治疗性肿瘤疫苗的制作方法

治疗性肿瘤疫苗的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种治疗癌症的方法，其包括用至少一种TLR激动剂和至少一种癌症相关抗原处理树突状细胞，和将所述经处理的树突状细胞施用给有此需要的对象。特别地，本发明涉及一种治疗性癌症疫苗。更特别地，本发明涉及经至少一种TLR激动剂和至少一种癌症相关抗原处理的树突状细胞(DC)。
【专利说明】治疗性肿瘤疫苗
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种治疗癌症的方法，其包括用至少一种TLR激动剂和至少一种癌症相关抗原处理树突状细胞，和将治疗有效量的所述经处理的树突状细胞施用给有此需要的对象。特别地，本发明涉及一种治疗性癌症疫苗。更特别地，本发明涉及经至少一种TLR激动剂和至少一种癌症相关抗原处理的树突状细胞(DC)。
【背景技术】
[0002]肿瘤疫苗是近年研究的热点之一，其原理是通过激活患者自身免疫系统，利用肿瘤细胞或肿瘤抗原物质诱导机体的特异性细胞免疫和体液免疫反应，增强机体的抗癌能力，阻止肿瘤的生长、扩散和复发，以达到清除或控制肿瘤的目的。
[0003]DC在激活固有免疫与适应性免疫反应中起关键作用(Banchereau etal.，1998，Nature 392:245-252) JC能够提呈肿瘤抗原给初始肿瘤特异性细胞毒T细胞。DC也是重要的细胞因子来源，如白介素_12 (Interleukin-12IL_12)、肿瘤坏死因子a (Tumor NecrosisFactor alpha TNF a )与a干扰素(Interferon alphal FN a ),这些细胞因子在抗肿瘤免疫反应中起作用(Banchereau et al.，1998，Nature 392:245-252)。因此，近几年来，科学家正在努力开发激活DC活性以用于治疗肿瘤的药物。为了诱导适当的免疫反应，DC必须摄取抗原、被TLR信号激活、迁移到次级淋巴器官并激活T细胞。
[0004]DC是免疫系统的中枢组分，桥联固有免疫与适应性免疫反应。在接收到成熟信号刺激后如炎性细胞因子、T细胞刺激或识别病原相关分子模式(pathogen-associatedmolecular patterns, PAMP), DC上调细胞表面主要组织相容性抗原I and II (majorhistocompatibility complex II, MHCII)与共刺激分子的表达(Kawai T & Akira`S.Nature Immunology, 11, 373-384, 2010)。在成熟过程中，DC的作用从抗原摄取转变成抗原提呈，并迁移到次级淋巴器官，刺激T淋巴细胞。利用DC特性用于临床的工作已经被大量开展如DC的间接体内疗法已经成为标准操作(Gilboa E.JClin Invest.117(5):1195-1203，2007)。尤其是由于DC能够激活初始T细胞，因此DC在恶性肿瘤治疗方面的应用是大有希望的(Figdor CG.et al.Nature Medicine 10,475-480,2004)。
[0005]DC辅助免疫疗法已经显示出对增强肿瘤患者的免疫反应是一种安全的方式。可是，到目前为止已经取得的免疫反应还没有达到治疗潜力，而且DC辅助疗法目前还没有成为临床的标准治疗(Gilboa E.J Clin Invest.117(5):1195-1203,2007 ；Steinman RM,Annual Review of Immunology, 30:1-22, 2012)。一项新近的 meta 研究发现,使用成熟的DC治疗338个黑色素瘤患者中，大约30%的病人有完全反应(CR)，部分反应(CR)或病情稳定(SD) (Melanoma Research，21，165-174，2011)。在免疫学参数中，尤其是抗原特异性T淋巴细胞的诱导被发现对于阳性结果(CR，PR和SD)的产生是有意义的。
