专利名称：一种盐地碱蓬黄酮提取及含量测定方法
技术领域：
本发明涉及一种海滨藜科植物-盐地碱蓬黄酮提取以及含量测定方法研究，属于天然产物提取及含量测定领域。
背景技术：
碱蓬，俗称嫩苗称“狼尾巴条”、常称为“海英菜”、“碱蒿”、“盐蒿”，一年生草本，茎直立，圆柱形，高达30 100厘米，花单生或2 3朵有柄簇生于叶腋的短柄上，呈团伞状，花被于果期呈五角星状，正常年份3月上中旬至6月上旬都可出苗，出土子叶鲜红。7 8月为花期，9 10月为结实期，11月初种子完全成熟。成熟时植株火红，极具观赏价值。是典型盐生植物，其栽培技术比较粗放，主要分布于东北、西北、华北和河南、山东、江苏、浙江等地。碱蓬的商品性好，碱蓬株型美观，有“翡翠珊瑚”的雅称；鲜嫩茎叶营养丰富，具有特别的海鲜味，口感好，切可入药主治食积停滞、发热等。黄酮类化合物是一类广泛存在于植物体内的天然产物，基本结构为C6-C3-C6,在植物体内大部分与糖结合成苷，部分以游离形式存在，因具有抗病毒、抗癌、抗氧化、抗炎、抗衰老等生理和药理活性，而成为国内外研究的热点课题。研究发现，盐地碱蓬(S. salsa)叶总黄酮含量较高，并有较强的抗氧化活性。与南方碱蓬同一属的盐地碱蓬主要分布在我国各地沿海的滩涂沙地、资源丰富，其叶可食用与饲用，近年来由于沿海滩涂养殖的发展，常被视为杂草以闲置或根除。探讨该植物体内黄酮类化合物的含量及提取工艺，将为其药用开发与食品保健利用提供科学依据。近年来有关南方碱蓬中黄酮的提取及含量测定的研究有较多的报道，目前多采用显色法测定以芦丁为对照品，通过与亚硝酸钠、硝酸铝和氢氧化钠显色后，采用分光光度法，在510nm处测定总黄酮含量，但在实际测定中发现显色法稳定性差，杂质干扰也会导致测定含量偏高。在紫外光波长范围内，利用高效液相色谱法测定盐地碱蓬中黄酮含量的方法研究甚少，可以有效地提高含量测定方法的准确性、灵敏度、重现性和线性范围。
发明内容
本发明的目的在于提供一种盐地碱蓬黄酮提取及含量测定方法。本发明所采用的技术方案I)采集海滨植物盐地碱蓬，选取茎、叶，晾干、粉碎；2)盐地碱蓬(重量)与溶剂(体积)之比为1: 20 1: 30，浸泡30min，于微波炉中处理10min，趁热抽滤，收集提取液；3)提取液中加入与乙醇提取液体积比为1:1的石油醚，萃取3 4次，脱去脂溶性杂质，得乙醇溶液层；4)将乙醇溶液层转入大孔吸附树脂柱，原液与树脂量的比为1: 2，依次用水、80%乙醇洗脱至溶液由浅黄色变为无色，收集乙醇溶液洗脱液；5)将洗脱液于50°C条件下减压浓缩，得到盐地碱蓬黄酮类化合物浸膏。
6)所得盐地碱蓬的黄酮提取浸膏用标准溶液溶解，配制成待测溶液；7)将对照品芦丁烘干至恒重，加标准溶液溶解，配制成梯度的标准溶液，在360nm波长下，记录芦丁的出峰时间并测定该标准溶液的色谱峰面积，根据峰面积与浓度之间的对应关系建立标准曲线；8)将待测液在360nm波长下测色谱峰面积，由标准曲线查得该待测液浓度，该浓度指即为待测液总黄酮含量，根据稀释倍数换算出盐地碱蓬黄酮含量。本发明利用浸泡、微波辅助提取盐地碱蓬中黄酮，本方法操作简单，时间短，溶剂的利用率高，有利于提高黄酮的制取率和降低生产成本，使所开发工艺易于实现产业化。本发明针对盐地碱蓬中的黄酮与对照品芦丁均在360nm土 Inm波长处对紫外光的有最大吸收(见图1、2)，确定360nm作为盐地碱蓬中黄酮的测定波长，盐地碱蓬中的黄酮与对照品的出峰时间均为16. 58min(见图3、4)。根据待测溶液在此波长处的吸光度值由黄酮含量对比基准即可查得该溶液的黄酮含量。该方法的绘制的标准曲线线性相关系数Y = 0.9971(见附表1、图5)，加样回收实验结果表明回收率为99. 65%，相对标准偏差为
0.58% (见附表2)。因此利用本发明对盐地碱蓬中的黄酮含量进行测定，测定结果准确性高，而且方法简单，易于操作。本发明为盐地碱蓬中黄酮的提取和分离提供了可行性依据，为进一步研究和利用盐地碱蓬中的黄酮物质，提高盐地碱蓬的利用价值奠定了基础。
图1芦丁对照品光谱扫描2盐地碱蓬黄酮提取物光谱扫描3芦丁对照品高效液相色谱4盐地碱蓬黄酮提取物高效液相色谱5本发明方法芦丁对照品的线性关系图
