专利名称：一种用于治疗或预防脑血管及相关疾病的药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及用于治疗脑血管及相关疾病的药物组合物，特别涉及利用人脂肪干细胞作为药物载体治疗脑血管及相关疾病的药物组合物。
背景技术：
脑血管病是危害人类生命与健康 的常见病和多发病，具有“发病率高、死亡率高、致残率高、复发率高、并发症多” 一 “四高一多”的特点，是中年人致死和致残的主要疾病。由于老年人口的不断増加和生活水平的提高，脑血管病的发病率仍在不断上升。在人类各种疾病死因的排序中,脑血管病一直列于前三位之内，成为人类死亡的主要原因之一。在全球范围内，毎年使460万人死亡，其患病和死亡主要在65岁以上的人群。我国也是脑卒中死亡率高发地区，据估计居民现患脑血管病600万，每年新发生脑血管病130万人、死亡近100万人，在幸存者中约3/4的人留下偏瘫等后遗症状，部分病人丧失劳动能力和生活能力。脑血管病，是指脑部动脉或支配脑的颈部动脉发生病变，或由于各种原因导致的脑血管的堵塞或破裂，致使颅内血液循环障碍，脑组织受损的ー组疾病。能引起相关症状，是ー种危害人民健康，威胁生命，影响劳动力的常见病和多发病。常见的脑血管病大致可以分为缺血性脑血管病和出血性脑血管病两大类。其中以缺血性脑血管病为主,包括短暂性脑缺血发作、脑血栓、脑栓塞和脑梗塞等四种，临床较多见，约占全部脑血管病人的709Γ80%，是由于脑动脉硬化等原因，使脑动脉管腔狭窄，血流減少或完全阻塞，脑部血液循环障碍，脑组织受损而发生的一系列症状。阿尔茨海默病(AD)即所谓的老年痴呆症。是ー种进行性发展的致死性神经退行性疾病，临床表现为认知和记忆功能不断恶化，日常生活能力进行性減退，并有各种神经精神症状和行为障碍。据中国阿尔茨海默病协会2011年的公布调查结果显示，全球有约3650万人患有痴呆症，每七秒就有ー个人患上此病，平均生存期只有5. 9年，是威胁老人健康的“四大杀手”之一。在中国65岁以上的老人患病率高达6. 6%以上，年龄每增加5岁，患病率增长一倍，3个85岁以上的老人中就有ー个是老年痴呆。保守估计全国老年痴呆患病人数闻达800万以上。目前治疗或防治脑血管及相关疾病的药物不多，具有显著效果的则更少。其中西药具有治愈速度快，对症治疗效果明显等特点，但不宜长期服用，需过一段时间后更换药物种类；而中药复方含多味药，单味药含有多种成分，因此中药可以通过多层次、多靶点、多环节发挥作用，但中药起效慢，作用时间长；因此随着科学的进展与研究的深入，对中西药结合的研究越来越多，这是由于中西药联合使用，能够达到协调增效、降低毒副反应、減少剂量、減少禁忌等良好作用。现有技术中，可知灯盏花素、水蛭素等药物具有抗凝血、抗血栓、扩张脑血管等作用，本发明研究人员在对前述药物的研究过程中，意外发现将灯盏花素、水蛭素和磷酸川芎嗪制成组合药物，再加入一定量的DHA，然后利用分离培养得到的人脂肪干细胞作为药物载体，得到的药物制剂用于治疗脑血管及相关疾病，其结果表明，该药物能够顺利透过血脑屏障，取得非常理想的治疗效果。
发明内容
本发明的主要目的是提供一种用于治疗或预防脑血管及相关疾病的药物组合物，该组合物包含以下重量百分比的组分DHAl-50份、灯盏花素1-50份、磷酸川芎嗪20-50份、水蛭素1-10份。优选地，本发明所述药物组合物，包含以下重量百分比的组分DHA10-40份、灯盏花素15-40份、磷酸川芎嗪25-45份、水蛭素3_8份。上述药物组合物中还包括人脂肪干细胞，作为治疗和预防脑血管及相关疾病药物的载体，使药物组合物顺利透过血脑屏障，达到靶向治疗的效果。所述人脂肪干细胞，是对人体的腹部、大腿或皮下脂肪进行切除术或吸脂手术后 废弃的脂肪组织，通过提取、分离、培养得到的脂肪干细胞。本发明的另ー个目的是提供这种治疗和预防脑血管及相关疾病的药物组合物的制备方法。制备方法包括以下步骤(I)药物混合溶液的制备将处方量的DHA、灯盏花素、磷酸川芎嗪和水蛭素溶于药学上可接受的介质中，充分混合；(2)人脂肪干细胞的分离培养采用分离、纯化、培养的方法获得人脂肪干细胞，并将其重悬在药学上可接受的介质中；(3)药物制剂的制备将上述药物混合溶液与人脂肪干细胞重悬液混合，即得发明产物。