本发明涉及一种中药多糖组合物，具体是一种包含玛咖多糖、灵芝多糖、香菇多糖及黄芪多糖有效成分在内的药用组合物，其制备方法和用途。
背景技术：
：随着经济社会的飞速发展，越来越多的环境问题威胁着人类的生存健康，环境问题以及生活压力所导致的疾病类型越来越多，有效增强机体免疫力，提高机体抗病毒抗氧化的能力是帮助人体抵御疾病威胁的重要手段。增强机体免疫力，提高人体抵抗外来威胁的能力维持机体健康的方式多种多样，作为现代社会重要的物质组成，保健品是保障人类健康的一大有利武器。现在，越来越多的研究证明，植物多糖，特别是中药多糖在免疫调节、降血糖、降血脂、抗氧化、抗病毒以及保护胃肠道上具有显著的生物学活性，其可能的机制在于这些中药多糖成分能够借助Clathrin蛋白进入肠道细胞内，并随血液到达全身各处，与其靶标物质，包括淋巴细胞表面抗原、细胞因子、神经细胞分泌蛋白等进行结合并发生相互作用，刺激机体免疫系统做出更为有效的应答，提高免疫细胞的活性，促进抗体的合成与释放，从而起到增强机体免疫力，维持机体健康的功能。玛咖（Maca），全程玛咖独行菜，拉丁名为LepidiummeyemiiWalp，十字花科植物，食用玛咖能够显著增强人体精力，消除疲劳，提高机体抗氧化能力。玛咖多糖是植物玛咖中含量较为丰富的活性物质，相关的研究表明，玛咖多糖能够显著抑制CCl4引起的大鼠肝脏脂质过氧化物的反应的发生，也能够增强果蝇的抗氧化能力，延长果蝇的寿命。灵芝是担子菌门担子菌纲多孔菌科灵芝属的药用植物，灵芝在免疫调节、抗病毒、抗衰老上的作用已被国内外研究者证实，作为灵芝中重要的组成成分，灵芝多糖不仅能够全面的激活免疫细胞，调动机体的免疫调节作用，还能够减少自由基对细胞器的损伤，对细胞起到保护作用，证实了其在增强免疫能力，保持并促进机体健康上的积极作用。黄芪是应用于临床的扶正固本的常用中药，其所含有的氨基酸，黄酮类，皂苷类物质是其起到药用活性的主要组成成分，作为黄芪的重要活性成分，黄芪多糖具有多种生物学活性：黄芪多糖能够通过促进机体免疫细胞的发育和成熟提高机体免疫力；此外，黄芪多糖还能够通过抑制病变细胞的活力、促进其凋亡来增强机体的免疫能力和抗病毒能力。香菇，拉丁名Lentinusedodes，属于真菌门，担子菌纲，侧耳科香菇属药、食两用真菌，由于其营养价值高且味道鲜美，在国内及其他亚洲国家备受人们喜爱。香菇多糖是一种内源性物质，除了在免疫功能调节上具有的重要作用外，其在发挥生物活性同时所具有的低毒副作用也是其药用价值体现的重要特点。虽然这些有效多糖成分存在的中药副作用小，但其有效成分含量一般较低，因而服用量大时，服用不方便，而且组合与配比不易掌握。若能以现代工艺加工，提取浓缩其有效成分，按照合适比例搭配，并做成容易服用的冲剂等剂型，则可大大方便现今都市人群对提高机体免疫力，抗病毒的需求。技术实现要素：本发明的目的是提供一种新颖的、含有玛咖多糖、黄芪多糖、灵芝多糖及香菇多糖提取物的药用组合物及其制备方法，药用组合物在增强人体免疫力，提高抗病毒能力，预防空气污染所造成的疾病，增强人体抵抗季节性流感、病毒性感冒的保健品中的应用。本发明的技术方案是这样实现的：一种玛咖多糖组合物，包括下述中药提取物，以重量份数计为：玛咖15-25份，黄芪15-25份，灵芝0.5-1份，香菇15-25份。优选为：玛咖20份，黄芪20份，灵芝0.5-1份，香菇20份。所述玛咖为成熟的玛咖植物根茎。所述黄芪为成熟采收的黄芪植物根部。所述灵芝为采收的灵芝子实体。所述香菇为采收的香菇子实体。所述中药组合物为散剂、口服液、口服乳液、胶囊剂、混悬液、颗粒剂或者冲剂，优选的剂型是散剂或口服液。对于散剂，无需加入赋形剂；对于口服液，所述的赋形剂可为蒸馏水。