一种荆芥总黄酮的制备方法及其在抗肿瘤中的应用的制作方法
【专利摘要】一种荆芥总黄酮的制备方法，其特征在于：取荆芥干燥地上部分及其花穗，去除杂质，粉碎过10目筛，制成粗粉，烘干，加入5-40倍量的浓度为10-95%的乙醇溶液，加热回流提取1-3次，每次0.5-3小时，过滤，合并滤液，回收乙醇至无醇味， 减压浓缩至室温下 测相对密度为 0.8-1.3 ，真空干燥，即得荆芥总黄酮提取物粗品。进一步纯化能获得高纯度抗癌药物精品。本发明方法只需一定浓度的乙醇溶液加热回流提取，使用大孔吸附树脂柱纯化，产品稳定性和均一性良好，可为应用到大规模工业生产提供有利基础，可望开发为以荆芥总黄酮纯化物为原料的具有广泛临床使用价值和商业开发价值的抗癌新药。
【专利说明】一种荆芥总黄酮的制备方法及其在抗肿瘤中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药领域，具体而言是涉及从中药荆芥中经过提取、富集，获得荆芥总 黄酮的制备方法及其抗癌中的应用。
【背景技术】
[0002] 肿瘤是严重威胁人类健康的一类常见疾病，是人类健康的三大杀手之一，寻找有 效的抗癌药物和方法，是世界医学面临的重要课题。中药是祖国医学用来防治疾病的有力 武器，与化学合成药物相比，中药除了具有取材方便、价格低廉和毒副作用小等优点外，更 重要的是，在减轻临床症状，提高生存质量，防止复发转移，延长生存期，预防肿瘤，提高患 者免疫力，增强放、化疗敏感性，减轻放、化疗不良反应等很多方面发挥着重要作用。同时， 随着社会的进步，生产力的发展，现代人越来越把注意力从化合成药转向天然药，希望从天 然药物中开发出更为安全有效的新药以替代前者，从而减少药源疾病的发生。因此，发展中 草药不仅传承了中华民族千百年的精华，也具有广大的市场前景及经济效益。
[0003] 荆芥（穗）为唇形科植物荆芥Schizonepeta tenuifolia Briq.的干燥地上部分 (干燥花穗）。全国大部分地区出产，价格低廉，应用广泛。中医认为，荆芥（穗）味辛，微 苦，性微湿，归肺、肝经，具有解表散风，透疹，消疮等功效，用于感冒，头痛，麻疹，风疹，疮疡 初起。现代临床研究表明荆芥（穗）不仅具有解热镇痛、抗炎抗菌的功效，还有镇静抗惊厥、 增强免疫功能、抗肿瘤等作用。荆芥（穗）中含有多种有效成分，包括挥发油、黄酮、单萜、 三萜酸、有机酸等。目前，针对荆芥（穗）抗肿瘤作用的研究以挥发油报道居多，而以黄酮 类作为有效部位进行的研究则未见报道。本实验经前期药效学实验证明，黄酮为荆芥（穗） 抗肿瘤的有效物质组分，具有较高的开发价值，故对其进行进一步的提取纯化工艺考察，优 选最佳工艺条件，以期为荆芥（穗）总黄酮组分的进一步药理药效研究奠定基础。
[0004] 根据近年来的文献报道，现有工艺技术制备荆芥（穗）总黄酮存在纯度不高、工艺 稳定性差等问题，这必然影响阐明荆芥（穗）总黄酮的成分组成及药效活性的检测，也不利 于大规模工业生产及临床应用，因此有必要对荆芥（穗）总黄酮的纯化方法进行研究。本 实验通过优选荆芥（穗）总黄酮最佳提取工艺，再对其纯化工艺进行研究，纯化方法可使 总黄酮富集物纯度达到90%以上，较为理想。这不仅有利于提高荆芥总黄酮纯度及其工艺 的稳定性，也有利于阐明药效物质组分及其临床作用机理，并可应用到新药的开发中。
[0005] 根据文献调研，目前对荆芥（穗）黄酮的研究主要以其抗流感病毒作用居多，而其 抗肿瘤作用研究尚未见报道。本发明通过意外抗肿瘤试验证明了总黄酮亦有明显的抗肿瘤 作用，为以后投入抗肿瘤新药的开发奠定基础。
【发明内容】
[0006] 本发明目的是提供一种荆芥总黄酮的制备方法，及其作为抗癌物质的应用。
[0007] 采用的技术方案是：
[0008] 荆芥为唇形科植物中药材，（Schizonepeta tenuifolia Briq.)。本发明是采用荆 芥的干燥地上部分及干燥花穗作为原料，提取荆芥的有效成分的提取纯化物，有效成分为 总黄酮类，具有抗肿瘤功效。具体是：
[0009] -种荆芥总黄酮的制备方法，其特征在于：
[0010] 1、取荆芥干燥地上部分及其花穗，去除杂质，粉碎过10目筛，制成粗粉，烘干，力口 入5-40倍量的浓度为10-95%的乙醇溶液，加热回流提取1-3次，每次0. 5-3小时，过滤，合 并滤液，回收乙醇至无醇味，减压浓缩至室温下测相对密度为〇. 8-1. 3,真空干燥，即得荆芥 总黄酮提取物粗品。
