治疗癌症的组合疗法的制作方法

相关申请的交叉引用

本申请要求2014年12月2日提交的美国临时申请号62/086,435和2015年8月27日提交的美国临时申请号62/210,545的优先权权益，其各自以其整体通过引用并入本文。

本文描述了用于治疗癌症和其他疾病的组合疗法。一方面，本文所述的用于治疗癌症和其他疾病的方法包括组合施用rspo-lgr通路抑制剂和有丝分裂抑制剂。

背景技术：

r-脊椎蛋白(rspo)蛋白家族在脊椎动物中是保守性的，并且包含四个成员rspo1、rspo2、rspo3和rspo4。这些蛋白质具有多种名称，其包括顶板特异性脊椎蛋白、hpwtsr(hrspo3)、ths2d(rspo3)、cristin1-4和futrin1-4。rspo是总共共享大约40％至60％序列同源性和结构域布局的小分泌蛋白。所有rspo蛋白在n-末端包含两个富含半胱氨酸的弗林蛋白酶样结构域和跟随其后的血小板反应蛋白结构域和碱性带电的c-末端尾(kim等，2006，cellcycle，5：23-26)。

研究已经显示rspo蛋白在脊椎动物发育(kamata等，2004，biochim.biophysacta，1676：51-62)和非洲爪蟾肌发生(kazanskaya等，2004，dev.cell，7：525-534)过程中起作用。rspo1还显示作为胃肠上皮细胞的有效的有丝分裂原的功能(kim等，2005，science，309：1256-1259)。据报道，rspo3在非洲爪蟾和小鼠中显著地表达于或接近内皮细胞及其细胞前体。此外，已经表明rspo3可以作为胚胎发生中的血管生成因子(kazanskaya等，2008，development，135：3655-3664)。

已显示，wnt配体和r-脊椎蛋白(rspo)对于激活公认的wnt通路具有协同作用。已知rspo蛋白激活类似与wnt信号传导的β-连环蛋白信号传导，然而，rspo蛋白和wnt信号传导之间的关系仍在研究中。据报道，rspo蛋白对于wnt配体具有正向调节活性(nam等，2006，jbc281：13247-57)。此研究还报道，rspo蛋白可作为frizzled8和lrp6受体配体起作用并且诱导β-连环蛋白信号传导(nam等，2006，jbc281：13247-57)。最近的研究鉴定了rspo蛋白和诸如lgr5等lgr(含有富含亮氨酸的重复序列的g蛋白偶联受体)蛋白之间的相互作用(美国专利公开第2009/0074782号和2009/0191205号)，这些数据提供了激活β-连环蛋白信号传导的另一条通路。

破坏β-连环蛋白信号传导的rspo和lgr拮抗剂(例如，抗rspo3抗体)是用于癌症及其他β-连环蛋白相关疾病的新治疗剂的潜在来源。例如参见，u.s.8,158,757、u.s.8,540,989、u.s.8,802,097和u.s20140017253。

wnt通路激活与结肠直肠癌有关。全部结肠直肠癌中的大约5％-10％是遗传性的，其中一个主要形式是家族性腺瘤性息肉病(fap)，其是常染色体显性疾病，其中约80％受影响的个体在腺瘤性结肠息肉病(apc)基因中包含种系突变。还在包括轴蛋白和β-连环蛋白的其他wnt通路组分中鉴定出突变。个体腺瘤是含第二失活等位基因的上皮细胞的克隆生长物，大量的fap腺瘤不可避免地通过致癌基因和/或肿瘤抑制基因中的另外的突变导致腺癌性发展。此外，包括apc中的功能丧失突变和β-连环蛋白中的稳定突变的wnt信号传导通路的激活可在小鼠模型中诱导增生性发育和肿瘤生长(oshima等，1997，cancerres.，57：1644-9；harada等，1999，emboj.，18：5931-42)。

本发明的一个目的在于提供用于癌症治疗的改善方法，特别是组合使用有丝分裂抑制剂和rspo-lgr通路抑制剂的策略性时间间隔(即，交错)给药方案。

技术实现要素：

本发明涉及治疗癌症的方法，其包括：向受试者施用治疗有效量的rspo-lgr通路抑制剂，如抗rspo3抗体或抗lgr5抗体。在某些实施方式中，该方法进一步包括向患者施用有丝分裂抑制剂。在某些实施方式中，在施用有丝分裂抑制剂前约1天、约2天或约3天施用rspo-lgr通路抑制剂。在某些实施方式中，所述癌症是肺癌。在某些其他实施方式中，癌症是结肠直肠癌，其包括但不限于：包含腺瘤性结肠息肉病(apc)基因中的失活突变或β-连环蛋白基因中的激活突变的结肠直肠癌。

本发明进一步涉及治疗癌症的方法，其包括：向受试者施用治疗有效量的rspo-lgr通路抑制剂和治疗有效量的有丝分裂抑制剂，其中，使用交错(staggered)给药方案施用rspo-lgr抑制剂和有丝分裂抑制剂，并且首先施用rspo-lgr抑制剂；并且其中，rspo-lgr通路抑制剂是：(a)特异性结合至少一种人rspo蛋白的抗体，(b)特异性结合至少一种人lgr蛋白的抗体，或(c)包含能够结合至少一种人rspo蛋白的人lgr蛋白的细胞外结构域的可溶性受体。

本发明还涉及治疗癌症的方法，其包括：向受试者施用治疗有效量的特异性结合至少一种人rspo蛋白的抗体和治疗有效量的有丝分裂抑制剂，其中，使用交错给药方案施用所述抗体和有丝分裂抑制剂，并且首先施用所述抗体。

本发明还涉及一种治疗癌症的方法，其包括：向受试者施用治疗有效量特异性结合人rspo3的抗体和治疗有效量的有丝分裂抑制剂，其中，使用交错给药方案施用所述抗体和有丝分裂抑制剂，并且首先施用所述抗体。在一个实施方式中，在施用rspo-lgr通路抑制剂或抗体约1天、2天、3天、4天、5天或6天后施用有丝分裂抑制剂。

本发明还涉及治疗癌症的方法，其包括：向受试者施用治疗有效量的rspo-lgr通路抑制剂，其中，rspo-lgr通路抑制剂是：(a)特异性结合至少一种人rspo蛋白的抗体，(b)特异性结合至少一种人lgr蛋白的抗体，或(c)包含能够结合至少一种人rspo蛋白的人lgr蛋白的细胞外结构域的可溶性受体，并且其中，受试者被安排在施用rspo-lgr通路抑制剂约1天、2天、3天、4天、5天或6天后接受治疗有效量的有丝分裂抑制剂。

本发明还涉及一种在受试者中治疗癌症的方法，其包括：向受试者施用治疗有效量的特异性结合至少一种人rspo蛋白的抗体，其中，受试者被安排在施用所述抗体约1天、2天、3天、4天、5天或6天后接受治疗有效量的有丝分裂抑制剂。

本发明还涉及一种在受试者中治疗癌症的方法，其包括：向受试者施用治疗有效量的特异性结合人rspo3的抗体，其中，受试者被安排在施用所述抗体约1天、2天、3天、4天、5天或6天后接受治疗有效量的有丝分裂抑制剂。

本发明还涉及一种在受试者中增加有丝分裂抑制剂治疗癌症的功效的方法，其包括，在施用rspo-lgr通路抑制剂约1天、2天、3天、4天、5天或6天后，向受试者施用有丝分裂抑制剂，其中，rspo-lgr通路抑制剂是：(a)特异性结合至少一种人rspo蛋白的抗体，(b)特异性结合至少一种人lgr蛋白的抗体，或(c)包含能够结合至少一种人rspo蛋白的人lgr蛋白的细胞外结构域的可溶性受体。

本发明还涉及一种在受试者中增加有丝分裂抑制剂治疗癌症的功效的方法，其包括，在施用特异性结合至少一种人rspo蛋白的抗体约1天、2天、3天、4天、5天或6天后，向受试者施用有丝分裂抑制剂。

本发明还涉及一种在受试者中增加有丝分裂抑制剂治疗癌症的功效的方法，其包括，在施用特异性结合人rspo3的抗体约1天、2天、3天、4天、5天或6天后，向受试者施用有丝分裂抑制剂。

本发明还涉及一种在受试者中增加有丝分裂抑制剂治疗癌症的功效的方法，其包括：(a)向受试者施用rspo-lgr通路抑制剂；和(b)在施用rspo-lgr通路抑制剂约1天、2天、3天、4天、5天或6天后，向受试者施用有丝分裂抑制剂，其中，所述rspo-lgr通路抑制剂是：(i)特异性结合至少一种人rspo蛋白的抗体，(ii)特异性结合至少一种人lgr蛋白的抗体，或(iii)包含能够结合至少一种人rspo蛋白的人lgr蛋白的细胞外结构域的可溶性受体。

本发明还涉及一种在受试者中增加有丝分裂抑制剂治疗癌症的功效的方法，其包括：(a)向受试者施用特异性结合至少一种人rspo蛋白的抗体；和(b)在施用所述抗体约1天、2天、3天、4天、5天或6天后，向受试者施用有丝分裂抑制剂。

本发明还涉及一种在受试者中增加有丝分裂抑制剂治疗癌症的功效的方法，其包括：(a)向受试者施用特异性结合人rspo3的抗体；和(b)在施用所述抗体约1天、2天、3天、4天、5天或6天后，向受试者施用有丝分裂抑制剂。

在前述方法的某些实施方式中，在施用rspo-lgr通路抑制剂或抗体约1天后施用有丝分裂抑制剂。在一个实施方式中，在施用rspo-lgr通路抑制剂或抗体约2天后施用有丝分裂抑制剂。在另一个实施方式中，在施用rspo-lgr通路抑制剂或抗体约3天后施用有丝分裂抑制剂。

在前述方法的某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂或抗体和有丝分裂抑制剂协同作用。

在本发明的某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂或抗体每周施用一次。在本发明的某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂或抗体每2周施用一次。在本发明的某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂或抗体每3周施用一次。

在本发明的某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂或抗体约每2周施用一次，且有丝分裂抑制剂约每周施用一次。在另一个实施方式中，有丝分裂抑制剂的施用为约每2周一次，约每3周一次，或在4周(28天)周期的3周中每周一次。在另一个实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂或抗体施用2、3、4、5、6、7、8个以上周期。在另一个实施方式中，有丝分裂抑制剂施用2、3、4、5、6、7、8个以上周期。

在本发明的某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂或抗体约每3周施用一次，且有丝分裂抑制剂约每周施用一次。在另一个实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂或抗体约每4周施用一次。在另一个实施方式中，有丝分裂抑制剂的施用约每周一次，约每2周一次，或约每3周一次。在另一个实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂或抗体约每4周施用一次，且有丝分裂抑制剂约每周施用一次。在另一个实施方式中，施用rspo-lgr通路抑制剂或抗体2、3、4、5、6、7、8个以上周期。在另一个实施方式中，施用有丝分裂抑制剂2、3、4、5、6、7、8个以上周期。

在本发明的某些实施方式中，以约2mg/kg～约20mg/kg的剂量向受试者施用rspo-lgr通路抑制剂。在某些实施方式中，以约2mg/kg～约10mg/kg的剂量向受试者施用rspo-lgr通路抑制剂或抗体。在某些实施方式中，以约2.5mg/kg～约10mg/kg的剂量向受试者施用rspo-lgr通路抑制剂或抗体。在某些实施方式中，以约5mg/kg～约20mg/kg的剂量向受试者施用rspo-lgr通路抑制剂或抗体。

在另一个实施方式中，以约2mg/kg～约20mg/kg的剂量每周一次施用rspo-lgr通路抑制剂或抗体。在另一个实施方式中，以约2mg/kg～约20mg/kg的剂量每2周一次施用rspo-lgr通路抑制剂或抗体。在另一个实施方式中，以约2mg/kg～约20mg/kg的剂量每3周一次施用rspo-lgr通路抑制剂或抗体。在另一个实施方式中，以约2mg/kg～约20mg/kg的剂量每4周一次施用rspo-lgr通路抑制剂或抗体。在另一个实施方式中，以约2mg/kg～约5mg/kg的剂量每3周施用rspo-lgr通路抑制剂或抗体。在另一个实施方式中，以约3mg/kg～约7.5mg/kg的剂量每4周施用rspo-lgr通路抑制剂或抗体。

