专利名称：：一种治疗脑卒中的药物组合物及制备方法和用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种治疗脑卒中的药物组合物，属于药物领域。
背景技术：
：脑血管疾病是当今世界严重危害人类生命健康的主要疾病之一，是我国的常见病、多发病。脑卒中是多种脑血管疾病的严重表现形式，具有极高的致残率和较高的致死率，脑卒中一直是中国人群死亡的主要原因。2574岁年龄组人群急性脑卒中事件的平均年龄标化发病率男性为270/10万，女性为161/10万，平均年龄标化死亡率男性为89/10万，女性为61/10万，平均年龄标化病死率男性为33%，女性为38%。它不仅严重威胁病人的生命，影响其生活质量，还给家庭和社会带来沉重的负担。目前脑血管疾病的致死率仍然很高，有大约75%的卒中患者会留下神经功能或认知功能异常的后遗症。在脑血管病中，急性缺血性脑血管病约占75%-85%。因此，进一步探索急性脑血管病特别是缺血性脑血管病的有效防治方法十分必要。人们很早就发现脑梗死伴发炎性反应。早在20世纪50年代，人们就发现动物的缺血损伤区域内有不复流(nore-flow)现象，这种现象的出现与血管内皮细胞水肿和白细胞粘附、浸润密切相关。近年来，随着对脑梗死的深入研究，研究人员提出了脑缺血损伤的病理生理机制新理论——损伤级联反应，即脑缺血后组织损伤的兴奋性毒性、梗死周围去极化、炎症、程序性细胞死亡等机制。根据级联反应的机制有时间选择地采取干预措施，使半暗带向正常组织转化或稳定半暗带，以便赢得进一步治疗时间，这对脑梗死的治疗非常重要。近年来大量的动物实验和临床研究均支持炎性反应参与缺血性脑损伤。不少学者认为，减少炎性细胞在缺血区浸润、聚集，可减轻脑缺血后的炎性反应，进而减少梗死体积和神经的功能缺损。在我国，中医治疗中风有悠久的历史，活血化瘀治疗已被公认治疗缺血性脑卒中有效，然而其作用机理尚不十分清楚。黄芪为豆禾斗(Leguminosae)植物蒙古黄芪Astragalusmembranaceus(Fish.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao禾口膜荚黄芪A.membranaceus(Fisch.)Bunge的木艮，主产内蒙古、山西、甘肃、黑龙江等地。黄芪甘、微温。归脾、肺经。功效补气升阳，益卫固表，利水消肿，托疮生肌。黄芪中主要含有甙类、多糖、氨基酸及微量元素等；具有增强机体免疫功能、利尿、抗衰老、保肝、降压作用；能消除实验性肾炎尿蛋白，增强心肌收縮力，还有促雌激素样作用和较广泛的抗菌作用。其中膜荚黄芪皂甙甲具有降压、稳定红细胞膜、提高血浆组织内c-AMP的含量、增强免疫功能、促进再生肝DNA合成等多种作用。黄芪多糖具有提高小鼠应激能力、增强免疫功能、调节血糖含量、保护心血管系统、加速遭受放射线损伤机体的修复等作用。丹参为唇形科(Labiatae)植物丹参SalviamiltiorrhizaBge.的干燥根及根茎，主产四川、山东、河南、山西等地。苦，微寒。归心、肝经；具有活血调经，祛瘀止痛，凉血消痈，清心除烦，养血安神。主治月经不调，经闭痛经，症瘕积聚，胸腹剌痛，热痹疼痛，疮疡肿痛，心烦不眠；肝脾肿大，心绞痛。具体的药理作用有(一)心血管系统的作用①强心加强心肌收縮力、改善心脏功能，不增加心肌耗氧量；②对血管作用扩张冠脉，增加心肌血流量；扩张外周血管，血流增加；脑血流量下降；③抗血栓形成提高纤溶酶活性；延长出、凝血时间；抑制血小板聚集(提高血小板内cAMP水平抑制TXA2合成)；改善血液流变学特性(血粘度降低、红细胞电泳时间縮短)；④改善微循环。(二)促进组织的修复与再生作用①促进组织的修复与再生，治疗坏死心肌清除快；纤维母细胞分化、胶原纤维形成较明显；肉芽形成比较成熟。局部瘀血减轻、血液循环改善，愈合时间縮短。②抑制过度增生对过度增生的纤维母细胞有抑制作用。(三)保肝、改善肝微循环。(四)抗菌丹参中含有隐丹参酮、二氢丹参酮，对体外的葡萄球菌、大肠杆菌、变性杆菌有抑制作用。