为了口感，组合物提取物中还可选择性的加入蜂蜜0.5-2份。可以根据需要进一步加入矫味剂、甜味剂、防腐剂或乳化剂等添加剂。本发明还提供了中药多糖组合物的制备方法，其步骤如下：a、玛咖多糖提取：取植物玛咖根茎，干燥至恒重，粉碎机粉碎，60目筛过筛，20倍体积水浸泡24h，95℃油浴浸提1h，重复2-3次，合并提取液，过滤后浓缩至原体积的1/3，加入5倍体积的95%的乙醇，4℃过夜。离心收集沉淀，沉淀用95%乙醇、无水乙醇、丙醇、乙醚依次洗涤2-3次，相同转速离心收集沉淀，沉淀以Sevage法除蛋白，真空干燥，得到玛咖多糖干制品。b、黄芪多糖提取：取黄芪根部切成小片，蒸馏水浸泡过夜，水煎煮3次，每次1.5小时，取上清合并浓缩至原体积的1/3，加入95%的乙醇至乙醇终浓度为60%，过滤分离析出物，用水溶解，离心取上清；过滤得到的滤液继续浓缩并加入乙醇，4℃静置过夜，去上清，沉淀部分加入高浓度乙醇搅拌，离心去上清。沉淀继续用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，真空干燥，得到黄芪多糖干制品。c、灵芝多糖提取灵芝子实体洗涤干燥，烘干至恒重，粉碎机粉碎，过60目筛，制备得到灵芝粉。灵芝粉以微波进行预处理，冷却至室温，将灵芝粉以4%的浓度加入pH4.5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲体系统，升温至40℃，加入25FPIU的纤维素酶，45W超声场下振荡30分钟，保持恒温3-4小时，90℃灭酶活3-5分钟，过滤，滤渣用热水淋洗2-3次，滤液旋蒸浓缩，乙醇沉淀，离心取沉淀，依次用丙酮及无水乙醇洗涤2-3次，冷冻干燥，制得灵芝多糖干制品。d、香菇多糖提取香菇子实体烘干至恒重，粉碎机粉碎，过筛，制得香菇子实体粉，取子实体体粉溶于10-15倍体积水，浸润30分钟，9%的纤维素酶40℃水浴2小时进行提取，提取液经抽滤除杂质，重复2-3次抽提过程，合并抽提液离心取上清，减压浓缩至原体积的1/3，加入95%的乙醇至乙醇终浓度为30%，4℃静置24小时，离心取上清，上清再加入95%的乙醇至终浓度为75%，4℃静置24小时，离心收集沉淀，沉淀以75%的乙醇水溶液分散，离心去上清，除去沉淀中混杂的少量单糖和低聚糖，重复2-3次。以蒸馏水溶解沉淀，树脂脱色，Sevage法除蛋白，干燥，制备得到香菇多糖干制品。e、多糖干制品组合及制剂制成：将上述中药多糖干制品按比例进行混合，可直接得到用于冲服的散剂；将干制品组合物溶于水，选择性的进行脱色等处理后灭菌包装，可制备得到口服用的口服液；干制品组合物经乳化等后续处理，可制备得到适合于保健品类药物流通的其他剂型制品。除去提取样品中的蛋白的Sevage方法，使用Sevage试剂，试剂组成为正丁醇和三氯甲烷，所用的正丁醇与三氯甲烷的体积比为1：4，多糖提取液与Sevage试剂的体积比为2：1，除蛋白步骤的洗脱次数为5次。所述提取工艺中，对多糖提取物进行脱色使用树脂脱色法，使用的大孔吸附树脂需首先经过4%的盐酸浸泡进行溶胀，蒸馏水洗涤至中性，接着使用4%的氢氧化钠浸泡，蒸馏水洗至中性，再使用95%的乙醇浸泡树脂，用蒸馏水洗至无味即可。本发明的中药多糖组合物在增强人体免疫力，提高抗病毒能力，预防空气污染所造成的疾病，增强人体抵抗季节性感冒、病毒性感冒的保健品中的应用。本发明的有益效果为：本发明玛咖多糖组合物可用于制备增强免疫力，提高人体抗病毒能力，特别是预防空气污染所造成的疾病，增强人体抵抗季节性感冒、病毒性感冒的保健品。所述的药物组合物有效成分含量高，在空气污染严重、流感易发期，以冲剂或口服液形式服用可有效防治流感及相关疾病。