在本发明的某些实施方式中，本发明的rspo-lgr通路抑制剂特异性结合至少一种人rspo蛋白的抗体。在一个实施方式中，所述抗体特异性结合选自由rspo1、rspo2和rspo3组成的组中的至少一种人rspo蛋白。在另一个实施方式中，所述抗体至少特异性结合人rspo1。在另一个实施方式中，所述抗体包含：(a)含有tgytmh(seqidno:5)的重链cdr1，含有ginpnnggttynqnfkg(seqidno:6)的重链cdr2，和含有kefsdgyyffay(seqidno:7)的重链cdr3；及(b)含有kasqdvifava(seqidno:8)的轻链cdr1，含有wastrht(seqidno:9)的轻链cdr2，和含有qqhystpw(seqidno:10)的轻链cdr3。在另一个实施方式中，所述抗体包含含有seqidno:11或seqidno:44的重链可变区以及含有seqidno:12或seqidno:45的轻链可变区。在另一个实施方式中，所述抗体包含含有seqidno:11的重链可变区和含有seqidno:12的轻链可变区。在另一个实施方式中，所述抗体包含含有seqidno:44的重链可变区和含有seqidno:45的轻链可变区。

在本发明的某些实施方式中，本发明的抗体至少特异性结合人rspo2。在另一个实施方式中，所述抗体包含：(a)含有ssyams(seqidno:17)的重链cdr1，含有sissggstyypdsvkg(seqidno:18)的重链cdr2，和含有rggdpgvyngdyedamdy(seqidno:19)的重链cdr3；及(b)含有kasqdvssava(seqidno:20)的轻链cdr1，含有wastrht(seqidno:21)的轻链cdr2，和含有qqhystp(seqidno:22)的轻链cdr3。在另一个实施方式中，所述抗体包含含有seqidno:23的重链可变区和含有seqidno:24的轻链可变区。

在本发明的某些实施方式中，本发明的抗体特异性结合至少人rspo3。在另一个实施方式中，所述抗体包含：(a)含有dysih(seqidno:29)的重链cdr1，含有yiypsngdsgynqkfk(seqidno:30)的重链cdr2，和含有tyfannfd(seqidno:31)或atyfanntdy(seqidno:32)的重链cdr3；及(b)含有kasqsvdydgdsymn(seqidno:33)的轻链cdr1，含有aasnles(seqidno:34)或aas(seqidno:35)的轻链cdr2，和含有qqsnedplt(seqidno:36)或qqsnedpltf(seqidno:37)的轻链cdr3。在另一个实施方式中，所述抗体包含：(a)含有dysih(seqidno:29)的重链cdr1，含有yiypsngdsgynqkfk(seqidno:30)的重链cdr2，和含有tyfannfd(seqidno:31)的重链cdr3；及(b)含有kasqsvdydgdsymn(seqidno:33)的轻链cdr1，含有aasnles(seqidno:34)的轻链cdr2，和含有qqsnedplt(seqidno:36)的轻链cdr3。在另一个实施方式中，所述抗体包含含有seqidno:38的重链可变区和含有seqidno:39的轻链可变区。

在本发明的某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是特异性结合至少一种人lgr蛋白的抗体。在另一个实施方式中，所述抗体特异性结合选自由lgr4、lgr5和lgr6组成的组中的至少一种人lgr蛋白。在另一个实施方式中，所述抗体至少特异性结合人lgr5。在另一个实施方式中，所述抗体包含：(a)由atcc保藏号为pta-9342的88m1杂交瘤产生的单克隆抗体的重链cdr1、cdr2和cdr3序列；及(b)由atcc保藏号为pta-9342的88m1杂交瘤产生的单克隆抗体的轻链cdr1、cdr2和cdr3序列。在另一个实施方式中，所述抗体包含atcc保藏号为pta-9342的88m1杂交瘤产生的单克隆抗体的重链可变区和轻链可变区。

在前述方法的某些实施方式中，所述抗体是单克隆抗体、重组抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体或包含抗原结合位点的抗体片段。在另一个实施方式中，所述抗体是单特异性抗体或双特异性抗体。在另一个实施方式中，所述抗体是igg1抗体、igg2抗体或igg4抗体。

在本发明的一个实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是omp-131r010。

在本发明的某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是包含人lgr蛋白细胞外结构域或其片段的可溶性受体，其中，所述细胞外结构域能够结合人rspo蛋白。在另一个实施方式中，人lgr蛋白是lgr5。在另一个实施方式中，人lgr蛋白的细胞外结构域包含人lgr5的22-564位氨基酸(seqidno:56)。在另一个实施方式中，可溶性受体包含非lgr多肽。在另一个实施方式中，非lgr多肽直接连接到人lgr蛋白的细胞外结构域。在另一个实施方式中，非lgr多肽通过接头连接到人lgr蛋白的细胞外结构域。在另一个实施方式中，非lgr多肽包含人fc区。在另一个实施方式中，非lgr多肽包含seqidno:58、seqidno:59、seqidno:60、seqidno:61或seqidno:62。

在前述方法的某些实施方式中，本发明的有丝分裂抑制剂是紫杉烷、长春花生物碱、埃博霉素(epothilone)或甲磺酸艾日布林。在另一个实施方式中，有丝分裂抑制剂是选自由紫杉醇、多西他赛和它们的衍生物组成的组的紫杉烷。在另一个实施方式中，有丝分裂抑制剂是紫杉醇或白蛋白结合型紫杉醇(nab-paclitaxel)。在另一个实施方式中，有丝分裂抑制剂是多西他赛。在另一个实施方式中，有丝分裂抑制剂是选自由长春花碱、长春新碱、长春瑞滨和它们的衍生物组成的组的长春花生物碱。

在前述方法的某些实施方式中，本发明的癌症是结肠直肠癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌或胰腺癌。在另一个实施方式中，所述癌症是结肠直肠癌。在某些实施方式中，wnt信号传导在结肠直肠癌中激活(例如，通过apc基因中的失活突变或β-连环蛋白基因中的激活突变)。在某些实施方式中，结肠直肠癌是三线结肠直肠癌。在某些实施方式中，结肠直肠癌对使用包含5-氟尿嘧啶、伊立替康和/或奥沙利铂的化学治疗的治疗抵抗。

在某些实施方式中，本发明的前述方法进一步包括施用至少一种另外的治疗剂。在另一个实施方式中，另外的治疗剂是化疗剂。

本发明还涉及一种治疗癌症的方法，其包括对受试者施用治疗有效量的omp-131r010和治疗有效量的选自由紫杉醇、白蛋白结合型紫杉醇和多西他赛组成的组的紫杉烷，其中，在施用omp-131r010约1天、2天、3天、4天、5天或6天后施用紫杉烷。在本发明的一个实施方式中，omp-131r010约每3周施用一次。在另一个实施方式中，omp-131r010约每4周施用一次。在另一个实施方式中，紫杉烷约每周施用一次。在另一个实施方式中，紫杉烷约每2周施用一次。在另一个实施方式中，紫杉烷约每3周施用一次。

在前述方法的某些实施方式中，还施用另外的治疗剂。在一个实施方式中，另外的治疗剂是化疗剂。

在前述方法的某些实施方式中，所述癌症是结肠直肠癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌或胰腺癌。在某些实施方式中，所述癌症包含rspo基因融合。在某些实施方式中，癌症包含rspo2基因融合。在某些实施方式中，癌症包含rspo3基因融合。在本发明的一个实施方式中，癌症是结肠直肠癌。在另一个实施方式中，结肠直肠癌在腺瘤性结肠息肉病(apc)基因中包含失活突变。在另一个实施方式中，结肠直肠癌在apc基因中不包含失活突变。在另一个实施方式中，结肠直肠癌包含野生型apc基因。在另一个实施方式中，结肠直肠癌在β-连环蛋白基因中包含激活突变。在另一个实施方式中，结肠直肠癌在β-连环蛋白基因不包含激活突变。在另一个实施方式中，结肠直肠癌包含rspo基因融合。在另一个实施方式中，rspo基因融合是rspo2基因融合。在另一个实施方式中，rspo基因融合是rspo3基因融合。

在本发明的某些实施方式中，确定癌症的apc基因中失活突变的存在。在另一个实施方式中，确定癌症的β-连环蛋白基因中激活突变的存在。在另一个实施方式中，确定肿瘤或癌症中rspo基因融合的存在。在另一个实施方式中，rspo基因融合是rspo2基因融合。在另一个实施方式中，rspo基因融合是rspo3基因融合。在另一个实施方式中，通过基于pcr-的测定、微阵列分析或核苷酸测序确定rspo基因融合的存在。

在本发明的某些实施方式中，分别与rspo1、rspo2、rspo3和/或rspo4表达的预定水平相比，癌症表达高水平的rspo1、rspo2、rspo3和/或rspo4。在另一个实施方式中，rspo1、rspo2、rspo3或rspo4的预定表达水平是相同组织类型的肿瘤或肿瘤组中的rspo1、rspo2、rspo3或rspo4表达水平。在另一个实施方式中，rspo1、rspo2、rspo3或rspo4的预定表达水平是相同组织类型的正常组织中的rspo1、rspo2、rspo3或rspo4的表达水平。

在本发明的一个实施方式中，还确定癌症中的rspo1、rspo2、rspo3和rspo4中的一种或多种的表达水平。在另一个实施方式中，通过基于pcr的测定、微阵列分析或核苷酸测序确定rspo1、rspo2、rspo3和rspo4中的一种或多种的表达水平。

当各方面或实施方式采用马库什群组或者其他可替换的群组来描述时，本发明不仅涵盖了作为整体列出的整个群组，也涵盖单独群组的各成员以及主要群组的所有可能的亚群组，也还该缺少一个或多个群组成员的主要群组。本发明还设想明确排除所要求保护的发明中的一种或多种任何群组成员。

附图说明

图1a和1b.通过组合rspo-lgr通路抑制剂和化疗剂对体内卵巢肿瘤生长的抑制。将omp-ov19卵巢肿瘤细胞皮下注射到nod/scid小鼠中。图1a.使用对照抗体(-●-)、紫杉醇(-■-)、同一天施用的紫杉醇加抗rspo3抗体131r010(也称为omp-131r10)的组合(-▲-)、或者紫杉醇加131r010的组合(其中在施用紫杉醇前2天施用131r010)(-▼-)治疗小鼠。以25mg/kg的剂量每隔一周施用一次抗体。以20mg/kg的剂量每隔一周施用一次紫杉醇。在治疗后的指定天数测量肿瘤体积并显示为平均值±sem。图1b.第61天两个组合治疗组中各动物的肿瘤体积。

图2.通过组合rspo-lgr通路抑制剂和化疗剂对体内肺肿瘤生长的抑制。将omp-lu77肺肿瘤细胞皮下注射到nod/scid小鼠中。使用对照抗体(-■-)、紫杉醇(-▲-)、同一天施用的紫杉醇和抗rspo3抗体131r010(也称为omp-131r10)的组合(-▼-)、或者紫杉醇加抗rspo3抗体131r010的组合(其中在施用紫杉醇前2天施用131r010)(-●-)治疗小鼠。抗体每3周以25mg/kg给药。紫杉醇(taxol)每3周以20mg/kg给药。在治疗后的指定天数测量肿瘤体积。

图3a和3b.通过组合rspo-lgr通路抑制剂和化疗剂对体内结肠直肠肿瘤生长的抑制。将omp-c8结肠直肠肿瘤细胞皮下注射到nod/scid小鼠中。图3a.使用对照抗体(-■-)、白蛋白结合型紫杉醇(abraxane)(-δ-)、同一天施用的白蛋白结合型紫杉醇和抗rspo3抗体131r010的组合(-●-)、或者白蛋白结合型紫杉醇加抗rspo3抗体131r010的组合(其中在施用白蛋白结合型紫杉醇前2天施用131r010)(-▼-)治疗小鼠。抗体每隔一周以25mg/kg给药。白蛋白结合型紫杉醇每周一次以30mg/kg给药。在治疗后的指定天数测量肿瘤体积。图3b.使用对照抗体(-■-)、5-fu和伊立替康(-○-)、同一天施用的5-fu、伊立替康和抗rspo3抗体131r010的组合(-▲-)、或者5-fu和伊立替康加抗rspo3抗体131r010的组合(其中在施用5-fu和伊立替康前2天施用131r010)(-◇-)治疗小鼠。抗体每隔一周以25mg/kg给药。5-fu和伊立替康每周一次分别以50mg/kg和5mg/kg给药。在治疗后的指定天数测量肿瘤体积。

