全、有效。本发明的目的是通过如下的技术方案来实现的，包括以下的鉴别和/或显微鉴别和/或细辛中马兜铃酸的限量测定延胡索的鉴别取本品内容物1.5-4.5g，加乙醚10-30m]，浸渍0.5-1.5小时，倾去乙醚液，加浓氨试液1.5-么5ml使湿润，加乙醚10-30ml浸溃1.5-4.5小时，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇().5-1.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索乙素对照品，加无水乙醇制成每0.5-1.5ml中含0.05-0.15rag的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2.5-7.5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯一丙酮(8-25:1.5-4.5)为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸汽中熏至斑点显色清晰，挥去碘后，置365mn紫外光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。显微鉴别取本品内容物，置显微镜下观察淀粉粒多为单粒，类球形或三角形，常聚集成团，脐点人字形，层纹不明显；导管多破碎，主为螺纹及梯纹导管，导管分子较长大；厚壁细胞，表面观呈类多角形或类长方形，壁厚，纹孔不明显；非腺毛，单细胞多分隔，淡黄色完整者较长，先端较尖，略弯曲；纤维多成束，黄色或黄棕色，韧型纤维微弯曲，末端尖或钝圆，有明显的单斜纹孔；石细胞，黄色，单个散离，呈类圆形，类方形，或作不规则分枝状，类圆形者壁极厚，层纹细密，孔沟多不明显；分枝状石细胞的壁较薄，胞腔较大；色素块黄色或黄棕色，多呈不规则形，散在；油细胞散在，无色或淡黄色，表面观呈类圆形或类方形。伤痛宁胶囊的原材料细辛药材中马兜铃酸的限量实验，具体的试验方法及结果如下1、仪器与试药仪器岛津LC一10ATVP高效液相色谱仪;C18(Hypersi]0DS20(M,6mm,5u，大连依利特公司)色谱柱。试剂甲醇为色谱试剂，水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。对照品马兜铃酸为中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，批号为0746—200103。2、色谱条件流动相参照文献中马先铃酸测定方法的流动相，经试验表明以甲醇_4%冰醋酸溶液(55:45)为流动相较好。检测波长经对马兜铃酸的对照品溶液进行紫外扫描，其最大吸收波长在315nm，故选择315nm作为检测波长。马先铃酸对照品的紫外扫描图见图1。流速l.Oml/min.对照品、供试品、细辛药材色谱图分别见图2、3、4。3、供试品溶液的制备参照文献中马先铃酸含量测定的提取方法，确定本品供试品溶液的制备方法如下取本品内容物4.0g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，加甲醇100ml，密塞，称定重量，超声处理40分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密吸取续滤液50.0ml，置蒸发皿中，水浴上蒸干，残渣加0.1mol/L氢氧化钠溶液30mi分次溶解，并转移至分液漏斗中，用三氯甲垸提取6次，每次20ml，弃去三氯甲烷液，碱水溶液加5mol/L盐酸溶液调节pH至2左右，再用三氯甲烷提取4次，每次20ml，合并三氯甲烷液，水浴上蒸干，残渣加甲醇分次偉溶解，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得。4、对照品溶液的制备精密称取马兜铃酸对照品6mg，置50ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5.0ml，置50ral量瓶中，加甲醉稀释至刻度，摇匀，即得(每lml中含马兜铃酸12ug)5、测定法分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。