兽用黄芪制剂及其制备方法
【专利摘要】兽用黄芪制剂及其制备方法，属于植物中药有效成分提取及应用【技术领域】，所述药物中含有黄芪多糖和黄芪多肽两种活性成分，其剂型为注射液、口服液或者粉剂。其制备方法为：综合利用酶水解提取技术有效的从黄芪原料中提取到了高活性的黄芪多肽和高含量、高纯度的黄芪多糖并进行有效配置成黄芪制剂，解决了综合提取制备技术难题，有利于对黄芪多糖和黄芪多肽的进一步系统、深入研究，大大提高了得率和纯度，减少资源浪费，降低成本，有利于产业化生产。
【专利说明】兽用黄芪制剂及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于植物中药有效成分提取及应用【技术领域】，具体涉及一种兽用黄芪制剂 及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 黄芪是豆科植物，内蒙(膜荚）黄芪的干燥根中含有多糖、黄酮类化合物、生物碱 类、皂苷类、多肽、氨基酸、微量元素等众多的生物活性物质，具有补气固表、利尿脱毒、排 脓、敛疮生肌的功能。其有效成分中黄芪多糖具有提高机体免疫力、抗菌、抗病毒、抗衰老、 抗肿瘤、抗突变、降血脂、降血糖以及改善动物生产性能等功能，同时由于它自身对细胞毒 性极小，对正常细胞影响很小，因此将多糖作为药物对于治疗多种免疫缺损疾病和自身免 疫疾病有显著效果。
[0003] 多肽是蛋白质的初级形式，几乎涉及动物机体神经、生长、生殖等生命的全过程， 是具有调节机体代谢、维持生命活动等功能的活性物质。随着医学、药学、医学免疫学以及 分子药理学理论及技术的不断发展，人们逐渐认识到中药材中所含的生物活性多肽在动物 机体中所发挥的作用，如抗菌，降低胆固醇，抗氧化，促进矿物质吸收，提高生物利用度，增 强免疫等等。
[0004] 传统中药往往侧重动物类中药所含多肽和蛋白质的研究，而忽视了植物类中药材 所含的生物活性多肽和蛋白质的提取及应用。传统植物中药提取工艺(如蒸煮法、浸渍法、 渗滤法、回流法等）存在反应条件恶劣、某些有效成分提取率不高(如黄芪多肽)、杂质清除 率低等问题，这些问题制约着中药所含生物活性多肽的开发和研究。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种兽用黄芪制剂，提供其制备方法是本发明的另一发明 目的。
[0006] 基于上述目的，本发明采取了如下技术方案：兽用黄芪制剂，所述黄芪制剂的活性 成分为黄芪多糖和黄芪多肽。
[0007] 所述活性成分的重量组成为：黄芪多糖10?60份、黄芪多肽I. 0?12. 0份。
[0008] 所述活性成分的重量组成为：黄芪多糖10?20份、黄芪多肽I. 0?4. 0份，或是 黄芪多糖20?40份、4. 0?8. 0份，或是黄芪多糖40?60份、黄芪多肽8. 0?12. 0份。 [0009] 所述黄芪多肽的分子量彡lOKDa。
[0010] 所述制剂为注射液、口服液或者粉剂。
