本发明涉及植物过时有效成分提取，尤其涉及一种滇皂荚总皂苷的提取纯化的方法。
背景技术：
滇皂荚（Gleditsia japonica var. delavayi）属苏木科皂荚属。皂荚属全球约15中，零星分布于中亚、东南亚和南北美洲。我国产6种2变种，广泛分布于南北各省区，主产长江流域各省。云南有2种，其一为变种。从皂荚种子胚乳种分离提取得到的多糖植物胶成为皂荚豆胶，主要成分为半乳甘露聚糖，其性质与瓜尔豆胶相似，具有良好的稳定性、增稠性和水合性，低浓度时有较高粘度，被广泛用于冰激凌的稳定、罐头感官品质改善、面粉品质改进和增加食品持水性等方面。据李时珍著《本草纲目》等多种医书记载，皂荚、皂刺、皂根、皂叶均可入药。皂荚味辛，性温，微毒，能祛风痰、除湿毒、杀虫。滇皂荚壳中韩活性三萜皂苷，其结构中具有糖体、配基、有机酸等亲水性大极性基团，而甙元结构较大，极性性低，具有亲脂性，在分子结构上有类似表面活性剂的结构特点，其水溶液振摇后能产生持久类似肥皂溶液的泡沫，是一种非离子型表面活性剂，具有良好的去污能力，壳代肥皂用，洗涤丝织品，不损光泽。现已有皂荚提取物已广泛用于洗涤、洗发产品中，同时有一定的去屑止痒功效。
国外对皂荚研究已有半个多世纪之久，最近几十年开始了系统研究并取得很大的发展。国外皂荚属研究最多的是三刺皂荚（G. triacathos）,其次为日本皂荚（G. japonica Miq.）。研究涉及范围广且较为系统，包括种群分布、种源试验、种内群体及个体的遗传结构、荚和种子遗传变异、育苗和造林技术、城市景观林技术、皂荚果荚和种子的生化分析利用、生物活性物质产品化等。目前，世界上40多个国家的皂荚（属）已广泛地栽植并应用于绿化造林，工业原料提取、食品添加剂、日用化工、医药等各种行业。滇皂荚作为我国特有的皂荚品种，由于还未得到充分的研究与开发等原因，并不为外国人所了解和熟悉，国内的闲逛的研究也较少，目前对滇皂荚开展的研究与开发利用主要涉及的方面有滇皂荚的荚果的化学成分分析；皂刺、叶、根等药用价值、生物学特性研究等。21世纪被专家预言为生物学世纪，生物科学的发展及其应用越来越受到人们的重视，相信具有特殊生物活性的滇皂荚总皂苷的研究开发，也必引起人们的关注。
虽然滇皂荚有很多功效，但因种种原因，系统地阐述滇皂荚总皂苷的提取物工艺及开发利用还未见文献报道。参照其他植物果实中总皂苷的提取方法主要包括水提法和有机溶剂提取法。水提法的提取率较高，但是往往会将一些单糖、寡糖、氨基酸、蛋白质、黏液质等也提取出来，导致提取物中的总皂苷纯度降低。有机溶剂提取法的提取率较高，单溶剂消耗大，工业化生产成本高。总之，要实现规模化生产还存在忖度低或是成本高，可操作性差等缺点。
技术实现要素：
本发明提供一种低成本、高纯度、操作简单、绿色环保的滇皂荚总皂苷提取纯化的方法。
本发明的技术解决方案为一种滇皂荚总皂苷提取纯化的方法，该方法包括以下步骤：
第一步：将干燥后的滇皂荚壳粉碎到10~20目，置于加压溶剂提取装置中，加入1~10倍蒸馏水，密封加压溶剂提取器，于温度80~110℃、压力2.5~4.0Kg/cm2下加压提取30min~60min，提取1~6次，固液分离，合并提取液；
第二步：将上述提取液冷却至室温，加入1%~7%红平红球菌 (Rhodococcuserythropolis)，在20~35℃培养2~10天，取上清液；
第三步：分别使用截留分子量为15000、5000、2000Da的膜进行分离，膜过滤工作压力：0.1~0.2Mpa；
第四步：经过2000Da的膜后的提取液经浓缩；
