专利名称：：以人参须为原料制备具有抗骨质疏松功效的人参胶囊的方法
技术领域：
：本发明涉及以人参须为原料制备具有抗骨质疏松功效的药物制剂与保健食品的生产方法。
背景技术：
：绝经后骨质疏松是绝经期后妇女的常见病，多见于绝经后1520年，该病主要是由于雌激素不足导致的，是一种为高转换型骨质疏松，即在这段时间，绝经后妇女由于破骨细胞异常活跃，导致骨吸收明显增强，骨量大量丢失，同时，由于破骨细胞介导的成骨细胞也大量激活，成骨活动也增强，骨合成也明显增加，但是，由于绝经期后妇女的骨吸收明显大于骨形成，骨量丢失大于骨合成，最终导致了高转换型骨质疏松，这是绝经期后妇女均普遍出现的健康问题，严重的骨质疏松可导致老年人脊椎骨折，髋部骨折发生率在增高，并发症严重，常长期卧床，失去生活能力，死亡率高达15-30%，因此防治骨质疏松病不仅是现代医学界急待解决的问题，也是一个社会化问题。从整个世界范围来看，60岁以上绝经期后妇女占整个人口中的比例不断上升，我国目前已步入老龄化社会，因而关注绝经期后妇女身体健康，提高生活质量显得十分重要。骨质疏松有原发性和继发性两大类，原发性骨质疏松症本质上是衰老的集中体现，可分为绝经后骨质疏松(I型)和老年性骨质疏松(n型)。前者多见于绝经后1520年由于雌激素不足的妇女，为高转换型骨质疏松；后者多见于70岁以上的老年人，男女均可发病，多为低转换型骨质疏松。目前防治骨质疏松症的药物主要分为三种类型一类为抑制骨吸收的药物，如雌激素、降钙素、孕激素、二膦酸盐类等；另一类是促进骨形成的药物，如氟化物、同化类固醇激素、依普拉芬等；第三类为作用骨矿化的药物，如钙剂、维生素D等。第一类是预防、治疗绝经后骨质疏松症的主要药物，但存在严重的不良反应，其最严重不良反应是刺激子宫内膜增生，增加子宫内膜癌的发病率，而且长期使用也会增加乳腺癌的发病率和引起子宫出血等。第二类则较适合于老年性骨质疏松，但这一类药物还处于研发的初始阶段，有良好前景，其代表药氟化物证明可增加骨量，但却会降低骨质量而诱发继发性骨折。第三类药物疗效明确且安全，但也存在一些不良反应。因此，寻找疗效肯定，无毒副作用的防治骨质疏松的药物成为了一个新的研究热点。本项目组通过大量的动物实验研究和筛选，曾发现了中药五加科植物人参(PanaxginsengC.A.Mey)的干燥根以及其干燥根的提取物人参二醇组皂武；人参茎叶的提取物人参茎叶总皂甙具有明显的防治骨质疏松的作用，于2000年申请了国家发明专利，专利申请号为ZL00104283丄该专利于2004年获得授权，发明证书号为第143882号。进一步研究我们发现人参须也有一定的预防骨质疏松作用。以人参须为原料，采用下述方法制备的人参须皂苷有效部位群对去卵巢大鼠骨质疏松有非常明显的预防作用用贝利微粉机进行微粉化，用70%乙醇室温浸泡24小时，加热提取2小时，滤渣再加40%乙醇浸泡24小时，加热提取2小时，过滤，得滤液，合并滤液l，2浓缩，至100%。该工艺制备的人参须皂苷有效部位群经动物实验注明，对老年性高转换型的骨质疏松有明显的预防作用
发明内容一种以仅为一味中药人参须为原料配方制备的具有抗骨质疏松功效的人参胶囊药物的生产方法，该药物的生产方法主要包括人参须超微粉碎及乙醇提取得到的人参须有效成分部位群，以及这些的人参须有效成分部位群制备为人参胶囊的生产方法。人参胶囊的生产方法取人参须，粉碎，再用贝利微粉机进行微粉化，加8~15倍60~80%乙醇浸泡24~48小时，加热回流提取2次，过滤，保留滤液。滤渣再加40%乙醇浸泡24小时，加热回流提取l次，过滤，合并滤液，回收乙醇后，浓縮至浸膏，加适量淀粉，分装为胶囊。即可。用本方法制备的人参须有效成分部位群还可以按现代工艺制备成丸剂、片剂、颗粒剂、注射剂和任何一种临床可接受的抗骨质疏松的药物制剂或保健食品，供临床用于预防可治疗绝经后骨质疏松和老年性骨质疏松。具体实施例方式1.人参须抗骨质疏松有效成分部位群的提取方法取人参须，粉碎，用贝利微粉机进行微粉化，加15倍70%乙醇浸泡24小时，加热回流提取2次，过滤，保留滤液。