[0011] 所述兽用黄芪制剂的制备方法，包括以下步骤： 1) 黄芪粉碎后加10?20倍重量的水，并加入果胶酶和纤维素酶进行水解后，酶灭活， 固液分离，分别收集液相分离物和固相分离物； 2) 对步骤1)所得液相分离物进行醇沉，分别收集上清液和沉淀物； 3) 合并步骤2)所得醇沉沉淀物与步骤1)的固相分离物并加水分散，加入中性蛋白酶 进行进一步水解，水解后，酶灭活，固液分离，分别收集液相分离物和固相分离物； 4) 合并步骤2)的醇沉上清液和步骤3)所得的液相分离物，醇沉，分别收集上清液和沉 淀物； 5) 对步骤4)所得上清液进行膜分离、浓缩得到黄芪多肽溶液；或进一步干燥成黄芪多 肽粉末； 6) 将步骤4)所得沉淀物与步骤3)所得固相分离物合并，加水分散，除去不溶物，经氧 化脱色处理后，加入乙酸钾后冷藏8?12h，收集沉淀物，精制，得到黄芪多糖。
[0012] 7)取步骤5)所得黄芪多肽浓缩液和步骤6)所得黄芪多糖配制成液体制剂，或取 步骤5)所得黄芪多肽粉末和步骤6)所得黄芪多糖配成粉剂。
[0013] 步骤1)中所述果胶酶的用量为黄芪重量的0. 05?0. 2wt%，所述纤维素酶为 Onozuka型纤维素酶，其用量为黄芪重量的0. 5?2wt%，水解温度为40?55°C，水解pH为 4. 0?6. 5,水解时间为1?2h。
[0014] 步骤3)中所述中性蛋白酶为A. S1398中性蛋白酶，其加入量为步骤2)所得醇沉 沉淀物与步骤1)的固相分离物总重的0. 05?0. lwt%，酶解温度为33?37°C，pH为6. 0? 8. 0,酶解时间1?2h。
[0015] 步骤5)中所述膜分离控制黄芪多肽的分子量< lOKDa。
[0016] 步骤6)中所述精制操作为：将收集到的沉淀物经去离子水洗涤，配成20?35%水 溶液，再经透析、醇沉、洗涤处理，制得精制黄芪多糖浓溶液；或进一步经喷雾干燥制得黄芪 多糖粉，所述精制操作中醇沉次数至少为三次。
[0017] 本发明具有以下有益效果： 1、本发明提供了一种药效成分配比合理的黄芪药物制剂，它不仅含有足量的黄芪多糖 而且含有适当含量、高生物活性的黄芪多肽活性成分。该药物制剂对于提升家禽(鸡、鸭、鹅 等）和家畜(猪、牛、羊等）的抗体水平和免疫器官指数，提高靶动物生长性能，以及某些常见 病毒病的预防和辅助治疗方面均具有较好的作用，其治疗效果优于传统的黄芪多糖提取技 术。
[0018] 2、本发明工艺首先采用酶破壁技术对黄芪多肽进行水解，再采用中性蛋白酶进一 步水解，保证了黄芪多肽较高的提取率以及高纯度的黄芪多糖的制备；整个水解过程可在 全自动水解反应器中进行，水解条件容易控制。反应条件温和，在保证黄芪多糖的提取前提 下，能够实现不破坏氨基酸结构和其他营养成分，保留了有效成分黄芪多肽。
[0019] 3、本发明工艺提取的黄芪多糖和黄芪多肽的得率均很高，其中黄芪多糖的得率达 到10. 06%，是传统水提醇沉法的5倍左右；总蛋白的得率在0. 105%以上，远远高于传统水 提醇沉法，其中分子量< IOKDa的多肽占总蛋白的85%以上，其得率最高可达0. 125%，远远 高于传统水提醇沉法所得多肽。
[0020] 4、本发明工艺解决了综合提取制备技术难题，有利于对黄芪多糖和黄芪多肽的进 一步系统、深入研究，大大提高了得率和纯度，减少资源浪费，降低成本，有利于产业化生 产。
[0021] 5、本发明制剂的剂型可以为注射液、口服液或者粉剂，使用或者存储都比较方便。
【专利附图】
【附图说明】
[0022] 图1是实施例1-9中注射液的工艺流程图。
[0023]
【具体实施方式】 下面结合具体实施例进一步说明本发明。
[0024] 实施例1-7 兽用黄芪制剂，其活性成分为黄芪多糖和黄芪多肽；剂型为注射液，每ml注射液中活 性成分的重量组成见表1所示。
