相关申请的交叉参考本申请要求2014年11月26日提交的美国临时专利申请号62/084,971的优先权，为所有目的而将该文献教导的内容以其完整的形式并入本文作为参考。本公开提供了用于荧光成像的方法。
背景技术：
：：常规的腹腔镜检查和机器人腹腔镜检查技术在结肠直肠和妇科手术领域中都是正在快速成长的实践。近期simorov等人,“laparoscopiccolonresectiontrendsinutilizationandrateofconversiontoopenprocedure：anationaldatabasereviewofacademicmedicalcenters”annsurg.2012256(3),462-468；wright等人,“roboticallyassistedvslaparoscopichysterectomyamongwomenwithbenigngynecologicdisease”jama2013309(7),689-698；和park等人,“ureteralinjuryingynecologicsurgery：a5-yearreviewinacommunityhospital”koreanj.urol.201253(2),120-125中所述的研究报道了所有结肠直肠切除术的42％和大于30％的妇科操作以这种方式尝试。腹腔镜检查方法提供了超过传统的开放性腹部手术的几个优点，包括术后疼痛减轻、住院时间缩短、手术部位感染减少和总体住院费用降低，正如如下文献中所述：kiran等人,“laparoscopicapproachsignificantlyreducessurgicalsiteinfectionsaftercolorectalsurgery：datafromnationalsurgicalqualityimprovementprogram”jamcollsurg.2010211(2)232-238；bilimoria等人,“laparoscopic-assistedvs.opencolectomyforcancer：comparisonofshort-termoutcomesfrom121hospitals”jgastrointestsurg.200812(11)2001-2009；juo等人,“isminimallyinvasivecolonresectionbetterthantraditionalapproaches？：firstcomprehensivenationalexaminationwithpropensityscorematching”jamasurg.2014149(2)177-184；wilson等人,“laparoscopiccolectomyisassociatedwithalowerincidenceofpostoperativecomplicationscomparedwithopencolectomy：apropensityscore-matchedcohortanalysis”colorectaldis.201416(5)382-389；kobayashi等人,“totallaparoscopichysterectomyin1253patientsusinganearlyureteralidentificationtechnique”jobstetgynaecolres.201238(9)1194-1200；makinen等人,“tenyearsofprogress--improvedhysterectomyoutcomesinfinland1996-2006：alongitudinalobservationstudy”bmjopen20133(10)e003169。然而，有限的触觉和二维影像可能导致医源性输尿管损伤。尽管并不常见，但是腹腔镜检查输尿管损伤仍然是具有显著相关发病率的严重并发症。报告显示在结肠直肠和妇科手术中有0.1-7.6％的发生率，其中超过80％难以在手术中被识别，正如park等人；palaniappa等人,“incidenceofiatrogenicureteralinjuryafterlaparoscopiccolectomy”archsurg.2012147(3),267-271；和dasilva等人,“roleofprophylacticuretericstentsincolorectalsurgery”asianjendoscsurg.20125(3),105-110中所述。用于手术中输尿管鉴定的现行技术包括输尿管支架放置、x-射线荧光透视检查和可见染料；然而，无论是支架还是荧光透视都给患者带来额外的风险，并且可见染料通常不敏感，正如tanaka等人,“real-timeintraoperativeureteralguidanceusinginvisiblenear-infraredfluorescence”jurol.2007178(5),2197-2202；bothwell等人,“prophylacticureteralcatheterizationincolonsurgery.afive-yearreview”discolonrectum.199437(4),330-334；wood等人,“routineuseofuretericcathetersatlaparoscopichysterectomymaycauseunnecessarycomplications”jamassocgynecollaparosc.19963(3),393-397；和brandes等人,“diagnosisandmanagementofuretericinjury：anevidence-basedanalysis”bjuint.200494(3),277-289中所述。采用花青染料的荧光成像是正在快速新出现的领域，其用于支持手术导航并且提供对解剖结构的实时照明。在700-900nm范围中的发射可以避免来自组织自体荧光的干扰并且可以穿透约1cm的组织，正如adams等人,“comparisonofvisibleandnear-infraredwavelength-excitablefluorescentdyesformolecularimagingofcancer”jbiomedopt.200712(2),024017；和keereweer等人,“opticalimage-guidedcancersurgery：challengesandlimitations”clincancerres.201319(14),3745-3754中所述。荧光成像的另一种应用在于对胆道解剖包括胆管和胆囊管的实时术中成像。现行方法通常在手术前采用通过胆道内注射或静脉内注射的吲哚花青绿(icg)染料。然而，研究证实，采用icg染料存在明显的问题。它们包括效率低和排泄入胆汁的动力学差(tanaka等人,“real-timeintraoperativeassessmentoftheextrahepaticbileductsinratsandpigsusinginvisiblenear-infraredfluorescentlight”surgery2008144(1)39-48)和患者发生不良反应(benya等人,“adversereactionstoindocyaninegreen：acasereportandareviewoftheliterature”cathetcardiovascdiagn.198917(4)231-233)。对于用于以非侵害性方式检测和测定体内靶标的敏感性组合物和方法存在需求。特别地，对于改善的、稳定的花青染料存在需求，其用于检测对腹腔镜检查或机器人手术期间可能出现的针对多种器官的损伤。本发明满足了这些和另外的需求。技术实现要素：发明概述在一个实施方案中，本发明包括用于肾输尿管成像的方法，包含：对个体施用诊断有效量的式1的2-((e)-2-((e)-3-(2-((e)-3,3-二甲基-5-磺酸根合(sulfonato)-1-(4-磺酸根合丁基)二氢吲哚-2-亚基)亚乙基)-2-(4-磺酸根合苯氧基)环己-1-烯-1-基)乙烯基)-3,3-二甲基-1-(4-磺酸根合丁基)-3h-吲哚-1--5-磺酸盐化合物：或其溶剂合物或多晶型物并且具有药学上可接受的阳离子，其中所述施用进行一次或多次，其选自在手术操作之前、手术操作期间、手术操作之后及其组合的手术操作，使个体肾脏系统组织暴露于电磁辐射；和检测来自所述化合物的荧光辐射。在一个实施方案中，所述方法包括通过静脉内施用式1的化合物。在一个实施方案中，所述方法包括施用式1的化合物，其中药学上可接受的阳离子选自钾或钠。