具体实施方式

本文描述了抑制肿瘤生长的方法，减少肿瘤大小的方法和治疗癌症的方法。本文提供的方法包括使用交错给药方案向受试者组合施用治疗有效量的rspo-lgr通路抑制剂与治疗有效量的有丝分裂抑制剂。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是抗体。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是特异性结合至少一种rspo蛋白的抗体。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是特异性结合至少一种lgr蛋白的抗体。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是可溶性受体。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是包含lgr蛋白的细胞外结构域或其片段的可溶性受体。在某些实施方式中，有丝分裂抑制剂是紫杉烷、长春花生物碱、埃博霉素或甲磺酸艾日布林。

rspo-lgr通路抑制剂抗rspo3抗体omp-131r010(也称为omp-131r10)和紫杉烷的组合治疗在几种异种移植模型中有效抑制肿瘤生长。出乎意料地，抗rspo3抗体和紫杉烷的递送顺序影响药物组合的功效。在施用紫杉烷之前施用rspo-lgr通路抑制剂抗rspo3抗体omp-131r010(交错或顺序方式给药)比共同施用omp-131r010和紫杉烷在异种移植模型中更好地抑制肿瘤生长(例如，实施例1-3；图1、2和3a)。实际上，omp-131r010和紫杉烷的交错施用不仅抑制肿瘤生长，并且在治疗过程中实际减小了肿瘤大小。

i.定义

为了便于理解具体实施方式，下面定义了许多术语和短语。

如本文使用的术语“拮抗剂”和“拮抗性”指部分或完全阻断、抑制、降低或中和靶标和/或信号传导通路(例如，rspo-lgr通路)的生物学活性的任何分子。本文使用的术语“拮抗剂”包括部分或完全阻断、抑制、降低或中和蛋白质(例如，rspo蛋白或lgr蛋白)活性的任何分子。适合的拮抗剂分子具体包括但不限于：拮抗剂抗体、抗体片段、可溶性受体或小分子。

如本文使用的术语“抗体”是指通过免疫球蛋白分子可变区内的至少一个抗原结合位点识别和特异性结合诸如蛋白、多肽、肽、碳水化合物、多核苷酸、脂质、或前述的组合等靶标的免疫球蛋白分子。如本文使用的，该术语包括完整的多克隆抗体、完整的单克隆抗体、包含抗原结合位点(诸如fab、fab'、f(ab')2和fv片段)的抗体片段、单链fv(scfv)抗体、诸如双特异性抗体等多特异性抗体、单特异性抗体、单价抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、包含抗体的抗原结合位点的融合蛋白、和包含抗原结合位点的任何其他经修饰的免疫球蛋白分子，只要所述抗体表现出所需的生物学活性即可。基于其分别被称为α、δ、ε、γ和μ的重链恒定结构域的身份，抗体可以是5种主要类别的免疫球蛋白：iga、igd、ige、igg和igm，或其亚类(同种型)(例如，igg1、igg2、igg3、igg4、iga1和iga2)中的任意一种。不同类别的免疫球蛋白具有不同的和公知的亚基结构和三维构型。抗体可以是裸抗体或与包括但不限于毒素和放射性同位素的其他分子缀合。

如本文使用的术语“抗体片段”是指完整抗体的一部分，并且通常包括完整抗体的抗原决定性可变区或抗原结合位点。抗体片段的实例包括但不限于：由抗体片段形成的fab、fab'片段、f(ab')2片段和fv片段、线性抗体、单链抗体和多特异性抗体。如本文使用的“抗体片段”包含至少一个抗原结合位点或表位结合位点。

如本文使用的术语抗体“可变区”是指单独的或组合的抗体轻链的可变区或抗体重链的可变区。重链的可变区或轻链的可变区通常由通过三个互补决定区(cdr)相连的四个框架区组成，也称为“高变区”。每个链中的cdr通过框架区紧密地保持在一起，并且与来自另一个链的cdr共同有助于抗体的抗原结合位点的形成。至少存在两种用于确定cdr的技术：(1)基于跨物种序列变异性的方法(即，kabat等，1991，sequencesofproteinsofimmunologicalinterest，第5版，nationalinstitutesofhealth，bethesdamd)，及(2)基于抗原-抗体复合物的晶体学研究的方法(al-lazikani等，1997，j.mol.biol.，273：927-948)。此外，本领域有时使用这两种方法的组合来确定cdr。

如本文使用的术语“单克隆抗体”是指涉及单个抗原决定簇或表位的高度特异性识别和结合的同源抗体群体。这与通常包括针对不同抗原决定簇的不同抗体的混合物的多克隆抗体相反。术语“单克隆抗体”包括完整抗体和全长抗体及抗体片段(例如，fab、fab'、f(ab')2、fv)、单链(scfv)抗体、包含抗体部分的融合蛋白、和包含至少一个抗原结合位点任何其他经修饰的免疫球蛋白分子。此外，“单克隆抗体”是指通过任何数量的技术制造的抗体，所述技术包括但不限于杂交瘤生产、噬菌体选择、重组表达和转基因动物。

如本文使用的术语“人源化抗体”是指下述抗体，其为特异性免疫球蛋白链，嵌合免疫球蛋白，或者含有最少非人序列的其片段。通常，人源化抗体是人类免疫球蛋白，其中cdr的氨基酸残基被具有期望的特异性、亲和力和/或结合能力、来自非人物种(例如，小鼠、大鼠、兔或仓鼠)的cdr的氨基酸残基替换。

如本文使用的术语“人抗体”是指由人类产生的抗体或是使用本领域已知的任何技术制造的具有对应于人类产生的抗体的氨基酸序列的抗体。

如本文使用的术语“嵌合抗体”是指其中免疫球蛋白分子的氨基酸序列来源于两个以上物种的抗体。通常，轻链和重链的可变区均对应于来源于具有期望的特异性、亲和力和/或结合能力的一个哺乳动物物种(例如，小鼠、大鼠、兔等)的抗体可变区，而恒定区与来源于其他物种(通常为人类)的抗体中的序列同源。

如本文使用的术语“亲和力成熟抗体”是指在一个或多个cdr中具有一个或多个改变的抗体，与不具有这些改变的亲本抗体相比，其导致抗体对抗原的亲和力的改善。优选的亲和力成熟抗体对靶标抗原将具有纳摩尔或甚至皮摩尔的亲和力。亲和力成熟抗体通过本领域已知的方法产生，包括重链和轻链可变区改组、cdr和/或框架残基的随机诱变，或cdr和/或框架残基的定点诱变。

术语“表位”和“抗原决定簇”在本文中可互换使用，是指能够被特定抗体识别并特异性结合的抗原部分。当抗原是多肽时，表位可以由连续氨基酸以及通过蛋白质的三级折叠并置的非连续氨基酸形成。由连续氨基酸形成的表位(也称为线性表位)通常在蛋白变性时保留，而通过三级折叠形成的表位(也称为构象表位)通常在蛋白变性时丧失。表位通常包括处在独特的空间构象中至少3个、更通常至少5个、或8个～10个氨基酸。

如本文使用的术语“选择性结合”或“特异性结合”是指与结合剂或抗体和替代性物质(包括不相关或相关的蛋白质)相比，结合剂或抗体与表位、蛋白质或靶分子更频繁、更快速、以更长的持续时间、以更大的亲和力或以上述的某种组合反应或结合。在某些实施方式中，“特异性结合”是指，例如，抗体以约0.1mm以下，但更通常小于约1μm的kd与靶标结合。在某些实施方式中，“特异性结合”是指抗体以至少约0.1μm以下、至少约0.01μm以下或至少约1nm以下的kd与靶标结合。由于不同物种中的同源蛋白之间的序列同一性，特异性结合可包识别多于一个物种中的蛋白(例如，人rspo蛋白和小鼠rspo蛋白)的抗体。类似地，由于不同蛋白质的多肽序列的某些区域内的同源性，特异性结合可以包括识别多于一种蛋白(例如，人rspo1和人rspo3)的抗体(或其他多肽或结合剂)。应当理解的是，在某些实施方式中，特异性结合第一靶标的抗体或结合剂可以或不可以特异性结合第二靶标。因此，“特异性结合”不一定需要(尽管它可以包括)排他性结合，即结合单个靶标。因此，在某些实施方式中，抗体可以特异性结合多于一个靶标。在某些实施方式中，多个靶标可以与抗体上相同的抗原结合位点结合。例如，在某些情况下，抗体可以包含两个相同的抗原结合位点，每个位点特异性结合两种以上蛋白(例如，rspo1和rspo3)上相同的表位。在某些替代实施方式中，抗体可以是双特异性的并且包含至少两个具有不同特异性的抗原结合位点。作为非限制性实例，双特异性抗体可以包含识别一种蛋白(例如，人rspo蛋白)上的表位的一个抗原结合位点，并且还包含识别第二种蛋白上的不同表位上的第二个不同的抗原结合位点。通常，但不是必然地，提到结合是指特异性结合。

如本文使用的术语“可溶性受体”是指能够以可溶形式从细胞中分泌的、在受体第一跨膜结构域之前的受体蛋白的细胞外片段(或其部分)。

如本文使用的术语“lgr可溶性受体”是指能够以可溶形式从细胞中分泌的受体第一跨膜结构域之前的lgr受体蛋白(例如，lgr5)的细胞外片段。包含整个细胞外结构域(ecd)及ecd更小片段的lgr可溶性受体包含在本术语中。在某些实施方式中，细胞外结构域包含人lgr5的22-564位氨基酸(seqidno:56)。在某些实施方式中，细胞外片段能够结合至少一种人rspo蛋白.

术语“多肽”和“肽”和“蛋白质”在本文中可互换使用，是指任何长度的氨基酸的聚合物。聚合物可以是直链或支链的，它可以包含经修饰的氨基酸，并且可以被非氨基酸中断。这些术语还包括已经天然修饰或通过干预修饰的氨基酸聚合物；例如二硫键形成、糖基化、脂化、乙酰化、磷酸化或任何其他操作或修饰，例如与标记组分的缀合。定义中还包括例如含有一个或多个氨基酸类似物(例如包括非天然氨基酸)以及本领域已知的其他修饰的多肽。应当理解的是，由于本文所述方法中使用的多肽可以基于抗体，在某些实施方式中，多肽可以以单链或关联链的形式存在。

如本文使用的术语“氨基酸”是指天然存在的和合成的氨基酸，以及与天然存在的氨基酸类似的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。天然存在的氨基酸是由遗传密码编码的氨基酸，以及随后经修饰的那些氨基酸，例如羟基脯氨酸、γ-羧基谷氨酸和o-磷酸丝氨酸。短语“氨基酸类似物”是指具有与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构(例如与氢结合的α碳、羧基、氨基和r基团)的化合物，例如，高丝氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸亚砜、甲硫氨酸甲基锍。这样的类似物可以具有经修饰的r基团(例如，正亮氨酸)或经修饰的肽主链，但保留与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构。短语“氨基酸模拟物”是指具有与氨基酸的一般化学结构不同的结构、但与天然存在的氨基酸功能类似的化学化合物。

术语“多核苷酸”和“核酸”在本文中可互换使用，是指任何长度的核苷酸的聚合物，并且包括dna和rna。核苷酸可以是脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、经修饰的核苷酸或碱基，和/或它们的类似物，或者可以通过dna或rna聚合酶引入聚合物的任何底物。

在两种以上核酸或多肽的语境中，术语“相同”或百分比“同一性”是指两个以上的序列或子序列，它们相同，或当针对最大对应性进行比较和比对(必要时引入空位)时，并且在不考虑任何保守性性氨基酸取代作为序列同一性的一部分的情况下，具有指定百分比的相同的核苷酸或氨基酸残基。可以使用序列比较软件或算法或目视检查来测量百分比同一性。可用于获得氨基酸或核苷酸序列比对的各种算法和软件是本领域公知的。其包括但不限于：blast和blast变体、align和align变体、megalign、bestfit、gcgwisconsinpackage等。在某些实施方式中两个核酸或多肽实质上具有同一性，意味着如使用序列比较算法或目视检查而测量的，当针对最大对应性进行比较和比对时，它们具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％，在某些实施方式中，至少95％、96％、97％、98％、99％的核苷酸或氨基酸残基同一性。在某些实施方式中，同一性存在于长度为至少约10个、至少约20个、至少约40-60个核苷酸或残基、至少约60-80个核苷酸或残基或者其间任何整数值的序列区域。在某些实施方式中，同一性存在于比60-80个核苷酸或残基的更长的区域，诸如至少约80-100个核苷酸或残基，在某些实施方式中，该序列在待比较的序列(如核苷酸序列的编码区)的全长上基本上相同。

如本文使用的术语“保守性氨基酸取代”是指其中一个氨基酸残基被具有类似侧链的另一个氨基酸残基替代的取代。本领域已经定义了具有类似侧链的氨基酸残基的家族，其包括碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、不带电的极性侧链(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非极性侧链(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、β-支链侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳族侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。例如，苯丙氨酸取代酪氨酸是保守性取代。多肽和抗体的序列中的保守性取代优选不消除含所述氨基酸序列的多肽或抗体与抗原的结合。不会消除抗原结合的氨基酸保守性取代的鉴定方法是本领域公知的。