滤渣再加40%乙醇浸泡24小时，加热回流提取l次，过滤，保留滤液，合并3次滤液，回收乙醇，浓縮至100%。2.人参须抗骨质疏松有效成分部位群制备为人参胶囊的生产方法取人参须5.5kg，粉碎，再用贝利微粉机进行微粉化，加8%乙醇浸泡24小时，加热回流提取2次，过滤，保留滤液。滤渣再加40%乙醇浸泡24小时，加热回流提取l次，过滤，合并滤液，回收乙醇后，浓縮至浸膏，加适量淀粉，分装为1#胶囊，制成10000粒，每粒含生药材0.55g;每粒药粉重约0.29—0.31g。3.按方法1提取的人参须有效成分部位群，还可以按现代工艺制备成丸剂、片剂、颗粒剂、注射剂和任何一种临床可接受的抗骨质疏松的药物制剂或保健食品，供临床用于预防可治疗绝经后骨质疏松和老年性骨质疏松。按上述方法制备的人参须抗骨质疏松有效成分部位群，其原料人参须可以用人参，人参茎叶，人参花蕾代替。实施例一1.实验动物分组给药及药物的制备1.1药物的制备1.1.1人参须超微粉醇提液(人参须抗骨质疏松有效成分部位群)按本发明1.人参须抗骨质疏松有效成分部位群的提取方法进行提取取人参须，粉碎，用贝利微粉机进行微粉化，加15倍70%乙醇浸泡24小时，加热回流提取2次，过滤，保留滤液。滤渣再加40%乙醇浸泡24小时，加热回流提取l次，过滤，保留滤液，合并3次滤液，回收乙醇，浓縮至100%(lg生药/ml)和33%两种浓度。经HPLC法检测，中剂量药液(lg生药/ral)含人参皂苷Rgl6.63±0.26mg/g生药，人参皂苷Rbl32.62±2.4mg/g生药，人参皂苷Re40.85±1.9mg/g生药。L1.2利维爱为替勃龙片，南京欧加农生产有限公司生产，规格2.5mg/片，批号LH-0502-10。1.2实验动物及饲养条件SPF级成年雌性未孕SD大鼠40只，体重271.67±25.63g，由广东省实验动物中心提供，广东省实验动物质量合格证编号粤监证字2006A015。饲养条件饲养室内温度保持24。C28。C,湿度在50%~60%，专室分笼饲养，每笼两只，隔日更换垫料，自由摄水，摄食(本院动物中心提供的标准饲料)，每周称体重一次。1.3实验设计与分组去卵巢实验时除假手术组外其余各组大鼠以3%戊巴比妥钠无菌溶液0.13ml*100g"BW腹腔注射麻醉，无菌条件下腹部手术切除双侧卵巢后缝合，假手术组大鼠只切开肌层进入腹腔寻找出卵巢后不切除并回纳腹腔。手术后观察伤口愈合情况并常规饲养，观察2d后开始作灌胃预防给药。32只大鼠随机分为4组，分别为假手术组、去卵巢组、利维爱、人参须超微粉醇提液中剂量组、低剂量组每组各8只。从去卵巢后2d开始，阳性对照药利维爱按0.25mg'kg"bw，(T1，人参须超微粉醇提液低剂量组为中剂量(100%即lg生药/ml)加两倍体积蒸馏水稀释成33%的药液。假手术组及去卵巢组每天给予等量蒸馏水灌胃，连续90d。每天各组灌胃给药情况如下组别动物数实验时间(天)处理措施假手术组890假手术+蒸馏水去卵巢组890去卵巢+蒸馏水利维爱组890去卵巢+利维爱0.25mgkg一'bwcf'人参须中剂量890去卵巢+人参须5g.lkg'bwd—1人参须低剂量890去卵巢+人参须1.66glkg—'bwd—1所有大鼠杀前13、14天皮下注射25mg,kg"盐酸四环素各一次，于杀前3、4两天皮下注射转黄绿素5mg.kg-l各一次，两荧光标记间隔10天。每周称量一次体重，自由饮水给食。实验结束后，用3%戊巴比妥钠(1.5ml,kg'1)行腹腔注射麻醉后右心室彻底抽血处死(以减少骨髓中红细胞，排除干扰，使骨片更易于观察分析)。检测指标右侧胫骨上段制成不脱钙骨切片、中段骨制成不脱钙骨磨片，进行骨组织形态计量学参数检测；取右尺骨盐酸消化后测骨钙、磷和骨羟脯氨酸含量，取右股骨及第5腰椎分别测量其骨重、骨密度，以此评价实验大鼠骨成分、骨量变化；另外称取子宫湿重计算子宫指数以观察子宫大体变化。2测定方法2.1大鼠内脏重量的测定子宫及右股骨等重量(湿重)采用称重法，计算子宫/体重比、股骨/体重比。