第五步：将浓缩液进行喷雾干燥得总滇皂荚总皂苷粉。
本发明用水作为提取剂提取滇皂荚皂苷，采用加压溶剂提取技术，提取液成分复杂，含有多糖、蛋白、色素类杂质，而且这些杂质于皂苷之间相互结合，同时加入生物絮凝剂对滇皂荚皂苷提取液具有良好的絮凝作用，而且有一定的脱色效果，絮凝处理后的提取液，通过膜法分离能够获得较为满意的纯度。
本发明具有以下明显的优势和有益效果：
1. 本发明提供了一种低成本，高纯度，操作简单，绿色环保的无患子皂苷提取纯化方法，为实现或完善滇皂荚总皂苷的工业化生产奠定基础；
2. 采用加压溶剂提取技术对滇皂荚总皂苷提取，具有以下特点：①提取时间短：与传统提取技术相比，加压溶剂提取技术能显著缩短提取时间；②溶剂消耗少：加压溶剂提取物技术能明显节约溶剂的消耗，使有效成分提取完全；③提取效率高：在高温和高压下，加压溶剂提取技术可以显著地促进有效成分提取过程，提高提取效率；
3. 本发明认为接种微生物的生长，产生生物絮凝剂NOC-1，对提取液有很好的脱色和絮凝效果，由于微生物絮凝剂可以克服无机高分子和合成有机高分子絮凝剂本身固有的缺陷，最终实现无污染排放；
4. 而且微生物的呼吸作用消耗水提液中大量糖类和水，所以水提掖体积减少，达到了一定的浓缩作用，这比工业上运用浓缩装置更环保，更节能，成本更低，经济效益增大；
5. 本发明的总皂苷，纯度较高，可以直接用于洗涤用品和化妆品中，涵盖范围广，经济效益高。
具体实施方式
下面的实施例可以使本专业的技术人员更理解本发明，单不以任何形式限制本发明。
实施例1，滇皂荚壳于60℃烘箱中烘干，脱皮，粉碎到10目，取果壳粉20Kg放入加压溶剂提取器中，加入200L蒸馏水，于温度80℃，压力2.5 Kg/cm2下加压提取30min，提取3次，合并提取液并离心。提取液冷却至室温，加入1%红平红球菌 (Rhodococcuserythropolis)，在35℃培养5天，离心分离，取上清液。使用截留分子量为15000、5000Da的膜进行分离，膜过滤工作压力：0.1~0.2Mpa。透过液经过2000Da的膜后的提取液经浓缩后，进行喷雾干燥得总滇皂荚总皂苷粉8.2Kg，总皂苷提取率为32.8%，总皂苷纯度为80.2%。
实施例2，滇皂荚壳于60℃烘箱中烘干，脱皮，粉碎到20目，取果壳粉20Kg放入加压溶剂提取器中，加入100L蒸馏水，于温度100℃，压力4.0 Kg/cm2下加压提取30min，提取4次，合并提取液并离心。提取液冷却至室温，加入3%红平红球菌 (Rhodococcuserythropolis)，在20℃培养8天，离心分离，取上清液。使用截留分子量为15000、5000Da的膜进行分离，膜过滤工作压力：0.1~0.2Mpa。透过液经过2000Da的膜后的提取液经浓缩后，进行喷雾干燥得总滇皂荚总皂苷粉8.5Kg，总皂苷提取率为35.0%，总皂苷纯度为82.3%。
实施例3，滇皂荚壳于60℃烘箱中烘干，脱皮，粉碎到10目，取果壳粉20Kg放入加压溶剂提取器中，加入160L蒸馏水，于温度100℃，压力3.5 Kg/cm2下加压提取45min，提取6次，合并提取液并离心。提取液冷却至室温，加入7%红平红球菌 (Rhodococcuserythropolis)，在20℃培养10天，离心分离，取上清液。使用截留分子量为15000、5000Da的膜进行分离，膜过滤工作压力：0.1~0.2Mpa。透过液经过2000Da的膜后的提取液经浓缩后，进行喷雾干燥得总滇皂荚总皂苷粉8.3Kg，总皂苷提取率为34.6%，总皂苷纯度为81.3%。