与治疗性药物联用，可加速人体恢复健康。具体实施方式下面结合具体实施例对本发明作进一步解释说明。实施例1：本发明的一个实施方案是所述的药用组合物为冲剂，其制备方法为：a、玛咖多糖提取：取植物玛咖根茎，干燥至恒重，粉碎机粉碎，60目筛过筛，20倍体积水浸泡24h，95℃油浴浸提1h，重复2-3次，合并提取液，过滤后浓缩至原体积的1/3，加入5倍体积的95%的乙醇，4℃过夜。离心收集沉淀，沉淀用95%乙醇、无水乙醇、丙醇、乙醚依次洗涤2-3次，相同转速离心收集沉淀，沉淀以Sevage法除蛋白，真空干燥，得到玛咖多糖干制品。b、黄芪多糖提取：取黄芪根部切成小片，蒸馏水浸泡过夜，水煎煮3次，每次1.5小时，取上清合并浓缩至原体积的1/3，加入95%的乙醇至乙醇终浓度为60%，过滤分离析出物，用水溶解，离心取上清；过滤得到的滤液继续浓缩并加入乙醇，4℃静置过夜，去上清，沉淀部分加入高浓度乙醇搅拌，离心去上清。沉淀继续用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，真空干燥，得到黄芪多糖干制品。c、灵芝多糖提取灵芝子实体洗涤干燥，烘干至恒重，粉碎机粉碎，过60目筛，制备得到灵芝粉。灵芝粉以微波进行预处理，冷却至室温，将灵芝粉以4%的浓度加入pH4.5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲体系统，升温至40℃，加入25FPIU的纤维素酶，45W超声场下振荡30分钟，保持恒温3-4小时，90℃灭酶活3-5分钟，过滤，滤渣用热水淋洗2-3次，滤液旋蒸浓缩，乙醇沉淀，离心取沉淀，依次用丙酮及无水乙醇洗涤2-3次，冷冻干燥，制得灵芝多糖干制品。d、香菇多糖提取香菇子实体烘干至恒重，粉碎机粉碎，过筛，制得香菇子实体粉，取子实体体粉溶于10-15倍体积水，浸润30分钟，9%的纤维素酶40℃水浴2小时进行提取，提取液经抽滤除杂质，重复2-3次抽提过程，合并抽提液离心取上清，减压浓缩至原体积的1/3，加入95%的乙醇至乙醇终浓度为30%，4℃静置24小时，离心取上清，上清再加入95%的乙醇至终浓度为75%，4℃静置24小时，离心收集沉淀，沉淀以75%的乙醇水溶液分散，离心去上清，除去沉淀中混杂的少量单糖和低聚糖，重复2-3次。以蒸馏水溶解沉淀，树脂脱色，Sevage法除蛋白，干燥，制备得到香菇多糖干制品。将上述多醣干制品按照玛咖多糖干制品1kg，黄芪多糖干制品1kg，灵芝粉多糖干制品50g，香菇多糖干制品1kg的量进行混合，进行无菌化处理，可直接得到用于冲服的散剂。实施例2：本发明的一个实施方案是所述的药用组合物为口服液，以实施例1的制法制备得到中药多醣干制品，然后将多醣干制品按玛咖多醣干制品1kg，黄芪多醣干制品1kg，灵芝粉多醣干制品40g，香菇多醣干制品1kg进行混合，将干制品组合物溶于水，进行脱色等处理后灭菌包装，可制备得到口服用的口服液。实验验证
发明内容：为验证中药多糖组合物对提高机体免疫能力的作用，选用公鸡作为实验样品，注射发明中涉及的中药多糖及其组合物，一段时间后采血检测公鸡外周血中淋巴细胞增殖情况和包含CD3、CD4、CD8表面抗原的淋巴细胞亚群含量变化情况，评价发明所涉及的中药多糖组合对雏鸡免疫的增强作用。T淋巴细胞对抗原、有丝分裂和抗受体抗体的反应能力是衡量机体免疫状况和淋巴细胞功能状态的重要指标，淋巴细胞增殖是反映细胞免疫最直接的指标，T细胞和B细胞受到抗原物质刺激后能分裂增殖、发生特异性免疫应答、产生抗体或淋巴因子，是机体最重要的免疫效应细胞，检测药物对T细胞功能的影响是探讨其作用机制和筛选其活性强弱的首选对象。