具体实施例方式I)黄酮的提取采集海滨植物盐地碱蓬，选取茎、叶，晾干、粉碎；80°C干燥2小时，加入重量20-30倍的70%乙醇浸泡提取30min，于微波炉中处理lOmin，趁热抽滤，收集提取液，加入与乙醇提取液体积比为1:1的石油醚，萃取3 4次，脱去脂溶性杂质，将乙醇溶液层转入大孔吸附树脂柱，原液与树脂量的比为1: 2，依次用水、80%乙醇洗脱至溶液由浅黄色变为无色，收集乙醇溶液洗脱液，将洗脱液于50°C条件下减压浓缩，得到盐地碱蓬黄酮类化合物浸膏。2)配制待测溶液取盐地碱蓬的提取浸膏，用70%的色谱级甲醇溶液溶解稀释成IOOml摇匀，配制成待测溶液。3)制作标准曲线准确称取芦丁 10. 5mg在120°C烘至恒重，用70%的色谱级甲醇溶液溶解稀释至50ml，分别量取Oml、Iml、2ml、3ml、4ml和5ml，置IOml容量瓶中，用70 %的色谱级甲醇溶液稀释至10ml，摇匀后，得到不同浓度梯度的标准溶液，将各种标准溶液在如下检测条件下测定色谱峰面积采用的检测仪器高效液相色谱仪、紫外检测器；
采用的色谱检测条件色谱柱Diamonsil C18 (4. 6 X 250mm, 5 u m);流动相为水与甲醇体积比为30 70 ;流速1. Oml/min进样量20 u L ;检测波长360nm ;柱温25°C ;理论塔板数按芦丁计算应不低于3000。根据标准溶液浓度和对应测得的峰面积，制作出黄酮含量对比基准，峰面积值见附表I。4)黄酮含量的测定将2)所得待测溶液在与3)中所述的检测条件下，测得待测液的峰面积值，由标准曲线查得该待测液浓度，该浓度指即为待测液总黄酮含量，根据稀释倍数换算出盐地碱蓬黄酮含量。附表I本发明方法芦丁标准品与色谱峰面积
权利要求
1.一种盐地碱蓬黄酮的提取及含量测定方法，其特征在于，包括以下步骤 1)一种盐地碱蓬黄酮的提取方法主要以盐地碱蓬茎、叶为原料，通过溶剂提取、萃取、层析、浓缩，制得黄酮类化合物，提取方法具体如下取海滨植物盐地碱蓬得茎、叶，晾干、粉碎，装入锥形瓶中，加入盐地碱蓬重量20-30倍的70%乙醇浸泡30min，于微波炉中处理lOmin，趁热抽滤，收集提取液，加入与乙醇提取液体积比为1:1的石油醚，萃取3 4次，脱去脂溶性杂质，将乙醇溶液层转入大孔吸附树脂柱，原液与树脂量的比为1: 2，依次用水、80%乙醇洗脱至溶液由浅黄色变为无色，收集乙醇溶液洗脱液，将洗脱液于50°C条件下碱压浓缩，得到盐地碱蓬黄酮类化合物浸膏。
2)一种盐地碱蓬中黄酮的含量测定方法，具体操作如下将(I)所得盐地碱蓬的黄酮提取浸膏用标准溶液溶解，配制成待测溶液；将对照品芦丁烘干至恒重，加标准溶液溶解，配制成梯度的标准溶液，在360nm波长下，记录芦丁的出峰时间并测定该标准溶液的色谱峰面积，根据峰面积与浓度之间的对应关系建立标准曲线；将待测液在360nm波长下测色谱峰面积，由标准曲线查得该待测液浓度，该浓度指即为待测液总黄酮含量，根据稀释倍数换算出盐地碱蓬黄酮含量。
采用的检测仪器高效液相色谱仪、紫外检测器； 采用的色谱检测条件色谱柱DiamonsiIC18(4. 6X 250mm，5 iim);流动相为水与甲醇体积比为30 70 ;流速1. Oml/min ;进样量20 u L ;检测波长360nm ;柱温25°C;理论塔板数按芦丁计算应不低于3000。
2.根据权利要求1所述的一种盐地碱蓬黄酮的提取及含量测定方法，其特征在于所述的提取方法为浸泡、微波辅助提取。
3.根据权利要求2所述的一种盐地碱蓬黄酮的提取及含量测定方法，其特征在于所述的标准溶液为体积比30 70的水/甲醇溶液。
全文摘要
本发明涉及一种盐地碱蓬黄酮提取及含量测定方法，包括1)采盐地碱蓬，晾干、粉碎，以乙醇为提取剂，浸泡、微波辅助提取，过滤，石油醚萃取后，乙醇层上大孔吸附树脂柱，依次用水、乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，加压浓缩得黄酮类化合物浸膏；2)以芦丁为对照品，配制不同浓度梯度标准溶液，用高效液相色谱法在360nm波长处测定色谱峰面积，制作黄酮含量对比基准，测定待测溶液色谱峰面积，由黄酮含量对比基准查得该待测溶液黄酮含量，根据待测溶液稀释倍数得盐地碱蓬中黄酮含量。本方法利用浸泡、微波辅助提取黄酮，色谱法测定其含量，方法简单，溶剂易得，得到的黄酮含量较高，具有抗病毒、抗氧化、抗衰老等生理和药理活性。
文档编号A61K127/00GK103027962SQ20111031100
公开日2013年4月10日 申请日期2011年10月8日 优先权日2011年10月8日
发明者刘德驹, 金绍娣, 张伟 申请人:盐城纺织职业技术学院