专利名称：免疫增强组成物及其制造方法
技术领域：
本发明涉及一种组成物，为借由刺激先天性免疫，使得抗菌作用、抗病毒作用、抗炎症作用、以及抗癌作用增强，同时，抑制影响于淋巴球系免疫系统的炎症。具体而言，有关本发明的组成物为刺激作为先天性免疫受体的TLR或NLR以及RIG 等，并且接着使包含巨噬细胞、自然杀伤细胞、自然杀伤T细胞的先天性免疫反应细胞活性化的同时，使Thl7以及Thl、或是与Treg等先天性免疫进行连动的淋巴球系免疫活性化。此外，借由诱导产生抑制过剩免疫反应的IL-21的一连串免疫程序的活性，而使得抗癌作用、 抗菌作用、抗病毒作用、抗炎症作用增强，缓和起因于CTL失控的自我免疫作用。
背景技术：
近年来，伴随于生活习惯的多样化而使得各种疾患成正比例的增加，达成先天性免疫任务的重要性日益增加。在美国NIH辅助项目中的Meven B. Mizel所作的研究里，揭明了利用作为先天性免疫配合基之一的鞭毛蛋白与鼠疫耶氏杆菌疫苗的结合体所形成的疫苗，其佐剂效果的增强约为50万倍。该成果表示了先天性免疫的高可能性，同时更令人期待先天性免疫配合基的佐剂效果(参照非专利文献1以及非专利文献2)。先天性免疫的受体或其类似传感器广泛存在于动物、植物、微生物中。具体而言，作为脊椎动物的先天性免疫受体，存在于TLR(Toll-like-rec印tor)、 NLR(Nod-like-receptor)、以及 RLR(RIG-1 ike-receptor)的细胞内外，借由分解菌或病毒等所得的物质(配合基)而检测出菌或病毒等外敌，以模式辨识进行判别。配合基为借由所分解的菌或病毒的种类而生成复数个，一般而言，由于所生成的物质或者是其浓度均为相异，借由该等配合基群的组合，识别出有着极微小不同的辨识模式，使得形成先天性免疫反应。在人类表皮细胞等先天性免疫反应细胞方面，于细胞膜上系有TLR4&2、TLR_6&2、 TLR-4&MD-2、TLR-5运作，在内体或吞噬细胞的食包内，以溶酶体酵素群所分解的菌或病毒的核酸(DNA或RNA)的分解断片则使得TLR-3、TLR-7、TLR-8、TLR-9活性化。在细胞质内， 感测作为感测菌的低分子分解物的受体的N0D1、N0D2、NALP3、NAIP5、IPAF等菌的低分子分解物的NLR受体、或是感测病毒的低分子分解物或核酸的RIG或MDA-5等在运作。该等作为先天性免疫传感器的受体，为依据感测各个菌或病毒的分解物所组合而成的模式，释放出用以进行各种抗菌的白细胞介或I型干扰素(IFN-α家族或INF-β以及 INF-λ)、或是释放出该等类似物质，感测邻近细胞。并且，已感测到的细胞群则一并释放出被称为防御素、抗菌(Cathelicidin)、皮西丁蛋白(Dermicidin)等抗菌物质、或是被称为 ISG的多达数百种类的抗病毒物质群，藉此以防御外敌而保护友方的细胞群。在此，对抗急速产生变化的病毒，将生体释放出多数抗病毒物质的事实，为有关于本发明的组成物的必要的理由之一。先天性免疫受体的第二个任务，为使得存在具有肠管的多细胞生物中的吞噬细胞进行活性化。吞噬细胞作为具有可动式(功用式)的先天性免疫责任的细胞很发达，在人类方面，则由巨噬细胞或中性粒细胞等负担该种任务。尤其是巨噬细胞，更是肩负起作为免疫司令官的重要任务。当作为先天性免疫传感器的受体群受到刺激时，巨噬细胞或中性粒细胞与其伙伴们便会进行活性化，形成与菌或病毒等外敌战斗的体制。在除了七鳃鳗与盲鳗的脊椎动物中，辨别淋巴球系的自我、非自我的免疫系统极为发达，补强免疫系统。尤其是在哺乳类方面，为将此种淋巴球系的免疫系统以补体为基础，进行有高度化的强化。但是另一方面，也造成了因过敏疾患或自体免疫性疾病而痛苦的情况。尤其是在哺乳类方面，当巨噬细胞、树状细胞、朗格汉斯细胞、微胶细胞等先天性免疫反应细胞的受体感测到各个配合基(特异性的刺激物)的存在时，分化T细胞的 IL-12、IL-6、IL-4、使TGF- β等白细胞介以及已分化的T细胞活性化的IL-1 β、IL-23、IL-2 以及抑制已分化的T细胞的活性的IL-2、IL-25、IL-27、IL-6等，依据其模式辨识的结果而进行分泌。该等程序为，由Thl7或自然杀伤T细胞释放出IL-21，使得具有攻击自我的抗体的 B细胞或记忆T细胞进行细胞凋亡或受到抑制，以防止陷入自体免疫性疾病中。借由DNA微数组技术而由DNA发现的RNA动态解析中，明确表现出借由组合各式先天性免疫的配合基、抗原与先天性免疫配合基的组合等，当程序中形成多样时，将引起变化与作用上的差异。这是因为随着DNA或RNA动态解析技术的进步，而可在时间序列上捕捉到先天性免疫或淋巴球系免疫(所谓获得免疫)发现的程序、细胞的细胞凋亡通路、炎症控制(抗菌、抗癌)通路、切换至抗病毒通路、炎症以及炎症抑制程序等的变化。揭晓这种先天性免疫的TLR、NLR、RLR的受体及其紧接而来的生理程序，对于医疗方面蕴藏有革命性的可能性。