CD3是T淋巴细胞的主要表面标志。CD4、CD8分子是T细胞表面I型跨膜糖蛋白，也是T淋巴细胞的标志。CD4、CD8分子作为TCR的辅受体参与对MHC分子呈递抗原的识别。CD4+T细胞能识别MHCII类分子递呈的抗原，它是一个传递信号的分子，促使T细胞的激活。CD8+T细胞能与MHCI类分子上的a3结构域部位结合。这种结合稳定了CTL与抗原MHCI类分子的靶细胞黏附作用，从而发挥对靶细胞的杀伤作用，显然，CD3+细胞，CD4+细胞以及CD8+细胞都与机体的免疫防御紧密相关。实验检测中药多糖组合物对免疫雏鸡外周血中T淋巴细胞增殖以及CD3+、CD4+、CD8+淋巴细胞动态变化的影响，以评价多糖组合物对雏鸡细胞免疫的强化作用，验证中药多糖组合物是否能够增强机体免疫力。实验过程：选取350羽罗受公鸡随机均分成6组,14日龄用新支二联弱毒苗点眼滴鼻进行首次免疫，28日龄肌肉注射进行二次免疫,在首次免疫的同时,5个试验组分别注射发明中提取的四种中药多糖和中药多糖组合物,对照组注射生理盐水,每天1次,连续注射3次.于首次免疫后第10、20、30、40、50和60天每组随机抽取5只鸡心脏采血,分离淋巴细胞,分别用MTT法和流式细胞术双染色法测定淋巴细胞增殖和CD3+、CD4+和CD8+淋巴细胞含量的动态变化。用MTT法将抗凝血样用Hank’s液稀释1倍,小心加在淋巴细胞分离液上层,2000rpm离心20分钟,分离淋巴细胞,用无血清RPMll64O营养液洗2遍，1500rpm离心15分钟，台盼蓝染色,细胞计数活细胞大于90%后,用RPMll64O培养液调整细胞浓度为5.0xl06个/ml,加入到96孔细胞培养板中,80ul/孔,每孔再加20ulConA,每个样品重复4孔,然后置于39.5℃5%CO2条件下培养44h,取出每孔加入MTT20ul,继续培养4h后,取出弃去培养液,每孔加二甲基亚矾100ul,将细胞板置于微量震荡器上震荡5分钟，使结晶完全溶解,在酶联免疫仪上检测570nm处的吸光值(A570),作为T淋巴细胞增殖的指标。相同方法分离淋巴细胞,用PBS溶液将细胞数调至5x106个/mL，一管加入鼠抗鸡CD3-FITC，CD4-PE单克隆抗体各10ul,另一管加入CD3-FITC、CD8a-PE单克隆抗体各10ul,相应对照管加入鼠抗人IgG1-FITC、lgG1-PE单克隆抗体各10ul，再分别加入淋巴细胞悬液50ul,混匀,4℃避光作用20分钟。加入PBS溶液500ul，混匀,室温避光作用10分钟,1500rpm离心10分钟,弃去上清,再加入PBs溶液500ul,重悬细胞,流式细胞仪检测,得出CD3+、CD4+和CD8+百分数。数据用SPSS软件进行Duncan’s多重分析比较。实验结果：表1单独注射中药多糖与注射中药多糖组合物对雏鸡T细胞增殖的影响（A570值）组别Day10Day20Day30Day40Day50Day60玛咖多糖0.2570.0290.3640.0160.4530.0200.4490.0130.4340.0420.4260.047黄芪多糖0.2770.0350.4090.4730.0210.4690.0160.4520.0190.4420.010灵芝多糖0.2790.0150.3980.0230.4190.0810.4820.0240.4790.0180.4690.015香菇多糖0.2490.0260.3730.0310.4640.0270.4790.0370.4610.0500.4870.035多糖组合0.3300.0110.4790.0290.5040.0220.5760.0410.5980.0310.5880.014对照组0.210.0210.310.0270.3540.0170.3820.0130.3730.0270.3600.019由表1可知，单独注射四种中药多糖也能够促进雏鸡T细胞的增殖，而注射中药多糖组合物则能显著增强雏鸡T细胞的增殖比例。