专利名称：马钱子生物碱囊泡及其制备方法
技术领域：
本发明涉及马钱子生物碱囊泡及其制备方法。
背景技术：
脂质体是由磷脂双分子层组成的单室或多室囊泡，是研究得最多靶向药 物载体，人多用于抗肿瘤药及抗利什曼病的锑制剂，可显著降低药物毒性而保 持更长时间的活性。但脂质体的性能存在缺点①由于其化学不稳定性，制备 及贮藏困难，药物包裹率不高且易发生渗漏而失去靶向性。②所用原料磷脂难 以纯化，且易氧化变质而降低膜流动性导致被包裹药物的渗漏。③纯化的磷脂 价高。因此，人们广泛地研究了化学组成确定、性质较稳定、能构成脂质体样 囊泡的载体。许多合成的表面活性剂都能形成囊泡，但其中非离子型的毒性较小， 宜用作药物载体，非离子表面活性剂在溶液中能自组装形成囊泡。
马钱子为传统中药，具有通络止痛、散结消肿功效，用于风湿顽痹，麻木 瘫痪，跌打损伤，痈疽肿痛，小儿麻痹后遗症，类风湿性关节痛等症，临床疗 效显著。药理研究证明，马钱子中生物碱为有效成分，但治疗窗极窄，治疗量 和中毒量接近，临床应用受极大限制。
已有马钱子碱脂质体、纳米马钱子碱脂质体专利报道，但传统脂质体由 于固有缺点，成本高，不稳定。
发明内容
本发明目的在T提供马钱子生物碱囊泡。 本发明另一目的在于提供马钱子生物碱囊泡制备方法。 本发明通过以下技术方案予以实施。 本发明马钱子生物碱囊泡，包括下列重量份组分马钱子生物碱1-40 非
离子表面活性剂5-150稳定剂0-100修饰脂质0-100。 以上非离子表面活性剂与稳定剂重量比为1: 1-180: 1。
马钱子生物碱可以为马钱子总生物碱，马钱子总生物碱中所含的任一种生物 碱，马钱子总生物碱中任一种生物碱或一种以上的生物碱混和物。
本发明马钱于生物碱可采取以下提取方法 马钱子粉碎成细粉，加氨水润湿，氯仿提取，提取液加盐酸酸化，收集沉 淀，根据需要，沉淀可继续纯化；提取液继续加盐酸提取2-IO次，加氯仿及氨碱化至pH8-12，充分振摇，氯仿液蒸干，和已收集沉淀合并，也可不合并，根据 需要，可继续进行纯化，即得。
马钱子生物碱还可采取以下提取方法
马钱子粉碎成细粉，浓度40%以上乙醇提取l-4次，每次1-3h，乙醇中可加 入盐酸或硫酸调节pH1-6，减压回收乙醇，干燥，得提取物，提取物可继续上离 子交换树脂或大孔交换树脂进行洗脱分离，得马钱子生物碱一种成分或一种以 上混和物。
本发明马钱子生物碱囊泡，其特征在于非离子表面活性剂可为聚甘油烷基 醚、葡萄糖烷基醚、冠醚、聚氧乙烯垸基醚、脂肪醇聚氧乙烯醚(AEO)、脂肪 酸聚氧乙烯酯、脂肪胺聚氧乙烯醚、烷基醇酰胺聚氧乙烷醚、嵌段聚氧乙烯-聚 氧丙烯醚、垸基聚葡萄糖苷、乙二醇单硬脂酸酯或双硬脂酸酯、聚乙二醇双硬 脂酸酯、丙二醇单硬脂酸酯、丙二醇藻酸酯、甘油单硬脂酸酯和双硬脂酸酯、 山梨醇脂肪酸酯类、失水山梨醇单月桂酸酯(Span-20)、失水山梨醇单棕榈酸酯 (Span-40)、失水山梨醇单硬脂酸酯(Span-60)、失水山梨醇单油酸酯(Span-80)、 蔗糖脂肪酸酯中一种成分或一种以上任意组合形式，稳定剂可为胆固醇、磷酸 二鲸蜡脂、磷脂酰胺一种或-一种以上，修饰脂质可为聚乙二醇-聚乳酸、聚乙二 醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、聚氧乙烯脂肪酸酯、N-十六酰-L-高半胱胺酸、聚 乙二醇一聚己内酯，聚乙二醇一聚乙交酯丙交酯、聚乙二醇一聚十六烷基氰基 丙烯酸酯、聚氧乙烯脂肪酸酯类、聚氧乙烯脂肪酸醚、聚氧乙烯甲基蓖麻油醚 一种或一种以上。