[0006]DC用于临床治疗的最关键的方面是DC对T淋巴细胞的刺激能力。Toll样受体(TLR)已经被认为是一种激活DC的重要受体。TLR识别微生物病原体的特异的分子模式。在人类中，已经鉴定到至少十种不同的TLR分子。通过微生物分子触发的TLR信号强烈地激活 DC 上调共刺激分子(CD80 和 CD86) (Hertz et al.,2001, J.1mmunol.166:2444-2450)，并产生促炎细胞因子(TNF- a、IL_6 和 IL-12) (Thoma-Uszynski et al.,2001,J.1mmunol.154:3804-3810)。现在，众多研究已经鉴定了多种的结构不同的细菌产物可作为TLR的配体和激动剂，包括细菌脂多糖(TLR-4)、鞭毛蛋白(TLR-5)、脂磷壁酸(TLR-2)与Poly 1:C(TLR-3)。更特别的是，TLR-9已经显示是具有免疫刺激作用的细菌CpG DNA的配体(Hemmi et al., 2000, Nature 408:740745 ;Wagner, 2001, Immunity 14:499-502)。
[0007]Toll 样受体(TLR)是一种模式识别受体家族(pattern recognitionreceptors,PRR)，是主要的识别微生物病原体诱导固有免疫反应的传感器。TLR识别微生物的不同结构，被称为“PAMP”(pathogen associatedmo lecular patterns)。配体结合到 TLR 引起细胞内信号通路级联，诱导产生炎症与免疫因子。PRR也包括细胞内蛋白，如NOD样受体、RIG-1样解旋酶(RLH)以及细胞外受体如清道夫受体和C型凝集素受体。TLR典型地被微生物信号或者内源性配体(如热休克蛋白、纤连蛋白与纤维蛋白原)或化学合成的药物激活。在人类，已经鉴定到十种TLR。这些受体包括一种保守的跨膜分子家族，在胞外区富含亮氨酸重复序列，含有一个跨膜结构域与一个细胞内TIR(Toll/IL-lR)结构域。表达于细胞表面的TLR(TLR1，-2，-4，-5,-6)侦测局部微环境中的病原体。TLR4通过胞外段识别细菌细胞壁成分脂多糖(LPS),除了单磷酰脂A(monophosphoryllipid A,MPLA)外。脂蛋白与脂磷壁酸被 TLR2分别联合TLRl与TLR6识别。TLR5识别细菌鞭毛蛋白。相反，某些TLR (TLR-3，-7/8，-9)位于内质网(ER)并被快速募集到内体-溶酶体区室，在区室内的TLR能够侦测微生物核酸(分别是 dsRNA, ssRNA 与含有未甲基化的 CpG模序的 ss DNA) (Napolitani G.et al.NatureImmunology 6，769，2005.)。配体结合到TLR诱导细胞衔接蛋白募集，在细胞质形成信号转导复合物。这导致信号通路包括NF-KB与MAPK p38和JNK的激活，调节参与炎症(细胞因子)与免疫(MHC分子、黏附分子)的基因的表达。由于不同的TLR信号通过不同的衔接蛋白的联合，因此募集不同的转录因子与诱导不同的基因表达。内体受体TLR7，-8，-9在配体结合后被激活，并与衔接蛋白 MyD88 (myeloid diff erentiation primary response gene)相互作用，接着与几种信号复合物联合，最后导致IRF7，NF-KB和MAPK的激活。IRF7的表达促进I型干扰素(IFN)的高表达。LPS与TLR4结合后，募集几种衔接蛋白(TIRAP，MyD88，TRAM和TRIF)到TIR胞内结构域。这些衔接蛋白随后参与MyD88和TRIF依赖的信号通路。
[0008]由于目前的肿瘤疫苗无法激活足够的免疫反应来抗击肿瘤，因此有必要开发新的肿瘤疫苗来治疗肿瘤。

【发明内容】

[0009]本发明人首次出人意料地发现，通过用至少一种TLR激动剂和至少一种癌症相关抗原的组合处理DC细胞，能够特别有效地激活DC细胞从而增强抗肿瘤免疫应答，由此可用于治疗癌症。
[0010]因此，在一个方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含至少一种TLR激动剂和至少一种癌症相关抗原。
[0011]在另一个方面，本发明提供了一种用于刺激免疫系统的方法，其包括:用至少一种TLR激动剂和至少一种癌症相关抗原处理树突状细胞；和将治疗有效量的所述经处理的树突状细胞施用给有此需要的对象。[0012]在又一个方面，本发明提供了一种用于改善对象中针对癌症的免疫应答的方法，其包括:用至少一种TLR激动剂和至少一种癌症相关抗原处理树突状细胞；和将治疗有效量的所述经处理的树突状细胞施用给有此需要的对象。
[0013]在又一个方面，本发明提供了一种用于治疗癌症的方法，其包括:用至少一种TLR激动剂和至少一种癌症相关抗原处理树突状细胞；和将治疗有效量的所述经处理的树突状细胞施用给有此需要的对象。
[0014]在又一个方面，本发明提供了用于处理树突状细胞的方法，其包括:用至少一种TLR激动剂和至少一种癌症相关抗原处理树突状细胞。