如本文使用的术语“载体”是指能够在宿主细胞中递送和通常表达一种或多种感兴趣的基因或序列的构建体。载体的实例包括但不限于：病毒载体、裸dna或rna表达载体、质粒、粘粒或噬菌体载体、与阳离子缩合剂相关联的dna或rna表达载体、及包封在脂质体中的dna或rna表达载体。

如本文使用的，“分离的”多肽、抗体、多核苷酸、载体、细胞或组合物是处于未见于自然中的形式的多肽、抗体、多核苷酸、载体、细胞或组合物。分离的多肽、抗体、多核苷酸、载体、细胞或组合物包括那些纯化程度达到不再处于天然被发现时的形式的多肽、抗体、多核苷酸、载体、细胞或组合物。在某些实施方式中，分离的多肽、抗体、多核苷酸、载体、细胞或组合物是基本上纯的。

如本文使用的术语“基本上纯的”是指至少50％纯度(即，不含污染物)、至少90％纯度、至少95％纯度、至少98％纯度或至少99％纯度的材料。

如本文使用的术语“癌症”和“癌性”是指或描述哺乳动物中的细胞群体的特征为不受调节的细胞生长的生理状况。癌症的实例包括但不限于：癌、母细胞瘤、肉瘤及如淋巴瘤和白血病等血液癌。

如本文使用的术语“增殖性障碍”和“增殖性病症”是指与异常细胞增殖相关的疾病，如癌症。

如本文使用的术语“肿瘤”和“瘤”是指由过度的细胞生长或增殖(良性(非癌性)或恶性(癌性))引起的任何组织块，包括癌前病变。

如本文使用的术语“转移”是指癌症从原发位点扩散或转移到身体其他区域的过程，并伴随着在新位置处发生类似的癌性损伤。“转移”或“转移中”的细胞通常是与相邻细胞失去粘合接触并从疾病的原发位置迁移从而侵入相邻身体结构的细胞。

术语“癌干细胞”和“csc”和“肿瘤干细胞”和“肿瘤初始细胞”在本文中可互换使用，是指来自癌症或肿瘤的细胞且其：(1)具有广泛的增殖能力；(2)能够进行不对称细胞分裂以产生一种或多种类型的分化细胞后代，其中分化细胞具有降低的增殖或发育潜能；和(3)能够进行对称细胞分裂以进行自我更新或自我维护。与未能形成肿瘤的大多数肿瘤细胞相比，这些性质赋予癌干细胞在连续移植到免疫受损的宿主(例如，小鼠)中时形成或建立肿瘤或癌症的能力。癌干细胞以无规方式进行自我更新与分化，以形成具有异常细胞类型的肿瘤，所述细胞类型随着突变的发生可随时间而变化。

如本文使用的术语“癌细胞”和“肿瘤细胞”是指源自癌症或肿瘤或癌前病变(包括非致瘤细胞)的细胞的总群体，其包含大量癌症细胞群和致瘤细胞(癌干细胞)。如本文使用的术语“癌细胞”或“肿瘤细胞”将仅在提到缺乏能够更新和分化的能力的那些细胞时被术语“非致瘤性”修饰，以将这些肿瘤细胞与癌干细胞区分。

如本文使用的术语“致瘤性”是指癌干细胞的功能性特征，其包括自我更新的性质(产生另外的致瘤性癌干细胞)和增殖以产生全部其他肿瘤细胞(产生分化且因此为非致瘤性的肿瘤细胞)。

如本文使用的术语“致瘤性”是指来自肿瘤的细胞样品在连续移植到免疫受损的宿主(例如，小鼠)中时形成可触知肿瘤的能力。

如本文使用的术语“受试者”是指任何动物(例如，哺乳动物)，其包括但不限于：人、非人类灵长类动物、犬科动物、猫科动物、啮齿动物等，其将是特定治疗的受体。通常，提到人受试者时，术语“受试者”和“患者”在本文中可互换使用。

术语“药学上可接受的”是指联邦政府或州政府的管理机构批准，或在美国药典或其他公认的药典中列出的用于包括人类的动物中的试剂、化合物、分子等。

短语“药学上可接受的赋形剂、载体或佐剂”和“药学上可接受的载体”指可以与治疗剂一起向受试者施用的赋形剂、载体或佐剂，且其不破坏其药理学活性，当以足以递送治疗效果的剂量施用时是无毒的。通常，本领域技术人员和fda认为药学上可接受的赋形剂、载体或佐剂是任何制剂或药物组合物的无活性成分。

如本文使用的术语“有效量”和“治疗有效量”和“治疗效果”是指结合剂、抗体、多肽、多核苷酸、小分子或其他治疗剂有效“治疗”受试者或哺乳动物病症或疾病的量。在癌症的情况下，试剂(例如，抗体)的治疗有效量具有治疗效果，并且因此可减少肿瘤细胞的数量；降低致瘤性、致瘤频率或致瘤能力；减少癌干细胞的数量或频率；减小肿瘤大小；减少癌细胞群体；抑制和/或停止癌细胞浸润周围器官中，例如包括癌症扩散到软组织和骨中；抑制和停止肿瘤或癌细胞转移；抑制和/或停止肿瘤或癌细胞生长；一定程度上缓解一种或多种与癌症相关的症状；减少发病率和死亡率；改善生活质量；或所述效果的组合。在该试剂预防癌细胞生长和/或杀死现存癌细胞的程度上，其可被称为具有细胞生长抑制和/或细胞毒性。

术语“治疗中”和“治疗”和“待治疗”和“缓解”和“待缓解”是指以下两方面：1)治愈、减缓、减轻所诊断的病例状况或疾病的症状和/或停止其进展的治疗措施，和2)预防或预防性措施，预防或减缓目标病理状况或疾病的发展。因此，需要治疗的受试者包括已经患有疾病的受试者；倾向于患有疾病的受试者；及要预防其中的疾病的受试者。在某些实施方式中，如果患者显示以下的一种或多种，本文所述方法的受试者被成功“治疗”：肿瘤细胞数量的减少或完全不存在；肿瘤大小的减小；癌细胞浸润到周围器官(包括肿瘤细胞扩散到软组织和骨中)的抑制或不存在；肿瘤或癌细胞转移的抑制或不存在；癌症生长的抑制或不存在；与特定癌症相关的一种或多种症状的缓解；发病率和死亡率的降低；生活质量的改善；致瘤性的降低；癌干细胞数量或频率的减少；或所述效果的某些组合。

如本公开内容和权利要求中所使用的，单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括复数形式，除非上下文另有明确规定。

应当理解的是，每当在本文用措辞“包含”来描述实施方式时，还提供了以“由……组成”和/或“基本上由……组成”描述的其他类似实施方式。还应当理解的是，每当在本文用措辞“基本上由……组成”来描述实施方式时，还提供了以“由……组成”描述的其他类似实施方式。

本文中如“a和/或b”等短语中使用的术语“和/或”旨在包括a和b两者；a或b；a(单独)；和b(单独)。同样，如“a、b和/或c”等短语中使用的术语“和/或”旨在包括以下实施方式中的每一种：a、b和c；a、b或c；a或c；a或b；b或c；a和c；a和b；b和c；a(单独)；b(单独)；及c(单独)。

ii.使用方法和药物组合物

与有丝分裂抑制剂组合rspo-lgr通路抑制剂(例如，rspo-结合剂和lgr-结合剂)在多种应用中是有用的，其包括但不限于：治疗性治疗方法，诸如癌症治疗，特别是当用于交错或连续给药方案时。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂和有丝分裂抑制剂的组合在抑制β-连环蛋白信号传导、抑制有丝分裂、抑制肿瘤生长、减小肿瘤大小、诱导肿瘤细胞分化、诱导凋亡、诱导肿瘤细胞死亡、增加肿瘤细胞分化、增加凋亡、减少肿瘤细胞死亡，减小肿瘤体积、降低癌干细胞频率，和/或降低肿瘤致瘤性的方法中是有用的，特别是当用于交错或连续给药方案时。所述使用方法可以是体外、离体或体内方法。

如本文使用的术语“交错或连续给药方案”以及诸如“交错给药方案”等相关术语或短语通常是指随着时间的推移交错使用或施用各试剂的rspo-lgr通路抑制剂和有丝分裂抑制剂的组合使用。在某些实施方式中，在施用第二试剂至少约12小时、24小时、36小时、48小时、60小时、72小时、84小时或96小时前施用第一试剂。在某些实施方式中，在施用第二试剂至少约1天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天或约7天前施用第一试剂。在某些实施方式中，两种试剂的交错施用包括剂量的变化。如本文使用的，该定义不排除施用另外的治疗剂。

在某些实施方式中，在治疗与β-连环蛋白信号传导相关的疾病的方法中，组合使用rspo-lgr通路抑制剂(例如，rspo-结合剂或lgr-结合剂)和有丝分裂抑制剂，特别是当用于交错或连续给药方案时。在某些实施方式中，该疾病依赖于β-连环蛋白信号传导。

在某些实施方式中，用rspo-lgr通路抑制剂(例如，rspo-结合剂或lgr-结合剂)和有丝分裂抑制剂的组合治疗疾病，其中，使用交错给药方案对癌症施用治疗剂。在某些实施方式中，癌症包含β-连环蛋白信号传导依赖性肿瘤细胞，或β-连环蛋白信号传导依赖性肿瘤细胞的子集。在某些实施方式中，癌症的特征在于肿瘤细胞或肿瘤细胞的子集表达或过表达β-连环蛋白。在某些实施方式中，癌症的特征在于肿瘤细胞或肿瘤细胞的子集表达或过表达一种或多种rspo蛋白。在某些实施方式中，癌症的特征在于肿瘤细胞或肿瘤细胞的子集表达或过表达一种或多种lgr蛋白。

本文所述的治疗癌症的方法包括向受试者施用治疗有效量的rspo-lgr通路抑制剂和治疗有效量的有丝分裂抑制剂，其中，首先rspo-lgr通路抑制剂，第二施用有丝分裂抑制剂。本文描述了治疗癌症的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的rspo-lgr通路抑制剂和治疗有效量的有丝分裂抑制剂，其中，使用交错给药方案施用rspo-lgr通路抑制剂和有丝分裂抑制剂，并且首先施用rspo-lgr通路抑制剂。在某些实施方式中，在施用rspo-lgr通路抑制剂约1天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天或约7天后施用有丝分裂抑制剂。本文还描述了在受试者中增加癌症治疗中的有丝分裂抑制剂功效的方法，其包括在施用治疗有效量的rspo-lgr通路抑制剂约1天、约2天、约3天、约4天、约5天或约6天后向受试者施用治疗有效量的有丝分裂抑制剂。本文还描述了在受试者中增加癌症治疗中的有丝分裂抑制剂功效的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的rspo-lgr通路抑制剂，其中，受试者被安排在施用rspo-lgr通路抑制剂约1天、约2天、约3天、约4天、约5天或约6天后施用治疗有效量的有丝分裂抑制剂。在某些实施方式中，癌症治疗中有丝分裂抑制剂的功效的增加是相对于在没有rspo-lgr通路抑制剂的情况下使用有丝分裂抑制剂的功效而言的。在某些实施方式中，癌症治疗中有丝分裂抑制剂的功效的增加是相对于在基本同时(例如在同一天)向患者施用有丝分裂抑制剂和rspo-lgr通路抑制剂时观察到的功效而言的。在某些实施方式中，治疗癌症的方法包括向受试者施用治疗有效量的rspo-lgr通路抑制剂和治疗有效量的有丝分裂抑制剂，其中，使用交错给药方案施用rspo-lgr通路抑制剂和有丝分裂抑制剂，并且首先施用rspo-lgr通路抑制剂；其中，rspo-lgr通路抑制剂是特异性结合至少一种人rspo蛋白的抗体、特异性结合至少一种人lgr蛋白的抗体、或包含人lgr蛋白的细胞外结构域或其片段的可溶性受体。在某些实施方式中，在施用rspo-lgr通路抑制剂约1天、2天、3天、4天、5天、6天或7天后施用有丝分裂抑制剂。在某些实施方式中，在施用rspo-lgr通路抑制剂约2天后施用有丝分裂抑制剂。在某些实施方式中，在施用rspo-lgr通路抑制剂约3天后施用有丝分裂抑制剂。