表2单独注射中药多糖与注射中药多糖组合物对雏鸡CD3+细胞动态变化的影响（%）组别Day10Day20Day30Day40Day50Day60玛咖多糖55.23.9356.84.0257.76.8858.94.7557.94.1358.10.53黄芪多糖58.63.5762.462.63.9660.34.3361.83.6359.04.76灵芝多糖57.95.3261.64.8963.84.7360.34.4561.14.4760.05.26香菇多糖56.84.2660.85.5360.65.0758.63.9857.35.3158.15.37多糖组合56.83.9165.63.9966.75.8569.75.0670.56.0769.83.78对照组51.05.3353.45.1354.26.2854.44.8553.95.0254.15.51由表2可知，单独注射四种中药多糖也能够促进雏鸡CD3+细胞的增殖，而注射中药多糖组合物则能显著增强雏鸡CD3+细胞的增殖比例。表3单独注射中药多糖与注射中药多糖组合物对雏鸡CD4+细胞动态变化的影响（%）组别Day10Day20Day30Day40Day50Day60玛咖多糖35.33.9437.15.2537.94.1236.24.8137.04.1838.13.69黄芪多糖39.33.7340.23.8240.43.7938.440.538.63.8639.64.01灵芝多糖38.64.6238.93.9941.54.3537.44.1239.94.0637.74.18香菇多糖36.94.6736.94.1638.54.5235.84.5337.54.4936.64.41多糖组合39.85.0642.75.3343.84.9249.55.1448.73.9450.54.02对照组29.64.6730.34.4632.74.0627.94.6230.75.0429.44.73由表3可知，单独注射四种中药多糖能够促进雏鸡CD4+细胞的增殖，而注射中药多糖组合物则能显著增强雏鸡CD4+细胞的增殖比例。表4单独注射中药多糖与注射中药多糖组合物对雏鸡CD8+细胞动态变化的影响（%）组别Day10Day20Day30Day40Day50Day60玛咖多糖18.23.0519.63.1621.73.0722.83.4023.23.4022.52.82黄芪多糖19.71.6822.41.8621.11.8521.02.2021.41.7121.72.29灵芝多糖19.33.4422.52.2122.72.7221.92.742.052.2421.72.67香菇多糖19.63.6524.12.5821.42.9122.33.0120.03.1622.73.13多糖组合20.92.9719.52.8922.33.0222.02.8821.93.6523.12.65对照组21.13.2622.33.1823.43.2522.52.7623.13.4022.33.40由表4可知，无论是单独注射四种中药多糖还是注射中药多糖组合物对CD8+细胞的增殖变化作用不显著。整个实验来看，中药多糖组合物能够显著增强雏鸡免疫T细胞的增殖，也能够促进CD3+，CD4+淋巴细胞的生长，初步判断，发明所涉及的四种中药多糖，玛咖多糖，黄芪多糖，灵芝多糖及香菇多糖组合物能够起到增强机体免疫力的功效。当前第1页1 2 3