[0015]在又一个方面，本发明提供了至少一种TLR激动剂和至少一种癌症相关抗原在制备用于治疗癌症的药物中的用途。
[0016]在又一个方面，本发明提供了至少一种TLR激动剂和至少一种癌症相关抗原在制备用于刺激免疫系统的药物中的用途。
[0017]在又一个方面，本发明提供了至少一种TLR激动剂和至少一种癌症相关抗原在制备用于改善对象中针对癌症的免疫应答的药物中的用途。
[0018]另外，本发明还提供了一种药物、药物组合或药盒(kit)，其包含至少一种TLR激动剂和至少一种癌症相关抗原。本发明还提供了一种经处理的树突状细胞，其经过至少一种TLR激动剂和至少一种癌症相关抗原的处理。本发明还提供了一种治疗性癌症疫苗，其包含至少一种TLR激动剂和至少一种癌症相关抗原或者经过至少一种TLR激动剂和至少一种癌症相关抗原处理的树突状细胞。
[0019]本发明至少部分地基于发现联合施用两种或更多种独特的TLR激动剂有很强的免疫刺激活性。另外，本发明还发现在联合施用两种TLR激动剂的情况下，用针对来源于肿瘤干细胞、肿瘤细胞与增殖性肿瘤相关内`皮细胞的抗原处理树突状细胞，然后将树突状细胞施用给患者能够从三方面抑制了肿瘤干细胞与肿瘤细胞的生长及血管生成。
[0020]因此，在一个特定的实施方案中，本发明提供了通过激活DC治疗肿瘤的药物，该药物含有至少两种TLR激动剂与至少三种分别来源于肿瘤干细胞、肿瘤细胞与增殖性肿瘤相关内皮细胞的抗原。
[0021]在另一个特定的实施方案中，本发明提供了通过给予有效剂量的药物来激活DC治疗肿瘤的方法，该药物含有至少两种TLR激动剂与至少三种分别来源于肿瘤干细胞、肿瘤细胞与增殖性肿瘤相关内皮细胞的抗原。
[0022]在又一个特定的实施方案中，本发明提供了通过给予足够量的用药物预处理的DC并通过激活DC来治疗肿瘤的方法，该药物含有至少两种TLR激动剂与至少三种分别来源于肿瘤干细胞、肿瘤细胞与增殖性肿瘤相关内皮细胞的抗原。
【专利附图】

【附图说明】
[0023]图1是激活DC抗原提呈的药物与方法的示意图，其中激活DC以诱导广泛的抗肿瘤细胞、肿瘤干细胞与肿瘤相关血管内皮细胞的免疫反应，其中AACSc表示抗血管发生肿瘤干细胞及肿瘤细胞(Anti AngiogenesisCancer Stem Cell and Cancer Cell)。
[0024]图2显示了通过ELISA方法定量人DC产生的促炎细胞因子IL_12p70，其中DC经以下药物预处理:0K-432、1C、CpG、AACSc, 0K-432+IC以及对照PBS缓冲液，其中IC表示Poly 1:C，CpG表示非甲基化CpG寡核苷酸，AACSc表示包含两种TLR激动剂(Poly 1:C和0K-432)和三种癌症相关抗原(hTERT、MUCl和VEGFR2)的抗血管发生，肿瘤干细胞及肿瘤细胞疫苗。
[0025]图3是一系列ELISP0T试验的检测图，其显示经AACSc疫苗预处理的DC相比于仅用肿瘤相关抗原(TAA)(其包含三种癌症相关抗原(hTERT、MUCl和VEGFR2))或肿瘤裂解物预处理的DC更强地活化抗TAA(tumor-associated antigen)特异性人T淋巴细胞。图3A显示在针对抗hTERT细胞应答的活化中，相比于肿瘤裂解物(MDA-MB-231裂解物)+TLR激动剂(Poly 1:C和0K-432)，AACSc预处理的DC表现出更强的活性。AACSc表示包含两种TLR激动剂Poly 1:C和0K-432以及三种癌症相关抗原hTERT、MUCl和VEGFR2的疫苗；图3B显示AACSc在活化抗MUClT细胞应答中活性更强，缩写如图3A中所述；图3(:显示AACSc在活化抗VEGFR T细胞应答中活性更强，缩写如图3A中所述。
[0026]图4是标准的51Cr释放试验的结果图，显示用AACSc疫苗或其他药物预处理的自体DC在体外激活HLA-A2+T淋巴细胞的溶瘤活性.所述激活HLA-A2+T淋巴细胞对HLA-A2+、hTERT+及MUCl+人类肿瘤细胞(MDA-MD-231细胞)的溶瘤活性，其中TAA表示hTERT、MUCl和VEGFR2的混合物，肿瘤裂解物表示MDA-MB-231裂解物，TLR激动剂表示Poly 1:C和OK-432，AACSc表示包含两种TLR激动剂Poly 1:(:和01(-432以及三种癌症相关抗原hTERT、MUCl和VEGFR2的疫苗。