2.2骨钙、磷及羟脯氨酸含量的测定方法将右尺骨精密称重后，8(TC烘烤72h至恒重，再次精密称重并记录。随后将每份骨标本置于ioml安培瓶中加入6mol/LHCL5ml，酒精喷灯火烧瓶口密封后108'C烤箱恒温消化24h后取出过滤。将滤液分成两份，一份以1:200稀释后用ICP仪测定Ca、P等元素的含量，再依据标准品含量及样品稀释倍数计算Ca、P等元素的含量；另一份滤液，股骨以1:10稀释，调PH值至7.07.4后，按照羟脯氨酸(hyp)测定试剂盒方法用UV-752型紫外分光光度计测定样品吸光度值，依据公式计算骨中羟脯氨酸含量。2.3骨组织形态计量学方法胫骨上段脱水塑料包埋，制作非脱钙骨切片，厚度为4nm和9nm，二甲苯透明后树脂封片，用图像分析仪分别测量松质骨动、静态形态学计量学参数。静态参数包括骨小梁百分率(o/。Tb,Ar)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁数目(Tb.N)、骨小梁分离度(Tb.Sp)，动态参数中骨形成参数包括荧光周长百分率(％L.Pm)，矿化沉积率(MAR)，骨形成率(BFR/BS),骨形成率(BFR7BV)，骨形成率(BFR7BV);通过动态参数，可以了解骨表面矿化的量和速率，并解释静态参数变化的原因。胫骨中段脱水塑料包埋，制作非脱钙骨磨片，厚度为40um，二甲苯透明后树脂封片，用图像分析仪测量皮质骨形态学计量学参数如皮质骨面积(Ct.Ar)，皮质骨面积百分比(％Ct.Ar)，骨髓腔面积百分比(％Ma.Ar)。2.4骨密度的测定美国GE-Limar公司DEXA骨密度仪测量实验大鼠离体右股骨及第5腰椎骨密度。2.5统计学分析实验数据均用iiS表示，釆用SPSS14.0软件。正态分布数据的组间比较采用单因素方差分析(ANOVA)，方差齐采用LSD检验；方差不齐则采用Tamhane'sT2检验；偏态分布则用Kruskal-Wallis秩和检验后，再进一步用Conover，st检验比较两两组间差别。3.实验结果3.1人参须超微粉醇提液对去卵巢大鼠子宫、股骨重量的影响人参须超微粉醇提液对去卵巢大鼠子宫、股骨重量的影响见表3.1:表3.1人参须超微粉醇提液对去卵巢大鼠子宫、股骨重量的影响(5±《)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>*P<0.05vs假手术组，**P<0.01vs假手术组，△PO.05vs去卵巢组，△△PO.01vs去卵巢组由表3.1的结果可见，与假手术组相比，去卵巢组股骨指数显著减少(PO.01)，与去卵巢组相比各干预组股骨指数均不同程度提高(PO.05或P<0.01);与假手术组相比，利维爱组明显增加大鼠子宫重量外(PO.01)，人参须超微粉醇提液各组与去卵巢组大鼠子宫重量都明显下降(PO.Ol)，和去卵巢组相比，人参须超微粉醇提液各组子宫重量无明显差异。3.2人参须超微粉醇提液对去卵巢大鼠尺骨有机质和钙、磷含量的影响人参须超微粉醇提液对去卵巢大鼠尺骨的有机质(骨hyp/骨干重)、无机质(骨妈/骨干重)的影响见表3,2:表3.2人参须超微粉醇提液对去卵巢大鼠尺骨成分的影响(^土^)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>*P<0.05vs假手术组，**P<0.01vs假手术组，厶PO.05vs去卵巢组，△△PO.01vs去卵巢组由表3.2可知，与假手术组相比，去卵巢组尺骨的hyp、Ca分别下降了17.5%、18.3%(P<0.05);提示去势大鼠同时有骨钙和骨胶原的丢失。与去卵巢组相比，利维爱、人参须超微粉醇提液均能分别增加hyp、Ca(P<0.01))，说明人参须超微粉醇提液能有效预防去势大鼠尺骨hyp和Ca的丢失，效果和利维爱相当。