其中，步骤(I)、(2)中的药学上可接受的介质选自缓冲液、生理盐水、平衡盐溶液或其组合；步骤(2)中采用质量与体积比为O. 1-0. 3%的混合胶原酶对脂肪组织进行消化，用含有10-15%胎牛血清、103-105u/ml LIF的MCDB-201培养液对提取分离后的干细胞进行培养;所述混合胶原酶由I型胶原酶和IV型胶原酶组成，所述混合胶原酶的质量与体积比为1%的母液配制方法为100ml D-Hanks平衡盐溶液中加入O. 7g I型胶原酶、O. 3g IV型胶原酶；步骤(3)中药物混合溶液与人脂肪干细胞培养液的比例为1:1-3，优选1:2。具体地，本发明所述治疗脑血管及相关疾病的药物，制备方法包括以下步骤(I)取处方量DHA、灯盏花素、磷酸川芎嗪和水蛭素，溶于磷酸盐缓冲液中，制备成浓度为5-15mg/ml的混合溶液；(2)取采集的脂肪组织，剔除肉眼可见的血管和纤维部分，剪碎，用pH值为7. 2-7. 4的D-Hanks平衡盐液洗涤多次，去除残留的血液，加入与脂肪组织等体积的O. 2-0. 4% (m/v)混合胶原酶，均匀震荡消化40-80分钟，再置于离心机中离心4_10分钟，去除表层脂肪，将底层细胞用PH值为7. 2-7. 4的D-Hanks平衡盐液反复清洗，经100目筛网过滤，滤液离心5-10分钟，弃去上清液，将获得的干细胞按照2-3 X IOVcm2的密度接种于培养瓶，加入IOmL含有10-15%胎牛血清、103-105U/ml LIF的MCDB-201培养液中进行培养，每隔1-2天更换新鲜的培养液，待细胞生成达到80%融合，在培养瓶中加O. 25%胰酶-EDTA进行消化，按1:3传代，获得传代培养后的人脂肪干细胞；将2 X IO5个脂肪干细胞重悬在200 μ I等渗磷酸盐缓冲液中，得到浓度为I. OXlOfVml的干细胞悬液；(3)将上述药物混合溶液和人脂肪干细胞悬液按照1:1-3的比例混合，即得发明产物。本发明的药物组合物可以根据需要加入一种或多种药学上可以接受的载体，如稀释剂、赋形剂、填充剂、表面活性剂等等，按照药学领域的常规方法，制备成所需要的注射制齐U。所述注射制剂是注射液和冻干粉针剂。本发明的又一目的是提供本发明药物在治疗脑血管及相关疾病方面的用途，所述脑血管疾病是指缺血性脑血管病，具体包括脑局部缺血、脑血栓、血管收缩、脑梗塞；脑血管相关疾病是指阿尔茨海默氏病。
为了使本领域普通技术人员更好的理解本发明，以下通过实验及实施例来进ー步阐述本发明复方荭草制剂的组成、其制备方法及用途试验I对局灶性脑缺血的影响I. I试验药物Α :本发明注射用冻干粉，规格为每支装200mg，按照实施例5的方法制备；B :注射用血塞通，规格为每支装200mg，黑龙江珍宝岛股份有限公司生产；C :右旋糖酐40氯化钠注射液，规格为500ml:30g:4. 5g，山东齐都药业有限公司生产。I. 2试验动物Wistar大鼠，体重230_270g，贵阳中医学院实验动物中心提供。I. 3试验方法健康成年大鼠随机分为四组，每组10只，其中缺血对照组用生理盐水灌胃；药物A、B、C组分别以50. 0mg/kg>60. 0mg/kg>40. Omg/kg剂量给药。动物模型的建立采用两血管闭塞合并放血法，造成急性脑缺血。实验动物先麻醉后固定在手术台上。经颈正中切ロ，钝性分离两侧颈总动脉，丝线结扎悬挂30min，同时断尾放血O. 8ml，然后松开丝带结扎线lOmin，再结扎两侧颈总动脉30min后松开。术后给予进食进水。观测指标(I)凝血系统凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶时间(APTT)、纤维蛋白原测定(FBG)。(2)脑梗死面积的测定术后一定时间采血后处死，取一定量大鼠大脑，去掉小脑和脑干，冠状切为O. 3cm的脑片，观察有无出血灶。将脑片浸入TTC中，恒温后甲醛固定，利用图像病理分析系统测定梗死面积。病理学检测脑片经染色后，在光镜下观察脑组织病理变化。I. 4 结果( I)凝血纤溶系统的检测结果如下表I表I凝血纤溶系统的检测结果(X土 s)
权利要求
1.一种用于治疗或预防脑血管及相关疾病的药物组合物，该组合物包含以下重量百分比的组分DHAl-50份、灯盏花素1-50份、磷酸川芎嗪20-50份、水蛭素1_10份。