在一个实施方案中，所述方法包括施用式1的化合物与药学上可接受的载体的组合，所述药学上可接受的载体选自生理无菌盐水溶液、无菌水溶液、无热原水溶液、等渗盐水溶液和磷酸盐缓冲溶液。在一个实施方案中，所述方法包括以约3000.0μg/kg-约1500.0μg/kg的化合物的诊断有效量施用式1的化合物。在一个实施方案中，所述方法包括以约1500.0μg/kg-约1000.0μg/kg的化合物的诊断有效量施用式1的化合物。在一个实施方案中，所述方法包括以约1000.0μg/kg-约500.0μg/kg的化合物的诊断有效量施用式1的化合物。在一个实施方案中，所述方法包括以约500.0μg/kg-约170.0μg/kg的化合物的诊断有效量施用式1的化合物。在一个实施方案中，所述方法包括以约170.0μg/kg-约120.0μg/kg的化合物的诊断有效量施用式1的化合物。在一个实施方案中，所述方法包括以约120.0μg/kg-约60.0μg/kg的化合物的诊断有效量施用式1的化合物。在一个实施方案中，所述方法包括在施用后一定时间期限时测定所施用的保留在个体肾脏系统组织处的式1的化合物的荧光强度。在一些方面，所述方法提供式1的化合物在尿或胆汁中的显影。在一个实施方案中，所述方法包括在施用后约24小时，所施用的式1的化合物的测定的荧光强度为背景荧光。在一个实施方案中，所述方法包括所述手术操作选自腹腔镜操作、机器人操作、机器人腹腔镜操作和开放性手术操作。在一个实施方案中，所述方法包括在施用后大约至多6小时，所施用的式1的化合物测定的在肾中的荧光强度高于所施用的式1的化合物测定的在脾、肠、心脏、肺、肌肉的一种或多种或其组合中的荧光强度。在一个实施方案中，本发明提供固体形式(多晶型物)，其为式1的形式a。式1的形式a具有包含2-θ在约4.3°的峰的x-射线粉末衍射图。形式a具有包含2-θ在约4.3°、约9.6°、约12.9°、约18.3°和约20.8°的峰的x-射线粉末衍射图。形式a具有基本上如图1e中所示的x-射线粉末衍射图。在一个实施方案中，本发明提供用于胆管成像的方法，包含对个体施用式1的化合物；和检测来自该化合物的荧光辐射。在另一个实施方案中，本发明提供式1的化合物的多晶型物或固体形式(形式a)，其特征在于它提供包含基本上如表2中列出的峰的xrpd图。在一个实施方案中，本发明提供固体形式(多晶型物)，其为式1的形式b。式1的形式b具有包含2-θ在约21.2°的峰的x-射线粉末衍射图。形式b具有包含2-θ在约5.3°、约14.2°、约14.3°、约20.7°和约21.2°的峰的x-射线粉末衍射图。形式b具有基本上如图1h中所示的x-射线粉末衍射图。在一个实施方案中，本发明包括用于肝胆道成像的方法，该方法包括：对个体施用诊断有效量的式2的2-((e)-2-((e)-3-(2-((e)-3,3-二甲基-5-磺酸根合-1-(4-磺酸根合丁基)二氢吲哚-2-亚基)亚乙基)-2-苯氧基环己-1-烯-1-基)乙烯基)-3,3-二甲基-1-(4-磺酸根合丁基)-3h-吲哚-1--5-磺酸盐：或其溶剂合物或多晶型物并且具有药学上可接受的阳离子，其中所述施用进行一次或多次，其选自在手术操作之前、手术操作期间、手术操作之后及其组合的手术操作，使个体肝脏系统组织暴露于电磁辐射；和检测来自所述化合物的荧光辐射。在一个实施方案中，所述方法包括通过静脉内施用式2的化合物。在一个实施方案中，所述方法包括施用式2的化合物，其中药学上可接受的阳离子选自钾或钠。在一个实施方案中，所述方法包括施用式2的化合物与药学上可接受的载体的组合，所述药学上可接受的载体选自生理无菌盐水溶液、无菌水溶液、无热原水溶液、等渗盐水溶液和磷酸盐缓冲溶液。在一个实施方案中，所述方法包括以约3000.0μg/kg-约1500.0μg/kg的化合物的诊断有效量施用式2的化合物。在一个实施方案中，所述方法包括以约1500.0μg/kg-约1000.0μg/kg的化合物的诊断有效量施用式2的化合物。在一个实施方案中，所述方法包括以约1000.0μg/kg-约500.0μg/kg的化合物的诊断有效量施用式2的化合物。在一个实施方案中，所述方法包括以约500.0μg/kg-约170.0μg/kg的化合物的诊断有效量施用式2的化合物。在一个实施方案中，所述方法包括以约170.0μg/kg-约120.0μg/kg的化合物的诊断有效量施用式2的化合物。在一个实施方案中，所述方法包括以约120.0μg/kg-约60.0μg/kg的化合物的诊断有效量施用式2的化合物。在一个实施方案中，所述方法包括在施用后一定时间期限时，测定所施用的保留在个体肝脏系统组织处的式2的化合物的荧光强度。在一些方面，所述方法提供式2的化合物在尿或胆汁中的显影。在一个实施方案中，所述方法包括在施用后约24小时，所测量的施用的式2的化合物的荧光强度为背景荧光。在一个实施方案中，所述方法包括所述手术操作选自腹腔镜操作、机器人操作、机器人腹腔镜操作和开放性手术操作。在一个实施方案中，所述方法包括在施用后大约至多6小时，所施用的式2的化合物测定的在肝中的荧光强度高于所施用的式2的化合物测定的在脾、肠、心脏、肺、肌肉的一种或多种或其组合中的荧光强度。在一个实施方案中，本发明包括用于肝胆囊管成像的方法，该方法包括：对个体施用诊断有效量的式2的2-((e)-2-((e)-3-(2-((e)-3,3-二甲基-5-磺酸根合-1-(4-磺酸根合丁基)二氢吲哚-2-亚基)亚乙基)-2-苯氧基环己-1-烯-1-基)乙烯基)-3,3-二甲基-1-(4-磺酸根合丁基)-3h-吲哚-1--5-磺酸盐：或其溶剂合物或多晶型物并且具有药学上可接受的阳离子，其中所述施用进行一次或多次，其选自在手术操作之前、手术操作期间、手术操作之后及其组合的手术操作，使个体肝脏系统组织暴露于电磁辐射；和检测来自所述化合物的荧光辐射。在一个实施方案中，所述方法包括通过静脉内施用式2的化合物。在一个实施方案中，所述方法包括施用式2的化合物，其中药学上可接受的阳离子选自钾或钠。在一个实施方案中，所述方法包括施用式2的化合物与药学上可接受的载体的组合，所述药学上可接受的载体选自生理无菌盐水溶液、无菌水溶液、无热原水溶液、等渗盐水溶液和磷酸盐缓冲溶液。在一个实施方案中，所述方法包括以约3000.0μg/kg-约1500.0μg/kg的化合物的诊断有效量施用式2的化合物。在一个实施方案中，所述方法包括以约1500.0μg/kg-约1000.0μg/kg的化合物的诊断有效量施用式2的化合物。在一个实施方案中，所述方法包括以约1000.0μg/kg-约500.0μg/kg的化合物的诊断有效量施用式2的化合物。在一个实施方案中，所述方法包括以约500.0μg/kg-约170.0μg/kg的化合物的诊断有效量施用式2的化合物。在一个实施方案中，所述方法包括以约170.0μg/kg-约120.0μg/kg的化合物的诊断有效量施用式2的化合物。在一个实施方案中，所述方法包括以约120.0μg/kg-约60.0μg/kg的化合物的诊断有效量施用式2的化合物。在一个实施方案中，所述方法包括在施用后一定时间期限时，测定所施用的保留在个体肝脏系统组织处的式2的化合物的荧光强度。在一个实施方案中，所述方法包括在施用后约24小时，所测量的施用的式2的化合物的荧光强度为背景荧光。在一个实施方案中，所述方法包括所述手术操作选自腹腔镜操作、机器人操作、机器人腹腔镜操作和开放性手术操作。在一个实施方案中，本发明提供用于肾输尿管成像的方法，该方法包括对个体施用式2的化合物；并检测来自该化合物的荧光强度。在一个实施方案中，所述方法包括施用后大约至多6小时，所施用的式2的化合物测定的在肝中的荧光强度高于所施用的式2的化合物测定的在脾、肠、心脏、肺、肌肉的一种或多种或其组合中测定的荧光强度。在一个实施方案中，药物组合物包含诊断成像用量的式1的化合物、药学上可接受的阳离子和药学上可接受的载体。在一个实施方案中，所述包含诊断成像用量的式1的化合物、药学上可接受的阳离子和药学上可接受的载体的药物组合物包含在静脉注射(iv)袋中。在一个实施方案中，药物组合物包含诊断成像用量的式2的化合物、药学上可接受的阳离子和药学上可接受的载体。在一个实施方案中，所述包含诊断成像用量的式2的化合物、药学上可接受的阳离子和药学上可接受的载体的药物组合物包含在静脉注射(iv)袋中。在一个实施方案中，本发明包括试剂盒，其含有包含诊断成像用量的式1的化合物、药学上可接受的阳离子和药学上可接受的载体的药物组合物以及使用指导手册或说明书。所述药物组合物可以包含在静脉注射(iv)袋中。在另外的实施方案中，本发明包括试剂盒，该试剂盒含有包含诊断成像用量的式2的化合物、药学上可接受的阳离子和药学上可接受的载体的药物组合物以及使用指导手册或说明书。所述药物组合物可以包含在静脉注射(iv)袋中。