专利名称：：免疫增强药用核苷组合物及其在制备药物或功能食品中的应用的制作方法
技术领域：
：本发明属于中药活性成分的组合物及该组合物的应用，具体涉及一种源自天然虫草的免疫增强药用核苷类成分的组合物，以及这种组合物在制备免疫增强药物或功能食品中的应用。
背景技术：
：免疫缺陷是导致人类疾病的主要原因之一。继发性免疫缺陷病是在出生后由于环境因素损伤免疫功能，导致免疫功能低下，发生反复感染。一些原发性疾病常伴免疫功能缺陷，如感染、肿瘤、肾病综合症、肠吸收不良和外伤等，如何提高这部分人群的免疫功能是防治这类疾病的重要途径之一。免疫增强剂通过调动免疫系统的功能，提高机体对病原微生物的特异性反应，是治疗和预防疾病的重要物质。因此，筛选开发高效、无毒、稳定的免疫增强剂是当前研究的热点之一。理想的免疫增强剂应该是选择性强、作用快速、效果明显、停药后作用可逆，不良反应少，不损伤机体正常免疫功能的药物，传统中药以其安全、有效成为免疫增强剂重要来源。冬虫夏草是我国传统的滋补性中药，现代研究表明其具有明显的免疫增强作用。然而，由于天然虫草的稀缺性，其市场价格在逐年攀升，极大地限制了其广泛应用。因此，研究天然虫草的活性物质，开发价格低廉的药物或食疗添加剂将有助于緩解这一矛盾。核苷类物质被认为是冬虫夏草中的主要活性物质之一。现代研究也证明，外源性核苷类物质可以增强动物或人的免疫功能，有助于维持细胞和体液免疫应答，但其作用与核苷的组成及比例密切相关[李绍平，免疫抑制药用核苷组合物及其在制备免疫抑制药物中的应用.CN200810018832.0]。
发明内容本发明目的是提供一种源自天然虫草的免疫增强药用核苷组合物，以及这种核苷组合物在制备免疫增强药物或功能食品中的应用，从而提供一种安全有效的营养补充剂和免疫增强剂。本申请的第一个发明目是通过如下技术方案实现的一种免疫增强药用核苷组合物(或称为"源自天然虫草的核苷组合物"或"源自天然虫草的免疫增强药用核苷组合物")，其组成和重量比例为，尿香肌香鸟香=2~34:3~44:1~18，或其中任意两种的組合物。本申请推荐以下优化方案所述各组分的重量比例为，尿苷肌苷鸟苷=7~9:1012:4~6，或其中任意两种的组合物。更优化的重量比例为，尿苷40g,肌苷55g，乌苷25g。上述組合物中可以加有药用辅料，例如糊精、淀粉和微晶纤维素。所用组合物和辅料可以用乙醇搅拌混合后，制成各种剂型的制剂。完成本申请的第二个发明目的技术方案是上述源自天然虫草的免疫增强药用核苷组合物在制备免疫增强药物或功能食品中的应用。根据发明人对冬虫夏草多年的研究认为核苷类成分是其重要的免疫调节活性物质，不同的核苷类成分组成和/或用量，可产生不同的免疫调节(增强或抵制)作用。本发明的免疫增强核苷组物可以明显提高机体的免疫功負&,通过增强免疫功能，产生防病治病的效果。以上应用方法的效果见以下实验无菌获取大鼠腹腔巨噬细胞，贴壁纯化，1.5-2x1(^细胞/ml接种于细胞培养板中，核苦样品分别为肌苷(1)、鸟苷(G)、尿苷(U)、尿苷+肌苷+鸟苷(UIG);I高浓度为8.4mg/mL，G高浓度为0.42mg/ml，U高浓度为10.8mg/ml，UIG高浓度为(0.68:0.88:0.36mg/ml),各组从高浓度依次倍比稀释，形成8个浓度梯度，低浓度到高浓度定为浓度1到浓度8，样品以培养液溶解并稀释，这些浓度即为细胞培养体系中的终浓度。每个浓度设四个复孔。阳性对照组分别采用LPS(终浓度10|ag/ml)，阴性对照组直接在细胞悬液中加入细胞培养液。每浓度设四个复孔，培养16h后收集细胞上清液检测NO，TNF-a和IL-l。各组检测值与阴性对照组比较，进行f检验，比较差异性。结果单种核苷(U、I、G)的对巨噬细胞释放NO的影响不明显，但对巨噬细胞释放IL-1均有促进作用；U和I对巨噬细胞释放TNF-a有一定的促进作用，而G却无明显作用；UIG可明显促进巨噬细胞释放NO，TNF-a和IL-l(见表l,表2和表3)。