6、线性关系考察精密吸取浓度为12ug/ml的马兜铃酸对照品溶液l、2、4、6、8、10wl进祥，测定其峰面积积分值，以进样量(ng)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为Y=2985.5427X+2943.633，r=0.99997。结果表明马兜铃酸在12—120ng范围内具有良好的线性关系。数据见表l。标准曲线图见图5。表1线性关系考察结果表<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>7、最低检测限精密吸取浓度为12yg/ml的马兜铃酸对照品溶液1.Oml，置100ml量瓶中，加甲醉稀释至刻度，摇匀，吸取10yl注入液相色谱仪，测定，结果见图6。马兜铃酸峰的信噪比(S/N)约为IO，最低检测限为1.2ng。8、加样试验取本品(批号20040315)内容物4.0g，精密称定，分别精密加入马兜铃酸对照品溶液(120ng/ml)l.Oml，B卩120ug，甲醇99ml，按上述检査方法测定马兜铃酸，结果见图7。结果表明马兜铃酸峰可与样品中的其它色谱峰较好的分离。9、成品与药材测定结果9.1药材测定结果9取细辛粉末4.0g,精密称定，按成品质量标准中马兜铃酸的检查方法，测定马兜铃酸，结果本品所细辛中未检测到马充铃酸，见图4。本品所用细辛的来源为马兜铃酸科植物北细辛AsarumheterotropoidesFr.Schmidtvar.隨ndshuricum(Maxim.)Kitan.、的干燥全草。产地为辽宁。9.2成品测定结果按拟定的检査方法测定6批成品中的马兜铃酸，结果均未检测到马兜铃酸。根据最低检测限，本品中的马兜铃酸寒含量在0.6ppm以下。在与对照品溶液相对比后，样品马兜铃酸峰形与保留时间与对照品溶液相近，且阴性样品无干扰。在经"线性关系实验"、"最低检测限"、"加样试验"后，证明该方法专属性强，能够准确地测定样品中马先铃酸的含量。符合本发明质量标准的伤痛宁胶囊具有以下药效伤痛宁胶囊系温经通脉、活血化瘀之方剂。多用于治疗跌打损伤、胃脘痛、痛经等病证。运用本药的基本指征是伤处青紫肿痛、不敢触碰，或脘腹冷痛，喜温拒按，舌淡或紫，脉象弦涩。这些指征体现了气滞血瘀，寒邪痹证经脉的病机，所以应用甚广。如1、闪腰岔气表现为伤处疼痛，活动受限，痛如针刺，或皮肤青紫，努伤咳嗽，呼吸痛甚，舌红或暗，脉弦或涩。西医学诊断之努伤、捩伤、软组织损伤，见上述表现者，属此范围。2、痹证表现为关节疼痛如剌，遇寒尤甚，活动受限，喜温喜暖，甚则肿胀，'舌淡脉细。西医学诊断之风湿性关节炎、外伤性关节炎，见以上临床表现者属之。3、胃脘痛表现为胃脘痛，势如针刺，喜温拒按，大便黑如柏油，舌淡或暗，脉象弦细或弦涩。西医学之胃溃疡、十二指肠球部溃疡等，见上述表现者，按此辨治。4、痛经表现为经来腹痛，其色紫黑，愆期而致，腹痛如刺，定处不移，喜温拒按，舌暗有瘀斑，脉象弦涩。西医学诊断之月经不调、附件炎等，见上述表现者，皆可用之。本发明的优点在于能够通过对处方中多种原料药的鉴别和含量测定，来有效地保证所生产出来的伤痛宁胶囊的药效和稳定性，从而能够更好地保护广大患者用药的安全。具体实施例具体实施例一延胡索的鉴别取本品内容物3g，加乙醚20ml，浸渍l小时，倾去乙醚液，加浓氨试液3ml使湿润，加乙醚2()ml浸渍3小时，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇lml使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索乙素对照品，加无水乙醇制成每lml中含O.lmg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯一丙酮(17:3)为展开剂，展开，取出，晾千，置碘蒸汽中熏至斑点显色清晰，挥去碘后，置紫外光下(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。检验三批样品均符合规定，阴性溶液无干扰。具体实施例二显微鉴别取本品'内容物，置显微镜下观察淀粉粒多为单粒，类球形或三角形，常聚集成团，脐点人字形，层纹不明显；导管多破碎，主为螺纹及梯纹导管，导管分子较长大；厚壁细胞，表面观呈类多角形或类长方形，壁厚，纹孔不明显；非腺毛，单细胞多分隔，淡黄色完整者较长，先端较尖，略弯曲；纤维多成束，黄色或黄棕色，韧型纤维微弯曲，末端尖或钝圆，有明显的单斜纹孔；石细胞，黄色，单个散离，呈类圆形，类方形，或作不规则分枝状，类圆形者壁极厚，层纹细密，孔沟多不明显；分枝状石细胞的壁较薄，胞腔较大；色素块黄色或黄棕色，多呈不规则形，散在；油细胞散在，无色或淡黄色，表面观呈类圆形或类方形。