2.如权利要求I所述的治疗或预防脑血管及相关疾病的药物组合物，其特征在于包含以下重量百分比的组分DHA10-40份、灯盏花素15-40份、磷酸川芎嗪25-45份、水蛭素3-8 份。
3.如权利要求I或2所述药物组合物，其特征在于药物组合物中还包括人脂肪干细胞，作为药物组合物的载体。
4.如权利要求3所述的药物组合物，其特征在于制备方法包括以下步骤 (O药物混合溶液的制备将处方量的DHA、灯盏花素、磷酸川芎嗪和水蛭素溶于药学上可接受的介质中，充分混合； (2)人脂肪干细胞的分离培养采用分离、纯化、培养的方法获得人脂肪干细胞，并将其重悬在药学上可接受的介质中； (3)药物制剂的制备将上述药物混合溶液与人脂肪干细胞重悬液混合，即得发明产物。
5.如权利要求4所述的药物组合物，其特征在于步骤(1)、(2)中的药学上可接受的介质选自缓冲液、生理盐水、平衡盐溶液或其组合；步骤(2)中采用质量与体积比为O. 1-0. 3%的混合胶原酶对脂肪组织进行消化，用含有10-15%胎牛血清、103-105U/ml LIF的MCDB-201培养液对提取分离后的干细胞进行培养；步骤(3)中药物混合溶液与人脂肪干细胞培养液的比例为1:1-3，优选1:2。
6.如权利要求5所述的药物组合物，其特征在于步骤(2)中的混合胶原酶由I型胶原酶和IV型胶原酶组成，所述混合胶原酶的质量与体积比为1%的母液配制方法为100mlD-Hanks平衡盐溶液中加入O. 7g I型胶原酶、O. 3g IV型胶原酶。
7.如权利要求4-6任一所述的药物组合物，其特征在于制备方法包括以下步骤 (1)取处方量DHA、灯盏花素、磷酸川芎嗪和水蛭素，溶于磷酸盐缓冲液中，制备成浓度为5-15mg/ml的混合溶液； (2)取采集的脂肪组织，剔除肉眼可见的血管和纤维部分，剪碎，用pH值为7.2-7. 4的D-Hanks平衡盐液洗涤多次，去除残留的血液，加入与脂肪组织等体积的O. 2-0. 4% (m/v)混合胶原酶，均匀震荡消化40-80分钟，再置于离心机中离心4-10分钟，去除表层脂肪，将底层细胞用PH值为7. 2-7. 4的D-Hanks平衡盐液反复清洗，经100目筛网过滤，滤液离心5-10分钟，弃去上清液，将获得的干细胞按照2-3 X IOVcm2的密度接种于培养瓶，加入IOmL含有10-15%胎牛血清、103-105U/ml LIF的MCDB-201培养液中进行培养，每隔1_2天更换新鲜的培养液，待细胞生成达到80%融合，在培养瓶中加O. 25%胰酶-EDTA进行消化，按1:3传代，获得传代培养后的人脂肪干细胞；将2 X IO5个脂肪干细胞重悬在200 μ I等渗磷酸盐缓冲液中，得到浓度为I. OX 106/ml的干细胞悬液； (3)将上述药物混合溶液和人脂肪干细胞悬液按照1:1-3的比例混合，即得发明产物。
8.如权利要求7所述的药物组合物，其特征在于本发明的药物组合物可以根据需要加入一种或多种药学上可以接受的载体，如稀释剂、赋形剂、填充剂、表面活性剂等等，按照药学领域的常规方法，制备成所需要的注射液和冻干粉针剂。
9.权利要求1-8任一所述的药物组合物在治疗脑血管及相关疾病方面的用途。
10.如权利要求9所述的药物组合物的用途，其特征在于所述药物组合物在治疗缺血性脑血管病，具体包括脑局部缺血、脑血栓、血管收缩、脑梗塞；和脑血管相关疾病即阿尔茨海默氏病方面的用途。
全文摘要
本发明公开了一种用于治疗或预防脑血管及相关疾病的药物组合物，该组合物由以下重量百分比的组分组成DHA1-50份、灯盏花素1-50份、磷酸川芎嗪20-50份、水蛭素1-10份。组合物中还包括有效量的人脂肪干细胞，其作为药物组合物的载体，使治疗药物顺利透过血脑屏障，达到靶向治疗脑血管及相关疾病的效果。本发明的药物组合物可有效改善脑部缺血所引起的发作、梗塞、栓塞等疾病，有效抑制体内血栓的形成，并对脑血管病引起的老年痴呆即阿尔茨海默氏病有良好疗效。
文档编号A61K38/58GK102813914SQ20121033768
公开日2012年12月12日 申请日期2012年9月12日 优先权日2012年9月12日
发明者张芝庭 申请人:贵州神奇集团控股有限公司