在某些实施方式中，治疗癌症的方法包括使用rspo-lgr通路抑制剂和有丝分裂抑制剂，其中，以交错给药方案使用rspo-lgr通路抑制剂和有丝分裂抑制剂，并且首先使用rspo-lgr通路抑制剂；其中，rspo-lgr通路抑制剂特异性结合至少一种人rspo蛋白的抗体、特异性结合至少一种人lgr蛋白的抗体、或包含人lgr蛋白的细胞外结构域或其片段的可溶性受体。

本文所述的在受试者中增加癌症治疗中的有丝分裂抑制剂的功效的方法包括：(a)向受试者施用rspo-lgr通路抑制剂；及(b)在施用rspo-lgr通路抑制剂约1天、约2天、约3天、约4天、约5天或约6天后向受试者施用有丝分裂抑制剂。在某些实施方式中，在受试者中增加癌症治疗中的有丝分裂抑制剂的功效的方法包括在施用rspo-lgr通路抑制剂约1天、2天、3天、4天、5天或6天后向受试者施用有丝分裂抑制剂，其中，rspo-lgr通路抑制剂是特异性结合至少一种人rspo蛋白的抗体、特异性结合至少一种人lgr蛋白的抗体、或包含人lgr蛋白的细胞外结构域或其片段的可溶性受体。在某些实施方式中，在受试者中增加癌症治疗中的有丝分裂抑制剂的功效的方法包括：(a)向受试者施用rspo-lgr通路抑制剂，其中，rspo-lgr通路抑制剂是：(i)特异性结合至少一种人rspo蛋白的抗体，(ii)特异性结合至少一种人lgr蛋白的抗体，或(iii)包含人lgr蛋白的细胞外结构域或其片段的可溶性受体；及(b)在施用rspo-lgr通路抑制剂约1天、2天、3天、4天、5天或6天后向受试者施用有丝分裂抑制剂。在某些实施方式中，癌症治疗中有丝分裂抑制剂的功效的增加是相对于在没有rspo-lgr通路抑制剂的情况下使用有丝分裂抑制剂的功效而言的。在某些实施方式中，癌症治疗中有丝分裂抑制剂的功效的增加是相对于在基本同时(例如在同一天)向患者施用有丝分裂抑制剂和rspo-lgr通路抑制剂时观察到的功效而言的。

在某些实施方式中，增加癌症治疗的有丝分裂抑制剂的功效的方法包括在使用rspo-lgr通路抑制剂约1天、2天、3天、4天、5天或6天后使用有丝分裂抑制剂，其中，rspo-lgr通路抑制剂是特异性结合至少一种人rspo蛋白的抗体、特异性结合至少一种人lgr蛋白的抗体、或包含人lgr蛋白的细胞外结构域或其片段的可溶性受体。在某些实施方式中，癌症治疗中有丝分裂抑制剂的功效的增加是相对于在没有rspo-lgr通路抑制剂的情况下使用有丝分裂抑制剂的功效而言的。在某些实施方式中，癌症治疗中有丝分裂抑制剂的功效的增加是相对于在基本同时(例如在同一天)向患者施用有丝分裂抑制剂和rspo-lgr通路抑制剂时观察到的功效而言的。

本文描述了改善使用rspo-lgr通路抑制剂和有丝分裂抑制剂的组合疗法的功效的方法，其中，所述方法包括在给予rspo-lgr通路抑制剂足够的时间以到达其靶标后施用有丝分裂抑制剂。在某些实施方式中，改善功效的方法包括在给予rspo-lgr通路抑制剂足够的时间以在其靶标处积累后施用有丝分裂抑制剂。在某些实施方式中，靶标是rspo蛋白。在某些实施方式中，靶标是lgr蛋白。在某些实施方式中，发现靶标与肿瘤相关。

在本文所述方法的某些实施方式中，在施用rspo-lgr通路抑制剂约1天后施用有丝分裂抑制剂。在某些实施方式中，在施用rspo-lgr通路抑制剂约2天后施用有丝分裂抑制剂。在某些实施方式中，在施用rspo-lgr通路抑制剂约3天后施用有丝分裂抑制剂。

在本文所述方法的某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂和有丝分裂抑制剂协同作用。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂使肿瘤细胞对有丝分裂抑制剂敏感。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂使癌干细胞对有丝分裂抑制剂敏感。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂在有丝分裂(m)期期间抑制或阻止细胞周期进程。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂抑制在g2/m检查点抑制或阻止细胞周期进程。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂在g2/m检查点抑制或阻止细胞周期进程并且增加有丝分裂抑制剂的功效。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂在m期抑制或阻止细胞周期进程并且增加有丝分裂抑制剂的功效。在某些实施方式中，交错给药允许β-连环蛋白信号传导的持续抑制并且增加有丝分裂抑制剂的功效。

在本文所述方法的某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂与有丝分裂抑制剂组合的交错给药方案增加肿瘤细胞凋亡。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂与有丝分裂抑制剂组合的交错给药方案允许rspo-lgr通路抑制剂在肿瘤位点的积累。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂与有丝分裂抑制剂组合的交错给药方案允许rspo-lgr通路抑制剂和有丝分裂抑制剂的抗肿瘤活性同步发生。

在本文所述方法的某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂每周施用一次。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂每2周施用一次。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂每3周施用一次。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂每4周施用一次。在某些实施方式中，有丝分裂抑制剂的施用约每周一次、约每2周一次、约每3周一次、约每4周一次、或在4周周期中约每3周一次。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂约每2周施用一次，且有丝分裂抑制剂的施用为每周一次、或在4周周期中的3周每周一次施用。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂约每3周施用一次，且有丝分裂抑制剂的施用为每周一次、或4周周期中的3周每周一次施用。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂每4周施用一次。在某些实施方式中，有丝分裂抑制剂的施用约每周一次、约每2周一次、约每3周一次、或约每4周一次。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂每4周施用一次，且有丝分裂抑制剂的施用为每周一次、或4周周期中的3周每周一次施用。

在某些实施方式中，治疗或给药方案可限于特定数量的施用或“周期”。“周期”可以是本领域技术人员公知或通常用于标准治疗剂的给药方案。例如，紫杉醇的周期可以是在4周(28天)周期中的3周每周一次施用(每4周中有一周不施用)。在某些实施方式中，施用rspo-lgr通路抑制剂2、3、4、5、6、7、8个以上周期。在某些实施方式中，施用有丝分裂抑制剂2、3、4、5、6、7、8个以上周期。在某些实施方式中，在继续施用第二试剂的同时一种试剂被保留1个以上周期。

在本文所述方法的某些实施方式中，癌症是选自由以下组成的组的癌症：结肠直肠癌、胰腺癌、肺癌、卵巢癌、肝癌、乳腺癌、肾癌、前列腺癌、胃肠癌、黑素瘤、宫颈癌、膀胱癌、胶质母细胞瘤和头颈癌。在某些实施方式中，癌症包含rspo基因融合。在某些实施方式中，癌症包含rspo2基因融合。在某些实施方式中，癌症包含rspo3基因融合。在某些实施方式中，癌症是乳腺癌。在某些实施方式中，癌症是卵巢癌。在某些实施方式中，癌症是胰腺癌。在某些实施方式中，癌症是肺癌。如本文使用的“肺癌”包括但不限于：小细胞肺癌和非小细胞肺癌(nsclc)。在某些实施方式中，癌症是结肠直肠癌。在某些实施方式中，癌症是在apc基因中包含失活突变的结肠直肠癌。在某些实施方式中，癌症是在apc基因中不包含失活突变的结肠直肠癌。在某些实施方式中，癌症在β-连环蛋白基因中包含激活突变。在某些实施方式中，癌症在β-连环蛋白基因中不包含激活突变。在某些实施方式中，所述肿瘤在β-连环蛋白基因中包含激活突变。在某些实施方式中，癌症是包含rspo基因融合的结肠直肠癌。在某些实施方式中，癌症是包含rspo2基因融合的结肠直肠癌。在某些实施方式中，癌症是包含rspo3基因融合的结肠直肠癌。在某些实施方式中，癌症具有升高的rspo多肽表达水平。在某些实施方式中，癌症具有升高的rspo1、rspo2、rspo3和/或rspo4表达水平。在某些实施方式中，癌症是具有升高的rspo3表达水平的结肠直肠癌。在某些实施方式中，癌症是具有升高的rspo2表达水平的结肠直肠癌。在某些实施方式中，癌症不具有升高的rspo多肽表达水平。在某些实施方式中，癌症不具有升高的rspo1、rspo2、rspo3和/或rspo4表达水平。在某些实施方式中，癌症是不具有升高的rspo3表达水平的结肠直肠癌。在某些实施方式中，癌症是不具有升高的rspo2表达水平的结肠直肠癌。在某些实施方式中，癌症与相同组织类型的正常组织具有基本上相同的rspo多肽表达水平。在某些实施方式中，癌症与相同组织类型的正常组织具有基本上相同的rspo1、rspo2、rspo3和/或rspo4表达水平。在某些实施方式中，癌症是与相同组织类型的正常组织具有基本上相同的rspo3表达水平的结肠直肠癌。在某些实施方式中，癌症是与相同组织类型的正常组织具有基本上相同的rspo2表达水平的结肠直肠癌。

在某些实施方式中，癌症是在编码wnt信号通路的组分的基因中包含突变的结肠直肠癌。例如参见，美国专利公开号20130209473，此处出于全部目的以其整体通过引用并入本文。在某些实施方式中，癌症是在以下基因中包含突变的结肠直肠癌：wnt(例如，wnt1、wnt2、wnt2b、wnt3、wnt3a、wnt4、wnt5a、wnt5b、wnt6、wnt7a、wnt7b、wnt8a、wnt8b、wnt9a、wnt9b、wnt10a、wnt10b、wnt11、wnt16)、卷曲蛋白(例如，fzd1-fzd10)、rspo(例如，rspo1、rspo2、rspo3、rspo4)、lgr(例如，lgr4、lgr5、lgr6)、wtx、wisp(例如，wisp1、wisp2、wisp3)、β-trcp、stra6、lrp(例如，lrp5、lrp6)、轴蛋白(例如、轴蛋白1、轴蛋白2)、dishevelled、sfrp、wif-1、dkk、krn、gsk3、cki、pp2a、pygopus、bcl9/legless、tcf/lef、groucho、ctnnb1、cbp/p300、brg-1基因、tcfl2、ppn、cdh17、ezh2、hmga1、hmga2、yy1和/或tc1基因。在某些实施方式中，wnt信号通路在包含突变的结肠直肠癌中激活。

在某些实施方式中，用rspo-lgr通路抑制剂(例如，抗rspo3或抗lgr5抗体)和有丝分裂抑制剂治疗的结肠直肠癌是二线或三线结肠直肠癌。在某些实施方式中，结肠直肠癌抵抗使用化学治疗方案的治疗。在某些实施方式中，结肠直肠癌抵抗包含5-氟尿嘧啶(5-fu)、伊立替康和/或奥沙利铂中的一种或多种的化疗治疗。在某些实施方式中，结肠直肠癌抵抗伊立替康/5-fu/甲酰四氢叶酸(folfiri)和/或奥沙利铂/5-fu/甲酰四氢叶酸(folfox)。在某些替代实施方式中，结肠直肠癌抵抗使用贝伐珠单抗的治疗。在某些实施方式中，使用rspo-lgr通路抑制剂和有丝分裂抑制剂治疗的患者的一个先前治疗方案失败。在另一个实施方式中，使用患者rspo-lgr通路抑制剂和有丝分裂抑制剂治疗的患者的两个先前治疗方案失败。在某些实施方式中，所述先前治疗方案包括使用5-氟尿嘧啶(5-fu)、伊立替康、奥沙利铂和/或贝伐单抗中的一种或多种进行治疗。

在某些实施方式中，治疗癌症的方法包括向受试者施用治疗有效量的抗rspo3抗体omp-131r010和治疗有效量的选自由紫杉醇、白蛋白结合型紫杉醇和多西他赛组成的组的紫杉烷，其中，在施用omp-131r010约1天、2天、3天、4天、5天、6天或7天后施用紫杉烷。在某些实施方式中，omp-131r010约每周施用一次。在某些实施方式中，omp-131r010约每2周施用一次。在某些实施方式中，omp-131r010约每3周施用一次。在某些实施方式中，omp-131r010约每4周施用一次。在某些实施方式中，紫杉烷每周施用一次。在某些实施方式中，紫杉烷每2周施用一次。在某些实施方式中，紫杉烷每3周施用一次。在某些实施方式中，紫杉烷在4周周期中的3周每周一次施用。在某些实施方式中，治疗癌症的方法包括向受试者施用治疗有效量的omp-131r010和治疗有效量的多西他赛，其中，在施用omp-131r010约2天或3天后施用多西他赛。在某些实施方式中，治疗癌症的方法包括受试者施用治疗有效量的omp-131r010、治疗有效量的白蛋白结合型紫杉醇和治疗有效量的吉西他滨，其中，在施用omp-131r010约2天或3天后施用白蛋白结合型紫杉醇。在某些实施方式中，治疗癌症的方法包括向受试者施用治疗有效量的omp-131r010、治疗有效量的白蛋白结合型紫杉醇和治疗有效量的吉西他滨，其中，在施用omp-131r010约2天或3天后施用白蛋白结合型紫杉醇和吉西他滨。在某些实施方式中，治疗癌症的方法包括向受试者施用治疗有效量的omp-131r010和治疗有效量的紫杉醇，其中，在施用omp-131r010约2天或3天后施用紫杉醇。