在一个实施方案中，本发明包括组合物，该组合物包括：式2的2-((e)-2-((e)-3-(2-((e)-3,3-二甲基-5-磺酸根合-1-(4-磺酸根合丁基)二氢吲哚-2-亚基)亚乙基)-2-苯氧基环己-1-烯-1-基)乙烯基)-3,3-二甲基-1-(4-磺酸根合丁基)-3h-吲哚-1--5-磺酸盐：或其溶剂合物或多晶型物并且具有药学上可接受的阳离子。另外的实施方案、方面和目的在阅读如下详细描述和附图时将得到更好地理解。附图说明在各附图中，800cw相当于在对比例1中列举的化合物；800bk-磺酸盐是指式1的化合物；800bk-nos是指式2的化合物。图1a-1i显示不同样品的x-射线粉末衍射(xrpd)图。图1a和1c中所示的样品表示形式a。图1b是形式a，但较少结晶。图1d和1e显示晶型a的xrpd图。图1f显示无定形形式的xrpd。图1h和图1i显示晶型b的xrpd图。就比较而言，图1g与图1d相同。图2a和2b示例对于a549细胞(a)和a431细胞(b)的体外基于细胞的分析。图2c显示作为为体内成像制备的每种染料的浓度的函数的荧光(0.03-1μm)。图3a-c示例对于对比例1的化合物(图3a)、式1的化合物(图3b)和式2的化合物(图3c)探针的小鼠背侧视图荧光图像。呈现对于探针施用后近似时间点的图像：30分钟、2小时、5小时和24小时。脉冲小动物成像系统用于全部动物和器官图像采集。图4a-c示例对于对比例1的化合物(图4a)、式1的化合物(图4b)和式2的化合物探针(图4c)的同一小鼠的腹侧视图荧光图像。呈现对于探针施用后近似时间点的图像：30分钟、2小时、5小时和24小时。箭头可以精确地找到膀胱区膀胱信号。白色箭头指向胆囊信号。图5示例对于对比例1的化合物、式1的化合物和式2的化合物探针的图4的图像的整体荧光强度编号。图6a-d显示对于对比例1的化合物(图6a)、式2的化合物(图6b)、式1的化合物(图6c)的小鼠器官的荧光数据：肝、脾、肠、脑、心脏/肺、肾、脑和肌肉(图6d)。荧光信号(800nm)调整至全部探针区域(像素)。图7示例施用式1的化合物探针后捕捉的小鼠中输尿管、肾和膀胱的图像。图8a-b示例显示命名的染料对人(h)、牛(b)、卵清蛋白(o)或5％fbs(胎牛血清)的非特异性或亲和力的选择的蛋白质的染色的电泳凝胶的直方图中的探针的荧光检测(图8a)。在染色的电泳的荧光图像中，深灰色表示来自检查的化合物的信号，浅灰色表示对蛋白质载量的考马斯蓝评价，且白色表示其中存在两种颜色(图8b)。图9示例对于对照样品(无探针)、式1的化合物、式2的化合物和吲哚菁绿(icg)染料的小鼠尿的荧光信号(800nm)分析。图10a、10b、10c、10d和10e示例如下的胆管成像：在磷酸缓冲盐水(pbs)溶液中的50nmoleicg(图10a)、在pbs溶液中的1nmole式2的化合物(图10b)、在pbs溶液中的0.5nmole式2的化合物(图10c)和在pbs溶液中的0.1nmole式2的化合物(图10d和10e)。分别在1分钟、30分钟、2小时、5小时和24小时记录每种条件下展示出的成像区域(左至右)。图11a-11h显示施用后不同小鼠器官的图像。对比对照品(图11a)、式1的化合物(图11c和11e)和式2的化合物(图11b和11d)施用后24和72小时时不同小鼠器官的荧光图像。所检查的器官包括：心脏(ht)、肺(ln)、肾(kd)、肝(lv)、脾(spl)、肠(int)、脑(br)和肌肉(ms)。在24小时时，在肝和肾中仍然存在一些信号，而截至到72小时，信号显著减少。图11f-11h显示术中荧光(800nm,式2的化合物)(图11g)、白光(图11f)和对于式2的化合物的肝、胆囊和胆汁的复合图像(0.1nmole)(图11h)。图12显示注射的染料溶液-800cw、800bk-磺酸盐(式1的化合物；800bk或bk)和800bk-nos(式2的化合物；800nos或nos)的斑点试验。图13a-13c显示注射测试染料之一的有代表性的小鼠的背侧和腹侧视图的整体动物成像。每个小组的图显示注射后15分钟、1小时、2小时、4小时、6小时和24小时时动物的背侧和腹侧视图。注射800cw染料、800nos染料和800bk染料的动物分别显示在图13a、图13b和图13c中。图14显示整体动物lut刻度、器官1/10lut刻度和器官1/100lut刻度。图15a-15d显示器官1/10lut刻度上肾(左下角)、肝(右下角)、肺(左上角)和肌肉(右上角)的信号强度。来自不注射探针(对照)、注射800cw染料、800nos染料和800bk染料的动物的器官分别显示在图15a、图15b、图15c和图15d中。图16a-16d显示器官1/100lut刻度上肾(左下角)、肝(右下角)、肺(左上角)和肌肉(右上角)的信号强度。来自不注射探针(对照)、注射800cw染料、800nos染料和800bk染料的动物的器官分别显示在图16a、图16b、图16c和图16d中。发明详述i.定义本文所用的术语“一种”、“一个”、“该”或“所述”不仅包括具有一个成员的方面，而且包括具有一个以上成员的方面。例如，包含使用本文举出的一种化合物的成像方法的一个实施方案可以包括一个方面，其中该方法包括使用两种或多种本文举出的化合物。本文所用修饰数值的术语“大约”或“约”包括在该值周围的定义范围。如果“x”是该值，则“大约x”或“约x”可以表示0.9x-1.1x的值，且更优选0.95x-1.05x的值。任意涉及的“大约x”或“约x”特别地表示至少如下的值：x、0.95x、0.96x、0.97x、0.98x、0.99x、1.01x、1.02x、1.03x、1.04x和1.05x。例如，“大约x”或“约x”预期教导并且提供对于例如“0.98x”的权利要求限定的书面描述支持。当用量“x”仅允许整数值(例如“x个碳”)且x至多为15时，“约x”表示(x-1)-(x+1)。在这种情况下，本文所用的“约x”特别地表示至少如下的值：x、x-1和x+1。如果x至少为16，则0.90x和1.10x的值近似至最接近的整数值以便定义该范围的边界。当修饰语“大约”或“约”应用于描述数值范围的起点时，它适用于该范围的两个端点。因此，“大约700-850nm”等同于“大约700nm-大约850nm”。因此，“约700-850nm”等同于“约700nm-约850nm”。当“大约”或“约”应用于描述一组值的第一个值时，它适用于该组中的所有值。因此，“约680、700或750nm”等同于“约680nm、约700nm或约750nm”。本文所用的“平衡电荷”包括在标准生理学条件下化合物及其结合的抗衡离子的净电荷为零的条件。为了实现平衡电荷，本领域技术人员可以理解，在第一个额外的平衡二氢吲哚环的+1电荷的磺酸根合基团后，必须添加阳离子抗衡离子(例如i族金属、例如钠的阳离子)以便平衡来自额外磺酸根合基团的负电荷。类似地，必须添加阴离子平衡离子以便平衡任何额外的阳离子基团(例如在生理学条件下的大部分碱性氨基)。ii.实施方案尽管显示和描述了本发明的优选实施方案，但是这类实施方案仅作为示例提供，而不是用于限定本发明的范围。本发明所述实施方案的各种替代选择方案可以应用于实施本发明。花青染料的一些优点包括：(1)花青染料强烈吸收和发出荧光；(2)许多花青染料在荧光显微镜下不会快速地光漂白；(3)许多结构和合成方法可利用且染料的类型是通用的；和(4)花青染料相对较小(典型的分子量约为1,000道尔顿)，由此它们不会导致可感觉到的空间干扰。通常，根据hamer,f.m.,cyaninedyesandrelatedcompounds,weissberger,mass.,ed.wileyinterscience,n.y.1964中教导的方法制备花青染料。例如，美国专利6,663,847；6,887,854；6,995,274；7,504,089；7,547,721；7,597,878和8,303,936(并入本文作为参考)描述了用于各种花青染料的合成机制。已知另外的花青染料包含反应官能团。例如，美国专利4,337,063；4,404,289和4,405,711(并入本文作为参考)描述了用于各种具有n-羟基琥珀酰亚胺活性酯基团的花青染料的合成。美国专利4,981,977(并入本文作为参考)描述了用于具有羧酸基团的花青染料的合成。美国专利5,268,486(并入本文作为参考)公开了用于制备芳基磺酸盐花青染料的方法。美国专利6,027,709(并入本文作为参考)公开了用于制备具有亚磷酰亚基团的花青染料的方法。美国专利no.6,048,982(并入本文作为参考)公开了用于制备具有反应基团的花青染料的方法，所述反应基团选自异硫氰酸酯、异氰酸酯、亚磷酰胺、一氯三嗪、二氯三嗪、一-或二-卤代吡啶、一-或二-卤代二嗪、氮丙啶、磺酰卤、酰卤、羟基琥珀酰亚胺酯、羟基磺基琥珀酰亚胺酯、亚氨基酯、乙二醛和醛。