[0025] 表1含有不同浓度黄芪多糖和黄芪多肽的兽用黄芪注射液(实施例1-7)
【权利要求】
1. 兽用黄芪制剂，其特征在于，所述黄芪制剂的活性成分为黄芪多糖和黄芪多肽。
2. 如权利要求1中所述的兽用黄芪制剂，其特征在于，所述活性成分的重量组成为：黄 芪多糖10?60份、黄芪多肽1. 0?12. 0份。
3. 如权利要求2所述的兽用黄芪制剂，其特征在于，所述活性成分的重量组成为：黄芪 多糖10?20份、黄芪多肽1. 0?4. 0份，或是黄芪多糖20?40份、4. 0?8. 0份，或是黄 芪多糖40?60份、黄芪多肽8. 0?12. 0份。
4. 如权利要求1-3任一所述的兽用黄芪制剂，其特征在于，所述黄芪多肽的分子量 彡 lOKDa。
5. 如权利要求4所述的兽用黄芪制剂，其特征在于，所述制剂为注射液、口服液或者粉 剂。
6. 权利要求1或5所述兽用黄芪制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： 1) 黄芪粉碎后加10?20倍重量的水，并加入果胶酶和纤维素酶进行水解后，酶灭活， 固液分离，分别收集液相分离物和固相分离物； 2) 对步骤1)所得液相分离物进行醇沉，分别收集上清液和沉淀物； 3) 合并步骤2)所得醇沉沉淀物与步骤1)的固相分离物并加水分散，加入中性蛋白酶 进行进一步水解，水解后，酶灭活，固液分离，分别收集液相分离物和固相分离物； 4) 合并步骤2)的醇沉上清液和步骤3)所得的液相分离物，醇沉，分别收集上清液和沉 淀物； 5) 对步骤4)所得上清液进行膜分离、浓缩得到黄芪多肽浓缩液；或进一步冷冻干燥成 黄芪多肽粉末； 6) 将步骤4)所得沉淀物与步骤3)所得固相分离物合并，加水分散，除去不溶物，经氧 化脱色处理后，加入乙酸钾后冷藏8?12h，收集沉淀物，精制，得到黄芪多糖； 7) 取步骤5)所得黄芪多肽浓缩液和步骤6)所得黄芪多糖配制成液体制剂，或取步骤 5)所得黄芪多肽粉末和步骤6)所得黄芪多糖配成粉剂。
7. 如权利要求6所述兽用黄芪制剂的制备方法，其特征在于，步骤1)中所述果胶酶的 用量为黄芪重量的〇. 05?0. 2wt%，所述纤维素酶为Onozuka型纤维素酶，其用量为黄芪重 量的0. 5?2wt%，水解温度为40?55°C，水解pH为4. 0?6. 5,水解时间为1?2h。
8. 如权利要求6所述兽用黄芪制剂的制备方法，其特征在于，步骤3)中所述中性蛋白 酶为A. S1398中性蛋白酶，其加入量为步骤2)所得醇沉沉淀物与步骤1)的固相分离物总 重的0? 05?0? lwt%，酶解温度为33?37°C，pH为6. 0?8. 0,酶解时间为1?2h。
9. 如权利要求6所述兽用黄芪制剂的制备方法，其特征在于，步骤5)中所述膜分离控 制黄芪多肽的分子量< l〇KDa。
10. 如权利要求6所述兽用黄芪制剂的制备方法，其特征在于，步骤6)中所述精制操作 为：将收集到的沉淀物经去离子水洗涤，配成20?35%水溶液，再经透析、醇沉、洗涤处理， 制得精制黄芪多糖浓溶液；或进一步经喷雾干燥制得黄芪多糖粉，所述精制操作中醇沉次 数至少为三次。
【文档编号】A61K36/481GK104367987SQ201410739752
【公开日】2015年2月25日 申请日期:2014年12月8日 优先权日:2014年12月8日
【发明者】岳旭龙 申请人:河南牧翔动物药业有限公司