本文描述了抑制肿瘤生长或减小肿瘤大小的方法，其包括使肿瘤细胞接触有效量的rspo-lgr通路抑制剂和有效量的有丝分裂抑制剂，其中，首先向细胞施用rspo-lgr通路抑制剂，然后向细胞施用有丝分裂抑制剂。本文描述了抑制肿瘤生长或减小肿瘤大小的方法，其包括使肿瘤细胞接触有效量的rspo-lgr通路抑制剂和有效量的有丝分裂抑制剂，其中，使用交错给药方案对细胞施用rspo-lgr通路抑制剂和有丝分裂抑制剂，并且首先向细胞施用rspo-lgr通路抑制剂。在某些实施方式中，在施用rspo-lgr通路抑制剂约12小时、24小时、36小时、48小时、60小时、72小时、84小时或96小时后施用有丝分裂抑制剂。在某些实施方式中，在施用rspo-lgr通路抑制剂约1天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天或约7天后施用有丝分裂抑制剂。本文描述了在抑制肿瘤生长或减小肿瘤大小中增加丝分裂抑制剂的功效的方法，其包括：(a)使肿瘤细胞接触rspo-lgr通路抑制剂；及(b)在施用rspo-lgr通路抑制剂约1天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天或约7天后使肿瘤细胞接触有丝分裂抑制剂。在某些实施方式中，癌症治疗中有丝分裂抑制剂的功效的增加是与在没有rspo-lgr通路抑制剂的情况下使用有丝分裂抑制剂的功效相对的。在某些实施方式中，癌症治疗中有丝分裂抑制剂的功效的增加是与在基本同时(例如在同一天)向患者施用有丝分裂抑制剂和rspo-lgr通路抑制剂时观察到的功效是相对的。

在本文所述方法的某些实施方式中，抑制肿瘤生长或减小肿瘤大小的方法包括使肿瘤使肿瘤细胞在体外接触rspo-lgr通路抑制剂和有丝分裂通路抑制剂。例如，在某些实施方式中，在添加rspo-lgr通路抑制剂的培养基中培养永生化细胞系或癌细胞系，然后添加有丝分裂抑制剂以抑制肿瘤细胞生长。在某些实施方式中，肿瘤细胞分离自患者样品，例如，组织活检、胸腔积液或血液样品，并且在添加有rspo-lgr通路抑制剂和有丝分裂抑制剂的培养基中培养以抑制肿瘤细胞生长。

在某些实施方式中，抑制肿瘤生长或减小肿瘤大小的方法包括使肿瘤或肿瘤细胞在体内接触rspo-lgr通路抑制剂和有丝分裂抑制剂。在某些实施方式中，在动物模型中进行肿瘤或肿瘤细胞与rspo-lgr通路抑制剂和有丝分裂抑制剂的接触。例如，rspo-lgr通路抑制剂和有丝分裂抑制剂可以交错给药方式施用给带有异种移植肿瘤的免疫受损小鼠(例如，nod/scid小鼠)以抑制肿瘤生长。在某些实施方式中，癌干细胞分离自患者样品，例如，组织活检、胸腔积液或血液样品，并且注射到免疫受损小鼠中，然后以交错给药方式施用rspo-lgr通路抑制剂其后施用有丝分裂抑制剂以抑制肿瘤细胞生长。在某些实施方式中，在将细胞引入动物后的同时或不久之后以交错给药方式施用rspo-lgr通路抑制剂和有丝分裂抑制剂以预防肿瘤生长(预防性模型)。在某些实施方式中，在细胞已经生长到特定大小的肿瘤后以交错给药方式施用rspo-lgr通路抑制剂和有丝分裂抑制剂以抑制和/或减少肿瘤生长(治疗性模型)。

本文描述了在受试者中抑制肿瘤生长或减小肿瘤大小的方法，该方法包括以交错给药方式向受试者施用治疗有效量的rspo-lgr通路抑制剂和治疗有效量的有丝分裂抑制剂，其中，在施用有丝分裂抑制剂前施用rspo-lgr通路抑制剂。在某些实施方式中，受试者是人类。在某些实施方式中，受试者具有肿瘤或已经被去除肿瘤。在某些实施方式中，受试者具有已转移的肿瘤。在某些实施方式中，受试者已经进行了先前治疗。

本文描述了一种在受试者中抑制肿瘤侵袭的方法，该方法包括以交错给药方式向受试者施用治疗有效量的rspo-lgr通路抑制剂和治疗有效量的有丝分裂抑制剂，其中，在施用有丝分裂抑制剂前施用rspo-lgr通路抑制剂。在某些实施方式中，侵袭的抑制包括增加肿瘤细胞的e-钙粘蛋白表达。在某些实施方式中，受试者是人类。在某些实施方式中，受试者具有肿瘤或已经被去除肿瘤。

本文描述了一种在受试者中减少或预防转移的方法，该方法包括以交错给药方式向受试者施用治疗有效量的rspo-lgr通路抑制剂和治疗有效量的有丝分裂抑制剂，其中，在施用有丝分裂抑制剂前施用rspo-lgr通路抑制剂。在某些实施方式中，转移的减少或预防包括对肿瘤侵袭的抑制。在某些实施方式中，转移的减少或预防包括通过增加肿瘤细胞的e-钙粘蛋白表达而抑制肿瘤侵袭。在某些实施方式中，受试者是人类。在某些实施方式中，受试者具有肿瘤或已经被去除肿瘤。

本文描述了一种在细胞中抑制β-连环蛋白信号传导的方法，该方法包括以交错给药方式使细胞接触有效量的rspo-lgr通路抑制剂和有效量的有丝分裂抑制剂，其中，在施用有丝分裂抑制剂前施用rspo-lgr通路抑制剂。在某些实施方式中，细胞是肿瘤细胞。在某些实施方式中，所述方法是体内方法，其中，使细胞接触抑制剂的步骤包括向受试者施用治疗有效量的抑制剂。在某些实施方式中，所述方法是体外或离体方法。

此外，本文描述了一种在受试者中降低肿瘤致瘤性的方法，该方法包括以交错给药方式向受试者施用治疗有效量的rspo-lgr通路抑制剂和治疗有效量的有丝分裂抑制剂，其中，在施用有丝分裂抑制剂前施用rspo-lgr通路抑制剂。在某些实施方式中，肿瘤包括癌干细胞。在某些实施方式中，通过在肿瘤中降低癌干细胞的频率来降低肿瘤致瘤性。在某些实施方式中，通过施用rspo-lgr通路抑制剂降低肿瘤中癌干细胞的频率。在某些实施方式中，通过诱导肿瘤细胞的分化降低肿瘤致瘤性。在某些实施方式中，通过诱导肿瘤细胞的凋亡降低肿瘤致瘤性。在某些实施方式中，通过增加肿瘤细胞凋亡降低肿瘤致瘤性。

本文描述了一种在包含癌干细胞的肿瘤中降低癌干细胞频率的方法，该方法包括以交错给药方式向受试者施用治疗有效量的rspo-lgr通路抑制剂和治疗有效量的有丝分裂抑制剂，其中，在施用有丝分裂抑制剂前施用rspo-lgr通路抑制剂。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂与有丝分裂抑制剂的组合能够在诸如小鼠异种移植模型等动物模型中降低包含癌干细胞的肿瘤的致瘤性。在某些实施方式中，未被治疗的肿瘤中的癌干细胞的频率相比，被治疗的肿瘤中癌干细胞的数量或频率减少至少约2倍、约3倍、约5倍、约10倍、约50倍、约100倍或约1000倍。在某些实施方式中，通过使用动物模型的有限稀释检验来确定癌干细胞数量或频率的减少。

在某些实施方式中，所述肿瘤是其中β-连环蛋白信号传导是有活性的肿瘤。在某些实施方式中，所述肿瘤是β-连环蛋白信号传导依赖性肿瘤。在某些实施方式中，所述肿瘤是其中β-连环蛋白信号传导异常的肿瘤。在某些实施方式中，所述肿瘤在apc肿瘤抑制基因中包含失活突变(例如，截短突变)。在某些实施方式中，所述肿瘤在apc肿瘤抑制基因中不包含失活突变。在某些实施方式中，所述肿瘤包含野生型apc基因。在某些实施方式中，所述肿瘤在β-连环蛋白基因中包含激活突变。在某些实施方式中，所述肿瘤在β-连环蛋白基因中不包含激活突变。在某些实施方式中，正在治疗受试者的癌症涉及这样的肿瘤。

在某些实施方式中，所述肿瘤包含rspo基因融合。在某些实施方式中，所述肿瘤包含rspo2基因融合。在某些实施方式中，所述肿瘤包含rspo3基因融合。在某些实施方式中，正在治疗受试者的癌症涉及这样的肿瘤。

在本文所述方法的某些实施方式中，所述肿瘤表达一种或多种与rspo-结合剂结合的人rspo蛋白。在某些实施方式中，所述肿瘤过表达一种或多种人rspo蛋白。在某些实施方式中，与相同组织类型的正常组织中的rspo蛋白表达相比，所述肿瘤过表达一种或多种人rspo蛋白。在某些实施方式中，与至少一种其他肿瘤中的rspo蛋白表达相比，所述肿瘤过表达一种或多种人rspo蛋白。在某些实施方式中，所述肿瘤过表达rspo1、rspo2、rspo3和/或rspo4。在某些实施方式中，所述肿瘤过表达rspo1或rspo3。在某些实施方式中，所述肿瘤不过表达一种或多种人rspo蛋白。在某些实施方式中，与相同组织类型的正常组织中的rspo蛋白表达相比，所述肿瘤不过表达一种或多种人rspo蛋白。在某些实施方式中，所述肿瘤不过表达rspo1、rspo2、rspo3和/或rspo4。在某些实施方式中，与相同组织类型的正常组织相比，所述肿瘤表达基本上相同水平的rspo1、rspo2、rspo3和/或rspo4。在某些实施方式中，与预定表达水平相比，所述肿瘤表达低水平的rspo1、rspo2、rspo3和/或rspo4。在某些实施方式中，与预定表达水平相比，所述肿瘤表达高水平的rspo1、rspo2、rspo3和/或rspo4。在某些实施方式中，rspo1、rspo2、rspo3或rspo4的预定表达水平是相同组织类型的肿瘤或肿瘤组中的rspo1、rspo2、rspo3或rspo4的表达水平。在某些实施方式中，rspo1、rspo2、rspo3或rspo4的预定表达水平是不同组织类型的肿瘤或肿瘤组中的rspo1、rspo2、rspo3或rspo4的表达水平。在某些实施方式中，正在治疗受试者的癌症涉及这样的肿瘤。

在某些实施方式中，所述肿瘤表达一种或多种与lgr-结合剂结合的人lgr蛋白。在某些实施方式中，所述肿瘤过表达一种或多种人lgr蛋白。在某些实施方式中，所述肿瘤过表达人lgr5。