如本文所述，本发明提供具有式1并且具有药学上可接受的阳离子的化合物的花青染料或其溶剂合物或多晶型物的用途：在一个实施方案中，本发明提供固体形式(多晶型物)，其为式1的形式a。式1的形式a具有x-射线粉末衍射图，其包含2-θ在约4.3°的峰。形式a具有x-射线粉末衍射图，其包含2-θ在约4.3°、约9.6°、约12.9°、约18.3°和约20.8°的峰。形式a具有基本上如图1e中所示的x-射线粉末衍射图。在一个实施方案中，本发明提供固体形式(多晶型物)，其为式1的形式b。式1的形式b具有x-射线粉末衍射图，其包含2-θ在约21.2°的峰。形式b具有x-射线粉末衍射图，其包含2-θ在约5.3°、约14.2°、约14.3°、约20.7°和约21.2°的峰。形式b具有基本上如图1h中所示的x-射线粉末衍射图。在一些方面，将本发明的多晶型物配制成组合物，然后施用于个体。式1的化合物可以以结晶或非极性或作为其混合物的形式存在。对于为晶型形式的本发明的盐，本领域技术人员可以理解，可以形成药学上可接受的溶剂合物，其中溶剂分子在结晶过程中被并入晶格。溶剂合物可以包括非水溶剂，例如乙醇、异丙醇、dmso、乙酸、乙醇胺和乙酸乙酯。在一个实施方案中，本发明提供并入晶格的式1的化合物的钠盐。在一个方面，本发明提供分离形式或纯形式的式1的化合物的多晶型物。“分离的”或“纯的”或“基本上纯的”形式是指样品，其中多晶型物以相对于可以存在于样品中的其它材料>75％、特别是>90％、>91％、>92％、>93％、>94％、>95％、>96％、>97％、>98％或>99％的量存在。可以根据本领域的任意方法表征根据本发明方法制备的多晶型物。例如，可以用x-射线粉末衍射(xrpd)、示差扫描量热法(dsc)、热重量分析(tga)、热-载台显微镜术和光谱法(例如拉曼、固态核磁共振(ssnmr)和红外(ir))表征根据本发明方法制备的多晶型物。xrpd可以用x-射线粉末衍射图(xrpd)来表征本发明的多晶型物。xrpd峰的相对强度可以根据样品制备技术、样品固定方法和所用的具体仪器的不同而改变。此外，仪器变化和其它因素可能会影响2θ值。因此，xrpd峰值分配可以通过加或减约0.2度改变。本发明的多晶型可用于显像剂的生产，并且可以通过结晶方法获得以产生结晶和半结晶形式。在各种实施方案中，通过在反应混合物中生成式1的化合物并从反应混合物中分离期望的多晶型物，或通过将原料化合物溶解在溶剂中，任选地加热进行结晶，然后通过冷却(包括主动冷却)和/或通过加入抗溶剂一段时间结晶/固化产物来进行结晶。结晶后可以在受控条件下进行干燥，直到达到最终多晶型的期望的含水量。在另一个实施方案中，本发明提供制备式1的化合物的多晶型物(形式a或形式b)的方法。在各种实施方案中，本发明涉及制备式1的化合物的多晶型物的方法，其中该方法包括将无定形形式转化为期望的多晶型物。在一些实施方案中，所述方法包括将包含无定形形式的组合物暴露于足以将至少约50％的无定形形式的总量转化为期望的多晶型物的至少约50％并根据需要分离期望的多晶型物。在某些情况下，结晶固体将比无定形固体更易于纯化，并且晶型能够以更高的纯度制备。这是因为在适合的条件下，形成的晶体倾向于从固体中排除杂质，与以较少受控的方式形成的无定形固体相反。类似地，结晶固体通常具有比无定形固体更好的稳定性，因为晶体填料产生保护作用。对于具有多晶型的材料，一些晶型通常比排除杂质和提高稳定性的其它晶体更有效。在一个实施方案中，本发明提供式2的化合物：或其溶剂合物或多晶型物并且具有药学上可接受的阳离子。本发明的一个实施方案包括用于器官成像的方法，该方法包括：对个体施用诊断有效量的式1的2-((e)-2-((e)-3-(2-((e)-3,3-二甲基-5-磺酸根合-1-(4-磺酸根合丁基)二氢吲哚-2-亚基)亚乙基)-2-(4-磺酸根合苯氧基)环己-1-烯-1-基)乙烯基)-3,3-二甲基-1-(4-磺酸根合丁基)-3h-吲哚-1--5-磺酸盐化合物：或其溶剂合物或多晶型物并且具有药学上可接受的阳离子，其中所述施用选自在手术操作之前、手术操作期间、手术操作之后及其组合的情况下进行一次或多次；使个体器官系统组织暴露于电磁辐射；和检测来自所述化合物的荧光辐射。在一个实施方案中，所述器官包括肾、膀胱、肝、脾、肠、心脏、肺和肌肉的一种或多种。在一个实施方案中，所述器官是肾、膀胱或其组合。在另一个实施方案中，所述器官是肾的输尿管。在一个实施方案中，所述方法包括通过静脉内施用式1的化合物。可以将式1的化合物快速浓注施用，例如静脉快速浓注。在一些实施方案中，将约5ml-约10ml的包含式1的化合物的组合物以快速浓注方式施用。在一个实施方案中，所述方法包括施用式1的化合物，其中药学上可接受的阳离子选自钾或钠。在一个实施方案中，所述方法包括施用式1的化合物与药学上可接受的载体的组合，所述载体选自无菌生理盐水溶液、无菌水溶液、无热原水溶液、等渗盐水溶液和磷酸缓冲盐水溶液。式1的化合物可以高度溶于水。在一些实施方案中，将式1的化合物重新混悬于水，达到至少200mg/ml或约300mg/ml-约320mg/ml的浓度。在一个实施方案中，所述方法包括以约3000.0μg/kg-约1500.0μg/kg的化合物的诊断有效量施用式1的化合物。在一个实施方案中，所述方法包括以约1500.0μg/kg-约1000.0μg/kg的化合物的诊断有效量施用式1的化合物。在一个实施方案中，所述方法包括以约1000.0μg/kg-约500.0μg/kg的化合物的诊断有效量施用式1的化合物。在一个实施方案中，所述方法包括以约500.0μg/kg-约170.0μg/kg的化合物的诊断有效量施用式1的化合物。在一个实施方案中，所述方法包括以约170.0μg/kg-约120.0μg/kg的化合物的诊断有效量施用式1的化合物。在一个实施方案中，所述方法包括以约120.0μg/kg-约60.0μg/kg的化合物的诊断有效量施用式1的化合物。在一个实施方案中，所述方法包括以约30.0μg/kg-约500.0μg/kg的化合物的诊断有效量施用式1的化合物。式1的化合物可以是无毒的。它们可以吸收和发出荧光，并且在荧光成像下不能快速地进行光漂白。施用后，式1的化合物可以通过个体体内体液的自然流动被运送到个体的组织和器官。照此，式1的化合物可以从施用部位被携带或转移到期望的部位、组织和器官，例如显影。在一些实施方案中，本文的化合物和方法可以对包括肝脏、胆囊、脾、小肠和相关导管的任何部分的胆道进行成像。在某些情况下，胆道包括肝内胆管、胆囊管-胆囊至胆总管和胆总管-肝和胆囊至小肠。在某些情况下，在施用后一段时间期限内发现在个体的胆汁或尿液中存在本文所述的化合物。本发明提供了在尿液或胆汁中的式1或2化合物的组合物。在一些实施方案中，本文的方法提供了对式1或2的化合物在尿或胆汁中的显影。在一个实施方案中，所述方法包括在施用后一定时间期限时，测定保留在个体器官组织处的所施用的式1的化合物的荧光强度。在一个实施方案中，所述器官包括肾、膀胱、胆囊、脾、肠、心脏、肺和肌肉的一种或多种。在一个实施方案中，所述器官是肾、膀胱或组合。在另一个实施方案中，所述器官是肾的输尿管。在一些实施方案中，所述方法包括在施用后一定时间期限时，测定保留在个体尿或胆汁中的所施用的式1的化合物的荧光强度。在一个实施方案中，所述方法包括：测定的所施用的式1的化合物的荧光强度是施用后大约24小时的背景荧光。在一个实施方案中，所述方法包括选自腹腔镜操作、机器人操作、机器人腹腔镜操作、内窥镜操作和开放性手术操作的手术操作。在一个实施方案中，所述方法包括在施用后大约至多6小时，所施用的式1的化合物测定的在肾中的荧光强度高于所施用的式1的化合物测定的在脾、肠、心脏、肺、肌肉的一种或多种或其组合中的荧光强度。在一个实施方案中，药物组合物包含诊断成像用量的式1的化合物、药学上可接受的阳离子和药学上可接受的载体。在另一个实施方案中，用于器官成像的方法包括：对个体施用诊断有效量的式2的2-((e)-2-((e)-3-(2-((e)-3,3-二甲基-5-磺酸根合-1-(4-磺酸根合丁基)二氢吲哚-2-亚基)亚乙基)-2-苯氧基环己-1-烯-1-基)乙烯基)-3,3-二甲基-1-(4-磺酸根合丁基)-3h-吲哚-1--5-磺酸盐：或其溶剂合物或多晶型物并且具有药学上可接受的阳离子，其中所述施用选自在手术操作之前、手术操作期间、手术操作之后及其组合的情况下进行一次或多次；使个体器官系统组织暴露于电磁辐射；和检测来自所述化合物的荧光辐射。在一个实施方案中，所述器官包括肾、膀胱、胆囊、脾、肠、心脏、肺和肌肉的一种或多种。在一个实施方案中，所述器官是肝。