[0027]图5是标准的51Cr释放试验的结果图，显示用AACSc疫苗或其他药物预处理的自体DC在体外激活HLA-A2+T淋巴细胞杀伤增殖内皮细胞(HUVEC)活性.所述激活HLA-A2+T淋巴细胞对增殖性HLA-A2+及VEGFR2+人类血管内皮细胞(原代HLA-A2+人脐静脉内皮细胞(HUVEC))的杀伤活性，其中TAA表示hTERT、MUCl和VEGFR2的混合物，肿瘤裂解物表示MDA-MB-231裂解物，TLR激动剂表示Poly1:C和OK-432，AACSc表示包含两种TLR激动剂Poly 1:C和0K-432以及三种癌症相关抗原hTERT、MUCl和VEGFR2的疫苗。
【具体实施方式】`
[0028]在一个方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含至少一种TLR激动剂和至少一种癌症相关抗原。在一些实施方案中，所述药物组合物包含至少两种、至少三种、至少四种或至少五种TLR激动剂。在另一些实施方案中，所述药物组合物包含至少两种、至少三种、至少四种或至少五种癌症相关抗原。优选地，所述药物组合物包含至少两种TLR激动剂和至少三种癌症相关抗原。
[0029]在另一个方面，本发明提供了一种用于刺激免疫系统的方法，其包括:用至少一种TLR激动剂和至少一种癌症相关抗原处理树突状细胞；和将治疗有效量的所述经处理的树突状细胞施用给有此需要的对象。本发明还提供了一种用于刺激免疫系统的方法，其包括:将治疗有效量的至少一种TLR激动剂和至少一种癌症相关抗原施用给有此需要的对象，从而在原位处理树突状细胞。在一些实施方案中，所述方法用至少两种、至少三种、至少四种或至少五种TLR激动剂处理树突状细胞。在另一些实施方案中，所述方法用至少两种、至少三种、至少四种或至少五种癌症相关抗原处理树突状细胞。优选地，所述方法用至少两种TLR激动剂和至少三种癌症相关抗原处理树突状细胞。
[0030]在又一个方面，本发明提供了一种用于改善对象中针对癌症的免疫应答的方法，其包括:用至少一种TLR激动剂和至少一种癌症相关抗原处理树突状细胞；和将治疗有效量的所述经处理的树突状细胞施用给有此需要的对象。本发明还提供了一种用于改善对象中针对癌症的免疫应答的方法，其包括:将治疗有效量的至少一种TLR激动剂和至少一种癌症相关抗原施用给有此需要的对象，从而在原位处理树突状细胞。在一些实施方案中，所述方法用至少两种、至少三种、至少四种或至少五种TLR激动剂处理树突状细胞。在另一些实施方案中，所述方法用至少两种、至少三种、至少四种或至少五种癌症相关抗原处理树突状细胞。优选地，所述方法用至少两种TLR激动剂和至少三种癌症相关抗原处理树突状细胞。
[0031]在又一个方面，本发明提供了一种用于治疗癌症的方法，其包括:用至少一种TLR激动剂和至少一种癌症相关抗原处理树突状细胞；和将治疗有效量的所述经处理的树突状细胞施用给有此需要的对象。本发明还提供了一种用于治疗癌症的方法，其包括:将治疗有效量的至少一种TLR激动剂和至少一种癌症相关抗原施用给有此需要的对象，从而在原位处理树突状细胞。在一些实施方案中，所述方法用至少两种、至少三种、至少四种或至少五种TLR激动剂处理树突状细胞。在另一些实施方案中，所述方法用至少两种、至少三种、至少四种或至少五种癌症相关抗原处理树突状细胞。优选地，所述方法用至少两种TLR激动剂和至少三种癌症相关抗原处理树突状细胞。
[0032]在又一个方面，本发明提供了用于处理树突状细胞的方法，其包括:用至少一种TLR激动剂和至少一种癌症相关抗原处理树突状细胞。在一些实施方案中，所述方法用至少两种、至少三种、至少四种或至少五种TLR激动剂处理树突状细胞。在另一些实施方案中，所述方法用至少两种、至少三种、至少四种或至少五种癌症相关抗原处理树突状细胞。优选地，所述方法用至少两种TLR激动剂和至少三种癌症相关抗原处理树突状细胞。在某些实施方案中，所述处理在原位进行。
[0033]在又一个方面，本发明提供了至少一种TLR激动剂和至少一种癌症相关抗原在制备用于治疗癌症的药物中的用途。在一些实施方案中，所述TLR激动剂为至少两种、至少三种、至少四种或至少五种TLR激动剂。在`另一些实施方案中，所述癌症相关抗原为至少两种、至少三种、至少四种或至少五种癌症相关抗原。
[0034]在又一个方面，本发明提供了至少一种TLR激动剂和至少一种癌症相关抗原在制备用于刺激免疫系统的药物中的用途。在一些实施方案中，所述TLR激动剂为至少两种、至少三种、至少四种或至少五种TLR激动剂。在另一些实施方案中，所述癌症相关抗原为至少两种、至少三种、至少四种或至少五种癌症相关抗原。
