一种不含表面活性剂的水包油乳液及其用途
【专利摘要】本发明公开了一种不含表面活性剂的水包油乳液，所述乳液包括可代谢的油相、水相以及分散在水相中的具有生物相容性的油水两亲性的固体颗粒，其中，所述油相包括角鲨烯或/和母育酚，所述水相为纯化水、注射用水、甘油水溶液、缓冲盐水溶液或临床上可用输液中的任意一种或者至少两种的组合，所述固体颗粒的平均粒径在纳米到微米级别。本发明提供的乳液可作为疫苗佐剂、药物递送或缓控释载体应用，乳液性质可控调控，所得乳液稳定，避免了表面活性剂的使用，能够降低对人体的毒害和环境污染。
【专利说明】一种不含表面活性剂的水包油乳液及其用途
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种生物制品，特别是涉及一种可以用于人或其他动物体内的水包油乳液，特别重要的是本发明所述水包油乳液不含表面活性剂，采用固体颗粒作为乳液稳定剂，可作为疫苗佐剂或药物递送或缓控释载体，属于生物医药【技术领域】。
【背景技术】
[0002]随着现代生物技术的迅速发展和社会对于减毒疫苗所导致的不良反应的日益重视，裂解疫苗、重组亚单位疫苗、抗独特型抗体疫苗、核酸疫苗及合成肽疫苗等得到开发。这些疫苗抗原纯度高，相对分子量小，疫苗的不良反应低，然而这些抗原的免疫原性和免疫保护性普遍较弱，为了提高抗原的有效性，必须在抗原中添加佐剂以增强它们诱导免疫反应的能力。
[0003]佐剂与抗原的同时应用或协同应用(在较短的间隔时间内(通常为I小时或更短时间)先后接种到同一或邻近部位)，能增强机体针对抗原的免疫应答能力，或改变免疫反应类型。其功能主要包括:在使用部位募集免疫细胞和免疫分子，增强免疫应答；增强疫苗抗原传递；增进免疫接触；增强弱抗原的免疫原性和免疫记忆，如高度纯化的抗原或重组抗原；减少抗原接种剂量和接种次数；促进疫苗在免疫应答能力弱的群体中的免疫效果；加快免疫应答的速度和延长持续时间；改变抗原的构型；增加抗体类型的多样性，实现对易变异病原体的交叉防护(如流感病毒)；改变体液抗体的种类、IgG亚类和抗体的亲和性，以及激发细胞免疫和黏膜免疫效应等。
[0004]铝佐剂是目前普遍被批准用于人类疫苗的主要佐剂，自1926年Glenny首先应用铝盐吸附白喉类毒素开始，至今己有磷酸铝和氢氧化铝两种铝盐佐剂广泛应用于多种疫苗。但是铝佐剂以体液免疫应答为主，不能诱导细胞免疫和黏膜免疫应答效应，特别是近几年发现多次接种含铝佐剂的疫苗可能出现免疫抑制和累积中毒而使其使用，并且铝佐剂对一些疫苗抗原的免疫增强效果不佳，注射部位偶有严重的局部反应，包括出现红斑、皮下结节、接触性过敏和肉芽肿性炎症，因此寻找新的疫苗佐剂成为疫苗学的重大现实问题。
[0005]近年来油乳佐剂备受关注，多家企业或科研机构开展了油乳佐剂方面的研究，其中部分上市及临床的油乳佐剂如表1所示。
[0006]表1部分上市及临床的油乳佐剂
[0007]
【权利要求】
1.一种不含表面活性剂的水包油乳液，其特征在于，所述乳液包括可代谢的油相、水相以及分散在水相中的具有生物相容性的油水两亲性的固体颗粒，其中，所述油相包括角鲨烯或/和母育酚,所述水相为纯化水、注射用水、甘油水溶液、缓冲盐水溶液或临床上可用输液中的任意一种或者至少两种的组合，所述固体颗粒的平均粒径在纳米到微米级别。