就是说，对于过去医学中难以治疗的「各种癌疾患或癌症前阶段的息肉形成」、「HIV、HCV、HPV、HHV以及新型流行性感冒等病毒疾患」、「因抗生物质造成的耐性菌或体内潜伏菌」、「各种过敏疾患等炎症性的疾患」、「因各种自我免疫造成的炎症性疾患」等，将期待可开拓其根本的解决之道。在此种技术经过的背景之下，A.「先天性免疫配合基的有效性的组合」、B.「抗原疫苗与先天性免疫配合基的组合」便具有极为重要的含意。例如，在过去，作为先天性免疫配合基而普及应用的有LPS与R-848以及咪唑喹啉 (imidazoquinoline)，此外还有鞭毛蛋白。LPS为将TLR4与MD2进行活性化的配合基，咪唑喹啉(imidazoquinoline)或其诱导体的R-848则为将TLR7进行活性化的配合基，鞭毛蛋白为将TLR5进行活性化的配合基。咪唑喹啉(imidazoquinoline)与R-848，虽然同为TLR7活性，但是由于会产生不同种类的IFN-α，因此，咪唑喹啉(imidazoquinoline)是作为HPV (乳头状瘤病毒)的治疗药而使用，R-848则是作为HHV(疱疹病毒)的治疗药而使用。这表示了即使是相同受体的活性，仍会因为配合基的不同而使得其产生不同的作用。此外，MDP (胞壁酰二肽)及其诱导体也是从1985年代开始受到瞩目，为一种先天性免疫配合基而活化TLR-2。诱导体的MDP-Lys作为佐剂而成为医药品。最近，因为活性化NLR而再度受到瞩目，但不是单独使用，而是通过与LPS或是类脂A等其他配合基进行组合，进而表明了可提高该配合基的效果。再者，于专利文献1中，组合IL-12产生的细菌或酵母与IL-12非产生的细菌或酵母的菌，所制作的复合配合基中，意外的发现到产生有IL-10。此种复合配合基，具有单一配合基所没有的相乘效果，并且由于可分散作用点，即使是LPS(内毒素)这类配合基中具有弊害的话，也可分散其风险。因为这样的理由，提高了复合性作用的配合基的开发需求。尤其在发现了鞭毛蛋白强力的佐剂效果后，更加深了其重要的意义。目前的医疗具有一个瓶颈。那就是所仰赖的抗生物质对病毒没有效果，因而产生了耐性菌这样严重的问题。此外，还有引起过敏性反应这一类的副作用。类固醇等荷尔蒙剂或是免疫抑制剂为通过免疫的弱体化，使得受到病原菌或机会致病菌感染的危险增大， 但是其使用并无法使得包含人类的生命体正常化。此外，即使是利用抑制剂的治疗，仍指责有因阻碍生体的正常系统的弊端存在。持续使用无法根治的药剂，亦会对医疗费的支出增加有影响。从打破该种瓶颈的观点来看，还要求能实现在安全性方面优越的先天性免疫活
性配合基。
先前技术文献
专利文献
专利文献1日本专利公报特开2008-31153号
专利文献2日本专利公报特开2006-265212号
专利文献3日本专利公报特表2007-506789号
专利文献4日本专利公报特表2006-514601号
专利文献5日本专利公报特表2005-530716号
非专利文献
非专利文献 1Medical Tribune 2005. 6. 1非专利文献2Clin Vaccine Immunol. 2009 Jan ； 16(1) :21-8. Epub 2008 Nov 非专利文献 3J. Biol. Chem.，Vol.282，Issue 48，34605-34610，November30，200非专利文献 4Nakanishi K. et. al :Interleukin-18 Regulates both Thland
Th2 Responses. Annu. Rev Immuno 119，423-474，200非专利文献5医学书院标准免疫学ρ209 ρ 21非专利文献6中西宪司「IL-18与超级Thl型过敏炎症」兵库医科大学非专利文献7Immunity 30(1) :108-119，2009非专利文献8Nature 2008 年 7 月 17 日号 Vol. 454 No. 7202/P. 350-352
发明内容
本发明鉴于此种状况，本发明的目的在于，提供一种无细胞障碍性的有效果的组成物(配合基或是佐剂)。更加详细说明的话，其目的在于，提供一种安全性高的组成物 (配合基或是佐剂)，其具有不会诱发炎症疾患的抗菌效果、抗病毒效果、抗癌效果、以及包含CTL的失控抑制的炎症抑制效果。此外，本发明的目的在于，提供一种可容易透过细胞膜的低分子组成物(低分子配合基)。所谓可容易透过细胞膜的含意为，可复合性的刺激立体存在于细胞表面与细胞内部的内体以及存在于细胞质的先天性免疫受体。