[0035]在又一个方面，本发明提供了至少一种TLR激动剂和至少一种癌症相关抗原在制备用于改善对象中针对癌症的免疫应答的药物中的用途。在一些实施方案中，所述TLR激动剂为至少两种、至少三种、至少四种或至少五种TLR激动剂。在另一些实施方案中，所述癌症相关抗原为至少两种、至少三种、至少四种或至少五种癌症相关抗原。
[0036]在又一个方面，本发明提供了一种药物组合物，其用于治疗癌症、刺激免疫系统或者改善对象中针对癌症的免疫应答，所述药物组合物包含至少一种TLR激动剂和至少一种癌症相关抗原。在一些实施方案中，所述TLR激动剂为至少两种、至少三种、至少四种或至少五种TLR激动剂。在另一些实施方案中，所述癌症相关抗原为至少两种、至少三种、至少四种或至少五种癌症相关抗原。[0037]另外，本发明还提供了一种药物、药物组合或药盒(kit)，其包含至少一种TLR激动剂和至少一种癌症相关抗原或者经至少一种TLR激动剂和至少一种癌症相关抗原处理的树突状细胞。本发明还提供了一种经处理的树突状细胞，其经过至少一种TLR激动剂和至少一种癌症相关抗原的处理。本发明还提供了一种治疗性癌症疫苗，其包含至少一种TLR激动剂和至少一种癌症相关抗原或者经过至少一种TLR激动剂和至少一种癌症相关抗原处理的树突状细胞。
[0038]在又一个方面中，本发明提供了用于处理树突状细胞的方法，其包括:用至少一种TLR激动剂和至少一种癌症相关抗原处理树突状细胞。
[0039]在另一个方面中，本发明提供了至少一种TLR激动剂和至少一种癌症相关抗原在制备用于治疗癌症的药物中的用途，其中所述治疗通过以下方式实现:用所述至少一种TLR激动剂和所述至少一种癌症相关抗原处理树突状细胞；和将所述经处理的树突状细胞施用给有此需要的对象。
[0040]在又一个方面中，本发明提供了至少一种TLR激动剂和至少一种癌症相关抗原在制备用于刺激免疫系统的药物中的用途，其中所述刺激通过以下方式实现:用所述至少一种TLR激动剂和所述至少一种癌症相关抗原处理树突状细胞；和将所述经处理的树突状细胞施用给有此需要的对象。
[0041]在又一个方面中，本发明提供了至少一种TLR激动剂和至少一种癌症相关抗原在制备用于改善对象中针对癌症的免疫应答的药物中的用途，其中所述改善通过以下方式实现:用所述至少一种TLR激动剂和所述至少一种癌症相关抗原处理树突状细胞；和将所述经处理的树突状细胞施用给有此需要的对象。
[0042]在又一个方面中，本 发明提供了至少一种TLR激动剂和至少一种癌症相关抗原在制备用于处理树突状细胞的药物中的用途。
[0043]在一个方面中，本发明还特别地提供了一种癌症疫苗(特别地为治疗性癌症疫苗)，其包含至少一种TLR激动剂和至少一种癌症相关抗原，或者包含经至少一种TLR激动剂和至少一种癌症相关抗原处理的树突状细胞。
[0044]在另一个方面中，本发明还提供了药物组合、药物、树突状细胞、药盒或者癌症疫苗，其用于治疗癌症、刺激免疫系统和/或改善针对癌症的免疫应答。
[0045]在又一个方面中，本发明还提供了如上所述的药物组合、药物、树突状细胞、药盒或者癌症疫苗在制备用于治疗癌症、刺激免疫系统和/或改善针对癌症的免疫应答之药物中的用途。
[0046]在本发明的一些实施方案中，所述至少一种TLR激动剂为至少两种、至少三种、至少四种或至少五种TLR激动剂，优选至少两种TLR激动剂，更优选两种TLR激动剂。特别地，所述TLR激动剂包括:TLR1激动剂、TLR2激动剂、TLR3激动剂(例如Poly 1: C)、TLR4激动剂(例如单磷酰脂A)、TLR5激动剂(例如鞭毛蛋白)、TLR6激动剂、TLR7激动剂、TLR8激动剂、TLR9激动剂(例如非甲基化CpG寡核苷酸)、非特定TLR激动剂(例如0K-432)或其任意组合。优选地，本发明中的所述至少一种TLR激动剂为TLR3激动剂和非特定TLR激动剂，更优选为Poly 1:C和0K-432。
[0047]在本发明的另一些实施方案中，所述至少一种癌症相关抗原为至少两种、至少三种、至少四种或至少五种癌症相关抗原，优选至少三种癌症相关抗原，更优选三种癌症相关抗原。特别地，所述至少一种癌症相关抗原包括至少一种来源于肿瘤细胞的癌症相关抗原、至少一种来源于增生的肿瘤相关内皮细胞的癌症相关抗原或其任意组合。更特别地，所述至少一种来源于肿瘤细胞的癌症相关抗原包括至少一种来源于肿瘤干细胞的癌症相关抗原。优选地，所述至少一种癌症相关抗原包括至少两种来源于肿瘤干细胞的癌症相关抗原和至少一种来源于增生的肿瘤相关内皮细胞的癌症相关抗原。