在本文所述方法的某些实施方式中，所述所述肿瘤是选自由以下组成的组的肿瘤：结肠直肠肿瘤、胰腺肿瘤、肺肿瘤、卵巢肿瘤、肝脏肿瘤、乳腺肿瘤、肾脏肿瘤、前列腺肿瘤、胃肠肿瘤、黑素瘤、宫颈肿瘤、膀胱肿瘤、胶质母细胞瘤和头颈肿瘤。在某些实施方式中，所述肿瘤包含rspo基因融合。在某些实施方式中，所述肿瘤包含rspo2基因融合。在某些实施方式中，所述肿瘤包含rspo3基因融合。在某些实施方式中，所述肿瘤是乳腺肿瘤。在某些实施方式中，所述肿瘤是卵巢肿瘤。在某些实施方式中，所述肿瘤是肺肿瘤。在某些实施方式中，所述肿瘤是胰腺肿瘤。在某些实施方式中，所述肿瘤是结肠直肠肿瘤。在某些实施方式中，所述肿瘤是其中wnt信号被激活(例如，通过wnt信号通路的组分中的突变)的结肠直肠肿瘤。在某些实施方式中，所述肿瘤是在apc基因中包含失活突变的结肠直肠肿瘤。在某些实施方式中，所述肿瘤是在apc基因中不包含失活突变的结肠直肠肿瘤。在某些实施方式中，所述肿瘤在β-连环蛋白基因中包含激活突变。在某些实施方式中，所述肿瘤是包含rspo基因融合的结肠直肠肿瘤。在某些实施方式中，所述肿瘤是包含rspo2基因融合的结肠直肠肿瘤。在某些实施方式中，所述肿瘤是包含rspo3基因融合的结肠直肠肿瘤。在某些实施方式中，肿瘤具有升高的rspo多肽表达水平。在某些实施方式中，肿瘤具有升高的rspo1、rspo2、rspo3和/或rspo4表达水平。在某些实施方式中，所述肿瘤是具有升高的rspo3表达水平的结肠直肠肿瘤。在某些实施方式中，所述肿瘤是具有升高的rspo2表达水平的结肠直肠肿瘤。在某些实施方式中，肿瘤不具有升高的rspo多肽表达水平。在某些实施方式中，肿瘤不具有升高的rspo1、rspo2、rspo3和/或rspo4表达水平。在某些实施方式中，所述肿瘤是不具有升高的rspo3表达水平的结肠直肠肿瘤。在某些实施方式中，所述肿瘤是不具有升高的rspo2表达水平的结肠直肠肿瘤。在某些实施方式中，所述肿瘤与相同组织类型的正常组织具有基本上相同的rspo多肽表达水平。在某些实施方式中，所述肿瘤与相同组织类型的正常组织具有基本上相同的rspo1、rspo2、rspo3和/或rspo4表达水平。在某些实施方式中，所述所述肿瘤是与相同组织类型的正常组织具有基本上相同的rspo3表达水平的结肠直肠肿瘤。在某些实施方式中，所述肿瘤是与相同组织类型的正常组织具有基本上相同的rspo2表达水平的结肠直肠肿瘤。在某些实施方式中，所述肿瘤是与预定表达水平相比，表达低水平的rspo1、rspo2、rspo3和/或rspo4的结肠直肠肿瘤。在某些实施方式中，所述肿瘤是与预定表达水平相比，表达高水平的rspo1、rspo2、rspo3和/或rspo4的结肠直肠肿瘤。在某些实施方式中，rspo1、rspo2、rspo3或rspo4的预定表达水平是相同组织类型的正常组织中的rspo1、rspo2、rspo3或rspo4表达水平。在某些实施方式中，rspo1、rspo2、rspo3或rspo4的预定表达水平是相同组织类型的肿瘤或肿瘤组中的rspo1、rspo2、rspo3或rspo4表达水平。在某些实施方式中，rspo1、rspo2、rspo3或rspo4的预定表达水平是不同组织类型的肿瘤或肿瘤组中的rspo1、rspo2、rspo3或rspo4的表达水平。

短语“肿瘤具有升高的…表达水平”、“肿瘤与相同组织类型的正常组织具有基本上相同的…表达水平”、“肿瘤具有低rspo3表达”或“肿瘤具有高rspo3表达”可以指蛋白的表达水平或核酸的表达水平。通常，短语“肿瘤具有升高的蛋白或基因表达水平”、“肿瘤具有蛋白或基因的高表达水平”、“肿瘤具有蛋白或基因的低表达水平”或“肿瘤具有基本上相同的表达水平”(或类似短语)是指与参考样品中的相同蛋白或相同基因的表达水平或预定表达水平相比的肿瘤中的蛋白或基因的表达水平。在某些实施方式中，参考样品是相同组织类型的正常组织。在某些实施方式中，参考样品是一组组织类型的正常组织。在某些实施方式中，参考样品是相同组织类型的肿瘤或肿瘤组。在某些实施方式中，参考样品是不同组织类型的肿瘤或肿瘤组。因此，在某些实施方式中，与一组组织类型内的蛋白或基因的平均表达水平相比，肿瘤中蛋白或基因的表达水平是“升高的”、“高的”、“低的”或“基本上相同的”。在某些实施方式中，与相同组织类型或不同组织类型的其他肿瘤中的蛋白或基因的表达水平相比，肿瘤中蛋白或基因的表达水平是“升高的”、“高的”、“低的”或“基本上相同的”。在某些实施方式中，与相同组织类型的正常组织中的rspo表达水平相比，所述肿瘤表达“升高的”、“高的”、“低的”或“基本上相同的”水平的rspo1、rspo2、rspo3和/或rspo4。在某些实施方式中，与预定水平相比，所述肿瘤表达“升高的”、“高的”、“低的”或“基本上相同的”水平的rspo1、rspo2、rspo3和/或rspo4。

在某些实施方式中，本文所述的方法进一步包括在所述肿瘤或癌症中确定至少一种rspo(即，蛋白或核酸)的表达水平的步骤。在某些实施方式中，在所述肿瘤或癌症中确定rspo表达水平的步骤包括确定rspo1、rspo2、rspo3和rspo4中的一种或多种的表达水平。在某些实施方式中，将肿瘤或癌症中的rspo1、rspo2、rspo3和rspo4中的一种或多种的表达水平与参考样品中的rspo1、rspo2、rspo3和rspo4中的一种或多种的表达水平进行比较。在某些实施方式中，将肿瘤或癌症中的rspo1、rspo2、rspo3和rspo4中的一种或多种的表达水平分别与相同组织类型的正常组织中的rspo1、rspo2、rspo3和rspo4的表达水平进行比较。在某些实施方式中，将肿瘤或癌症中的rspo1、rspo2、rspo3和rspo4中的一种或多种的表达水平分别与rspo1、rspo2、rspo3和rspo4的预定表达水平进行比较。在某些实施方式中，将肿瘤或癌症中的rspo1、rspo2、rspo3和rspo4中的一种或多种的表达水平分别与相同组织类型的正常组织中的rspo1、rspo2、rspo3和rspo4的预定表达水平进行比较。在某些实施方式中，所述肿瘤或癌症具有rspo1、rspo2、rspo3和rspo4中的一种或多种的升高表达。在某些实施方式中，所述肿瘤或癌症不具有rspo1、rspo2、rspo3和rspo4中的一种或多种的升高表达。在某些实施方式中，所述肿瘤或癌症表达与参考样品基本相同水平的rspo1、rspo2、rspo3和rspo4中的一种或多种。通常，将rspo的表达水平(即，蛋白质或核酸)与相同组织类型的正常组织中的rspo的表达水平(即，蛋白质或核酸)进行比较。然而，在某些实施方式中，将rspo的表达水平(即，蛋白质或核酸)与一组组织类型内的平均rspo的表达水平(即，蛋白质或核酸)进行比较。在某些实施方式中，将所述肿瘤中的rspo的表达水平(即，蛋白质或核酸)与相同组织类型或不同组织类型的其他肿瘤中的rspo的表达水平(即，蛋白质或核酸)进行比较。在某些实施方式中，在用rspo-lgr通路抑制剂治疗前完成rspo表达水平的确定。

在某些实施方式中，本文所述的方法进一步包括确定所述肿瘤或癌症是否在apc基因中具有失活突变的步骤。在某些实施方式中，本文所述的方法进一步包括确定所述肿瘤或癌症是否在β-连环蛋白基因中具有激活突变的步骤。在某些实施方式中，本文所述的方法进一步包括确定所述肿瘤或癌症是否在编码wnt信号通路组分的基因中具有突变的步骤。例如参见，seahgiri等，nature，488：660-664(2012)和美国专利公开号20130209473，此处出于全部目的以其整体通过引用并入本文。在某些实施方式中，本文所述的方法进一步包括确定所述肿瘤或癌症是否在以下基因中具有突变：wnt(例如，wnt1、wnt2、wnt2b、wnt3、wnt3a、wnt4、wnt5a、wnt5b、wnt6、wnt7a、wnt7b、wnt8a、wnt8b、wnt9a、wnt9b、wnt10a、wnt10b、wnt11、wnt16)、卷曲蛋白(例如，fzd1-fzd10)、rspo(例如，rspo1、rspo2、rspo3、rspo4)、lgr(例如，lgr4、lgr5、lgr6)、wtx、wisp(例如，wisp1、wisp2、wisp3)、β-trcp、stra6、lrp(例如，lrp5、lrp6)、轴蛋白(例如、轴蛋白1、轴蛋白2)、dishevelled、sfrp、wif-1、dkk、krn、gsk3、cki、pp2a、pygopus、bcl9/legless、tcf/lef、groucho、ctnnb1、cbp/p300、brg-1基因、tcfl2、ppn、cdh17、ezh2、hmga1、hmga2、yy1和/或tc1基因。

在某些实施方式中，本文所述的方法进一步包括确定肿瘤或癌症是否具有rspo基因融合的步骤。

在某些实施方式中，本文所述的方法进一步包括确定肿瘤或癌症中rspo1、rspo2、rspo3和/或rspo4的表达水平的步骤。在某些实施方式中，在用rspo-lgr通路抑制剂治疗前完成rspo表达水平的确定。在某些实施方式中，如果肿瘤或癌症在apc基因中具有失活突变，对受试者施用rspo-lgr通路抑制剂。

用于确定细胞、肿瘤或癌症中的rspo表达水平的方法是本领域技术人员已知的。对于核酸表达，这些方法包括但不限于：基于pcr的测定、微阵列分析和核苷酸测序(例如，nextgen测序)。对于蛋白表达，这些方法包括但不限于：western印记分析、蛋白质阵列、elisa、免疫组织化学(ihc)测定和facs。

用于确定肿瘤在编码rspo-lgr通路组分的基因中是否具有rspo基因融合或突变的方法是本领域技术人员已知的。方法可以包括但不限于：基于pcr的测定、微阵列分析和核苷酸测序(例如，nextgen测序，全基因组测序(wgs))。

用于确定rspo的表达水平、rspo基因融合的存在或在编码rspo-lgr通路组分的基因中突变的存在的方法可以使用多种样品。在某些实施方式中，样品取自患有肿瘤或癌症的受试者。在某些实施方式中，样品是新鲜的肿瘤/癌症样品。在某些实施方式中，样品是冷冻肿瘤/癌症样品。在某些实施方式中，样品是福尔马林固定的石蜡包埋样品。在某些实施方式中，样品被处理成细胞裂解物。在某些实施方式中，样品被处理成dna或rna。

在本文所述的任何方法的某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是rspo-结合剂。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是lgr-结合剂。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是抗体。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是抗rspo抗体。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是抗rspo3抗体。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是抗lgr抗体。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是抗lgr5抗体。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是抗体omp-131r010。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是可溶性受体。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是lgr可溶性受体。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是lgr-fc可溶性受体。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是lgr5-fc可溶性受体。在某些实施方式中，lgr5-fc可溶性受体包含seqidno:63的氨基酸序列。

在本文所述的任何方法的某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是特异性结合至少一种rspo蛋白或其片段的抗体。在某些实施方式中，所述抗体特异性结合选自下组的至少一种人rspo蛋白：rspo1、rspo2、rspo3和rspo4。在某些实施方式中，所述抗体特异性结合人rspo3。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是特异性结合rspo3的抗体并且包含：(a)含有dysih(seqidno:29)的重链cdr1、含有yiypsngdsgynqkfk(seqidno:30)的重链cdr2、和含有atyfannfdy(seqidno:32)或tyfannfd(seqidno:31)的重链cdr3；及(b)含有kasqsvdydgdsymn(seqidno:33)的轻链cdr1、含有aasnles(seqidno:34)的轻链cdr2、和含有qqsnedplt(seqidno:36)的轻链cdr3。

在本文所述的任何方法的某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是包含以下的抗体：(a)含有dysih(seqidno:29)的重链cdr1、含有yiypsngdsgynqkfk(seqidno:30)的重链cdr2、和含有atyfannfdy(seqidno:32)或tyfannfd(seqidno:31)的重链cdr3；及(b)含有kasqsvdydgdsymn(seqidno:33)的轻链cdr1、含有aasnles(seqidno:34)的轻链cdr2、和含有qqsnedplt(seqidno:36)的轻链cdr3；并且以交错给药方式与有丝分裂抑制剂组合施用。