[0011] 2、对荆芥总黄酮提取物粗品加水稀释，稀释成0. 1-0. 4g生药量/ml的药液，上 HPD-400大孔树脂柱，药材/湿树脂比上柱量为0. 5-1. 5g/ml，先用水冲洗1-5BV柱体积 除杂，再用浓度为30-90 %的乙醇溶液洗脱1-20BV柱体积，浓缩，得浓缩液，再用水稀释成 0. 1-0. 4g生药/ml的药液，以药液/湿树脂为0. 5-1. 5g/ml上柱，用1-5BV水洗除杂，再用 1-20BV，浓缩为30-90%的乙醇洗脱，回收乙醇至无醇味，即得荆芥总黄酮提取物精品，荆芥 总黄酮纯度>90%。
[0012] 本发明的荆芥总黄酮提取物能制备多种剂型，并可添加药学上可接受的辅剂及载 体应用于临床抗癌新药的研发。
[0013] 经临床实验证明本发明的荆芥黄酮提取物具有良好的抗癌效果。
[0014] 本发明通过药理药效实验证明，荆芥（穗）总黄酮纯化物随着纯度的上升，抗肿瘤 疗效越来越显著，证明荆芥（穗）总黄酮纯化物可作为一种有效的抗癌药物。
[0015] 本发明的制备工艺方法简单、药物有效成分提取率高、疗效显著、准确可靠、能更 全面地保障中药的疗效和质量，并且与原始直接使用药材水煎液相比，在相同的疗效下，此 制备方法所获得的纯化物具有服用剂量小的优点。
[0016] 本发明的发明人根据临床的需要将荆芥（穗）总黄酮富集物制备为各个剂型而可 添加药学上可接受的辅剂及载体供临床选择应用。 具体实施方案：
[0017] 实施例一
[0018] 一种荆芥总黄酮的制备方法，包括下述工艺步骤：
[0019] 取荆芥（穗）药材干燥至恒重，粉碎过10目筛，精密称取5. 0g，采用常规提取条 件，按下述方法进行提取试验，各方法平行两份。
[0020] 乙醇超声提取法加75%乙醇IOOmL于样品中，室温超声提取lh，滤过，滤渣加 100mL75%乙醇再超声提取lh，滤过，合并滤液，浓缩，真空干燥至恒定质量。
[0021] 乙醇回流提取法加75 %乙醇IOOmL于样品中，回流提取lh，滤过，滤渣加 100mL75%乙醇再回流提取lh，滤过，合并滤液，浓缩，真空干燥至恒定质量。
[0022] 水回流提取法加 IOOmL水于样品中，回流提取lh，滤过，滤渣加 IOOmL水再回流提 取lh，滤过，合并滤液，浓缩，真空干燥至恒定质量。
[0023] 测定结果结果见表1。
[0024] 表1荆芥（穗）黄酮不同提取方法的综合评价
[0025]
【权利要求】
1. 一种荆芥总黄酮的制备方法，其特征在于： (1 )、取荆芥干燥地上部分及其花穗，去除杂质，粉碎过10目筛，制成粗粉，烘干，加入 5-40倍量的浓度为10-95%的乙醇溶液，加热回流提取1-3次，每次0. 5-3小时，过滤，合并 滤液，回收乙醇至无醇味，减压浓缩至室温下测相对密度为〇. 8-1. 3,真空干燥，即得荆芥总 黄酮提取物粗品。
2. 根据权利要求1所述的一种荆芥总黄酮的制备方法，其特征是对所制得的荆芥总黄 酮提取物粗品加水稀释，稀释成〇. 1-0. 4g生药量/ml的药液，上HPD-400大孔树脂柱，药材 /湿树脂比上柱量为0. 5-1. 5g/ml，先用水冲洗1-5BV柱体积除杂，再用浓度为30-90%的乙 醇溶液洗脱1-20BV柱体积，浓缩，得浓缩液，再用水稀释成0. 1-0. 4g生药/ml的药液，以药 液/湿树脂为〇. 5-1. 5g/ml上柱，用1-5BV水洗除杂，再用1-20BV，浓缩为30-90%的乙醇洗 脱，回收乙醇至无醇味，即得荆芥总黄酮提取物精品，荆芥总黄酮纯度>90%。
3. 根据权利要求1所述的一种荆芥总黄酮的制备方法，其特征在于所述乙醇浓度为 75%，加入量为20倍生药材量，回流提取3次，每次提取lh。
4. 根据权利要求2所述的一种荆芥总黄酮的制备方法，其特征在于：上样液浓度为 0. lg生药量/ml，PH值为5,洗脱用乙醇浓度为70%。
5. 根据权利要求1或2所述的一种荆芥总黄酮的制备方法，其特征在于制得的总黄酮 对Caco - 2肿瘤细胞具有明显的抑制作用，能制成多种剂型的抗癌药物。
【文档编号】A61P35/00GK104352562SQ201410397261
【公开日】2015年2月18日 申请日期:2014年8月14日 优先权日:2014年8月14日
【发明者】孟宪生, 包永睿, 王帅, 马聪 申请人:辽宁中医药大学