[0048]在本发明的又一些实施方案中，所述来源于肿瘤细胞的抗原包括:端粒酶逆转录酶、黑素细胞分化抗原 A(melanocyte differentiation antigenMelan-A)、酪氨酸酶、黑色素瘤抗原_1 (melanoma-associated anti gen-1MAGE-1)、黑色素瘤抗原_2、黑色素瘤抗原-3、黑色素瘤抗原-4、黑色素瘤抗原-12、黑色素瘤相关抗原I (Melanoma-associatedantigen recognizedby T cells)、粘蛋白I (MUCl)、粘蛋白2、粘蛋白3、粘蛋白4、粘蛋白 18、癌胚抗原(Cancer Embryo Antigen CEA)、前列腺特异性抗原(prostate specificantigen PSA)、前列腺特异性膜抗原(prostate-specif icmembrane antigen P SM) > α-胎球蛋白、gp 100抗原、NY-ES0-1抗原或其任意抗原性片段。
[0049]在本发明的又一些实施方案中，所述来源于肿瘤干细胞的抗原包括:端粒酶逆转录酶(telomerase reverse transcriptase, TERT)例如 hTERT、粘蛋白 I (mucin I, MUCI)或其任意抗原性片段。
[0050]在本发明的又一些实施方案中，所述来源于增生的肿瘤相关内皮细胞的抗原包括:血管内皮生长因子受体 I (Vascular Endothelial Growthfactor receptor-lVEGFRl)、血管内皮生长因子受体2、肿瘤内皮标记物8 (Tumor Endothelial Marker 8TEM8)、成纤维细胞生长因子受体I (fibroblast Growth factor receptor-1)、内皮素、Tie2受体、血管动蛋白、生存素及血小板源生长因子受体β (platelet-derived growth factorreceptorbeta PDGFRbeta)或其任意抗原性片段。
[0051]在本发明一些特别优选的实施方案中，所述癌症相关抗原包括hTERT、MUCl和VEGFR2或其任意抗原性片段。
[0052]在本发明的一些实施方案中，所述癌症选自:黑色素瘤、乳腺癌、胰腺癌、结肠癌、肺癌、神经胶质瘤、肝细胞癌、子宫内膜癌、胃癌、小肠癌、肾癌、前列腺癌、甲状腺肿瘤、卵巢癌、睾丸癌、头颈癌、结直肠癌、食管癌、胃癌、眼癌、膀胱癌、胶质母细胞瘤以及转移癌。
[0053]在本发明的一些实施方案中，所述树突状细胞为异体或自体树突状细胞，优选自体树突状细胞。
[0054] 在本发明的一些实施方案中，根据本发明的疫苗、药物、药物组合或组合物还包含根据施用方式所选的适合的药物赋形剂、稀释剂或载体，其可以通过任何适合的方式施用于需要处理的细胞和/或需要治疗的患者/受试者。精确的剂量将取决于多个因素。
[0055]本领域中相关技术人员可使用适当的溶剂或制剂配制根据本发明的疫苗、药物、药物组合或组合物，例如:等张赋形剂如氯化钠注射液、林格氏注射液，乳酸林格氏注射液。根据要求，可以加入防腐剂、稳定剂、缓冲剂、抗氧化剂和/或其它一些添加剂。口服施用的药物组合物可以是片剂、胶囊、粉剂或口服液等形式。片剂可以包括固体载体，如明胶或辅剂。液体药物组合物通常包括液体载体，如水、石油、动物或植物油、矿物油或合成油。也可以包括生理盐水溶液、葡萄糖或其它糖溶液或二醇类，如乙二醇、丙二醇或聚乙二醇。
[0056]以上所提到的技术和方案的例子以及其它一些根据本发明所使用的技术和方案可以在 Remington' s Pharmaceutical Sciences, 16th edition, Oslo, A.(ed), 1980.中找到。
[0057]定义
[0058]除非另有定义，本文使用的所有科技术语具有本领域普通技术人员所理解的相同含义。关于本领域的定义及术语，专业人员具体可参考CurrentProtocols in MolecularBiology (Ausubel)。氨基酸残基的缩写是本领域中所用的指代20个常用L-氨基酸之一的标准3字母和/或I字母代码。
[0059]尽管本发明的广义范围所示的数字范围和参数近似值，但是具体实施例中所示的数值尽可能准确的进行记载。然而，任何数值本来就必然含有一定的误差，其是由它们各自的测量中存在的标准偏差所致。另外，本文公开的所有范围应理解为涵盖其中包含的任何和所有子范围。例如记载的“I至10”的范围应认为包含最小值I和最大值10之间(包含端点)的任何和所有子范围；也就是说，所有以最小值I或更大起始的子范围，例如I至
