专利名称：氨基酸接合氰基丙烯酸酯聚合物粒子的制作方法
技术领域：
本发明涉及接合了氨基酸的氰基丙烯酸酯聚合物粒子、以及含有该粒子作为有效成分的癌症的治疗和/或预防药。
背景技术：
T细胞淋巴瘤是顽症非何杰金淋巴瘤的一种。除了用细胞毒性强的抗癌药进行骨髄破坏后移植骨髓的方法之外，不存在有效的治疗方法。以往的抗癌药具有强的细胞毒性， 因此在产生目标抗癌效果的同时，产生对正常细胞的强毒性。因此，在骨髄破坏后的移植步骤中，患者的正常细胞已经受损伤，以此为主要原因，其预后也常常不良。另外，供体的条件也是严格的，发现供体也并不容易。胰腺癌是存活率最低的癌症之一。胰腺癌没有特有的早期症状，因此早期发现非常困难，大多是在进展到相当程度后被发现。目前尚未知晓有效的治疗方法，预后非常不
良ο另一方面，为了通过药物传递系统(DDS)、缓释来提高药物的效果，药剂的微粒子化研究得到发展，例如，使药剂接合在氰基丙烯酸酯聚合物粒子中的DDS是公知的(专利文献1-5以及非专利文献1)。直至现在，本申请的发明人也公开了粒径变化小的氰基丙烯酸酯聚合物粒子的制造方法、抗菌剂接合粒子、以及质粒接合粒子(专利文献3- 。但是，在目前为止的任何研究中均未知的是，以药物DDS和缓释为目的，接合了如氨基酸这样的、其本身没有特别的药理作用的物质的氰基丙烯酸酯聚合物粒子。使用这种接合粒子的药物也是完全未知的。现有技术文献专利文献
专利文献1 日本特表平11-503148号公报专利文献2 日本特表2002-5045 号公报专利文献3 日本特开2008-127538号公报专利文献4 国际公开第2008/U6846号公报专利文献5 日本特开2008-208070号公报非专利文献
非专利文献 1 :Christine Vauthier 等人·，Adv. DrugDeliv. Rev. , 55，519-548 (2003)。
发明内容
因此，本发明的目的在于提供对癌症的治疗有用的新手段。本申请的发明人进行了深入的研究，结果发现通过使氰基丙烯酸酯单体在氨基酸的共存下进行阴离子聚合，合成接合了氨基酸的纳米尺寸(平均粒径小于1000 nm)的氰基丙烯酸酯聚合物粒子。另外发现该接合粒子对于来自癌细胞的各种细胞系可以诱导凋亡样细胞死亡而损害该细胞；通过选择接合的氨基酸的种类，可以应对各种癌症，尤其是对于来自淋巴瘤的细胞系可发挥高亲和性；并且对于一部分来自胰腺癌的细胞系具有增殖抑制作用，对于不存在有效的治疗方法的胰腺癌的治疗也有用，从而完成了本发明。S卩，本发明提供平均粒径小于1000 nm的、接合了氨基酸的氰基丙烯酸酯聚合物粒子。另外，本发明提供含有上述本发明的粒子作为有效成分的癌症的治疗和/或预防药。本发明进一步提供癌症的治疗和/或预防方法，该方法包含对有必要进行癌症的治疗和/或预防的人给予有效量的上述本发明的粒子。根据本发明，首次提供接合了氨基酸的纳米尺寸的氰基丙烯酸酯聚合物粒子。该氨基酸接合粒子可以对癌细胞诱导凋亡样细胞死亡而损害癌细胞，因此对癌症的治疗和预防是有用的。通过选择所接合的氨基酸的种类，也可以对各种癌症例如来自上皮系统/血液系统的癌细胞系选择亲和性，因此，对于来自上皮系统/血液系统的癌症等各种癌症的治疗/预防是有用的。特别是，该接合粒子对于癌细胞中的来自τ细胞淋巴瘤、B细胞淋巴瘤的细胞系的亲和性高，因此对于淋巴瘤的治疗是尤其有用的。另外，该粒子还具有抑制一部分来自胰腺癌的细胞系的增殖的作用，对于不存在有效的治疗方法的胰腺癌也期望获得治疗效果。在用于实际的癌症治疗时，例如，如果对于患者自身的癌细胞事先在体外确认效果，并选择抗癌活性高的氨基酸接合粒子给予患者，则可更有效地治疗/预防癌症。即，本发明的治疗和/或预防药可用作定制(f一，一J 4 F)抗癌药。本发明的氨基酸接合粒子可用对生物体具有适合性的材料制作，因此对人体的安全性也高，与现有抗癌药比较在临床应用上非常有利。根据本发明，不使用细胞毒性强的抗癌药、称为DDS的手段就可以治疗癌症，因此对患者的QOL的提高也有贡献。附图简述