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同样的，本发明的目的在于，提供一种可立体性的刺激先天性免疫受体的组成物 (配合基)。借由立体的组成物(配合基)的实现，可期待其相乘效果，进而成为可再提高安全性。再者，利用低分子化，亦可提供可容易的由肠管或皮肤进行吸收的免疫活性剂。此外，可实现虽然为低分子，但却因此不受抗体攻瘦击的组成物(配合基)，而可作为注射剂来使用。再者，本发明的目的在于提供一种可作为佐剂而利用的组成物。用以解决课题的手段本案发明者之一的御手洗薰，在大分县佐伯市近郊山中的森林采取到需氧性的土壤菌类，在经过长年培养的结果，获得了耐性强且稳定的共生菌群，再经过深入研究、不断实验的结果，进而完成了本发明。此外，本发明者们将分解该共生菌群的菌体，进而所获得的低分子分解物投与至HIV已发病的患者时，发现到患者的容态有显着的改善，并且做为爱滋发症指标的CD4， 也在一个月以内这极短的期间内显助增加，全数的患者恢复精神，将此种共生菌群命名为 「MRE共生菌群」。这意味着，MRE共生菌群的分解生成物为使得在患者体内的先天性免疫增强，而可治疗该疾患。亦即，本案发明为提供的一种先天性免疫增强组成物，能够使对象所具有的免疫力得到增强的，且包含有MRE共生菌群的分解生成物。从而，由本发明第一主要观点来看，所提供一种免疫增强组成物，是通过刺激先天性免疫，而使对象所具有的免疫得到增强的免疫增强组成物，其特征在于，作为有效成分，具有免疫赋活物质，该免疫赋活物质是通过选择下列一种或一种以上的菌类进行分解所产生的，这些菌类由芽胞杆菌sp. (Bacillus sp.) (FERM BP-11209)、梭形芽孢杆菌(Lysinibacillus fusiformis) (FERM BP-11206)、枯草芽孢杆菌(Bacillus sonorensis)、梭形芽孢杆菌 sp. (Lysinibacillus sp.) (FERM BP-11207)、以及丛毛单胞菌 sp. (Comamonas sp.) (FERM BP-11208)所形成的 MRE 共生菌群。此外，若借由本发明一实施形态，在此种免疫增强组成物中，前述免疫赋活物质为，至少其98重量％以上为平均分子量达1000D a以下的亲水性低分子物质。此外，若借由本发明另一实施形态，在此种免疫增强组成物中，前述免疫赋活物质为使巨噬细胞、自然杀伤细胞、或自然杀伤T细胞进行活性化。若借由本发明另一实施形态，在此种免疫增强组成物中，前述免疫赋活物质为使树状细胞、小胶质细胞、朗格汉斯细胞、或柯弗氏细胞进行活性化。再者，若借由本发明另一实施形态，在此种免疫增强组成物中，前述免疫赋活物质为使表皮细胞、纤维芽细胞、角质形成细胞、或骨芽细胞进行活性化。再者，若借由本发明另一实施形态，在此种免疫增强组成物中，前述免疫赋活物质是Thl7或Thl进行分化或进行活性化。再者，若借由本发明另一实施形态，在此种免疫增强组成物中，前述免疫赋活物质是IL-21的产生增强。此外，若借由本发明另一实施形态，在此种免疫增强组成物中，前述免疫赋活物质，最好是将由前述MRE共生菌群所选择的一种或一种以上的菌类，在适于生育的培养条件下进行培养，将所获得的培养液置于饥饿状态，并借由进行通风换气而获得。此外，若借由本发明另一实施形态，在此种免疫增强组成物中，该种免疫增强组成物是作为罹患过敏疾患或自体免疫性疾病对象的抗炎症剂来使用。在此种情况，前述过敏疾患或自体免疫性疾病，可以从颚关节炎、溃疡性大肠炎、 异位性皮肤炎、过敏性鼻炎所构成的群组中进行选择。另外，若借由本发明另一实施形态，在此种免疫增强组成物中，该种免疫增强组成物是作为对病原性细菌或病原性病毒的疫苗的佐剂来使用的。在此种情况下，前述病原性细菌或是病原性病毒，可以从机会致病菌 (opportunistic bacterium)、HIV、HCV,以及HPV所形成的群组中进行选择。此外，若借由本发明另一实施形态，在此种免疫增强组成物中，该种免疫增强组成物，是作为一种医药或动物药，用以治疗或预防罹患那些由肝臓癌、前立腺癌、大肠癌、直肠癌、肺癌、脾臟癌、胃癌、恶性淋巴肿、糖尿病、高血压、创伤、韧带损伤、骨折、低温烫伤、 青春痘、飞蚊症、褥疮、荨麻疹所构成的疾患群组中选出的疾患对象。若借由本发明其他实施形态，在这样的免疫增强组成物中，该免疫增强组成物是作为食品或饲料所使用的。由本发明第二主要观点来看，能够提供一种制造方法，通过对先天性免疫进行刺激而使对象所具有的免疫得到增强的一种免疫增强组成物的方法，其特征在于具有，由芽胞杆菌 sp. (Bacillus sp.) (FERM BP-11209)、梭形芽孢杆菌(Lysinibacillus fusiformis) (FERM BP-11206)、枯草芽孢杆菌(Bacillus sonorensis)、梭形芽孢杆菌 sp. (Lysinibacillus sp.) (FERM BP-11207)、以及丛毛单胞菌 sp. (Comamonas sp.) (FERM BP-11208)所形成的MRE共生菌群中选择一种或一种以上的菌类所进行的准备的工序，以及对前述所准备的一种或一种以上的菌类进行分解的工序。