在另一个实施方案中，所述器官是肝的胆管。在一个实施方案中，所述器官是肝的胆囊管。在一个实施方案中，所述方法包括通过静脉内施用式2的化合物。可以将式2的化合物快速浓注施用，例如静脉快速浓注施用。在一些实施方案中，将约5ml-约10ml的包含式2的化合物的组合物以快速浓注方式施用。在一个实施方案中，所述方法包括施用式2的化合物，其中药学上可接受的阳离子选自钾或钠。在一个实施方案中，所述方法包括施用式2的化合物与药学上可接受的载体的组合，所述药学上可接受的载体选自生理无菌盐水溶液、无菌水溶液、无热原水溶液、等渗盐水溶液和磷酸盐缓冲溶液。式2的化合物可以高度溶于水。在一些实施方案中，将式2的化合物重新混悬于水，达到至少200mg/ml、约300mg/ml或约320mg/ml的浓度。在一个实施方案中，所述方法包括以约3000.0μg/kg-约1500.0μg/kg的化合物的诊断有效量施用式2的化合物。在一个实施方案中，所述方法包括以约1500.0μg/kg-约1000.0μg/kg的化合物的诊断有效量施用式2的化合物。在一个实施方案中，所述方法包括以约1000.0μg/kg-约500.0μg/kg的化合物的诊断有效量施用式2的化合物。在一个实施方案中，所述方法包括以约500.0μg/kg-约170.0μg/kg的化合物的诊断有效量施用式2的化合物。在一个实施方案中，所述方法包括以约170.0μg/kg-约120.0μg/kg的化合物的诊断有效量施用式2的化合物。在一个实施方案中，所述方法包括以约120.0μg/kg-约60.0μg/kg的化合物的诊断有效量施用式2的化合物。在一个实施方案中，所述方法包括以约30.0μg/kg-约500.0μg/kg的化合物的诊断有效量施用式2的化合物。式2的化合物可以是无毒的。它们可以吸收和发出荧光，并且在荧光成像下无法快速地进行光漂白。施用后，式2的化合物可以通过个体体内体液的自然流动被运送到个体的组织和器官。照此，式2的化合物可以从施用部位携带或转移到期望的部位、组织和器官，例如显影。在一个实施方案中，所述方法包括在施用后一定时间期限时，测定保留在个体器官组织处的所施用的式2的化合物的荧光强度。在一个实施方案中，所述器官包括肾、膀胱、胆囊、脾、肠、心脏、肺和肌肉的一种或多种。在一个实施方案中，所述器官是肝。在另一个实施方案中，所述器官是肝的胆管。在一些实施方案中，所述方法包括在施用后一定时间期限时，测定保留在个体尿或胆汁中的所施用的式2的化合物的荧光强度。在一个实施方案中，所述方法包括在施用后约24小时，所测量的施用的式2的化合物的荧光强度为背景荧光。在一个实施方案中，所述方法包括选自腹腔镜操作、机器人操作、机器人腹腔镜操作、内窥镜操作和开放性手术操作的手术操作。在一个实施方案中，所述方法包括在施用后大约至多6小时，所施用的式2的化合物测定的在肝中的荧光强度高于所施用的式2的化合物测定的在脾、肠、心脏、肺、肌肉的一种或多种或其组合中的荧光强度。在一个实施方案中，药物组合物包含诊断成像用量的式2的化合物、药学上可接受的阳离子和药学上可接受的载体。在一些实施方案中，式1的化合物或式2的化合物的药物组合物以诊断有效量与药学上可接受的阳离子和药学上可接受的载体组合。在这类实施方案中，该药物组合物包含在静脉内滴注袋中。在选择的实施方案中，式1的化合物和式2的化合物的诊断有效量独立地低于，例如3000.0、2800.0、2600.0、2400.0、2200.0、2000.0、1800.0、1600.0、1400.0、1200.0、1000.0、950.0、900.0、850.0、800.0、750.0、700.0、650.0、600.0、550.0、500.0、490.0、480.0、470.0、460.0、450.0、440.0、430.0、420.0、410.0、400.0、390.0、380.0、370.0、360.0、350.0、340.0、330.0、320.0、310.0、300.0、290.0、280.0、270.0、260.0、250.0、240.0、230.0、220.0、210.0、200.0、190.0、180.0、170.0、160.0、150.0、140.0、130.0、120.0、110.0、100.0、95.0、90.0、85.0、80.0、75.0、70.0、65.0、60.0、55.0、50.0、49.0、48.0、47.0、46.0、45.0、44.0、43.0、42.0、41.0、40.0、39.5,39.0、38.5,38.0、37.5,37.0、36.5,36.0、35.5,35.0、34.5,34.0、33.5,33.0、32.5,32.0、31.5,31.0、30.9、30.8、30.7、30.6、30.5、30.4、30.3、30.2、30.1μg/kg。在选择的实施方案中，式1的化合物和式2的化合物的诊断有效量独立地低于，例如2800.0、2600.0、2400.0、2200.0、2000.0、1800.0、1600.0、1400.0、1200.0、1000.0、950.0、900.0、850.0、800.0、750.0、700.0、650.0、600.0、550.0、500.0、490.0、480.0、470.0、460.0、450.0、440.0、430.0、420.0、410.0、400.0、390.0、380.0、370.0、360.0、350.0、340.0、330.0、320.0、310.0、300.0、290.0、280.0、270.0、260.0、250.0、240.0、230.0、220.0、210.0、200.0、190.0、180.0、170.0、160.0、150.0、140.0、130.0、120.0、110.0、100.0、95.0、90.0、85.0、80.0、75.0、70.0、65.0、60.0、55.0、50.0、49.0、48.0、47.0、46.0、45.0、44.0、43.0、42.0、41.0、40.0、39.5,39.0、38.5,38.0、37.5,37.0、36.5,36.0、35.5,35.0、34.5,34.0、33.5,33.0、32.5,32.0、31.5,31.0、30.9、30.8、30.7、30.6、30.5、30.4、30.3、30.2、30.1、30.0μg/kg。在选择的实施方案中，式1的化合物和式2的化合物各自的诊断有效量独立地在如下范围：约30.0μg/kg-约3000.0μg/kg、约30.1μg/kg-约2800.0μg/kg、约30.2μg/kg-约2600.0μg/kg、约30.3μg/kg-约2400.0μg/kg、约30.4μg/kg-约2200.0μg/kg、约30.5μg/kg-约2000.0μg/kg、约30.6μg/kg-约1800.0μg/kg、约30.7μg/kg-约1600.0μg/kg、约30.8μg/kg-约1400.0μg/kg、约30.9μg/kg-约1200.0μg/kg、约31.0μg/kg-约1000.0μg/kg、约31.5μg/kg-约950.0μg/kg、约32.0μg/kg-约900.0μg/kg、约32.5μg/kg-约850.0μg/kg、约33.0μg/kg-约800.0μg/kg、约33.5μg/kg-约750.0μg/kg、约34.0μg/kg-约700.0μg/kg、约34.5μg/kg-约650.0μg/kg、约35.0μg/kg-约600.0μg/kg、约35.5μg/kg-约550.0μg/kg、约36.0μg/kg-约500.0μg/kg、约36.5μg/kg-约490.0μg/kg、约37.0μg/kg-约480.0μg/kg、约37.5μg/kg-约470.0μg/kg、约38.0μg/kg-约460.0μg/kg、约38.5μg/kg-约450.0μg/kg、约39.0μg/kg-约440.0μg/kg、约39.5μg/kg-约430.0μg/kg、约40.0μg/kg-约420.0μg/kg、约41.0μg/kg-约410.0μg/kg、约42.0μg/kg-约400.0μg/kg、约43.0μg/kg-约390.0μg/kg、约44.0μg/kg-约380.0μg/kg、约45.0μg/kg-约370.0μg/kg、约46.0μg/kg-约360.0μg/kg、约47.0μg/kg-约350.0μg/kg、约48.0μg/kg-约340.0μg/kg、约49.0μg/kg-约330.0μg/kg、约50.0μg/kg-约320.0μg/kg、约55.0μg/kg-约310.0μg/kg、约60.0μg/kg-约300.0μg/kg、约65.0μg/kg-约290.0μg/kg、约70.0μg/kg-约280.0μg/kg、约75.0μg/kg-约270.0μg/kg、约80.0μg/kg-约260.0μg/kg、约85.0μg/kg-约250.0μg/kg、约90.0μg/kg-约240.0μg/kg、约95.0μg/kg-约230.0μg/kg、约100.0μg/kg-约220.0μg/kg、约110.0μg/kg-约210.0μg/kg、约120.0μg/kg-约200.0μg/kg、约130.0μg/kg-约190.0μg/kg、约140.0μg/kg-约180.0μg/kg,-约150.0μg/kg-约170.0μg/kg。