图1是表示用Lys接合粒子处理的各种细胞系的存活率的图。图2是表示用Arg接合粒子处理的各种细胞系的存活率的图。图3是表示用His接合粒子处理的各种细胞系的存活率的图。图4是表示用Asp接合粒子处理的各种细胞系的存活率的图。图5是表示用Gly接合粒子处理的各种细胞系的存活率的图。图6是表示用Ala接合粒子处理的各种细胞系的存活率的图。图7是表示用Val接合粒子处理的各种细胞系的存活率的图。图8是表示用Leu接合粒子处理的各种细胞系的存活率的图。图9是表示用Try接合粒子处理的各种细胞系的存活率的图。图10是表示用Phe接合粒子处理的各种细胞系的存活率的图。图11是表示用Ser接合粒子处理的各种细胞系的存活率的图。图12是表示用Thr接合粒子处理的各种细胞系的存活率的图。图13是表示用Met接合粒子处理的各种细胞系的存活率的图。图14是表示用氨基酸非接合粒子处理的各种细胞系的存活率的图。图15是表示对于用Arg接合粒子处理的EL-4细胞系进行膜联蛋白V测定的结果的图。图16是表示各种氨基酸接合粒子对于来自人B细胞淋巴瘤的细胞系YCUB-2的增殖抑制效果的图。
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图17是表示将来自人B细胞淋巴瘤的细胞系YCUB-2用各浓度的氨基酸(Arg、 Asp)接合粒子处理48小时后的细胞存活率的图。图18是表示将来自人T细胞淋巴瘤的细胞系H9用各浓度氨基酸(Arg、Asp)接合粒子处理M小时后的细胞存活率的图。图19是将现有的抗癌药丝裂霉素C (MMC)和放线菌素D (Act-D)与氨基酸接合粒子之间对H9细胞系的细胞增殖抑制效果进行比较的图。图20是表示将来自人T细胞淋巴瘤的细胞系H9用各浓度的Asp接合粒子处理1、 3>6,24小时时的细胞存活率的图。图21是表示将来自人T细胞淋巴瘤的细胞系H9用各浓度的Arg接合粒子处理1、 3>6,24小时时的细胞存活率的图。图22是表示将来自人T细胞淋巴瘤的细胞系H9用各种浓度的抗癌药丝裂霉素C (MMC)或放线菌素D (ACD)处理M小时后的细胞存活率的图。图23是表示用3种氨基酸接合粒子(碱性氨基酸D70Arg_NP、酸性氨基酸 D70Asp-NP、中性氨基酸D70Gly-NP)或氨基酸非接合粒子(D70-NP)处理H9细胞系时的细胞增殖抑制率的图。图M是表示使用来自各种人胰腺癌的细胞系研究氨基酸接合粒子(D70Asp-NP、 D70Arg-NP、D70Gly-NP)的增殖抑制效果的结果图。D70-NP为氨基酸非接合粒子。