具体实施例三细辛中马兜铃酸的含量测定含量测定，照高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅垸键合硅胶为填充剂，以甲醇-4%冰醋酸溶液(55:45)为流动相；检测波长为315nm，理论板数按马兜铃酸峰计应不低于3000;对照品溶液的制备精密称取马兜铃酸对照品适量，加甲醇制成每lml中含10ug的溶液，即得；供试品溶液的制备:.取本品内容物4.0g,精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，加甲醇100ml，密塞，称定重量，超声处理40分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重要，摇匀，滤过；精密吸取续滤液50.0ral，置蒸发皿中，水浴上蒸干，残渣加0.lmol/L氢氧化钠溶液30ml分次溶解，并转移至分液漏斗中，用三氯甲烷提取6次，每次20ml，弃去三氯甲烷液，碱水溶液加5mol/L盐酸溶液调节PH至2左右，再用三氯甲烷提取4次，每次20ml，合并三氯甲烷，水浴上蒸干，残渣加甲醇分次使溶解，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，进行测定。用上述方法，不得检出马兜铃酸。1、(1)图1为马兜铃酸对照品紫外扫描(2)图2为马兜铃酸对照品HPLC色谱(3)图3为伤痛宁胶囊供试品HPLC色谱(4)图4为细辛药材HPLC色谱(5)图5为马兜铃酸对照品标准曲线(6)图6为马兜铃酸对照品最低检测限HPLC色谱(7)图7为伤痛宁胶囊供试品加马兜铃酸对照品的HPLC色谱图。权利要求1、一种治疗伤痛的中药制剂的质量控制方法，该中药制剂由原料药制乳香、制没药、甘松、醋制延胡索、细辛、制香附、山柰、白芷所制备，其特征在于通过对延胡索的鉴别和/或显微鉴别和/或细辛中马兜铃酸的限量测定来进行质量控制。2、如权利要求l所述的一种治疗伤痛的中药制剂的质量控制方法，其特征在于所述的中药制剂是伤痛宁胶囊。3、如权利要求l所述的一种治疗伤痛的中药制剂的质量控制方法，其特征在于它所用延胡索的薄层色谱法是通过实施以下的具体鉴别方法来实现控制药品质量的目的的延胡索的鉴别取本品内容物1.5-4.5g，加乙醚10-30inl，浸渍0.5-1.5小时，倾去乙醚液，加浓氨试液1.5-4.5ml使湿润，加乙醚10-30ml浸渍1.5-4.5小时，滤过，滤液蒸千，残渣加无水乙醇0.5-1.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索乙素对照品，加无水乙醇制成每0.5-1.5ml中含0.05-0.15mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2.5-7.5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为8-25:1.5-4.5的苯一丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸汽中熏至斑点显色清晰，挥去碘后，置365nni紫外光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。4、如权利要求3所述的一种治疗伤痛的中药制剂的质量控制方法，其特征在于它所用延胡索的薄层色谱法是通过实施以下的具体鉴别方法来实现控制药品质量的目的的延胡索的鉴别取本品内容物3g，加乙醚20m]，浸渍l小时，倾去乙醚液，加浓弑试液3ml使湿润，加乙醚20ml浸渍3小时'，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇Jml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索乙素对照品，加无水乙醇制成每lml中含O.lmg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为17:3的苯一丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸汽中熏至斑点显色清晰，挥去碘后，置365nm紫外光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。