此外，若借由本发明的一实施形态，在此种方法中，前述分解工序是，将前述所准备的一种或一种以上的菌类，通过在适于生育的培养条件下进行培养，将所获得的培养液置于饥饿状态，进行曝气(通气)的工序。由本发明第三个主要观点来看，可以提供一种方法，是对哺乳动物所罹患的有关先天性免疫疾患进行预防或治疗的方法，其特征在于具有准备工序，针对由芽胞杆菌 sp. (Bacillus sp.) (FERM BP-11209)、梭形芽孢杆菌(Lysinibacillus fusiformis) (FERM BP-11206)、枯草芽孢杆菌(Bacillus sonorensis)、梭形芽孢杆菌 sp. (Lysinibacillus sp.) (FERM BP-11207)、以及丛毛单胞菌 sp. (Comamonas sp.) (FERM BP-11208)所形成的 MRE共生菌群，通过对从中选择出的一种或是一种以上菌类进行分解、并将其分解所产生的免疫赋活物质作为有效成份，并为达成其应有的免疫增强组成物在治疗上的有效量所进行的准备工序，以及投药工序，是将前述所准备的免疫增强组成物在治疗上有效的量对前述哺乳动物进行投药的工序。此外，若借由本发明一实施形态，在此种方法中，前述哺乳动物是指人类。此外，若借由本发明其他实施形态，在此种方法中，前述投药工序是指以口服的方式进行。此外，若借由本发明其他实施形态，在此种方法中，前述投药工序是指以非口服的方式进行。
在此情况下，前述非口服所进行的投药工序，最好是从血管内投药、组织周围及组织内注射、皮下注射、点眼投药、点鼻投药、经皮投药、粘膜投药的方式中选择。再者，若借由本发明其他实施形态，在此种方法中，与前述先天性免疫有关连的疾患是指可以由颚关节炎、溃疡性大肠炎、异位性皮肤炎、包含过敏性鼻炎的过敏疾患或自体免疫性疾病、机会致病菌、包含HIV、HCV、及HPV的病原性细菌或病原性病毒关连疾患、肝
臟癌、前立腺癌、大肠癌、直肠癌、肺癌、脾臟癌、胃癌、恶性淋巴肿、糖尿病、高血压、创伤、 韧带损伤、骨折、低温烫伤、青春痘、飞蚊症、褥疮、荨麻疹所形成的群组中进行选择。另外，上述以外的本发明的特征以及显着的作用、效果，本领域的业者将可借由参照后述发明实施形态的内容以及图面而明白。
图1为将初始T细胞分化成Thl7、Thl、Th2、Treg的程序的概略图。图2为使用人类血液的IL-21产生试验的图表。比较A E的5人的无刺激 (Control)与添加MRE饮料6%稀释液的情况下的IL-21的产生浓度。图3为使用人类血液的IFN-α产生试验的图表。比较A D的4人的无刺激 (Control)与添加MRE饮料6%稀释液的情况下的IFN-α的产生浓度。图4为巨噬细胞单独下的TNF-α产生试验的图表。比较无刺激(Control)、将 LPS (内毒素)与MRE6%稀释液添加至巨噬细胞的情况下的TNF-α的产生浓度。图5为使用人类血液的IFN-Y产生试验的图表。比较A D的4人的无刺激 (Control)与添加MRE饮料6%稀释液的情况下的IFN-γ的产生浓度。
具体实施例方式如上所述，若借由本发明可提供一种免疫增强组成物，利用MRE共生菌群的菌体分解所产生的低分子的免疫赋活物质，而有效的增强包含先天性免疫活性的免疫机能。在此，前述MRE共生菌群，是由芽胞杆菌sp. (Bacillus sp. ) (FERM BP-11209)、 梭形芽孢杆菌(Lysinibacillus fusiformis) (FERM BP-11206)、枯草芽孢杆菌(Bacillus sonorensis)、梭形芽孢杆菌 sp. (Lysinibacillus sp.) (FERM BP-11207)、以及丛毛单胞菌 sp. (Comamonass p.) (FERMBP-11208)所形成，均为需氧性的细菌类。另外，本发明中所使用的「低分子」，是意味着通过细胞膜，而可影响细胞内部的具有分子量的分子。详述之，若借由本发明，将需氧性革兰阳性菌群与需氧性革兰阴性菌群所形成的 MRE共生菌群，以溶酶体酵素群或是溶酶体类酵素群进行菌体分解，藉此可获得由包含低分子肽(Small Peptide)、糖链、糖脂质、低分子核酸分解物等的菌体分解生成物所形成的可透过细胞膜的低分子免疫赋活物质。该种免疫赋活物质，因为可透过细胞膜的缘故，不仅可到达存在于细胞膜表面的 TLR受体群，更可到达存在于内体或食包内部的TLR受体群、甚至是可到达存在于细胞深部的细菌感受性的NLR受体群或病毒感受性的RLR受体等，会将具深度的立体性配合基刺激给予先天性免疫反应细胞。并且，通过该MRE共生菌群的菌体分解所获得的免疫赋活物质，其接近99%为亲水性的分子量3000以下的物质，由包含MDP类似物质的寡肽或寡醣链以及单股RNA等成分所构成，通过所谓蛋白酶等一般性消化酵素所无法获得的、成为不具细胞毒性的低分子配合基成分。