在一个实施方案中，式1的化合物的诊断有效量约为3000.0μg/kg-约1500.0μg/kg。在一个实施方案中，式1的化合物的诊断有效量约为1500.0μg/kg-约1000.0μg/kg。在一个实施方案中，式1的化合物的诊断有效量约为1000.0μg/kg-约500.0μg/kg。在一个实施方案中，式1的化合物的诊断有效量约为500.0μg/kg-约170.0μg/kg。在一个实施方案中，式1的化合物的诊断有效量约为170.0μg/kg-约120.0μg/kg。在一个实施方案中，式1的化合物的诊断有效量约为120.0μg/kg-约60.0μg/kg。在一个实施方案中，式1的化合物的诊断有效量约为30.0μg/kg-约500.0μg/kg。在一个实施方案中，式2的化合物的诊断有效量约为3000.0μg/kg-约1500.0μg/kg。在一个实施方案中，式2的化合物的诊断有效量约为1500.0μg/kg-约1000.0μg/kg。在一个实施方案中，式2的化合物的诊断有效量约为1000.0μg/kg-约500.0μg/kg。在一个实施方案中，式2的化合物的诊断有效量约为500.0μg/kg-约170.0μg/kg。在一个实施方案中，式2的化合物的诊断有效量约为170.0μg/kg-约120.0μg/kg。在一个实施方案中，式2的化合物的诊断有效量约为120.0μg/kg-约60.0μg/kg。在一个实施方案中，式2的化合物的诊断有效量约为30.0μg/kg-约500.0μg/kg。本发明式1的化合物和式2的化合物各自的诊断有效量在宽剂量范围内有效。确切剂量将取决于施用途径、施用每种化合物的形式、待治疗个体的性别、年龄和体重以及施用者的偏好和经验。在选择的实施方案中，所施用的式1的化合物和所施用的式2的化合物各自的荧光强度可以独立地在施用后的如下时间期限时测量：例如，小于24小时、23小时、22小时、21小时、20小时、19小时、18小时、17小时、16小时、15小时、14小时、13小时、12小时、11小时、10小时、9.5小时、9.0小时、8.5小时、8.0小时、7.5小时、7.0小时、6.5小时、6.0小时、5.5小时、5.0小时、4.75小时、4.50小时、4.25小时、4.00小时、3.75小时、3.50小时、3.25小时、3.00小时、2.75小时、2.50小时、2.25小时、2.00小时、1.75小时、1.50小时、1.25小时、1.00小时、0.90小时、0.80小时、0.70小时、0.60小时、0.50小时、0.40小时、0.30小时、0.20小时。在选择的实施方案中，所施用的式1的化合物和所施用的式2的化合物各自的荧光强度可以独立地在施用后的如下时间期限时测量：例如，大于23小时、22小时、21小时、20小时、19小时、18小时、17小时、16小时、15小时、14小时、13小时、12小时、11小时、10小时、9.5小时、9.0小时、8.5小时、8.0小时、7.5小时、7.0小时、6.5小时、6.0小时、5.5小时、5.0小时、4.75小时、4.50小时、4.25小时、4.00小时、3.75小时、3.50小时、3.25小时、3.00小时、2.75小时、2.50小时、2.25小时、2.00小时、1.75小时、1.50小时、1.25小时、1.00小时、0.90小时、0.80小时、0.70小时、0.60小时、0.50小时、0.40小时、0.30小时、0.20小时、0.10小时。在选择的实施方案中，所施用的式1的化合物和所施用的式2的化合物各自的荧光强度可以独立地在施用后的如下范围的时间期限时测量：约0.10小时-约24小时、约0.20小时-约23小时、约0.30小时-约22小时、约0.40小时-约21小时、约0.50小时-约20小时、约0.60小时-约19小时、约0.70小时-约18小时、约0.80小时-约17小时、约0.90小时-约16小时、约1.00hr-约15小时、约1.25小时-约14小时、约1.50小时-约13小时、约1.75小时-约12小时、约2.00小时-约11小时、约2.25小时-约10小时、约2.50小时-约9.5小时、约2.75小时-约9.0小时、约3.00小时-约8.5小时、约3.25小时-约8.0小时、约3.50小时-约7.5小时、约3.75小时-约7.0小时、约4.00小时-约6.5小时、约4.25小时-约6.0小时、约4.50小时-约5.5小时、约4.75小时-约5.0小时。在本文描述的方法的实施方案中，用选择波长的光照射样品以得到可检测到的光学响应，并用于检测光学响应的装置观察。用于照射本发明的染料化合物的仪器包括、但不限于钨灯、手持式紫外线灯、水银弧灯、氙灯、发光二极管(led)、激光器和激光二极管。这些照明源任选地被集成到手术相机、腹腔镜和显微镜中。本发明的优选实施方案是在波长633-636nm、647nm、660nm、680nm和超过700nm例如780nm、810nm和850nm处或附近可激发的染料，因为这些区域与相对低廉的激发源的输出紧密匹配。光学响应任选地通过目视检查或通过使用以下装置的任意种检测：ccd摄像机、电视摄像机、摄影胶片。使用的nir成像探针是式1的化合物；激发773nm和发射790nm；或独立地，式2，激发772nm和发射787nm。如本文所述的式1的化合物和式2的化合物可以以与剂量制剂相容的方式施用，并且以对于体内成像有效或适合的量来施用。所施用的量取决于多种因素，包括例如个体的年龄、体重、身体活动和饮食、待成像的组织或器官以及需要进行的手术操作或手术的类型。在一些实施方案中，剂量的大小也可以由伴随化合物在特定个体中的施用的任何副作用的存在、性质和程度决定。然而，应当理解，任何特定患者的具体剂量水平和剂量频率可以变化，并且将取决于多种因素，包括所用特定化合物的活性、代谢稳定性和该化合物的作用时间长度、年龄、体重、遗传特征、一般健康状况、性别、饮食、施用方式和施用时间、排泄速率、药物组合、特定病症的严重程度和进行疗法的宿主。在一些实施方案中，剂量可以采取固体、半固体或冻干粉末形式，优选采用适合于精确剂量简单施用的单位剂型。在一些实施方案中，为了进行一次或多层施用，以特定剂量在容器、小瓶或注射器中提供剂量。如本文所用，术语“单位剂型”是指表示适合于作为人类和其它哺乳动物的单位剂量的物理上离散单元，每个单元包含预定量的经计算其用于产生期望的起效、耐受性和/或荧光效应的成像剂与适合的药用赋形剂的组合(例如安瓿)。此外，可以制备更浓缩的剂型，然后可以从其生产更稀释的单位剂型。因此，更浓缩的剂型包含基本上超过例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多倍用量的成像剂。制备这类剂型的方法是本领域技术人员已知的(参见，例如remington’spharmaceuticalsciences,第18版,mackpublishingco.,easton,pa(1990))。所述剂型典型地包括常规的药用载体或赋形剂，并且还可以包括其它药物、载体、佐剂、稀释剂、组织渗透增强剂、增溶剂等。可以通过本领域众所周知的方法将合适的赋形剂制成特定施用途径的剂型(参见，例如remington’spharmaceuticalsciences,第18版,mackpublishingco.,easton,pa(1990))。在一些实施方案中，所述剂型包含用于储存、分离、纯化和/或冻干化合物的稳定剂。用于冻干的试剂包括、但不限于糖，例如单糖、二糖或葡聚糖。其它糖类包括葡萄糖、半乳糖、木糖、葡萄糖醛酸、海藻糖、葡聚糖、羟乙基淀粉、甘露醇或5％葡萄糖。对于肠胃外施用，例如静脉内注射、动脉内注射、皮下注射、肌内注射等，有效剂量可以是无菌注射溶液和无菌包装粉末的形式。优选地，在约4.5至约7.5的ph或生理ph下配制注射溶液。在一些实施方案中，用于成像的有效剂量包含本文所述的高质量、易溶形式的冻干化合物，在室温下可稳定数月。可以将冻干的式1或式2的化合物存储在任意适合类型的密封容器中，例如密封小瓶或注射器，其包含用于个体例如人成人的单剂量的化合物用量。