一种抑制肿瘤干细胞的组合物的制作方法
【专利摘要】本发明提供了一种抑制肿瘤干细胞的组合物，采用姜黄素提取物、胡椒碱提取物、灰树花D-组分提取物和有机硒复配制得，本组合物中胡椒碱提高了姜黄素的生物利用度和抗癌活性，且辅以灰树花D-fraction和有机硒的抗癌功效，靶向肿瘤干细胞，可杀灭肿瘤干细胞，提高化疗药物的疗效，防止肿瘤的复发和转移。本组合物可制成片剂、胶囊或口服液，用于制备抗癌药物或保健食品。
【专利说明】一种抑制肿瘤干细胞的组合物
【技术领域】
[0001]本发明涉及天然产物医药及保健【技术领域】，具体涉及一种采用姜黄素提取物、胡椒碱提取物、灰树花D-组分提取物和有机硒复配制得的组合物，该组合物可抑制肿瘤干细胞，可以用作肿瘤的治疗或辅助治疗。
【背景技术】 [0002]世界卫生组织预测，未来20年，肿瘤的发生率会增加一倍，其中90%肿瘤引起的死亡，都是由于肿瘤复发并转移到其他关键器官所致。
[0003]肿瘤的复发和转移是由于肿瘤干细胞的存在。美国癌症研究协会(AmericanAssociation for Cancer Research) 2006年对肿瘤干细胞给出的明确定义是:肿瘤中具有自我更新能力并能产生异质性肿瘤细胞的细胞。从20世纪60年代Chester等进行的肿瘤细胞自体/异体移植实验到后来众多实验都证实，并非每个肿瘤细胞都有再生肿瘤的能力，只有很少数的肿瘤细胞能再生肿瘤。而肿瘤细胞生长、转移和复发的特点与干细胞的基本特性十分相似。因此，肿瘤干细胞的假说开始逐渐被接受。
[0004]肿瘤干细胞具有自我更新能力、强致瘤性、高侵袭性和耐药性，因此放化疗不能完全清除体内的肿瘤干细胞，只要体内有肿瘤干细胞存在，肿瘤就有可能复发和转移。
[0005]肿瘤干细胞成为目前国际上肿瘤研究的热点，成为肿瘤治疗的新靶点，为肿瘤治疗带来新希望。
[0006]现在绝大部分靶向药物缺乏专一性，只能杀灭原发肿瘤，并且毒副反应大，治疗费用昂贵，很多肿瘤病人负担不起。而天然植物提取物姜黄素能选择性地作用于细胞的多个靶点，并且和放化疗有协同增效作用，抑制癌细胞的生长、侵袭和转移，并且费用低，安全性闻。
[0007]姜黄素(curcumin)是从姜科姜黄属(Curcuma LI)植物姜黄、莪术、郁金等的根莖中提取的一种天然有效成分，也是姜黄发挥药理作用最重要的活性成分。姜黄是姜科姜黄属一种多年生的草本植物，其粉末称为姜黄根粉，可作药用。姜黄的研究历史悠久，印度传统医学认为，姜黄根粉可治疗胆疾患、厌食、鼻炎、咳嗽、糖尿病、肝疾患、风湿病和鼻窦炎。我国传统医学认为，姜黄可用于腹痛、黄疽等相关疾病的治疗。
[0008]姜黄素多靶点地作用于肿瘤细胞，其中有些靶点也是靶向治疗药物的作用靶点，这些靶点包括:
[0009]I炎症因子
[0010]炎症转录因子NF-k B几乎在所有癌细胞里高度表达，姜黄素能抑制NF-k B的活化，破坏细胞周期，诱导细胞凋亡。肿瘤坏死因子TNF-a控制细胞的生存和凋亡，姜黄素能抑制TNF-a产生并抑制其信号通路。CXC受体4 (CXC4)与肿瘤的进展、血管生成、转移和生存率有关。姜黄素通过抑制CXCL-12和CXCR4的表达，抑制卵巢癌的侵袭和转移。
[0011]2生长因子
[0012]姜黄素能够靶向EGF、PDGF和VEGF等生长因子，并作用于其信号通路，抑制肿瘤细胞的分裂和转移，上调细胞死亡信号。
[0013]3蛋白激酶
[0014]蛋白激酶和蛋白磷酸化酶(RAS-RAF-MAPK/ERK，JNK，cAMP/PKA，PKCand RTK/PI3K/AKT/mT0R)信号通路调控细胞的生长、增殖和死亡。姜黄素能抑制蛋白激酶信号通路，诱导癌细胞凋亡。
[0015]4转录因子 [0016]姜黄素下调转录因子ER的活性，阻止乳腺癌细胞的增殖，并且减少化疗药物的毒副作用。姜黄素抑制转录因子JAK2mRNA的表达，诱导慢性淋巴癌细胞凋亡。