表l不同核苷及其组合对巨噬细胞释放NO的影响(I±SD，n=4)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>151.057.283±0.72##162.109.188±1.14#174.208.916±0.95#188.4011.016±0.37**Gl0駕5.91±0.71*#**G20.0068.01±0.56#G30.0137.60±0.81##G40.02610.51±0.99#*G50.0529.61±1.33#G60.10511.34±0.58**G70.2107.60±0.28#G80.4206.68±0.94#**Ul0.088.34±0.22#U20.1698.90±0.98#U30.3388.24±0.70#U40.6759.03±1.07#U51.357.72±0.35#U62.708.40±0.96#U75.409.31±0.39#*U810.8010.28±1.014#*UI(0.04:0.02)12.32±0.58**UG(0.04:0.02)13.13±1.23**IG(0.04:0.04)11.13±0.64**UIG1(0.005:0.007:0.002)8.037±0.79##UIG2(0.010:0.014:0.005)9.481±0.80#UIG3(0.021:0.027:0.011)10.172±0.83#*UIG4(0.042:0.055:0.022)11.790±0.45**UIG5(0.085:0.11:0.045)11.532士1.76*UIG6(0.17:0.22:0.09)16.988±1.07**UIG7(0.34:0.44:0.18)17.706±0.65**UIG8(0.68:0.88:0.36)23.706±0.44##**LPS15.22±2.68*control_8.29±0.49与空白组比较，*尸<0.05，**户<0.01;与LPS组比较，#尸O.05，Mp〈0.01表2不同核苷及其组合对巨噬细胞释放TNF-a的影响(7土SD,n-4)样品浓度(mg/ml)巨噬细胞TNF-a释放量(pg/ml)110.0617.335±0.76*##120.1317.384±0.93*##130.2616.920±0.97*##140.5217.748±0.72*##151.0518.299±1.73*#162.1017.302±1.26##174.2017.384±1.41##188.4018.133±1.47##Gl0.00317.78士1.08糾G20.00617.92±0.98##G30.01317.23±1.15*##G40雄18.頻.53##G50.05218.68±0.59##G60.10520.98±0.53**##G70.21019.02±0.65##G80.42019.49±0.74##Ul0.0821.89±0.86***#U20.16921.12±1.11*糾U30.33823.34±3.68##U40.67520.51±0.72*##U51.3522.71±0.42**##U62.7021.09±0.78**##U75.4022.05±0.95**##U810.8022.38±1.04**##UI(0.04:0.02)22.73±0.67**#<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>表3不同核苷及其组合对巨噬细胞释放IL-1的影响(^±SD，n=4)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>G70.210141.68士28.78"G80.420201.67±38.96**#Ul0.0871.97±9.94**##U20.16975.37±6.68**##U30.33865.70±14.43**##U40.67590.82±5.18***#U51.3587.12±18.40**#U62.70112.26±3.13**U75.40130.53±12.03**U810.80183.76±17.97**##UI(0.04:0.