本发明马钱子生物碱囊泡可采取以下制备方法
取非离子表面活性剂、稳定剂、修饰脂质、马钱子生物碱溶于适量有机溶剂， 加热溶解，溶液备用；另取磷酸盐缓冲液，在30-7(TC恒温并搅拌下，匀速滴加 上述有机溶剂溶液，加完后继续搅拌，至有机溶剂挥尽，加磷酸盐缓冲液至全 量，超声或过高压乳匀机1-3次，微孔滤膜过滤，灌装或冷冻干燥，即得。
本发明马钱子生物碱囊泡制备方法也可以为取非离子表面活性剂、稳定剂、 修饰脂质、马钱子生物碱溶于适量有机溶剂，在旋转蒸发仪上，30-8(TC真空蒸 发至干燥薄膜，然后加入磷酸盐缓冲液，超声处理，即得。
本发明中磷酸盐缓冲液也可为硫酸铵缓冲液、三羟甲基氨基缓冲液或其它缓 冲液。
将非离子表面活性剂、稳定剂、修饰脂质溶于适量有机溶剂中，减压蒸发，制 备类脂膜；加入的预热的硫酸铵缓冲液，旋转蒸发,至30-7(TC水浴中水化0. 5_2 h， 超声5-30 min，得空白囊泡。将空白囊泡依次通过不同孔径的微孔滤膜，进行整
5粒。整粒后空白囊泡装入透析袋中，置于0.9懇aCl溶液中透析12-48 h，每隔一定 时间更换透析液。取此空白囊泡，加入马钱子生物碱，30-7(TC水浴孵化5-30min， 微孔滤膜过滤，即得。
本发明马钱子生物碱囊泡制备方法还可以为将非离子表面活性剂、稳定剂、 修饰脂质溶于适量有机溶剂中，减压蒸发，制备类脂膜；加入枸橼酸缓冲液或乳 酸缓冲液，30-7(TC水浴中水化0.5-2 h，得空白囊泡；将所得空白囊泡用不同孔 径的微孔滤膜过滤后，加入马钱子生物碱，并加缓冲液、调外水相值至中性， 30-70。C水浴孵化5-30 min，微孔滤膜过滤，即得。
本发明有机溶剂可为乙醚、乙醇、氯仿、二氯甲垸、正戊醇、异戊醇，非离 子表面活性剂、稳定剂、修饰脂质均可选用其它已存在的同类物代替。
本发明采用非离子表面活性剂作为囊材，成本低，易工业化生产，产品较脂 质体稳定具有较大推广价值。
具体实施例方式
本发明通过实施例作进一步说明，但不局限于本发明。
仪器RE-52A型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；高压乳匀机(美国)； 超声波仪(上海)
实施例1
取司盘20 600mg、胆固醇100mg、马钱子碱10mg溶于200ml乙醚，超声溶 解，溶液备用；另取磷酸盐缓冲液(pH7.0) 500ml，在4(TC恒温并搅拌下，匀 速滴加上述乙醚溶液，加完后继续搅拌，至乙醚挥尽，加磷酸盐缓冲液至800ml， 过高压乳匀机1-3次，0.22um微孔膜过滤，即得。
实施例2
取司盘60 1500mg、胆固醇1000mg、 士的宁400mg溶于1500ml氯仿，加热 溶解，溶液备用；另取磷酸盐缓冲液(pH7.0)，在60。C恒温并搅拌下，匀速滴 加上述氯仿溶液，加完后继续搅拌，至氯仿挥尽，加磷酸盐缓冲液至3000ml， 超声处理，0.22um过滤，即得。
实施例3
取司盘40 50mg、胆固醇50mg、聚乙二醇-聚乳酸1000mg、马钱子总生物碱 11mg溶于1000ml乙醇，在旋转蒸发仪上，3(TC真空蒸发至干燥薄膜，然后加入 磷酸盐缓冲液(pH7.0) 1200ml,超声处理15rain， 0.22ym微孔膜过滤，即得。
实施例4