术语“小瓶”在本文中广泛使用，是指任何设计用于密封和无菌储存、运输和处理少(例如单剂量)的药物的药物包装装置。单室小瓶(其仅包含冻干的化合物，不含水)是众所周知的；典型的单室小瓶可以设计用于静脉内输注袋。或者，可以使用包含冻干化合物和无菌水溶液的两室小瓶，以便立即重构和注射包含式1或式2的化合物的含水液体。本文提供了包含式1的化合物或式2的化合物的试剂盒。在一些实施方案中，试剂盒包含一个或多个小瓶或注射器，其中包含例如冻干形式的式1的化合物。在其它实施方案中，试剂盒包含一个或多个小瓶或含有例如冻干形式的式2的化合物的注射器。这样的试剂盒还可以包括药学上可接受的载体或无菌水溶液，例如用于在施用前重构化合物的无菌水。在一些情况下，所述试剂盒还包括用于肠胃外施用化合物的无菌注射器或用于静脉内的输注袋。该试剂盒还可以包括使用说明书。当本文使用范围时，旨在包括范围的所有组合和子组合以及其中的具体实施方案。在引用数字或数值范围时使用术语“大约”意味着所提及的数字或数值范围是实验变异性内(或统计学实验误差)内的近似值，且由此数字或数值范围可以在所述数字或数值范围的1％至15％之间改变。术语“包含”(以及例如“含有”或“包括”或“具有”或“包括”这样的相关术语)包括由所描述的特征“组成”或“基本上由所述描述的特征组成”的那些实施方案。具体实施方式iii.实施例实施例1可以通过将3,3-二甲基-2-[2-[2-氯-3-[2-[1,3-二氢-3,3-二甲基-5-磺基-1-(4-磺基丁基)-2h-吲哚-2-亚基]-亚乙基]-1-环己烯-1-基]-乙烯基]-5-磺基-1-(4-磺基丁基)-3h-吲哚氢氧化物内盐三钠盐(1g，1.05mmol)溶于25ml水并且喷射氮气15分钟合成式1的化合物。将4-羟基苯磺酸钠二水合物(875mg，3.77mmol)溶于3.6ml1nnaoh(3.6mmol)，加入到该反应混合物中。将该反应混合物在40℃放入油浴中，搅拌16小时。通过旋转蒸发干燥该溶液，然后使产物从80:20乙醇:水中重结晶。过滤化合物，然后用乙醇洗涤，在60℃真空干燥18小时。可以如下制备式1的化合物的多晶型物(形式a)：将3,3-二甲基-2-[2-[2-氯-3-[2-[1,3-二氢-3,3-二甲基-5-磺基-1-(4-磺基丁基)-2h-吲哚-2-亚基]-亚乙基]-1-环己烯-1-基]-乙烯基]-5-磺基-1-(4-磺基丁基)-3h-吲哚氢氧化物内盐三钠盐(20g，21mmol)和4-羟基苯磺酸钠二水合物(5.84g，25.2mmol)的混合物混悬于水(120ml)中。将该混悬液加热至85℃，其中观察到完全溶解。滴加氢氧化钠水溶液(10n，2.5ml，25mmol)，将该反应体系搅拌45分钟。缓慢地加入异丙醇(360ml)以维持反应温度高于60℃。然后将该混合物缓慢地冷却至环境温度，过滤得到的浆液。用40ml异丙醇:水(3:1)冲洗滤饼，用40ml异丙醇冲洗2次，在50-60℃真空干燥，得到18.4g式1的化合物，为深绿色固体。然后通过在约70℃溶于水(50ml)和异丙醇(100ml)并且将该混合物冷却至环境温度使10克(9mmol)的该材料重结晶。通过过滤采集固体，用20ml异丙醇:水(2:1)冲洗，用20ml异丙醇冲洗2次，在50-60℃真空干燥，得到6.7g式1的化合物，为深绿色结晶固体。形式a的x-射线粉末衍射(xrpd)用panalyticalx’pertpro进行xrpd分析，在3-35°2θ扫描样品。适度研磨该材料，上具有kapton或聚酯薄膜的聚合物薄膜的多孔板以支持样品。然后将多孔板上样于以传输方式运行的panalytical衍射仪并且分析。xrpd数据如图1a-1f中所示。正如所示例的，图1a和1c相同且均为适度的结晶并且表示形式a。图1b在结晶度方面类似且为形式a。图1d是结晶。图1e是图1d的放大版。图1d和图1e表示形式a。图1f是无定形形式。对于形式a，将固态形式的特征xrpd角度和d-间距概括在表1中。测定峰位并且制表。表1：irdye800bk批号bv736185(图1a)的峰数据，xprd分析对于形式a，将固体形式的特征性xrpd角度和d-间距概括在表2中。测定峰位并且制表。表2：irdye800bk批号ve-759-24-1(图1e)的峰数据，xrpd分析在一个实施方案中，能够由形式a制备形式b。形式a是结晶并且作为具有无确定形态的小双折射颗粒存在。该材料是吸湿性的(27wt％吸收率至90％rh)并且可以在压力条件下改变形式。形式改变在形式a接触40℃/75％rh时发生。该形式相当于使用后-gvs样品测定的形式。hplc纯度显示无改变。图1h和图1i表示形式b。对于比较，图1g与图1d相同。对于形式b，将固体形式的特征性xrpd角度和d-间距概括在表3中。测定峰位并且制表。表3：irdye800bk批号ve-759-24-1形式b的峰数据，xrpd分析实施例2可以通过将3,3-二甲基-2-[2-[2-氯-3-[2-[1,3-二氢-3,3-二甲基-5-磺基-1-(4-磺基丁基)-2h-吲哚-2-亚基]-亚乙基]-1-环己烯-1-基]-乙烯基]-5-磺基-1-(4-磺基丁基)-3h-吲哚氢氧化物内盐三钠盐(1g，1.05mmol)溶于25ml水并且喷射氮气15分钟合成式2的化合物。将苯酚钠三水合物(390mg，2.29mmol)溶于2ml超纯水，加入到该反应混合物中。将该反应混合物在40℃放入油浴中，搅拌4小时。通过旋转蒸发干燥该溶液，然后使产物从90:10乙醇:水中重结晶。过滤化合物，然后用乙醇洗涤，在60℃真空干燥18小时。对比例1对比例1化合物、也称作800cw的结构如下所示：吲哚菁绿(icg)染料的结构如下所示：实施例3：体外使用两种癌细胞系(a431和a549)进行体外基于细胞的测定以评价式1的化合物和式2的化合物的非特异性结合。将染料与800cw比较。如图2a、2b和2c中所示。式2的化合物显示与式1的化合物和800cw相比非特异性结合显著增加2倍。式1的化合物更与800cw相差无几。为了证实全部三种化合物具有相差无几的荧光，制备稀释液系列并且用odysseysa荧光成像系统(li-corbiosciences)成像。用仪器软件对每个孔中的荧光定量。图2c显示在本试验中的全部三种化合物在荧光方面极为接近，由此证实在基于板的测定中注意到的较高浓度下的荧光增加可能归因于该化合物非特异性地结合细胞的倾向。通常，低非特异性结合是有利的。两种细胞系均显示对于低于1μm浓度的全部化合物的非特异性结合。然而，在较高浓度下均开始显示一定结合。实施例4：体内使用pearl脉冲成像系统(impulseimagingsystem)(li-corbiosciences)的800荧光通道，随着时间的推移使注射了探针的动物成像。在裸鼠中形成对于800cw、式1的化合物和式2的化合物清除分布(所有化合物的剂量均为1nmole)。在24hr时间期限内对顺序图像和切下的器官进行评价。背侧图像系列如图3所示。pearl脉冲小动物成像系统用于所有的动物和器官图像采集。对比例1的化合物用作参考。从背侧视图来看，任何探针都没有肾脏信号。在注射后2小时，式2的化合物表现出高信号，从背侧可见的肝脏区域发出。式2的化合物不会完全散播，因为它在肝脏中被快速采集，并且截止到注射后5hr，全身信号与800cw和式1的化合物相比较低。实施例5：腹部影像腹侧图像显示在图4中。从目视检查中可以看出，式1的化合物和800cw的清除模式相似。这两种探针显然通过肾脏快速清除。该特征对于用于泌尿系统的成像而言非常有用。另一方面，式2的化合物通过肝脏清除。该特征对于胆管监测染料是非常有用的，其可以“模拟”目前用于该临床应用的icg。从体外基于板的测定中可以看出，显然式1的化合物和式2的化合物具有与800cw相似的荧光强度。然而，从体内数据来看，式1的化合物显然通过组织快速地移动，但在器官中长时间保留。膀胱信号是对于800cw和式1的化合物探针(紫色箭头)注意到的最强信号。对于三种探针的全身荧光数(腹侧视图)如图5中所示。非侵入性成像不会捕获动物全深度的信号，但强度值对于显示相对趋势是有用的。与式2的化合物相比，800cw和式1的化合物存在较慢的清除率。式2的化合物的信号显然比800cw和式1的化合物的信号总体更低，但是显然在肝脏中被快速地采集。24小时施用后，全部三种探针的剩余荧光减少到大致相同的程度。检查荧光信号的另一种方法通过测定在特定时间点保留的化合物的百分数来进行。30分钟时间点是标准化其它时间点的基线。这些数据如下表4中所示。每次剩余的百分比信号使用注射后30分钟的时间点显示，其用作基线。在2小时时，出现式2的化合物最大的减少。式1的化合物与800cw非常相似，且截止到注射后24小时，全部化合物在基线的2％以下的剩余信号非常相似。