2.如权利要求1所述的水包油乳液，其特征在于，所述母育酚是α-生育酚或其衍生物； 优选地，所述油相还包括任何对受体无毒并可通过代谢作用转化的植物油、鱼油、动物油或合成油，优选自大豆油、米格列醇、中链油、鱼油、维生素Ε、维生素E琥珀酸酯、维生素E醋酸酯、红花油、玉米油、沙棘油、亚麻子油、花生油、茶油、葵花籽油、杏仁油、薏仁油、月见草油、芝麻油、棉籽油、蓖麻油、低芥酸菜子油、油酸乙酯、油酸、亚油酸乙酯、月桂酸异丙酯、内豆蘧酸异丙酯、丁酸乙酯、乳酸乙酯、辛酸甘油三酯或癸酸甘油三酯中的任意一种或者至少两种的组合。
3.如权利要求1或2所述的水包油乳液，其特征在于，所述水相为注射用水、磷酸盐缓冲液、柠檬酸缓冲液或Tris缓冲液中的任意一种或者至少两种的组合； 优选地，所述磷酸盐缓冲液、柠檬酸缓冲液或Tris缓冲液的pH值独立地为5.0~8.1，优选为6.0~8.0。
4.如权利要求1-3之一所述的水包油乳液，其特征在于，所述水相中含有单价或多价抗原，所述抗原选自人类抗原、非人类动物抗原、植物抗原、细菌抗原、真菌抗原、病毒抗原、寄生虫抗原或肿 瘤抗原中的任意一种或者至少两种的组合； 优选地，所述抗原来自鸡胚培养、细胞培养、携带者体液、器官或组织中纯化分离所得、重组基因表达或化学合成所得，优选所述抗原选自减毒疫苗、灭活疫苗、裂解疫苗、亚单位疫苗、多糖结合疫苗、重组疫苗或DNA疫苗等中的任意一种或者至少两种的组合； 优选地，所述抗原为包含来自至少三种流感季节性株的病毒抗原或抗原性制剂，并且任选包含至少一种与大流行爆发相关或具有与大流行爆发相关的潜能的流感病毒株的病毒抗原或抗原性制剂，其中，与大流行爆发相关或具有与大流行爆发相关的潜能的流感病毒株选自: 人类流感病毒中 A、B、C 型，包含 HlNl，H2N2，H3N2，H5N1，H7N7，H1N2，H9N2，H7N3，H10N7 ; 猪型流感病毒 HlNl，H1N2, H3N1, H3N2 ； 狗或马型流感病毒H7N7，H3N8 ；
或禽流感病毒 H5N1, H7N2, H1N7, H7N3, H13N6, H5N9, H11N6, H3N8, H9N2, H5N2, H4N8,H10N7, H2N2, H8N4, H14N5, H6N5和H12N5中的一种或一种以上的流感病毒组合； 优选地，所述水相中还包括药用辅助物质，优选PH调节剂或/和缓冲剂，进一步优选自乙酸钠、乳酸钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙、人血清清蛋白、必需氨基酸、非必需氨基酸、L-精氨酸盐酸盐、蔗糖、无水D-海藻糖、甘露醇、甘露糖、淀粉或明胶中的任意一种或者至少两种的组合。
5.如权利要求1-4之一所述的水包油乳液，其特征在于，所述固体颗粒选自铝盐、钙盐、多糖、多糖衍生物或高分子聚合物中的任意一种或者至少两种的混合物； 优选地，所述铝盐为氢氧化铝或/和磷酸铝； 优选地，所述钙盐为磷酸钙或/和碳酸钙；优选地，所述多糖选自壳聚糖、海藻酸、明胶、淀粉、葡聚糖、魔芋葡甘聚糖、肝素、果胶类多糖、透明质酸、硫酸软骨素、壳聚糖盐、海藻酸盐、明胶盐、葡萄糖盐、魔芋葡甘聚糖盐、肝素盐、果胶类多糖盐、透明质酸盐或硫酸软骨素盐中的任意一种或者至少两种的组合，优选壳聚糖、海藻酸盐、明胶、淀粉或葡聚糖中的任意一种或者至少两种的组合； 优选地，所述多糖衍生物为对多糖进行季铵化、羧甲基化、羟基化、烷基化、酰基化、磺化、硝化或卤化等衍生反应后所得的多糖衍生物，优选为对壳聚糖、海藻酸、明胶、淀粉或葡聚糖中的任意一种或者至少两种的组合进行季铵化、羧甲基化、羟基化、烷基化、酰基化、磺化、硝化或卤化等衍生反应后所得的多糖衍生物； 优选地，所述高分子聚合物包括聚(α-羟酸)、聚羟基丁酸、聚己酸内酯、聚原酸酯、聚酐或聚氰基丙烯酸酯及其共聚物，所述共聚物的共聚单体优选聚(α -羟酸)、聚羟基丁酸、聚己酸内酯、聚原酸酯、聚酐或聚氰基丙烯酸酯中的任意一种或者至少两种的组合。 