6.1，以及以最大值10或更小终止的子范围，例如5.5至10。另外，任何称为“并入本文”的参考文献应理解为以其整体并入。
[0060]另外应注意，如本说明书中所使用的，单数形式包括其所指对象的复数形式，除非清楚且明确的限于一个所指对象。术语“或”可与术语“和/或”互换使用，除非上下文另有清楚指明。
[0061]本文使用的术语“TLR激动剂”是指能够激活toll样受体(“TLR”)的任何分子，其包括但不限于多种TLR配体。特别地，TLR激动剂包括但不限于TLRl激动剂、TLR2激动剂、TLR3激动剂(例如Poly 1:C)、TLR4激动剂(例如单磷酰脂A)、TLR5激动剂(例如鞭毛蛋白)、TLR6激动剂、TLR7激动剂、TLR8激动剂、TLR9激动剂(例如非甲基化CpG寡核苷酸)、非特定TLR激动剂(例`如0K-432)或其任意组合。在本发明的一个优选实施方案中，TLR激动剂是指TLR 3激动剂Poly 1: C和/或TLR4激动剂0K-432。另外，本文使用的术语“非特定TLR激动剂”是指激活多于一种特定toll样受体的TLR激动剂，即激活选自TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8 和 TLR9 中一种或更多种的激动剂，例如激活TLRl和TLR2的TLR激动剂、激活TLRl和TLR3的TLR激动剂、激活TLR2和TLR3的TLR激动剂、激活TLR3和TLR4的TLR激动剂等、或者激活TLR1、TLR2和TLR3的TLR激动剂。
[0062]本文使用的术语“0K-432”是指一种用于治疗癌症的链球菌制剂，其具有免疫活性作用，又称为0K432或PicibaniI。
[0063]本文使用的术语“Poly 1:C”是指聚肌胞苷酸，又称为聚肌苷酸-聚胞苷酸。其为一种双链RNA类似物，已知Poly 1: C与TLR3相互作用。
[0064]本文使用的术语“癌症相关抗原”和“肿瘤相关抗原”可互换地使用，其是指与癌症或肿瘤有关的抗原，特别地指肿瘤抗原，即由肿瘤产生的抗原性物质，例如肿瘤细胞、肿瘤干细胞、增生的肿瘤相关内皮细胞所产生的抗原性物质。所述癌症相关抗原在宿主中引发了免疫应答。在本发明的一些实施方案中，所述癌症相关抗原为天然或重组的多肽或其抗原性片段。
[0065]本文使用的术语“抗原性片段”是指天然或合成多肽的片段，其保留了所述天然或合成多肽的抗原特性，即能够引发针对所述天然或合成多肽的免疫应答。
[0066]本文使用的术语“药物组合物”、“组合药物”和“药物组合”可互换地使用，其表示组合在一起以实现某种特定目的的至少一种药物以及任选地可药用赋形剂或辅料的组合。在某些实施方案中，所述药物组合物包括在时间和/或空间上分开的组合，只要其能够共同作用以实现本发明的目的。例如，所述药物组合物中所含的成分(例如TLR激动剂和/或癌症相关抗原)可以以整体施用于对象，或者分开施用于对象。当所述药物组合物中所含的成分分开地施用于对象时，所述成分可以同时或依次施用于对象。
[0067]本文使用的术语“肿瘤细胞”是指以不受控的方式生长和分裂的细胞，也经常被称为“癌细胞”。
[0068]本文使用的术语“肿瘤干细胞”是指具有正常干细胞特征的肿瘤细胞，其具有产生在肿瘤组织中存在的所有细胞类型的能力。该术语的定义还可参见http://en.wikipedia.0rg/wiki/Cancer stem cell。
[0069]本文使用的术语“增生的肿瘤相关内皮细胞”是指在肿瘤发生过程中出现异常增生的内皮细胞。所述增生的肿瘤相关内皮细胞包括血管内皮细胞。
[0070]本文使用的术语“来源于肿瘤干细胞的癌症相关抗原”是指与肿瘤干细胞有关的癌症相关抗原，特别地为由肿瘤干细胞产生或者由肿瘤干细胞所表达的抗原性物质。
[0071]本文使用的术语“来源于肿瘤细胞的癌症相关抗原”是指与肿瘤细胞有关的癌症相关抗原，特别地为由肿瘤细胞产生或者由肿瘤细胞所表达的抗原性物质。
[0072]本文使用的术语“来源于增生的肿瘤相关内皮细胞的癌症相关抗原”是指与增生的肿瘤相关内皮细胞有关的癌症相关抗原，特别地为由增生的肿瘤相关内皮细胞产生或者由其所表达的抗原性物质。
[0073]本文使用的术语“hTERT”指人端粒酶逆转录酶或其抗原性片段。特别地，所述hTERT包含014746的121位至1132位氨基酸所示的序列(例如SEQ ID NO:1的121位至1132位氨基酸所示的序列)，如下所示:
【权利要求】
1.一种药物组合物，其包含至少一种TLR激动剂和至少一种癌症相关抗原。