实施例5：器官在24小时切下器官并成像。数据如图6中所示。与注射后24小时的式2的化合物相比，式1的化合物保留在肝脏和肾脏中的水平较高。令人惊奇地，与800cw和式1的化合物相比，主要从肝脏清除的式2的化合物在24小时时具有较低的肝脏信号。与800cw和式2的化合物相比，这可以解释为式1的化合物从组织中的总体清除更为缓慢。在脑中未检测到800cw或式1的化合物或式2的化合物的任一种，并且可能是由于它们不能通过血脑屏障所致。图7示例输尿管以及肾和膀胱。当施用式1的化合物来筛选肾脏的输尿管时，该区域的图像在施用后被捕获。图8示例显示命名的化合物对人(h)、牛(b)、卵清蛋白(o)或5％fbs(胎牛血清)的非特异性或亲和性的选定蛋白质的染色电泳凝胶的荧光图像。显然式2的化合物具有用于胆管检查的潜能，类似于icg。实施例7：小鼠尿由于对于式1的化合物主要消除途径是肾脏，所以分析小鼠尿中的输出量。从接收的小鼠中获得尿液：既无式1的化合物、也无式2的化合物(对照)、式1的化合物、icg和式2的化合物。用乙腈：甲醇混合物提取尿液，并在odysseyclx成像仪(li-corbiosciences)上成像，如图9中所示。对于对照和icg，没有观察到荧光信号。icg被肝脏消除，所以预期没有信号。对于式2的化合物有轻微的荧光，这启示肝脏排泄不完全排他。实施例8：与icg比较为了它们在胆管成像中的常见应用，对式2的化合物与icg进行比较(图10a和10b)。pearl脉冲小动物成像系统用于所有的动物和器官图像采集。icg极不溶于水性介质，并且比体内的式2的化合物提供了更弱的荧光信号。制备icg在磷酸缓冲盐水溶液中的50nmol溶液，静脉内注射，并与在1分钟、30分钟、2小时、5小时和24小时时间期限时的1nmole式2的化合物溶液进行定位比较。在1分钟、30分钟、2小时、5小时和24小时时间期限时，对于式2的化合物的剂量响应的比较如图10b(1nmole)、图10c(0.5nmole)和图10d和10e(0.1nmole)中所示。使用相同的lut表呈现全部图像，图10e除外，其中图10d的lut减少至800nm信号变亮，因此，它们是可见的。对于1nmole(图10b)和0.5nmole(图10c)剂量静脉内施用后30分钟，胆囊可见，并且在2小时和5小时图像中持续可见。图10d中的0.1nmole剂量的图像似乎显示使用与1nmole和0.5nmole剂量系列相同的刻度的极低的检测信号。然而，如果如图10e所示调整刻度，则胆囊目标区域在非常低的背景上可见。宽泛的施用能够适应特定的成像系统或应用。实施例9：切下器官的评价在24小时和72小时检查式1的化合物和式2的化合物在不同器官的荧光信号强度(图11a-11e)。检查的器官包括：心脏(ht)、肺(ln)、肾(kd)、肝(lv)、脾(spl)、肠(int)、脑(br)和肌肉(ms)。在24小时时，在肝和肾中仍然保留一些信号，但截至到72小时，信号显著(substantially)减少。图11a显示施用后24小时使用对照(800cw)的结果。图11b显示施用后24小时使用式2的化合物的结果。图11c显示施用后24小时使用式1的化合物的结果。图11d-11e显示分别施用式1和式2后72小时的结果。图11f显示以手术方式打开的动物，用于确定胆道结构是否可见。将动物的肝定位以暴露关键结构。图11f-11h的图像系列呈现具有因暴露连接卡洛氏三角区(calot’striangle)的胆囊和胆管增加的叶片的肝的白光图像；如通过式2的化合物的荧光研究检测的800nm图像；和在白光图像顶部的覆盖800nm图像的复合图像。实施例10：小鼠中的消除途径本实施例描述了一种用于评价本文所述的染料从注射这类染料的动物排泄的实验。测试的染料是稳定的花青染料(irdyes)：800cw、800bk-磺酸盐(式1的化合物；800bk或bk)和800bk-nos(式2的化合物；800nos或nos)。在本研究中，给12只裸鼠(每组3只)注射：(1)无探针(对照组)；(2)800cw；(3)800nos；或(4)800bk。将三种探针(800cw-1166g/mole(应该是1091.1g/mole)/800nos-1011.09g/mole和800bk-1113.14g/mole)溶于pbs中。进行三个探针的斑点试验，以在稀释至1nmole/100μl的注射剂量时检测荧光信号(图12)。800cw的荧光略高于800nos和800bk。小鼠通过尾静脉注射接受1nmole的染料。静脉注射后超过24小时，连续成像小鼠：注射后5分钟、1小时、2小时、4小时、6小时和24小时。图13a-13c中示出了有代表性的一系列图像，每种染料针对一只动物。所有数据被校准为相同的lut。使用对照小鼠(无探针)作为参照(无信号对照)。使用trilogy成像系统进行成像。然后处死小鼠，收获其器官和组织(即肝、肾、肺、脾和肌肉)。成像器官以检测荧光。当将相同的lut用于动物和器官图像时，器官中的荧光无法检测。照此，扩大了动物刻度的下限，使得可以评价器官的图像(图14)。例如，图15a-15d的图像中使用了“器官1/10(1/10th)刻度”，“图16a-16d的图像使用了“1/100(1/100th)刻度的器官”。图15a显示对照动物的器官中没有荧光。肾脏(左下角)和肝脏(右下角)在用800cw(图15b)、800nos(图15c)和800bk(图15d)处理的动物中具有检测信号。除了800cw处理外，治疗中没有肌肉(右上角)或肺组织(左上角)可见。在1/10lut刻度上，高水平是整个动态lut刻度的1/10。数据显示，在整个动物lut刻度上成像时，这些器官中仅存在残留的染料。如果整个动物lut刻度降低到100x，使得调整的刻度是整个动物尺度的1/100，则图16a-d显示器官中的一些信号。图16a显示来自对照动物的信号。图16b、16c和16d分别显示来自800cw处理的动物、800nos处理的动物和800bk处理的动物的器官的信号。800cw和800bk通过肾脏排泄。800cw动物中较高的总体信号主要是由于注入动物的探针浓度意外较高所致。800nos通过胆道(肝、胆囊和胆管)和肠被从体内消除。在800nos处理的动物中，随着染料迅速离开肝脏，肝脏在15分钟时可见，然后是胆囊。数据还表明，染料被移入肠内进行排泄。2-6小时之间的主要信号是在肠内。在注射后24小时，肠信号几乎检测不到。使器官在三种lut标度下成像；它们各自在覆盖的信号范围内逐渐变小。每个渐进比例的较低水平扩大到覆盖全红色到蓝色范围(图14)。任何目标器官如肝、肾、肺和肌肉中的信号保留非常少。对于800cw和800bk，肾脏中发现类似的信号强度。在肝脏中，800bk与800cw相比具有更高的信号。结果显示，与800cw和800nos相比，800bk在肝脏中的保留时间更长。这可能是由于800bk的血浆蛋白结合增加(高于800cw)。本实施例显示，irdye800nos的清除从全身快速到达胆(biliay)系统，其中在肝脏中的保留时间极短，并且还快速排泄到肠内。通过肝脏快速清除意味着800nos具有低血浆蛋白结合活性。实施例11：子宫切除术期间的输尿管显影将式1的药物制剂溶于具有5ml盐水(0.9％氯化钠)的小瓶(25mg)中，并且在手术开始前15分钟，以5mg/ml的浓度通过快速浓注施用于患者。用于该手术操作的医用装置是pinpoint内窥镜荧光成像系统(novadaq,mississauga,ontario,canada)。在手术过程中的任意时间点，当外科医生需要鉴定输尿管时，将所述装置的模式切换到近红外检测成像，且外科医生通过医用装置的监视器或显示器使输尿管显影。输尿管的这种鉴定在监视器上可视化为覆盖图像，其中外科医生可以用白光成像同时定位输尿管。实施例12：胆囊切除术期间胆道管显影将式2的药物制剂溶于具有5ml盐水(0.9％氯化钠)的小瓶(25mg)中，并且在手术开始前15分钟，以5mg/ml的浓度通过快速浓注施用于患者。该手术操作的医用装置是达芬奇萤火虫手术系统(davincifireflysurgicalsystem)(intuitivesurgical,sunnyvaleca)。在手术操作过程中，当外科医生需要鉴定胆管时，将所述装置的模式切换到近红外检测成像，且外科医生根据需要通过在白光图像与近红外图像之间切换经医用装置监视器或显示器来鉴定胆管。应当理解，本文描述的实施例和实施方案仅用于说明性目的，并且将向本领域技术人员启示各种变型或改变，且将被包括在本申请的精神和范围以及权利要求的范围内。出于所有目的，本文引用的所有出版物、专利和专利申请的全部内容通过引用并入本文。当前第1页12当前第1页12