川尊为伞形科(Umbel1iferae)植物川尊LigusticumchuanxiongHort.的干燥根茎，主产四川。辛，温。归肝、胆、心包经。功能与主治活血行气，祛风止痛。用于安抚神经，正头风头痛，症瘕腹痛，胸胁剌痛，跌扑肿痛，头痛，风湿痹痛。其化学成分为含挥发油、阿魏酸(ferulicacid)，以及4-羟基-3-丁基酽内酯(4-hydroxy-3-butylphthalide)、川尊1T内酉旨(senkyunolide)、蔓本内酉旨(Ligustilide)、川尊嚷(tetramethylpyrazine)、川尊酚(chimnxiongol)、瑟丹酸(sedanicacid)等。目前尚无文献报道将黄芪、丹参、川芎配合使用治疗脑卒中。
发明内容本发明的技术方案是提供了一种治疗脑卒中的药物组合物，本发明的另一技术方案是提供了该药物组合物的制备方法和用途。本发明提供了一种治疗脑卒中的药物组合物，它是由下述重量配比的原料药制备而成的药剂黄芪5-120份、丹参5-50份、川芎5-50份。优选地，它是由下述重量配比的原料药制备而成的药剂黄芪15-60份、丹参10-30份、川芎10-30份。优选地，它是由下述重量配比的原料药制备而成的药剂黄芪15-30份、丹参15-30份、川芎10-15份。进一步优选地，它是由下述重量配比的原料药制备而成药剂黄芪30份、丹参15份、川芎10份。其中，所述的药剂是片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、口服液或滴丸。本发明还提供了一种制备所述的药物组合物的方法，它包括如下步骤a、称取下述重量配比的原料药黄芪5-120份、丹参5-50份、川芎5-50份；b、黄芪饮片用3060%乙醇提取，滤液过大孔树脂柱，3070%乙醇洗脱，回收乙醇，得黄芪总皂苷；c、丹参醇提物的制备丹参饮片用815倍水加热提取，提取液过大孔树脂柱，5090%乙醇洗脱，回收乙醇，得丹参总酚酸；药渣用95%100%乙醇回收提取，回收乙醇，得丹参总酮提取物，将丹参总酚酸和丹参总酮提取物混合，得丹参醇提物；d、川芎饮片用80X100%乙醇溶剂浸提，回收溶剂得川芎油；e、将b、c、d步骤的黄芪总皂苷、丹参醇提取物、川芎油混合，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备成药学上常用的药剂。本发明还提供了该药物组合物在制备治疗脑卒中的药物中的用途。4其中，所述的药物是治疗缺血性脑卒中的药物。其中，所述的药物是治疗脑梗死的药物。本发明药物采用局灶性脑缺血标准动物模型(MCA0模型)，运用现代组织病理技术、流式细胞技术和分子生物学的方法，观察本发明药物阻断梗死缺血区炎性反应的作用。试验证明，本发明药物中三味原料配伍使用，发挥了明显协同增效的作用，药效明确，且质量可控，为临床提供了一种治疗脑卒中药物的新选择。显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明的上述基本技术思想前提下，还可以作出其它多种形式的修改、替换和变更。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应该将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。具体实施例方式实施例1本发明药物的制备a、取黄芪50kg、丹参50kg、川芎50kg，黄芪饮片用30X乙醇提取，滤液过大孔树脂柱，30%乙醇洗脱，回收乙醇，得黄芪总皂苷；b、丹参醇提物的制备丹参饮片用8倍水加热提取，提取液过大孔树脂柱(D皿)，50%乙醇洗脱，回收乙醇，得丹参总酚酸；药渣用95%乙醇回收提取，回收乙醇，得丹参总酮提取物，将丹参总酚酸和丹参总酮提取物混合，得丹参醇提物；c、川芎饮片用80%乙醇溶剂浸提，回收溶剂得川芎油；d、将a、b、c步骤的黄芪总皂苷、丹参醇提取物、川芎油混合加适当淀粉、糊精等相关辅料混匀后，制粒，干燥；川芎油用环糊精包埋后，干燥；将上述二者混匀，可制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂。实施例2本发明药物的制备a、取黄芪120kg、丹参50kg、川芎50kg，黄芪饮片用60%乙醇提取，滤液过大孔树脂柱，70%乙醇洗脱，回收乙醇，得黄芪总皂苷；b、丹参醇提物的制备丹参饮片用15倍水加热提取，提取液过大孔树脂柱，90%乙醇洗脱，回收乙醇，得丹参总酚酸；药渣用无水乙醇回收提取，回收乙醇，得丹参总酮提取物，将丹参总酚酸和丹参总酮提取物混合，得丹参醇提物；C、川芎饮片用无水乙醇溶剂浸提，回收溶剂得川芎油；d、将a、b、c步骤的黄芪总皂苷、丹参醇提取物、川芎油混溶后，加相关辅料制成滴丸。也可适当的助溶剂将川芎油、黄芪总皂苷和丹参提取物混溶后制成口服液。实施例3本发明药物的制备取黄芪30kg、丹参15kg、川芎10kg，按实施例1的方法制备成颗粒剂。实施例4本发明药物滴丸的制备取聚乙二醇4000和聚乙二醇6000(比例为1:1)，水浴熔融后加入干燥药粉(取实施例1制备的黄芪总皂苷干粉、丹参醇提物干粉、川芎油P-环糊精包埋无干粉，混合；药物与基质的配比为l:2)，搅匀，熔融，迅速移至预热至恒温(85°C)的滴丸机储料灌中，以甲基硅油为冷却剂制备滴丸，滴头口径为2.5/5.Omm，冷却温度为1015°C，滴速为每分钟530滴，滴制，滴完后洗涤，干燥，包装成成品。以下通过药效学试验证明本发明的有益效果。试验例1本发明药物原料组方配伍筛选试验1、研究对象SD雄性健康大鼠，6-8月龄，247只(133只用于脑梗死体积的检测，114只用于其余指标检测)，体重300士20g，均为清洁级动物，检疫合格，由成都中医药大学实验动物中心提供(批号川动管8)。2、试剂戊巴比妥钠，中国医药(集团)上海化学试剂公司，批号F20020915。2，3，5-氯化三苯基四氮唑(2，3，5-triphenyltetrazoliumchloride,TTC)，北京生化制药厂，批号20020352。3、仪器及材料高速涡轮牙钻机YK-4北京医疗器械厂双极电凝器成都中医药大学药学院自制Mias-2000图形分析系统四川大学图像图形研究所奥林巴斯BX50学显微镜日本数码相机(Kodak,DC240USA)美国4、实验药物及给药方法受试药物组(根据表1的原料配比，按实施例1方法制备)，由成都中医药大学药学院制备。配制成每ml含生药2克的药液备用。环磷酰胺，上海华联制药有限公司生产，批号20030124。治疗组造模前8天开始灌胃，每天一次，中药组每次按临床剂量(lg/Kg)20倍(高剂量组)、10倍(中剂量组)、5倍(低剂量组)灌胃；环磷酰胺组15mg/Kg(给药剂量以体表面积按最小剂量计算，200g大鼠的系数为0.018)灌胃，造模后继续灌胃直至处死动物。模型对照组予生理盐水灌胃。5、实验方法5.1动物分组5.1.1脑梗死体积检测动物分组将133只大鼠随机分为正常组7只；假手术组21只；模型对照组21只；本发明药物高剂量组(20倍)21只；本发明药物中剂量组(10倍)21只；本发明药物低剂量组(5倍)21只；环磷酰胺组21只。5.1.2相关病理检测动物分组将114只大鼠随机分为正常组6只；假手术组18只；模型组18只；本发明药物高剂量组(20倍)18只；本发明药物中剂量组(10倍)18只；本发明药物低剂量组(5倍)18只；环磷酰胺组18只5.2MCA0动物造模制作电凝法闭塞大鼠右侧大脑中动脉制成MCAO模型。灌胃8天后造模。参照王世忠等电凝法制作MCAO模型(王世忠，刘舒洁，梁玉，等.大鼠局灶性脑缺血模型制作技术的探讨.天津医科大学学报，1999，5(4):72-73.)。方法SD大鼠经2X戊巴比妥钠(35mg/kg)腹腔注射麻醉，大鼠头部右侧卧位固定于鼠板。局部剪毛，常规消毒，于右眼外眦和右耳的中点纵形切开皮肤约1.5cm，沿颞骨缘解开颞肌筋膜，钝性分离颞肌，直至完全暴露颞骨的颞鳞和蝶骨大翼，在颧弓上方颞鳞与蝶骨大翼交界处进行钻孔，随后用血管钳向下方咬骨将孔扩大，做3-5mm2骨窗，以手术刀切开硬膜，暴露大脑中动脉，用微小双极电凝器电凝大脑中动脉(电流4毫安，时间2分钟)使之闭塞。