[0017]5癌蛋白
[0018]姜黄素下调Src癌蛋白的活性，从而抑制癌细胞的生长和转移。姜黄素下调Bcr-Abl癌蛋白，抑制淋巴癌细胞的增殖。
[0019]6细胞成分
[0020]姜黄素能直接跟DNA和RNA结合，抑制DNA和RNA，导致癌细胞的死亡。DNA拓扑异构酶是DNA保持螺旋结构的关键酶，姜黄素能够抑制DNA拓扑异构酶I和II，引发癌细胞的凋亡程序。
[0021]由于姜黄素可以多靶点作用于肿瘤细胞，所以姜黄素可作为抗突变剂和抗癌剂，美国国立肿瘤研究所已将其列为第3代癌化学预防药，姜黄素的抗肿瘤作用已经成为国内外学者的研究热点。
[0022]姜黄素还可以逆转人宫颈癌耐药细胞、大鼠肝癌细胞、人胃癌耐药细胞以及人膀胱癌耐药细胞等的耐药性，是一个很有开发潜力的P-糖蛋白抑制剂。且姜黄素毒性低，药源充足。动物实验及人体试验表明，姜黄素安全性高，I期临床研究人体口服日剂量可达12g，姜黄素Sg连服3个月无毒。姜黄素的安全性及其广泛的药理活性，使其成为一个很有开发前景的天然化合物，受到国内外广泛的关注。
[0023]但姜黄素在体内生物利用度低，在肠道吸收过程中发生转化，极少以原形吸收入血。姜黄素在人和鼠肠肝中的代谢，它在肠、肝的线粒体中转化为姜黄素-葡萄糖醛酸苷，而在细胞质中代谢为硫酸化姜黄素、四氢姜素以及六氢姜黄素，其代谢产物的活性明显低于原形药。姜黄素的血药浓度及生物利用度很低，主要是因为其吸收差、易被代谢并迅速从体内消除，使血药及组织浓度很低，在动物体内实验常达不到预期的理想效果，这已成为限制其临床应用的主要因素。
[0024]胡椒碱(piperine)属于桂皮酞胺类生物碱，在自然界中存在广泛，尤其在胡椒科植物中大量存在。胡椒碱(piperine)作为胡椒科植物中的主要活性成分，目前已发现其具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、免疫调节等作用。在众多研究中，胡椒碱作为生物利用度增强剂的应用越来越引起人们的重视，是一个成熟的葡糖醛酸基转移酶抑制剂。除了姜黄素，胡椒碱还能够提高卡马西平、苯妥因、茶碱、普奈洛尔、奈韦拉平、阿莫西林等众多药物在人体或动物体内的生物利用度。胡椒碱可通过改变膜动力学、膜通透性以及诱导与细胞骨架功能相关的蛋白质的合成，使小肠粘膜吸收面增加，药物吸收增加。这是由于胡椒碱结构非极性部位与蛋白类脂部分和疏水部分的相互作用，减少了膜脂作为酶蛋白的支撑，进而改变了酶的构象。胡椒碱对各种单氧化酶的抑制作用没有选择性，低剂量的胡椒碱对大鼠肝脏芳香基羟化酶(AHH)、UDP-葡糖醛酸基转移酶等具有强效抑制作用。胡椒碱对胃酸分泌具有剂量依赖性刺激作用。胡椒碱的这种延缓胃排空作用与其生物利用度增强活性密切相关，可以使药物在胃肠停留时间延长，与胃肠道吸收面的接触时间增加，吸收提高。胡椒碱可增加大鼠胆汁的分泌量，其中黑胡椒低剂量组刺激分泌作用持久，高剂量组对胆汁分泌的刺激作用更明显。胆汁中的胆酸盐具有表面活性作用，可增加难溶性药物的溶解度，促进吸收。
[0025]灰树花(Grifola frondosa)是食、药兼用蕈菌,属担子菌亚门层菌纲非裙菌目多孔菌科树花菌属。灰树花用热水提取，水溶性多糖用80%乙醇沉淀，沉淀再用醋酸和碱处理，得到酸不溶性和碱溶性部分，此部分过葡聚糖凝胶柱，得到脱除蛋白的部分即为D-fraction,构型为带1，3分支的(6-1, 6葡聚糖。综合近年日本、加拿大、意大利、英国等国家对灰树花药理作用的研究表明；灰树花具有抗癌和免疫增强作用，并具有抗高血压，降低血糖和血脂的作用和抗各类肝炎病毒的作用。
【发明内容】