具体实施方案本发明的粒子是含有接合了氨基酸的氰基丙烯酸酯聚合物的粒子，该粒子尺寸是平均粒径小于1000 nm。粒子尺寸的下限没有特别限定，例如，在利用下述方法通过丙烯酸酯单体的聚合制造聚合物粒子时，粒子的粒径通常为7 nm左右以上。平均粒径优选20 nm-600 nm，更优选50 nm-550 nm。另外，接合粒子的电荷(ζ电位)没有特别限定，通常为-40 mV-0 mV左右。ζ电位表示粒子表面的电荷，是粒子分散性的指标。粒子尺寸和ζ 电位例如可使用采用He/Ne激光的市售装置(例如Malvern Inst. UK公司制造的七一夕寸4廿一等)容易地测定。氨基酸的种类没有特别限定，通常是构成天然蛋白质的20种氨基酸中的任一种。 如下所述，本发明的粒子所接合的氨基酸的种类对该粒子的抗癌活性有影响。所接合的氨基酸可以是1种，或者也可以接合2种以上。上述氨基酸接合粒子的氰基丙烯酸酯聚合物部分是将氰基丙烯酸酯单体进行阴离子聚合得到的。所使用的氰基丙烯酸酯单体优选氰基丙烯酸烷基酯单体(烷基的碳原子数优选1-8)，特别地，优选在外科领域中作为伤口缝合用胶粘剂使用的、下式所示的2-氰基丙烯酸正丁酯(nBCA)。[化学式1]
权利要求
1.接合了氨基酸的氰基丙烯酸酯聚合物粒子，其平均粒径小于1000nm。
2.权利要求1的粒子，其中，所述粒子是在氰基丙烯酸酯单体、糖类和/或聚山梨酸酯、 以及氨基酸的共存下，通过使所述单体阴离子聚合而制造的。
3.权利要求2的粒子，其中，所述糖类为选自具有羟基的单糖类和具有羟基的多糖类的至少一种糖类。
4.权利要求2的粒子，其中，所述糖类为葡聚糖。
5.权利要求1-4中任一项的粒子，其中，所述氰基丙烯酸酯为氰基丙烯酸正丁酯。
6.权利要求1-5中任一项的粒子，其中，所述粒子的平均粒径为20nm-600 nm。
7.癌症的治疗和/或预防药，所述药物含有权利要求1-6中任一项的粒子作为有效成分。
8.权利要求7的治疗和/或预防药，其中，所述癌症为淋巴瘤。
9.权利要求8的治疗和/或预防药，其中，所述癌症为T细胞淋巴瘤。
10.权利要求9的治疗和/或预防药，其中，与所述粒子接合的氨基酸为选自甘氨酸、天冬氨酸和精氨酸的至少一种。
11.权利要求8的治疗和/或预防药，其中，所述癌症为B细胞淋巴瘤。
12.权利要求11的治疗和/或预防药，其中，与所述粒子接合的氨基酸为选自甘氨酸、 甲硫氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、丙氨酸、缬氨酸、丝氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、亮氨酸、苏氨酸、色氨酸、脯氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺的至少一种。
13.权利要求7的治疗和/或预防药，其中，所述癌症为胰腺癌。
14.权利要求13的治疗和/或预防药，其中，与所述粒子接合的氨基酸为选自天冬氨酸和甘氨酸的至少一种。
15.权利要求1-6中任一项的粒子，所述粒子用于癌症的治疗和/或预防。
16.癌症的治疗和/或预防方法，所述方法包含对需要进行癌症的治疗和/或预防的动物给予有效量的权利要求1-6中任一项的粒子。
全文摘要
本发明公开了平均粒径小于1000nm的、接合了氨基酸的氰基丙烯酸酯聚合物粒子。本发明的氨基酸接合粒子可以对癌细胞诱导凋亡样细胞死亡而损害该癌细胞。该粒子尤其对来自T细胞淋巴瘤、B细胞淋巴瘤等淋巴瘤的细胞系的亲和性高，另外，也可对于一部分来自胰腺癌的细胞系发挥增殖抑制效果。因此，本发明的粒子用作癌症的治疗和/或预防。
文档编号A61K31/198GK102361636SQ20108001017
公开日2012年2月22日 申请日期2010年3月3日 优先权日2009年3月3日
发明者吉田笃司, 城武升一, 横田俊平, 远藤格 申请人:公立大学法人横浜市立大学