优选地，所述高分子聚合物是聚(α-羟酸)及其共聚物，优选自聚(L-丙交酯)、聚(D, L-丙交酯)或聚(丙交酯-共-乙交酯)，最优选聚(丙交酯-共-乙交酯)； 优选地，在聚(丙交酯-共-乙交酯)中，丙交酯与乙交酯的链段摩尔比为10:90-90:10 ； 优选地，所述固体颗粒选自氢氧化铝、磷酸铝、磷酸钙、碳酸钙、壳聚糖、海藻酸盐、聚乳酸、聚乳酸-羟基乙酸共聚物或聚乙二醇-乳酸共聚物中的任意一种或者至少两种的混合物，进一步优选自氢氧化铝、磷酸铝、磷酸钙、聚乳酸、聚乳酸-羟基乙酸共聚物或聚乙二醇-乳酸共聚物中的任意一种或者至少两种的混合物，最优选聚乳酸-羟基乙酸共聚物。
6.如权利要求1-5之 一所述的水包油乳液，其特征在于，对固体颗粒的表面进行亲水修饰、疏水修饰、覆层或接枝改性； 优选地，所述固体颗粒的表面或内部吸附、偶联或包埋靶向物质、荧光标记物、同位素标记物、环境响应物质、细胞因子、抗体或免疫调节剂； 优选地,所述环境响应物质选自带有pH敏感、热敏感或生物活性物质敏感的基团； 优选地，所述固体颗粒的表面或内部吸附、偶联或包埋抗原； 优选地，所述固体颗粒的平均粒径在Inm~10 μ m之间,优选IOnm~5 μ m之间； 优选地，所述固体颗粒粒径分布系数span值低于1.0 ； 优选地，固体颗粒在水相中的质量浓度在0.1~20wt%,优选为0.5~IOwt进一步优选为I~8wt%。
7.如权利要求1-6之一所述的水包油乳液，其特征在于，所述乳液包括可代谢的油相、水相以及分散在水相中的具有生物相容性的油水两亲性的固体颗粒，其中，所述油相为角鲨烯，所述水相为纯化水、注射用水、甘油水溶液、缓冲盐水溶液或临床上可用输液中的任意一种或者至少两种的组合，所述固体颗粒为PLGA，其平均粒径在纳米到微米级别； 优选地，所述水包油乳液的油水两相体积比为1:100~9:1，优选为1:50~1:2 ; 优选地，所述水包油乳液中乳滴的平均粒径在50nm~300 μ m之间，优选在IOOnm~100 μ m之间； 优选地，所述水包油乳液中还包含药用添加剂，所述药用添加剂包括稀释剂、稳定剂或防腐剂中的任意一种或者至少两种的组合。
8.一种不含表面活性剂的免疫原性组合物，其特征在于，其包含:(I)抗原或抗原组合物，和(2)佐剂组合物,所述佐剂组合物由如权利要求1-7之一所述的水包油乳液组成。
9.一种如权利要求1-7之一所述的水包油乳液作为疫苗佐剂、药物递送或缓控释载体的用途。
10.如权利要求9所述的用途，其特征在于，免疫接种或给药方式包括静脉注射、脊椎腔注射、肌内注射、皮下注射、皮内注射、经呼吸道喷入或吸入、腹腔注射、经鼻给药、经眼给药、经口给药、直肠给药、阴道给药、局部给药或透皮给药。
【文档编号】A61K47/44GK104013955SQ201410272743
【公开日】2014年9月3日 申请日期:2014年6月18日 优先权日:2014年6月18日
【发明者】马光辉, 吴颉, 杨柳青, 夏宇飞, 齐峰, 范清泽 申请人:中国科学院过程工程研究所