因此，由该种MRE共生菌群所获得的免疫增强组成物，为可在生体内做为配合基发挥机能。此外，由于是由混合复数菌所获得的配合基，而具多样性，因此先天性免疫受体可实现同时接受各式各样模式的辨识刺激。这就是由MRE共生菌群所获得的低分子的免疫增强组成物的特征。另外，在以下说明的有关本案发明的实施形态以及实施例中，为方便起见，将如上述的由MRE共生菌群获得的免疫增强组成物」，简称为「MRE复合配合基」，但两种称呼均为相同意思或是含意。此外，在本案发明中所使用的所谓「配合基」，是指特异性地结合免疫受体等，而引起受体活性化的物质，所谓的复合配合基，则是指复数的配合基的混合物或是结合物。另外，在「配合基」中亦包含了做为佐剂而作用。有关本案发明的MRE复合配合基(免疫增强组成物，以下同)，可以对细胞内外的先天性免疫受体进行刺激，并使巨噬细胞、树状细胞、柯弗氏细胞、小胶质细胞、朗格汉斯细胞、自然杀伤细胞、自然杀伤T细胞等的先天性免疫系的免疫细胞以及存在于粘膜或皮肤的表皮细胞、纤维芽细胞、肠管的潘氏细胞(Paneth cell)等活性化。另外，基于该活性化能够产生I型的干扰素，借由该干扰素的放出，而由邻近细胞一并产生抗菌、抗病毒物质。再者，基于本案发明相关的MRE复合配合基的先天性免疫系的免疫细胞的活性化，白细胞介等物质分泌于血液或淋巴液中。借此，可使作为淋巴球的T细胞，朝增强抗菌力、抗病毒力、抗癌力的Thl以及TH17的状态进行分化、活泼化。而紧接着这一连串的免疫活性化程序，形成将炎症抑制、组织修复的程序于时间序列上推进状。特别是有关本案发明的MRE复合配合基，可由TH17等，产生具有抑制自我免疫机能的IL-21。本发明为如上所述，可提供具有新式低分子免疫赋活物质的免疫增强组成物，该新式低分子免疫赋活物质具有抗菌、抗病毒、抗癌、抗炎症效果、以及伴随于其后的自我免疫抑制效果，藉此，解决有关上述本案发明的课题。在此，若具体说明本发明，本案发明，如上所述，为发现一种新式微生物共生菌群， 产生有无须进行高浓度培养便可进行菌体分解、发挥充分效果优越的免疫赋活物质，并且提供利用该新式微生物共生菌群的免疫增强组成物。并且，此种MRE共生菌群为由需氧性革兰阳性菌以及需氧性革兰阴性菌所形成的五种菌所构成。该等菌群并非单纯存在于自然界的菌的混合物，而是将各式各样土壤菌与附着在海产物上的菌进行长期持续培养的结果，使得初始的菌经过激烈的生存竞争，在该竞争中相护显露出各自的任务分配，再伴随于菌的变异或进化而稳定便化所出现、形成的分别具有其个性的五种菌所形成的共生菌群。构成该MRE共生菌的五种菌群，是由作为需氧性革兰氏阳性菌的芽胞杆菌sp. (Bacillus sp.)(受托编号FERM BP-11209，识别编号MK-005)、梭形芽孢杆菌 (Lysinibacillus fusiformis)(受托编号 FERM BP-11206，识别编号 MK-001)、枯草芽孢杆菌(Bacillus sonorensis)(识别编号 MK-004)、梭形芽孢杆菌 sp. (Lysinibacillus sp.) (受托编号FERM BP-11207,识别编号MK-002)、以及作为需氧性革兰氏阴性菌的丛毛单胞菌 sp. (Comamonas sp.)(受托编号 FERM BP-11208，识别编号 MK-003)所形成。在此，受托编号FERM BP-11206 (由在公元2008年3月19日所寄存的受托编号 FERM P-21548进行移转管理)、受托编号FERM BP-11207 (由在公元2008年3月19日所寄存的受托编号FERM P-21549进行移转管理)、受托编号FERM BP-11208(由在公元2008年 3月19日所寄存的受托编号FERM P-21550进行移转管理)、受托编号FERM BP_11209(由在公元2009年2月2日所寄存的受托编号FERM P-21760进行移转管理)为寄存在独立法人产业总合技术研究所的生物寄存中心的菌。接着，针对本案发明中的「共生菌群」的特征进行说明。在混合复数菌进行培养后， 便会产生已知的暂时性不稳定的状况。如同发酵中所利用的曲菌与酵母菌或枯草菌与其他芽胞杆菌那样所引起营养的分室作用，但另一方面，广泛的展开像是激烈的有机物的争夺战或是自由基所造成相互的攻击，以及即使在富营养价值下仍会以一定的比例所产生的伴随于内孢子化的芽胞杆菌所造成的肽形式抗生物质的攻撃，或是近年来才明白的借由酵母菌以抗生物质(肽)所进行的反击等激烈的生存竞争。经过如此激烈的生存竞争的时期， 已知会有对于营养的分室作用或获得对于抗生物质的耐性、以及利用具有自由基除去能力的短链胜或借由分子伴侣的放出产生对于酵素变性的防御等，再加上会有完全不同种类的菌会交换低分子肽(Small P印tide)而帮助相互的生存或成长。最后，利用包含质粒的基因的交换而交换相互的能力，进而达到微生物群整体的共存稳定性。