取司盘20 300mg、胆固醇150mg溶于300ml乙醚，振摇溶解，溶液备用；另 取马钱子碱12 mg溶于磷酸盐缓冲液(pH7.0)，在35'C恒温并搅拌下，匀速滴加上述乙醚溶液，加完后继续搅拌，至乙醚挥尽，加磷酸盐缓冲液(pH7.0)至 600ml，超声处理10min， 0.22pm微孔膜，即得。 实施例5
取司盘40 600mg、磷酸二鲸蜡脂100mg、聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺 200mg溶于800ml乙醚，溶解，溶液备用；另取马钱子碱100mg溶于磷酸盐缓冲 液(pH7.0)，在5(TC恒温并搅拌下，匀速滴加上述乙醚溶液，加完后继续搅拌， 至乙醚挥尽，加磷酸盐缓冲液(pH7.CO至1500ml，超声处理5min， 0. 22 u m微 孔膜过滤，即得。
实施例6
将脂肪醇聚氧乙烯醚900mg、磷脂酰胺900mg溶于乙醇中，减压蒸发，制备类脂 膜，加入的预热至50。C的硫酸铵缓冲液(200 mmol/L) 1000ml，旋转蒸发，至6(TC 水浴中水化l h，超声10 min，得空白囊泡；将空白囊泡依次通过O. 8 p m， 0. 45 lim和O. 22um的微孔滤膜，进行整粒。整粒后空白囊泡装入透析袋中，置于 0. 9。/。NaCl溶液中透析24h，每隔8h更换透析液。取此空白囊泡，加入300mg马钱子 碱，6(TC水浴孵化10 min，即得。
实施例7
将聚氧乙烯脂肪酸脂1300mg、胆固醇500mg溶于乙醇中，减压蒸发,制备类脂 膜，加入的预热至6(TC的硫酸铵缓冲液(300咖ol/L) 1000ml，旋转蒸发，至60。C 水浴中水化0.5h，超声15min，得空白囊泡；将空白囊泡依次通过O. 8um， 0. 45 u ni和O. 22 p m的微孔滤膜，进行整粒。整粒后空白囊泡装入透析袋中，置于 0. 9。/。NaCl溶液中透析24h，每隔8h更换透析液。取此空白囊泡，加入190mg马钱子 碱，60。C水浴孵化5 min,即得。
实施例8
将垸基聚葡萄糖苷300mg、磷脂酰胺200mg溶于氯仿中，减压蒸发，制备类脂膜， 加入的预热至45。C的硫酸铵缓冲液(350腿ol/L) 800ml，旋转蒸发，至45。C水浴 中水化l h，超声8min，得空白囊泡；将空白囊泡依次通过O. 8um， 0. 45 u m和 0. 22"m的微孔滤膜，进行整粒。整粒后空白囊泡装入透析袋中，置于0.9。/。NaCl 溶液中透析12h，每隔4h更换透析液。取此空白囊泡，加入70mg马钱子碱，4(TC水 浴孵化20 min，即得。
实施例9
将司盘20 800mg、磷脂酰胺300mg溶于氯仿中，减压蒸发，制备类脂膜，加入的 预热至50。C的硫酸铵缓冲液(250 mmol/L) 1000ml，旋转蒸发，至50。C水浴中水 化O. 5h,超声8min，得空白囊泡；将空白囊泡依次通过O. 8 u m, 0. 45um和0. 22"m的微孔滤膜，进行整粒。整粒后空白囊泡装入透析袋中，置于O. 9。/。NaCl溶液中 透析12h，每隔4h更换透析液。取此空白囊泡，加入100mg马钱子碱，4(TC水浴孵化 20 min，即得。 实施例10