[0026]研究证实姜黄素能够靶向肿瘤干细胞，抑制肿瘤干细胞，胡椒碱有抗癌作用，并且可以提高姜黄素的生物利用度和抗癌活性，灰树花D-fraction和有机硒也具有较强的抗癌活性。
[0027]本发明提供了一种组合物，该组合物通过将姜黄素提取物、胡椒碱提取物、灰树花提取物D-组分和有机硒四种有效成分复配制得，其中灰树花提取物D-组分主要为带1，3分支的3-1，6葡聚糖。该组合物中胡椒碱提高了姜黄素的生物利用度和抗癌活性，且辅以灰树花D-fraction和有机硒的抗癌功效，靶向肿瘤干细胞，可杀灭肿瘤干细胞，提高化疗药物的疗效，防止肿瘤的复发和转移。
[0028]本发明的组合物，通过将姜黄素提取物、胡椒碱提取物、灰树花提取物D-组分和有机硒四种有效成分复配制得；其中所述姜黄提取物，其总姜黄素含量为95% ;所述黑胡椒提取物，其胡椒碱含量为90%，所述灰树花提取物D-组分，其带1，3分支的P -1, 6葡聚糖含量为30%。
[0029]本发明的组合物，已经开发为健康食品，商品名称为DRCELL。
[0030]本发明的组合物，其中，该组合物的四种有效成分的重量配比为:
[0031]
【权利要求】
1.一种抑制肿瘤干细胞的组合物，其特征在于，该组合物通过将姜黄素提取物、胡椒碱提取物、灰树花提取物D-组分和有机硒四种有效成分复配制得。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述姜黄提取物，其总姜黄素含量为95% ;所述黑胡椒提取物，其胡椒碱含量为90%，所述灰树花提取物D-组分，其带1，3分支的^ -1, 6葡聚糖含量为30%。
3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，该组合物的四种有效成分的重量配比为:
4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，该组合物的四种有效成分的重量配比为:
5.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，所述姜黄提取物或所述黑胡椒提取物选用优质原料，采用超临界CO2萃取精制而成。
6.根据权利要求5所述的组合物，其特征在于，所述姜黄提取物中总姜黄素含量达到95%，所述黑胡椒提取物中胡椒碱含量达90%。
7.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，所述灰树花提取物D-组分是通过将灰树花用水提取后，乙醇沉淀提取物及凝胶柱层析制得，该灰树花提取物的D-组分中1，3分支的P -1, 6葡聚糖含量达30%。
8.根据权利要求6所述的组合物，其特征在于，所述姜黄提取物的制备方法是，先将姜黄粉碎到20目左右，放入超临界萃取罐中，调节温度45-55°C，萃取压力35-40MPa，萃取3-5h，放出姜黄油，姜黄油用作开发其他产品。继续萃取，调节温度45-55°C，萃取压力35-40MPa，加入萃取夹带剂95%食用乙醇20_30%，萃取4_6h。通过控制萃取温度、萃取压力和萃取夹带剂加入量，控制萃取得到姜黄提取物的姜黄素组分构成。
9.根据权利要求8所述的组合物，其特征在于，所述姜黄提取物采用HPLC检测，其组分构成为姜黄素89-91%，去甲氧基姜黄素6-9%，双去甲氧基姜黄素1-3%。
10.根据权利要求1-9任意一项所述的组合物，其特征在于，所述的组合物制成片剂、胶囊或口服液。
11.根据权利要求1-10任意一项所述的组合物在用于制备抗癌药物或保健食品中的用途。
【文档编号】A61P35/00GK103565819SQ201310492017
【公开日】2014年2月12日 申请日期:2013年10月18日 优先权日:2013年10月18日
【发明者】董淮海, 叶甫云 申请人:上海科爱生物技术有限公司