2.根据权利要求1的药物组合物，其包含至少两种、至少三种、至少四种或至少五种TLR激动剂，例如包含两种TLR激动剂。
3.根据前述任一项权利要求的药物组合物，其中所述至少一种TLR激动剂选自:TLR1激动剂、TLR2激动剂、TLR3激动剂(例如Poly 1:C)、TLR4激动剂(例如单磷酰脂A)、TLR5激动剂(例如鞭毛蛋白)、TLR6激动剂、TLR7激动剂、TLR8激动剂、TLR9激动剂(例如非甲基化CpG寡核苷酸)、非特定TLR激动剂(例如0K-432)和其任意组合。
4.根据前述任一项权利要求的药物组合物，其中所述至少一种TLR激动剂至少包括TLR3激动剂和非特定TLR激动剂，优选至少包括PolyI = C和0K-432。
5.根据前述任一项权利要求的药物组合物，其中所述药物组合物包含至少两种、至少三种、至少四种或至少五种癌症相关抗原，优选至少三种癌症相关抗原。
6.根据前述任一项权利要求的药物组合物，其中所述至少一种癌症相关抗原包括至少一种来源于肿瘤细胞的癌症相关抗原和至少一种来源于增生的肿瘤相关内皮细胞的癌症相关抗原，更优选地所述至少一种来源于肿瘤细胞的癌症相关抗原包括至少一种来源于肿瘤干细胞的癌症相关抗原。
7.根据权利要求6的药物组合物，其中所述来源于肿瘤细胞的抗原选自:端粒酶逆转录酶、黑素细胞分化抗原A、酪氨酸酶、黑色素瘤抗原-1、黑色素瘤抗原_2、黑色素瘤抗原-3、黑色素瘤抗原_4、黑色素瘤抗原-12、黑色素瘤相关抗原1、粘蛋白I (MUCl)、粘蛋白2、粘蛋白3、粘蛋白4、粘蛋白18、癌胚抗原、前列腺特异性抗原、前列腺特异性膜抗原、α -胎球蛋白、gplOO抗原、NY-ESO-1抗原及其任意抗原性片段。
8.根据权利要求6的药`物组合物，其中所述来源于肿瘤干细胞的抗原选自:端粒酶逆转录酶、粘蛋白I及其任意抗原性片段。
9.根据权利要求6的药物组合物，其中所述来源于增生的肿瘤相关内皮细胞的抗原选自:血管内皮生长因子受体1、血管内皮生长因子受体2、肿瘤内皮标记物8、成纤维细胞生长因子受体1、内皮素、Tie2受体、血管动蛋白、生存素、血小板源生长因子受体β及其任意抗原性片段。
10.根据前述任一项权利要求的药物组合物，其中所述癌症选自:黑色素瘤、乳腺癌、胰腺癌、结肠癌、肺癌、神经胶质瘤、肝细胞癌、子宫内膜癌、胃癌、小肠癌、肾癌、前列腺癌、甲状腺肿瘤、卵巢癌、睾丸癌、头颈癌、结直肠癌、食管癌、胃癌、眼癌、膀胱癌、胶质母细胞瘤以及转移癌。
11.根据前述任一项权利要求的药物组合物，其中所述至少一种癌症相关抗原包括至少两种来源于肿瘤干细胞的癌症相关抗原和至少一种来源于增生的肿瘤相关内皮细胞的抗原，例如包括端粒酶逆转录酶或其任意抗原性片段、粘蛋白I或其任意抗原性片段和血管内皮生长因子受体2或其任意抗原性片段。
12.经权利要求1-10中任一项所述药物组合物处理的树突状细胞。
13.药盒，其包含根据权利要求1-11任一项的药物组合物和/或经根据权利要求1-11任一项的药物组合物处理的树突状细胞。
14.治疗性癌症疫苗，其包含根据权利要求1-11任一项的药物组合物和/或经过根据权利要求1-11任一项的药物组合物处理的树突状细胞。
15.一种获得树突状细胞的方法，其包括:用权利要求1-11中任一项所述药物组合物处理树突状细胞。
16.—种用于治疗癌症的方法,其包括: 将治疗有效量的根据权利要求1-11任一项的药物组合物和/或根据权利要求12所述经处理的树突状细胞施用给有此需要的对象。
17.一种用于刺激免疫系统的方法，其包括: 将治疗有效量的根据权利要求1-11任一项的药物组合物和/或根据权利要求12所述经处理的树突状细胞施用给有此需要的对象。
18.一种用于改善对象中针对癌症的免疫应答的方法，其包括: 将治疗有效量的根据权利要求1-11任一项的药物组合物和/或根据权利要求12所述经处理的树突状细胞施用给有此需要的对象。
19.根据权利要求16或18的方法，其中所述癌症选自:黑色素瘤、乳腺癌、胰腺癌、结肠癌、肺癌、神经胶质瘤、肝细胞癌、子宫内膜癌、胃癌、小肠癌、肾癌、前列腺癌、甲状腺肿瘤、卵巢癌、睾丸癌、头颈癌、结直肠癌、食管癌、胃癌、眼癌、膀胱癌、胶质母细胞瘤以及转移癌。
20.根据权利要求12-19任一项的方法，其中所述树突状细胞为异体或自体树突状细胞，优选自体树突状细胞。`
【文档编号】A61P35/04GK103768604SQ201210409853
【公开日】2014年5月7日 申请日期:2012年10月24日 优先权日:2012年10月24日
【发明者】黄雪芬 申请人:北京圣沃德生物科技有限公司