02)26.48±3.62##UG(0.04:0.02)26.13±6.15##IG(0.04:0.04)28.04±7.23##UIG1(0.005:0.007:0.002)43.853±11.513**##UIG2(0.010:0.014:0.005)43.323±13.466*##UIG3(0.021:0.027:0.011)51.207±12.215**##UIG4(0.042:0.055:0.022)54.497±6.164**##UIG5(0.085:0.11:0.045)66.562±24.775*##UIG6(0.17:0.22:0.09)71.92±29.440*#UIG7(0.34:0.44:0.18)107.608±7.045**#UIG8(0.68:0.88:0.36)103.362±28.303*LPS129.51±11.98**control10.63±6.47与空白组比较，*户<0.05，**尸O.Ol;与LPS组比较，#/><0.05，尸O.Ol。以上实验数据表明本发明的免疫增强核苷组物可以明显提高机体的免疫功能，通过增强免疫功能，产生防病治病的效果。具体实施例方式实施例1天然虫草药粉(80目)经超临界二氧化碳流体萃取脱脂，残渣用2倍量70%乙醇回流提取2小时，重复提取2次，提取液低温回收乙醇至无醇味。浓缩液置4。C水箱放置析晶，母液冷冻干燥，以2倍量水溶解后置4°C冰箱放置再析晶，重复析晶操作2次。母液低温浓缩至约1/2原体积，上ODS柱，以l倍柱体积水洗脱除杂后，改用30。/。乙醇洗脱至在254nm下无吸收，洗脱液低温浓缩后冷冻干燥，即得天然虫草核苷提取物。按以下比例选取提取物中的尿苷、肌苷与鸟苷组成药粉尿苷40g，肌苷55g,鸟苷25g,药粉内加入辅料淀粉25g，糊精50g，微晶纤维素15g，以30%乙醇搅拌混合，制粒、干燥、整粒后压制1000片(每片重0,2g)。用于免疫增强，每次1~2片。实施例2尿香40g，肌苷55g，乌苷25g，淀粉25g，糊精50g,微晶纤维素15g，30%乙醇适量。药粉内加入辅料糊精、淀粉和微晶纤维素，以30%乙醇搅拌混合，制粒、干燥、整粒后装填胶嚢1000粒(每粒重0.2g)。用于免疫增强，每次1~2粒。实施例3尿香4g，肌苦5.5g，鸟苷2.5g，商品奶粉加至5000g,混匀即得核苷强化奶粉。用于免疫增强，每次3050克。实施例4尿苷0.4g，肌苷0.55g,鸟苷0.25g,溶于5000mL牛奶中，制得核苷强化牛奶。用于免疫增强，每次250500mL。实施例5，与实施例l基本相同，但有以下改变尿苷肌苷乌苷的重量比为2:3:1。实施例6，与实施例l基本相同，但有以下改变尿苷肌苷鸟苷的重量比为2:3:18。实施例7，与实施例l基本相同，但有以下改变尿苷:肌苷鸟苷的重量比为34:44:1。实施例8，与实施例l基本相同，但有以下改变尿苷肌苷鸟苷的重量比为34:44:18。实施例9，与实施例l基本相同，但有以下改变尿苷肌苷鸟苷的重量比为2:44:1。实施例10，与实施例l基本相同，但有以下改变尿苷肌苷鸟苷的重量比为2:44:18。实施例ll,与实施例l基本相同，但有以下改变尿苷肌苷鸟苷的重量比为34:3:1。实施例12，与实施例l基本相同，但有以下改变尿苷肌苷乌苷的重量比为34:3:18。实施例13,与实施例l基本相同，但有以下改变尿苷肌苷鸟苷的重量比为2:3:0。实施例14，与实施例l基本相同，但有以下改变尿苷肌苷乌苷的重量比为34:44:0。实施例15，与实施例l基本相同，但有以下改变尿苷肌苷鸟苷的重量比为2:44:0。实施例16,与实施例l基本相同，但有以下改变尿苷肌苷乌苷的重量比为34:3:0。实施例17,与实施例l基本相同，但有以下改变尿苷肌苷鸟苷的重量比为2:0:1。实施例18，与实施例l基本相同，但有以下改变尿苷肌苷鸟苷的重量比为34:0:1。实施例19，与实施例l基本相同，但有以下改变尿苷肌苷鸟苷的重量比为2:0:18。实施例20，与实施例l基本相同，但有以下改变尿苷肌苷鸟苷的重量比为34:0:18。