缝合颞肌及皮肤，局部涂抹氧氟沙星。放回笼中饲养，大鼠苏醒后观察神经症状和体征。血管闭塞大鼠苏醒后表现为(l)提尾时左前肢内收屈曲；(2)爬行时向左侧划圈。凡具有上述2项体征者提示模型成功。脑梗死体积检测造模过程中，共有3只大鼠死亡。模型组一只麻醉过量死亡，中剂量和环磷酰胺组各有一只血管破裂出血死亡。造模后至72小时无大鼠死亡。5.3观察指标5.3.1脑梗死体积5.3.1.1组织标本的采集分别于造模后24、48、72小时分三批处死大鼠。在处死大鼠时，24小时模型组、本发明药物中剂量组、环磷酰胺组各处死6只，本发明药物高剂量组、低剂量组各处死7只。48、72小时各组均处死大鼠7只。动物用戊巴比妥钠深度麻醉后处死，迅速取出鼠脑，置于-22t:冰箱快速冷冻15min。5.3.1.2标本的处理取冠状面均匀切成2mm厚脑片，迅速放入2%红四氮唑(TTC)溶液(37°C)中染色30min，然后用4X甲醛固定。24h后用数码相机(Kodak,DC240USA)拍照，输入计算机，用图像处理软件(Adobe,Photoshop7.0)计算梗死面积(粉红色区为正常脑组织，白色区为梗死区)，各脑片梗死体积(梗死面积乘以厚度2mm)之和为总的梗死体积。5.3.2相关病理检测5.3.2.1标本的采集分别于造模后24、48、72小时各处死6只大鼠。开颅取大脑右侧半球，称取80毫克额、顶部脑组织，放入经焦碳酸二乙酯(diethylpyrocarbonat，DEPC)水处理过的1.5ml印pendorf管，置于-7(TC低温保存备用，将其余脑组织入4^多聚甲醛液内固定2小时，脱水、浸蜡、包埋切片。5.3.2.2组织病理学检查常规石蜡制片，HE染色。5.3.2.3尼氏体检测5.3.2.3.1甲苯胺蓝染色方法显示尼氏体(1)切片15-20ym，二甲苯脱蜡，梯度酒精脱苯至蒸馏水洗。(2)放入经预热至5(TC的1%甲苯胺篮(toluidneblue)水溶液中，并在56"温箱中染20min。(3)蒸馏水洗。(4)70%酒精约lmin。(5)95%酒精分化，镜下控制。以尼氏体显示清晰为度。(6)无水酒精迅速脱水，二甲苯透明，中性塑胶封固。5.3.2.3.2图像分析采用Mias-2000高清晰度彩色病理图文报告系统对尼氏体染色结果进行半定量分析，放大倍数为200，检测正常组、伪手术组、模型组、本发明药物不同剂量组、环磷酰胺组在单位视野中尼氏体染色的积分光密度。以每例标本5个表达最强视野(X200)的积分光密度值作为该例的测量值。5.4统计学处理采用DPS统计软件进行3因素5水平的正交试验设计方案(见表1)，分别提取各药的有效部位混匀后给大鼠给药，制作MCAO模型。以24h脑梗死体积的为指标对配伍比例进行优化。结果见下表1:表1组方配伍比例的三因素5水平^B^、A:黄芪(份)B:丹参(份)C:川芎(份)48h脑梗死体积平均值mm3<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>表2正交设计方差分析表(完全随机模型)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表3极差分析结果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>由方差分析表，模型误差显著水平=0.0001<0.01，有统计学意义。FA=93.9216、PA=0.0001<0.01，FB=25.5725、PB=0.0001<0.01，Fc=181.8152、PB=0.0001<0.01。由极差分析，A取水平3，B取水平3，C取水平2，故最优试验方案为A3B3C2。因此，确定下述重量配比的原料药制备而成黄芪30份、丹参15份、川芎10份。试验例2本发明药物药效试验为了验证前项筛选出药物组方的有效性和合理性，本实验采用前项(筛选实验)采用的实验方法，增加动物数对筛选出的组方进行再评价。