将司盘40 500mg、胆固醇100mg、磷脂酰胺200mg溶于氯仿中，减压蒸发，制备 类脂膜，加入的预热至4(TC的硫酸铵缓冲液(100 mmol/L) 600ml,旋转蒸发，至 4(TC水浴中水化lh，超声5min，得空白囊泡；将空白囊泡依次通过O. 8 u m， 0. 45 um和O. 22um的微孔滤膜,进行整粒。整粒后空白囊泡装入透析袋中，置于 0. 9G/。NaCl溶液中透析24h，每隔8h更换透析液。取此空白囊泡，加入10mg士的宁生 物碱，35。C水浴孵化30 min，即得。
实施例11
将司盘20 700mg、胆固醇300mg溶于乙醇中，减压蒸发，制备类脂膜，加入的预 热至55。C的硫酸铵缓冲液(400 mmol/L) 500ml，旋转蒸发，至55。C水浴中水化2 h， 超声15min，得空白囊泡；将空白囊泡依次通过O. 8pm， 0. 45 u m和O. 22 u m的 微孔滤膜,进行整粒。整粒后空白囊泡装入透析袋中，置于O. 9。認aCl溶液中透析 24h，每隔8h更换透析液。取此空白囊泡，加入3mg士的宁生物碱和3mg马钱子 碱，65。C水浴孵化15 min，即得。
实施例12
将司盘20 300mg、聚乙二醇一聚乙交酯丙交酯300mg、磷脂酰胺100mg、胆固 醇100mg溶于乙醚中，减压蒸发，制备类脂膜，加入的预热至45。C的枸橼酸缓冲液 (pH4. 3) 1200ml，旋转蒸发，至45。C水浴中水化l h，超声25min，得空白囊泡;将 空白囊泡依次通过O. 8um, 0. 45um和0. 22 y m的微孔滤膜，进行整粒。整粒 后空白囊泡装入透析袋中，置于O. 9。/。NaCl溶液中透析24h，每隔8h更换透析液。取 此空白囊泡，加入3mg士的宁生物碱和3mg马钱子碱，并加入磷酸氢二钠缓冲液 (pH4. 3) 65X:水浴孵化15 min，即得。 实施例13
50g马钱子粉碎成细粉，浓度40%乙醇4倍量提取1次，时间3h，乙醇中可加 入盐酸调pHl，减压回收乙醇，干燥，得提取物，提取物继续上大孔树脂按生物 碱常规分离方法进行洗脱分离，得以马钱子碱和士的宁为主的生物碱混和物。
实施例14
40g马钱子粉碎成细粉，浓度95%乙醇3倍量提取4次，每次lh，乙醇中加入 硫酸调pH6，减压回收乙醇，干燥，得提取物，提取物继续上离子交换树脂按生 物碱常规分离方法进行洗脱分离，得马钱子碱350mg， 士的宁680mg。实施例15
取司盘40 30mg、司盘20 40mg、胆固醇30mg马钱子总生物碱8mg溶于1600ml 氯仿，在旋转蒸发仪上，8(TC真空蒸发至干燥薄膜，然后加入磷酸盐缓冲液 (pH7.0)画ml，超声处理10min， 0.22pm微孔膜过滤，即得。
权利要求
1、马钱子生物碱囊泡，其特征在于包括下列重量份组分马钱子生物碱1-40 非离子表面活性剂5-150 稳定剂0-100 修饰脂质0-100。
2、 如权利要求1所述的马钱子生物碱囊泡，其特征在于非离子表面活性剂与稳定剂重量比为1: 1-180: 1。
3、 如权利要求1所述的马钱子生物碱囊泡，其特征在于马钱子生物碱可采取以下提取方法马钱子粉碎成细粉，浓度40%以上乙醇提取1-4次，每次l-3h，乙醇中可加 入盐酸或硫酸调节pHl-6，减压回收乙醇，干燥，得提取物，提取物可继续上离 子交换树脂或大孔交换树脂进行洗脱分离，得马钱子生物碱一种成分或一种以 上混和物。