实施例21,与实施例l基本相同，但有以下改变尿苷肌苷鸟苷的重量比为0:3:1。实施例22，与实施例l基本相同，但有以下改变尿苷肌苷鸟苷的重量比为0:3:18。实施例23，与实施例l基本相同，但有以下改变尿苷肌苷乌苷的重量比为0:44:1。实施例24,与实施例l基本相同，但有以下改变尿苷肌苷鸟苷的重量比为0:44:18。实施例25,与实施例1基;M目同，但有以下改变尿苷肌苷鸟苷的重量比为7:10:4。实施例26，与实施例l基本相同，但有以下改变尿苷肌苷乌苷的重量比为9:12:6。实施例27,与实施例l基本相同，但有以下改变尿苷肌苷乌苷的重量比为7:10:4。实施例28，与实施例l基本相同，但有以下改变尿苷肌苷鸟苷的重量比为7:12:6。实施例29，与实施例l基本相同，但有以下改变尿苷肌苷鸟苷的重量比为7:12:4。实施例30,与实施例l基本相同，但有以下改变尿苷肌苷鸟苷的重量比为9:12:4。实施例31，与实施例l基本相同，但有以下改变尿苷肌苷鸟苷的重量比为9:10:4。实施例32,与实施例l基本相同，但有以下改变尿苷肌苷鸟苷的重量比为9:10:6。实施例33,与实施例l基本相同，j旦有以下改变尿苷肌苷鸟苷的重量比为7:10:0。实施例34,与实施例l基本相同，但有以下改变尿苷肌苷鸟苷的重量比为9:12:0。实施例35，与实施例l基本相同，但有以下改变尿苷肌苷乌苷的重量比为7:12:0。实施例36，与实施例l基本相同，但有以下改变尿苷肌苷乌苷的重量比为9:10:0。实施例37,与实施例l基本相同，但有以下改变尿苷肌苷乌苷的重量比为9:0:6。实施例38，与实施例l基本相同，但有以下改变尿苷肌苷乌苷的重量比为7:0:4。实施例39,与实施例1基本相同，重量比为9:0:4。实施例40,与实施例1基本相同，重量比为7:0:6。实施例34，与实施例1基本相同，重量比为0:10:4。实施例41，与实施例1基本相同，重量比为0:10:6。实施例42，与实施例1基本相同，重量比为0:12:4。实施例43，与实施例1基本相同，重量比为0:12:6。但有以下改变尿苷肌苷鸟苷的但有以下改变尿苷肌苷鸟苷的但有以下改变尿苦肌苷鸟苷的但有以下改变尿苷肌苷鸟苷的但有以下改变尿苷肌苷鸟苷的但有以下改变尿苷肌苷鸟苷的权利要求1、一种免疫增强药用核苷组合物，其特征在于，该组合物组成和重量比例为，尿苷∶肌苷∶鸟苷＝2～34∶3～44∶1～18，或其中任意两种的组合物。2、根据权利要求1所述的免疫增强药用核苷组合物，其特征在于，所述各组分的重量比例为，尿苷肌苷鸟苷=7~9:10~12:46，或其中任意两种的组合物。3、根据权利要求l所述的免疫增强药用核苷组合物，其特征在于，组成和重量比例为，尿苷40g，肌苷55g，鸟苷25g。4、根据权利要求1或2或3所述的免疫增强药用核苷组合物，其特征在于，组合物中还加有药用辅料。5、根据权利要求4所述的免疫增强药用核苷组合物，其特征在于，所述的药用辅料选自糊精、淀粉和/或微晶纤维素。6、根据权利要求4或5所述的免疫增强药用核苷组合物，其特征在于，所述的组合物和辅料是用乙醇搅拌混合后，制成的制剂。7、一种权利要求1~6之一所述的免疫增强药用核苷组合物在制备免疫增强药物或功能食品中的应用。全文摘要一种源自天然虫草的免疫增强药用核苷组合物，其特征在于，组成和重量比例为，尿苷∶肌苷∶鸟苷＝2～34∶3～44∶1～18，或其中任意两种的组合物。优化方案的组成和重量比例为，尿苷∶肌苷∶鸟苷＝7～9∶10～12∶4～6，或其中任意两种的组合物。最佳比例为，尿苷40g，肌苷55g，鸟苷25g。组合物中还可加有药用辅料。所述的药用辅料选自糊精、淀粉和微晶纤维素。本发明还涉及上述源自虫草的核苷组合物在制备免疫增强药物或功能食品中的应用。实验数据表明本发明的免疫增强核苷组物可以明显提高机体的免疫功能，通过增强免疫功能，产生防病治病的效果。文档编号A23L1/30GK101306005SQ20081012440公开日2008年11月19日申请日期2008年7月4日优先权日2008年7月4日发明者李绍平,杨丰庆申请人:李绍平