根据前项的实验结果确定最佳配伍为黄芪30份、丹参15份、川芎10份，次优配伍为黄芪60份、丹参30份、川芎15份，本实验进行二者的比较验证实验。药物制备、实验方案和评价指标同试验例1。结果见表4.表4最佳配伍和次优配伍对大鼠48h脑梗死体积的比较<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>注A，与模型组相比，P<0.05。由表4可见，本发明药物的最佳配伍组、次优配伍组及环磷酰胺组与模型组比较，48小时梗死体积明显縮小，P<0.05。而次优配伍组减小脑梗死体积虽较最佳配伍组有优势的趋势，但没有统计学差异；同时在考虑药材消耗、和制剂难度、服药量和资源有效利用等方面综合评价后，确定最佳配伍组(黄芪30份、丹参15份、川芎10份)是本发明药物的最优配伍。综上所述，本发明药物中三味原料配伍使用，发挥了明显协同增效的作用，药效明确，且质量可控，为临床提供了一种治疗脑卒中药物的新选择。权利要求一种治疗脑卒中的药物组合物，其特征在于它是由下述重量配比的原料药制备而成的药剂黄芪5-120份、丹参5-50份、川芎5-50份。2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于它是由下述重量配比的原料药制备而成的药剂黄芪15-60份、丹参10-30份、川芎10-30份。3.根据权利要求2所述的药物组合物，其特征在于它是由下述重量配比的原料药制备而成的药剂黄芪15-30份、丹参15-30份、川芎10-15份。4.根据权利要求3所述的药物组合物，其特征在于它是由下述重量配比的原料药制备而成药剂黄芪30份、丹参15份、川芎10份。5.根据权利要求l-3任意一项所述的药物组合物，其特征在于所述的药剂是片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、口服液或滴丸。6.—种制备权利要求l-5任意一项所述的药物组合物的方法，它包括如下步骤a、称取下述重量配比的原料药黄芪5-120份、丹参5-50份、川芎5-50份；b、黄芪饮片用3060%乙醇提取，滤液过大孔树脂柱，3070%乙醇洗脱，回收乙醇，得黄芪总皂苷；c、丹参醇提物的制备丹参饮片用815倍水加热提取，提取液过大孔树脂柱，5090%乙醇洗脱，回收乙醇，得丹参总酚酸；药渣用95%100%乙醇回收提取，回收乙醇，得丹参总酮提取物，将丹参总酚酸和丹参总酮提取物混合，得丹参醇提物；d、川芎饮片用80%100%乙醇溶剂浸提，回收溶剂得川芎油；e、将b、c、d步骤的黄芪总皂苷、丹参醇提取物、川芎油混合，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备成药学上常用的药剂。7.权利要求1-5任一项所述的药物组合物在制备治疗脑卒中的药物中的用途。8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于所述的药物是治疗缺血性脑卒中的药物。9.根据权利要求7所述的用途，其特征在于所述的药物是治疗脑梗死的药物。全文摘要本发明提供了一种治疗脑卒中的药物组合物，它是由下述重量配比的原料药制备而成黄芪5-120份、丹参5-50份、川芎5-50份。本发明还提供了该药物组合物的制备方法。本发明药物采用局灶性脑缺血标准动物模型(MCAO模型)，运用现代组织病理技术、流式细胞技术和分子生物学的方法，观察本发明药物阻断梗死缺血区炎性反应的作用。试验证明，本发明药物中三味原料配伍使用，发挥了明显协同增效的作用，药效明确，且质量可控，为临床提供了一种治疗脑卒中的药物新选择。文档编号A61K36/537GK101766685SQ20091026268公开日2010年7月7日申请日期2009年12月23日优先权日2008年12月31日发明者严铸云,余芳,冉宁晶,刘福友,祝彼得,谢文,金硕果,陈卫银申请人:成都中医药大学