此外，关于本案发明的MRE共生菌群，它们若是在可生育的环境下，即使在何种条件下仍可进行生育，具体而言，于分子生物学区域中，可借由一般所采用的培养条件来生育。例如如后所述，在培养曝气槽中进行曝气(aeration)的同时，添加鱼粉10kg、米糠 10kg、油粕^g、肉汁Ikg的营养源，再于存在硫酸镁等矿物质等的环境下，可以PH6. 0 6. 8、培养温度25°C 35°C、以及适当的曝气来进行培养。较佳为，前述营养源为鱼粉^g、 米糠^g、油粕2. ^g、肉汁0. 5kgo此外，有关本案发明的MRE共生菌群的培养条件，并非限定于该等设定条件。在有本案发明的MRE共生菌群中，进行截至活泼的进行基因交换的阶段为止，变异、进化至形成为接近如Bacillus sp.般菌体融合的不可思议的菌体。在此，针对构成MRE共生菌的各个菌进行说明。构成MRE共生菌的各个菌的16S RDNA为如下述。化1MK-001(Lysinibacillus fusiformis)TGGAGAGTTTGATCCTGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTCGAGCGAACAGAGAAGGAGCTTGCTCCTTCGACGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGCAACCTACCCTATAGTTTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGAATAAYTTGTTTCACCTCATGGTGAAACACTGAAAGACGGTTTCGGCTGTCGCTATAGGATGGGCCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGGCGAAAGCCTGATGGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGATTTCGGTTCGTAAAACTCTGTTGTAAGGGAAGAACAAGTACAGTAGTAACTGGCTGTACCTTGACGGTACCTTATTAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAAT
MK-002(Lysinibacillus sp.)TGGAGAGTTTGATCCTGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTCGAGCGAACAGAGAAGGAGCTTGCTCCTTTGACGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGCAACCTACCCTATAGTTTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGAATAATYTATTTCAYCTCATGGTGAAATACTGAAAGACGGTTTCGGCTGTCGCTATAGGATGGGCCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAAYGGCTCACCAAGGCGACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGGCGAAAGCCTGATGGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGATTTCGGTTCGTAAAACTCTGTTGTAAGGGAAGAACAAGTACAGTAGTAACTGGCTGTACCTTGACGGTACCTTATTAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATMK-003(Comamonas denitrificans)TGGAGAGTTTGATCCTGGaCTCAGATTGAACGCTGGCGGCATGCCTTACACATGCAAGTCGAACGGTAACAGGTCTTTCGGGATGCTGACGAGTGGCGAACGGGTGAGTAATACATCGGAACGTGCCTAGTAGTGGGGGATAACTACTCGAAAGAGTGGCTAATACCGCATGAGATCTATGGATGAAAGCAGGGGACCTTCGGGCCTTGTGCTACTAGAGCGGCCGATGGCAGATTAGGTAGTTGGTGGGATAAAAGCTTACCAAGCCTACGATCTGTAGCTGGTCTGAGAGGACGATCAGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATTTTGGACAATGGGGGAAACCCTGATCCAGCAATGCCGCGTGCAGGATGAAGGCCTTCGGGTTGTAAACTGCTTTTGTACGGAACGAAAAGTCTTGGGTTAATACCCTGGGATCATGACGGTACCGTAAGAATAAGCACCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATMK-004(Bacillus