5、如权利要求l所述的一种治疗伤痛的屮药制剂的质量控制方法，其特征在于它所用显微鉴别是通过实施以下的方法来实现控制药品质量的目的的取本品内容物，置显微镜下观察淀粉粒多为单粒，类球形或三角形，常聚集成闭，脐点人字形，层纹不明显；导管多破碎，主为螺纹及梯纹导管，导管分子较长大；厚壁细胞，表面观呈类多角形或类长方形，壁厚，纹孔不明显；非腺毛，单细胞多分隔，淡黄色完整者较长，先端较尖，略弯曲；纤维多成朿，黄色或黄棕色，韧型纤维微弯曲，末端尖或钝圆，有明显的单斜纹孔；石细胞，黄色，单个散离，呈类圆形，类方形，或作不规则分枝状，类圆形者壁极厚，层纹细密，孔沟多不明显；分枝状石细胞的壁较薄，胞腔较大；色素块黄色或黄棕色，多呈不规则形，散在；油细胞散在，无色或淡黄色，表面观呈类圆形或类方形。6、如权利要求1-5所述的一种治疗伤痛的中药制剂的质量控制方法，其特征在于其对细辛中马兜铃酸的限量测定采用如下的方法来实现的含量测定，照高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以比例为55:45的甲醇-4%冰醋酸溶液为流动相；检测波长为315nm，理论板数按马兜铃酸峰计应不低于3000;对照品溶液的制备精密称取马兜铃酸对照品适量，加甲醉制成每lmi中含l()ug的溶液，即得；供试品溶液的制备取本品内容物2.0-6.0g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，加甲醇50-150ml，密塞，称定重量，超声处理20-60分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重要，摇匀，滤过；精密吸取续滤液25-75ml，置蒸发皿中，水浴上蒸干，残渣加0.05-0.15moJ/L氢氧化钠溶液15-45ml分次溶解，并转移至分液漏斗中，川三氯甲烷提取3-9次，每次10-30ml,弃去三氯甲烷液，碱水溶液加2.5-7.5mol/L盐酸溶液调节PH至1-3左右，再用三氯甲烷提取2-6次，每次10-30ml，合并三氯甲烷，水浴上蒸干，残渣加甲醇分次使溶解，置10ml量瓶中，加甲醉至刻度，摇匀，滤过，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5-15ul，注入液相色谱仪，进行测定。7、如权利要求6所述的一种治疗伤痛的中药制剂的质量控制方法，其特征在于它采用如下的方法对细辛中马兜铃酸的含量进行限定含量测定，照高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以比例为55:45的甲醇-4%冰醋酸溶液为流动相；检测波长为315nm,理论板数按马兜铃酸峰计应不低于3000;对照品溶液的制备:精密称取马兜铃酸^t^品适量，加甲醉制成每lml中含10叫的溶液，即得；供试品溶液的制备取本品内容物4.0g，精密称定，置10()ml具塞锥形瓶中，加甲醇J00m丄，密塞，称定重量，超声处理40分钟，放冷，再称定重量，用甲醉补足减失的重要，摇匀，滤过；精密吸取续滤液5().0ml,置蒸发皿中，水浴上蒸千，》戋渣加().lmol/L氣氧化钠溶液30ml分次溶解，并转移至分液漏斗中，用三氯甲垸提取6次，每次20ml，弃去三氯甲烷液，碱水溶液加5mol/L盐酸溶液调节PH至2左右，再用三氯甲垸提取4次，每次20m]，合并三氯甲烷，水浴上蒸千，残渣加甲醇分次使溶解，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，进行测定；用上述方法，不得检出马兜铃酸。全文摘要本发明公开了一种中药制剂的质量控制方法，它是一种治疗伤痛的伤痛宁胶囊的质量控制方法。本发明的质量控制方法是通过对处方中的蒲公英、狗脊、赤芍中的一种或多种原料药进行鉴别或含量测定来达到有效控制产品质量的目的。见摘要附图。本发明的优点在于能够通过对处方中多种原料药的鉴别和含量测定，来有效地保证所生产出来的伤痛宁胶囊的药效和稳定性，从而能够更好地保护广大患者用药的安全。文档编号A61K9/48GK101357204SQ200810030998公开日2009年2月4日申请日期2008年4月3日优先权日2008年4月3日发明者王衡新申请人:王衡新