4、 如权利要求1所述的马钱子生物碱囊泡，其特征在于非离子表面活性剂 可为聚甘油烷基醚、葡萄糖烷基醚、冠醚、聚氧乙烯烷基醚、脂肪醇聚氧乙烯 醚(AEO)、脂肪酸聚氧乙烯酯、脂肪胺聚氧乙烯醚、烷基醇酰胺聚氧乙垸醚、 嵌段聚氧乙烯-聚氧丙烯醚、烷基聚葡萄糖苷、乙二醇单硬脂酸酯或双硬脂酸酯、 聚乙二醇双硬脂酸酯、丙二醇单硬脂酸酯、丙二醇藻酸酯、甘油单硬脂酸酯和 双硬脂酸酯、山梨醇脂肪酸酯类、失水山梨醇单月桂酸酯(Span-20)、失水山 梨醇单棕榈酸酯(Span-40)、失水山梨醇单硬脂酸酯(Span-60)、失水山梨醇 单油酸酯(Span-80)、蔗糖脂肪酸酯中一种成分或一种以上任意组合形式，稳 定剂可为胆固醇、磷酸二鲸蜡脂、磷脂酰胺一种或一种以上，修饰脂质可为聚 乙二醇-聚乳酸、聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、聚氧乙烯脂肪酸酯、N-十 六酰-L-高半胱胺酸、聚乙二醇一聚己内酯，聚乙二醇一聚乙交酯丙交酯、聚乙 二醇一聚十六垸基氰基丙烯酸酯、聚氧乙烯脂肪酸酯类、聚氧乙烯脂肪酸醚、 聚氧乙烯甲基蓖麻油醚一种或一种以上。
5、 如权利要求1所述的马钱子生物碱囊泡制备方法，其特征在于 取非离子表面活性剂、稳定剂、修饰脂质、马钱子生物碱溶于适量有机溶剂，加热溶解，溶液备用；另取磷酸盐缓冲液，在30-7(TC恒温并搅拌下，匀速滴加 上述有机溶剂溶液，加完后继续搅拌，至有机溶剂挥尽，加磷酸盐缓冲液至全 量，超声或过高压乳匀机1-3次，微孔滤膜过滤，灌装或冷冻干燥，即得。
6、 如权利要求1所述的马钱子生物碱囊泡制备方法，其特征在于 取非离子表面活性剂、稳定剂、修饰脂质、马钱子生物碱溶于适量有机溶剂，在旋转蒸发仪上，30-80。C真空蒸发至干燥薄膜，然后加入磷酸盐缓冲液，超声 处理，即得。
7、 如权利要求5、 6所述的马钱子生物碱囊泡制备方法，其特征在于磷酸 盐缓冲液也可为硫酸铵缓冲液、三羟甲基氨基缓冲液或其它缓冲液。
8、 如权利要求1所述的马钱子生物碱囊泡制备方法，其特征在于 将非离子表面活性剂、稳定剂、修饰脂质溶于适量有机溶剂中，减压蒸发,制备类脂膜；加入的预热的硫酸铵缓冲液，旋转蒸发，至30-7(TC水浴中水化0. 5-2 h， 超声5-30 min，得空白囊泡。将空白囊泡依次通过不同孔径的微孔滤膜，进行整 粒。整粒后空白囊泡装入透析袋中，置于0.9。/。NaCl溶液中透析12-48 h，每隔一定 时间更换透析液。取此空白囊泡，加入马钱子生物碱，30-70。C水浴孵化5-30min， 微孔滤膜过滤，即得。
9、 如权利要求1所述的马钱子生物碱囊泡制备方法，其特征在于 将非离子表面活性剂、稳定剂、修饰脂质溶于适量有机溶剂中，减压蒸发，制备类脂膜;加入枸櫞酸缓冲液或乳酸缓冲液，30-7(TC水浴中水化0.5-2 h，得空 白囊泡；将所得空白囊泡用不同孔径的微孔滤膜过滤后，加入马钱子生物碱，并 加缓冲液、调外水相值至中性，30-7(TC水浴孵化5-30min，微孔滤膜过滤，即 得。
10、 如权利要求5、 6、 8、 9所述的马钱子生物碱囊泡制备方法，其特征在 —有机溶剂可为乙醚、乙醇、氯仿、二氯甲烷、正戊醇、异戊醇。
全文摘要
本发明涉及马钱子生物碱囊泡及其制备方法。本发明以非离子表面活性剂司盘、吐温、单(双)烷基聚丙三醇醚类、聚氧乙烯烷基醚类等为囊材，加入胆固醇、二鲸蜡磷酸酯等作为稳定剂，制备稳定性好，易产业化的新型靶向制剂。
文档编号A61K9/50GK101574394SQ20081010618
公开日2009年11月11日 申请日期2008年5月9日 优先权日2008年5月9日
发明者张卫华, 张永丽 申请人:北京因科瑞斯医药科技有限公司