3.3人参须超微粉醇提液对去卵巢大鼠胫骨上段松质骨形态计量学静态参数的影响人参须超微粉醇提液对去卵巢大鼠胫骨上段骨组织计量学中静态参数^Tb.Ar(骨小梁面积百分数)、Tb.Th(骨小梁厚度)、Tb.N(骨小梁数量)、Tb.Sp(骨小梁分离度)的影响见表3.3:表3.3人参须超微粉醇提液对去卵巢大鼠松质骨静态参数的影响(i土s)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>人参须低剂量组4.79±0.6779.1士1.54aa20.9士1.53aa*P<0.05vs假手术组，**P<0.01vs假手术组，△PO.05vs去卵巢组，△△PO.01vs去卵巢组由表3.4可知，与假手术组比较，去卵巢组大鼠的呢Ma,Ar增加表明骨髓腔扩大，%Ct.Ar降低提示皮质骨面积减少(P<0.05);而人参须超微粉醇提液能使大鼠的Ct.Ar明显增加(P〈0.05)。说明人参须超微粉醇提液对去卵巢大鼠中段骨的皮质骨形成有一定的作用。3.5人参须超微粉醇提液对去卵巢大鼠骨密度的影响人参须超微粉醇提液对去卵巢大鼠右股骨及第5腰椎骨密度的影响见表3.5:表3.5人参须超微粉醇提液对去卵巢大鼠右股骨及第5腰椎骨密度的影响(5±^)组别BMD(g/cm2)RFLV5假手术组0.253±0扁0.179±0細去卵巢组0.201±0.026**0.132±0.023*利维爱组0.245i0.023厶a0.167士0.026a人参须中剂量组0.223土0.015a0.174土0.018a厶人参须低剂量组0.224士0.020a0.168土0.016a厶*P<0.05vs假手术组，**P<0.01vs假手术组，厶PO.05vs去卵巢组，△△P<0.0vs去卵巢组由表3.5可知，与假手术组相比，去卵巢组大鼠股骨及第5腰椎骨密度显著下降(P〈0.01、P<0.05);利维爱、人参须超微粉醇提液均能使去势大鼠骨密度增加(P〈0.01或P〈0.05)，其中人参须超微粉醇提液对腰椎骨密度的影响比利维爱明显。以上结果表明人参须超微粉醇提液对去卵巢导致的骨质疏松有明显的预防和治疗作用。可用于预防可治疗绝经后骨质疏松和老年性骨质疏松。权利要求1、一种以人参须为原料制备的具有抗骨质疏松功效的人参胶囊的生产方法，其特征是该生产方法包括人参须超微粉碎及乙醇提取得到的人参须有效成分部位群，以及药物制剂的制备人参须有效成分部位群的提取主要是用贝利微粉机对人参须进行微粉化，乙醇提取包括用70％乙醇和40％乙醇两种不同比例的乙醇浸泡，加热回流提取，药物制剂的制备包括加适量淀粉，分装胶囊；其具体生产方法如下取人参须5.5kg，粉碎，再用贝利微粉机进行微粉化，加8％乙醇浸泡24小时，加热回流提取2次，过滤，保留滤液。滤渣再加40％乙醇浸泡24小时，加热回流提取1次，过滤，合并滤液，回收乙醇后，浓缩至浸膏，加适量淀粉，分装胶囊，即得。2、如权利要求所述的一种以人参须为原料制备的具有抗骨质疏松功效的人参胶囊的生产方法，还可按现代工艺制备成丸剂、片剂、颗粒剂、注射剂和任何一种临床可接受的抗骨质疏松的药物制剂或保健食品，供临床用于预防可治疗绝经后骨质疏松和老年性骨质疏松。3、如权利要求所述的一种以人参须为原料制备的具有抗骨质疏松功效的人参胶囊的生产方法，其原料人参须可以用人参，人参茎叶，人参花蕾代替。全文摘要本发明涉及用以人参须为原料制备具有抗骨质疏松功效的人参胶囊的方法，该生产方法包括人参须超微粉碎及乙醇提取得到的人参须有效成分部位群，以及药物制剂的制备人参须有效成分部位群的提取主要是用贝利微粉机对人参须进行微粉化，乙醇提取包括用70％乙醇和40％乙醇两种不同比例的乙醇浸泡，加热回流提取，药物制剂的制备包括加适量淀粉，分装胶囊。研究表明用人参须有效成分部位群制备的药物制剂，对去卵巢大鼠导致的高转换型的骨质疏松有非常明显的预防和治疗作用，临床可用于老年性骨质疏松症的预防及治疗作用，特别是对绝经期后骨质疏松和对肾上腺糖皮质激素等药物造成的骨质疏松也有具有较好的预防及治疗作用。文档编号A61K9/48GK101422498SQ200810184830公开日2009年5月6日申请日期2008年11月27日优先权日2008年11月27日发明者怡吴,铁吴,燎崔,张新乐,张益嘉,彬李申请人:广东医学院