sonorensis)TGGAGAGTTTGATCCTGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTCGAGCGAACCGACGGGAGCTTGCTCCCTTAGGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATGCTTGATTGAACCGCATGGTTCAATTATAAAAGGTGGCTTTTAGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAACTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTACCGTTCGAACAGGGCGGTGCCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATMK-005(Bacillus sp)TGGAGAGTTTGATCCTGGCTCAGGATGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTCGAGCGAATGGATTAAGAGCTTGCTCTTATGAAGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCCATAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATAACATTTTGAACYGCATGGTTCGAAATTGAAAGGCGGCTTCGGCTGTCACTTATGGATGGACCCGCGTCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCAACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGCTTTCGGGTCGTAAAACTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTGCTAGTTGAATAAGCTGGCACCTTGACGGTACCTAACCA
GAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAAT表1
权利要求
1.一种免疫增强组成物，是通过对先天性免疫进行刺激，而使对象所具有的免疫得到增强，其特征在于具有针对由芽胞杆菌sp. (Bacillus sp.) (FERM BP-11209),梭形芽孢杆菌 (Lysinibacillus fusiformis) (FERM BP-11206)、枯草芽孢杆菌(Bacillus sonorensis)、 梭形芽孢杆菌sp. (Lysinibacillus sp.)(FERM BP-11207),以及丛毛单胞菌 sp. (Comamonas sp.) (FERM BP-11208)所形成的MRE共生菌群，通过对从中选择出的一种或是一种以上菌类进行分解、并将其分解所产生的免疫赋活物质作为有效成份。
2.根据权利要求1所述的免疫增强组成物，其特征在于前述免疫赋活物质为，至少其 98重量％以上为平均分子量达1. OOODa以下的亲水性低分子物质。
3.根据权利要求1所述的免疫增强组成物，其特征在于前述免疫赋活物质，可使巨噬细胞、自然杀伤细胞、或自然杀伤T细胞进行活性化。
4.根据权利要求1所述的免疫增强组成物，其特征在于前述免疫赋活物质，可使树状细胞、小胶质细胞、朗格汉斯细胞、或柯弗氏细胞进行活性化。
5.根据权利要求1所述的免疫增强组成物，其特征在于前述免疫赋活物质，可使表皮细胞、纤维芽细胞、角质形成细胞、或骨芽细胞进行活性化。
6.根据权利要求1所述的免疫增强组成物，其特征在于前述免疫赋活物质，可使Thl7 或Thl进行分化或进行活性化。
7.根据权利要求1所述的免疫增强组成物，其特征在于前述免疫赋活物质，可使 IL-21的产生增强。
8.根据权利要求1所述的免疫赋活物质，其特征在于前述免疫赋活物质，是将由前述 MRE共生菌群中所选择的一种或一种以上的菌类，在适于生育的培养条件下进行培养，将所获得的培养液置于饥饿状态并通过进行曝气而获得的。
9.根据权利要求1所记载的免疫增强组成物，其特征在于该免疫增强组成物是针对罹患过敏疾患或自体免疫性疾病为对象可以作为抗炎症剂来使用的。
10.根据权利要求9所述的免疫增强组成物，其特征在于前述过敏疾患或自体免疫性疾病，是由颚关节炎、溃疡性大肠炎、异位性皮肤炎、过敏性鼻炎所形成的群组中选出的。
11.根据权利要求1所述的免疫增强组成物，其特征在于该免疫增强组成物是针对病原性细菌或病原性病毒可以作为疫苗的佐剂来使用的。
12.根据权利要求11所述的免疫增强组成物，其特征在于前述病原性细菌或病原性病毒，是从机会致病菌、HIV、HCV、以及HPV所形成的群症中选择的。
13.根据权利要求1所述的免疫增强组成物，其特征在于该免疫增强组成物，是作为用以治疗或预防由肝臟癌、前列腺癌、大肠癌、直肠癌、肺癌、脾臟癌、胃癌、恶性淋巴肿、糖尿病、高血压、创伤、韧带损伤、骨折、低温烫伤、青春痘、飞蚊症、褥疮、荨麻疹所形成的群症中选择的疾患罹患对象的医药或动物药。
14.根据权利要求1所述的免疫增强组成物，其特征在于该免疫增强组成物作为食品或饲料所使用。
15.一种方法，是通过对先天性免疫进行刺激而使对象所具有的免疫得到增强来制造免疫增强组成物的方法，其特征在于具有准备工序，由芽胞杆菌sp. us sp.) (FERM BP-11209)、梭形芽孢杆菌(Lysinibacillus fusiformis) (FERM BP-11206)、枯草芽孢杆菌(Bacillus sonorensis)、梭形芽孢杆菌 sp. (Lysinibacillus sp.) (FERMBP-11207)、以及丛毛单胞菌 sp. (Comamonas sp.) (FERM BP-11208)所形成的MRE共生菌群，从中选择一种或一种以上的菌类的工序，以及分解工序，是对前述所准备的一种或一种以上的菌类进行分解的工序，
16.根据权利要求15所述的方法，其特征在于，前述分解工序，是通过将由前述所准备的一种或一种以上的菌类，在适于生育的培养条件下进行培养，将所获得营养液置于饥饿状态，进行曝气的工序。
17.一种方法，是对哺乳动物所罹患的有关先天性免疫疾患进行预防或治疗的方法， 其特征在于具有准备工序，针对由芽胞杆菌sp. (Bacillus sp.) (FERM BP-11209)、梭形芽孢杆菌(Lysinibacillus fusiformis) (FERM BP-11206)、枯草芽孢杆菌(Bacillus sonorensis)、梭形芽孢杆菌 sp. (Lysinibacillus sp.) (FERM BP-11207)、以及丛毛单胞菌 sp. (Comamonas sp.) (FERM BP-11208)所形成的MRE共生菌群，通过对从中选择出的一种或是一种以上菌类进行分解、并将其分解所产生的免疫赋活物质作为有效成份，从而准备好应有的免疫增强组成物在治疗上的有效量，以及投药工序，是将前述所准备的免疫增强组成物在治疗上有效的量对前述哺乳动物进行投药的工序。
18.根据权利要求17所述的方法，其特征在于前述哺乳动物是指人类。
19.根据权利要求17所述的方法，其特征在于前述投药工序是指以口服方式进行。
20.根据权利要求17所述的方法，其特征在于前述投药工序是指以非口服方式进行。
21.根据权利要求20所述的方法，其特征在于前述以非口服方式进行的投药工序，是指从血管内投药、组织周围及组织内注射、皮下注射、点眼投药、点鼻投药、经皮投药、粘膜投药方式中进行选择。
22.根据权利要求17所述的方法，其特征在于与前述先天性免疫关连的疾患，是指由颚关节炎、溃疡性大肠炎、异位性皮肤炎、包含过敏性鼻炎的过敏疾患或自体免疫性疾病、 机会致病菌、包含HIV、HCV、及HPV的病原性细菌或病原性病毒关连疾患、肝 癌、前列腺癌、大肠癌、直肠癌、肺癌、脾臟癌、胃癌、恶性淋巴肿、糖尿病、高血压、创伤、韧带损伤、骨折、低温烫伤、青春痘、飞蚊症、褥疮、荨麻疹所形成的群组中选择的。
全文摘要
本发明公开了一种免疫增强组成物，其具有有效的免疫赋活物质，可以使先天性免疫及其延续的淋巴球的免疫，在不刺痛细胞的状态下进行活性化。特别是公开了一种免疫增强组成物，其特征在于具有作为有效成分的免疫赋活物质，该免疫赋活物质为利用分解由下列一种或一种以上的菌类所产生，该等菌类选自芽胞杆菌sp.(Bacillus sp.)(FERM BP-11209)、梭形赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus fusiformis)(FERM BP-11206)、枯草芽孢杆菌(Bacillus sonorensis)、赖氨酸芽孢杆菌sp.(Lysinibacillus sp.)(FERM BP-11207)、以及丛毛单胞菌sp.(Comamonas sp.)(FERM BP11208)所形成的MRE共生菌群。
文档编号A61P31/12GK102387808SQ20108000751
公开日2012年3月21日 申请日期2010年2月22日 优先权日2009年2月20日
发明者御手洗薰, 长滨阳二 申请人:有限公司名将