在本文所述的任何方法的某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是包含以下的抗体：(a)含有dysih(seqidno:29)的重链cdr1、含有yiypsngdsgynqkfk(seqidno:30)的重链cdr2、和含有atyfannfdy(seqidno:32)或tyfannfd(seqidno:31)的重链cdr3；及(b)含有kasqsvdydgdsymn(seqidno:33)的轻链cdr1、含有aasnles(seqidno:34)的轻链cdr2、及含有qqsnedplt(seqidno:36)的轻链cdr3；并且以交错给药方式与紫杉烷组合施用。

在本文所述的任何方法的某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是包含以下的抗体：(a)含有dysih(seqidno:29)的重链cdr1、含有yiypsngdsgynqkfk(seqidno:30)的重链cdr2、和含有atyfannfdy(seqidno:32)或tyfannfd(seqidno:31)的重链cdr3；及(b)含有kasqsvdydgdsymn(seqidno:33)的轻链cdr1、含有aasnles(seqidno:34)的轻链cdr2、和含有qqsnedplt(seqidno:36)的轻链cdr3，并且以交错给药方式与紫杉醇、白蛋白结合型紫杉醇或多西他赛组合施用。

在本文所述的任何方法的某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是包含含有seqidno:38的重链可变区和含有seqidno:39的轻链可变区的抗体，并且以交错给药方式与有丝分裂抑制剂组合施用。

在本文所述的任何方法的某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是包含含有seqidno:38的重链可变区和含有seqidno:39的轻链可变区的抗体，并且以交错给药方式与紫杉烷组合施用。

在本文所述的任何方法的某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是包含含有seqidno:38的重链可变区和含有seqidno:39的轻链可变区的抗体，并且以交错给药方式与紫杉醇、白蛋白结合型紫杉醇或多西他赛组合施用。

在某些实施方式中，所述抗体是单克隆抗体、重组抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体或包含抗原结合位点的抗体片段。在某些实施方式中，所述抗体是单特异性抗体或双特异性抗体。在某些实施方式中，所述抗体是igg1抗体、igg2抗体或igg4抗体。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是抗体omp-131r010。

在本文所述的任何方法的某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是可溶性受体。在某些实施方式中，可溶性受体包含lgr蛋白的细胞外结构域或其片段。在某些实施方式中，lgr蛋白是lgr5。在某些实施方式中，细胞外结构域包含人lgr5的22-564位氨基酸(seqidno:56)。

在本文所述的任何方法的某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是包含人lgr5的22-564位氨基酸的lgr-fc可溶性受体，以交错给药方式与有丝分裂抑制剂组合施用。在某些实施方式中，有丝分裂抑制剂是紫杉烷。在某些实施方式中，紫杉烷是紫杉醇、白蛋白结合型紫杉醇或多西他赛。

本文描述了包含rspo-lgr通路抑制剂和/或有丝分裂抑制剂的组合物。在某些实施方式中，所述组合物包含本文所述的rspo-结合剂或多肽。在某些实施方式中，所述组合物包含本文所述的lgr-结合剂或多肽。在某些实施方式中，所述组合物包含本文所述的有丝分裂抑制剂。在某些实施方式中，所述组合物是包含rspo-lgr通路抑制剂和药学上可接受的载体的药物组合物。在某些实施方式中，所述组合物是包含有丝分裂抑制剂和药学上可接受的载体的药物组合物。所述药物组合物可用于在人类患者中抑制肿瘤细胞生长、减小肿瘤大小和治疗癌症。在某些实施方式中，本文所述的rspo-结合剂可与有丝分裂抑制剂组合用于制造用于癌症治疗的药物。在某些实施方式中，本文所述的lgr-结合剂可与有丝分裂抑制剂组合用于制造用于癌症治疗的药物。在某些实施方式中，有丝分裂抑制剂是紫杉烷。

通过将治疗剂与药学上可接受的载体、赋形剂和/或稳定剂组合为灭菌冻干粉末、水溶液等来制备用于储存和使用的制剂(remington:thescienceandpracticeofpharmacy，第22版，2012，pharmaceuticalpress，london)。本领域技术人员通常将药学上可接受的载体、赋形剂和/或稳定剂视为制剂或药物组合物的非活性成分。

适合的载体、赋形剂或稳定剂包括：诸如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸等无毒缓冲液；诸如氯化钠等盐；包括抗坏血酸和甲硫氨酸等抗氧化剂；防腐剂(例如十八烷基二甲基苄基氯化铵；六甲基氯化铵；苯扎氯铵；苄索氯铵；苯酚、丁基醇或苄醇；诸如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯等对羟基苯甲酸烷基酯类；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；间甲酚)；低分子量多肽(如小于约10个氨基酸残基)；诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白等蛋白质；诸如聚乙烯吡咯烷酮等亲水性聚合物；诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸等氨基酸；诸如单糖、二糖、葡萄糖、甘露糖或糊精等碳水化合物；诸如edta等螯合剂；诸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇等糖；诸如钠等成盐抗衡离子；金属络合物(例如zn-蛋白络合物)；和/或诸如聚山梨醇酯(tween)或聚乙二醇(peg)等非离子型表面活性剂。

治疗性制剂可以是单位剂型。这样的制剂包括片剂、丸剂、胶囊剂、粉末剂、颗粒剂、水性或非性水介质中的溶液或悬浮液，或栓剂，用于口服、肠胃外或直肠施用或通过吸入施用。在诸如片剂等固体组合物中，主要活性成分与药物载体混合。如本文所述，药物载体被认为是制剂或组合物的无活性成分。常规的压片成分包括玉米淀粉、乳糖、蔗糖、山梨糖醇、滑石、硬脂酸、硬脂酸镁、磷酸二钙或树胶，及其他稀释剂(例如水)，以形成包含化合物或其无毒的药学上可接受的盐的均质混合物的固体预制剂组合物。然后将固体预制剂组合物细分为上述类型的单位剂型。新型组合物的片剂、丸剂等可以被包衣或以其他方式复合以提供具有延长作用优点的剂型。例如，片剂或丸剂可包含被外部组分覆盖的内部组合物。此外，两个组分可以被用于抵抗崩解的肠溶层分开，并允许内部组分完整地通过胃或延迟释放。各种材料可用于所述肠溶层或涂层，其包括多种聚合酸，及聚合酸与诸如虫胶、鲸蜡醇和乙酸纤维素等材料的混合物。

药物制剂可包括与脂质体复合的rspo-lgr通路抑制剂和/或有丝分裂抑制剂。通过用包含磷脂酰胆碱、胆固醇和peg衍生的磷脂酰乙醇胺(peg-pe)的脂质组合物进行反相蒸发可以产生脂质体。脂质体通过规定孔径的过滤器挤出以产生具有所需直径的脂质体。

rspo-lgr通路抑制剂和/或有丝分裂抑制剂封装在微胶囊中。例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备这种微胶囊，例如分别在胶体药物递送系统(例如，脂质体、白蛋白微球、微乳液、微乳液、纳米颗粒和纳米胶囊)或在remington:thescienceandpracticeofpharmacy，第22版，2012，pharmaceuticalpress，london中所述的大乳液(macroemulsion)中的羟甲基纤维素或明胶微胶囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊。

此外，可制备包含rspo-lgr通路抑制剂和/或有丝分裂抑制剂的缓释制剂。缓释制剂的适合实例包括包含该试剂的固体疏水性聚合物的半透性基质，该基质为成型品的形式(例如，膜或微胶囊)。缓释基质的实例包括聚酯类、如聚(2-羟乙基-甲基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇)等水凝胶、聚丙交酯类、l-谷氨酸和7乙基-l-谷氨酸的共聚物、非降解性乙烯-乙酸乙烯酯、诸如luprondepot^tm(乳酸-乙醇酸共聚物和乙酸亮丙瑞林组成的可注射微球)等可降解性乳酸-乙醇酸共聚物、异丁酸蔗糖酯和聚-d-(-)-3-羟基丁酸。

根据已知方法将rspo-lgr通路抑制剂和有丝分裂抑制剂作为适合的药物组合物对人类患者施用。所述药物组合物可以以任何种方式施用以用于局部或全身治疗。适合的施用方法包括但不限于：静脉内(作为推注施用或者通过连续输注一段时间施用)、动脉内、肌内(注射或输注)、肿瘤内、腹腔内、脑脊髓内、皮下、关节内、滑膜内、颅内(例如，鞘内或脑室内)或口服。此外，可以局部施用(例如，透皮贴剂、软膏、洗剂、霜剂、凝胶剂、滴剂、栓剂、喷雾剂、液体和粉末剂)或肺部施用(例如，通过吸入或吹入粉末剂或气溶胶，包括通过喷雾器；气管内、鼻内、表皮和经皮)。

对于疾病的治疗，rspo-lgr通路抑制剂与有丝分裂抑制剂组合的适当剂量取决于待治疗的疾病类型、疾病的严重性和病程、疾病的响应性、抑制剂是否用于治疗或预防目的施用、先前治疗、患者的临床病史等，均由治疗医师酌情决定。rspo-lgr通路抑制剂的施用可以是一次或作为分布于数天至数月内的一系列治疗，或者直至实现治愈或实现疾病状态的减轻(例如肿瘤大小减小)。有丝分裂抑制剂的施用可以是一次或作为分布于数天至数月内的一系列治疗，或者直至实现治愈或实现疾病状态的减轻(例如肿瘤大小减小)。每种试剂的最佳给药方案可以根据患者体内药物积累的测量来计算，并且将根据个体试剂的相对效力而变化。给药医师可以确定最佳剂量、给药方法和重复率。

在某些实施方式中，组合施用包括单一药物制剂的共同施用。在某些实施方式中，组合施用包括以任何顺序使用分开的制剂和连续施用，但通常在一段时间内使得所有活性剂可以同时发挥其生物学活性。在某些实施方式中，组合施用包括使用分开的制剂和交错给药方案。在某些实施方式中，组合施用包括使用分开的制剂和以特定顺序施用。在某些实施方式中，组合施用包括使用分开的制剂和以特定顺序和以交错给药方案施用所述试剂。例如，在某些实施方式中，在施用rspo-lgr通路抑制剂约1天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天或约7天后施用有丝分裂抑制剂。

在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂的剂量为约0.01μg～约100mg/kg体重，约0.1μg～约100mg/kg体重，约1μg～约100mg/kg体重，约1mg～约100mg/kg体重，约1mg～约80mg/kg体重，约10mg～约100mg/kg体重，约10mg～约75mg/kg体重，或约10mg～约50mg/kg体重。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂的剂量为约0.1mg～约20mg/kg体重。在某些实施方式中，以约2mg/kg～约10mg/kg的剂量向受试者施用rspo-lgr通路抑制剂。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂每日、每周、每月或每年施用一次以上。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂的施用为每周一次、每2周一次、每3周一次或每4周一次。

在本发明的某些实施方式中，以约2mg/kg～约20mg/kg的剂量向受试者施用rspo-lgr通路抑制剂。在某些实施方式中，以约2mg/kg～约10mg/kg的剂量向受试者施用rspo-lgr通路抑制剂或抗体。在某些实施方式中，以约2.5mg/kg～约10mg/kg的剂量向受试者施用rspo-lgr通路抑制剂或抗体。在某些实施方式中，以约5mg/kg～约20mg/kg的剂量向受试者施用rspo-lgr通路抑制剂或抗体。

在另一个实施方式中，以约2mg/kg～约20mg/kg的剂量每周一次施用rspo-lgr通路抑制剂或抗体。在另一个实施方式中，以约2mg/kg～约20mg/kg的剂量每2周一次施用rspo-lgr通路抑制剂或抗体。在另一个实施方式中，以约2mg/kg～约20mg/kg的剂量每3周一次施用rspo-lgr通路抑制剂或抗体。在另一个实施方式中，以约2mg/kg～约20mg/kg的剂量每4周一次施用rspo-lgr通路抑制剂或抗体。在另一个实施方式中，以约2mg/kg～约5mg/kg的剂量每3周施用rspo-lgr通路抑制剂或抗体。在另一个实施方式中，以约3mg/kg～约7.5mg/kg的剂量每4周施用rspo-lgr通路抑制剂或抗体。

在某些实施方式中，有丝分裂抑制剂的剂量为约20mg/m²～约3000mg/m²、约20mg/m²～约2000mg/m²、约20mg/m²～约1000mg/m²、约20mg/m²～约500mg/m²、或约20mg/m²～约250mg/m²。在某些实施方式中，有丝分裂抑制剂的剂量为约20mg/m²～约150mg/m²。在某些实施方式中，有丝分裂抑制剂的剂量为约50mg/m²。在某些实施方式中，有丝分裂抑制剂的剂量为约75mg/m²。在某些实施方式中，有丝分裂抑制剂的剂量为约90mg/m²。在某些实施方式中，有丝分裂抑制剂的剂量为约125mg/m²。在某些实施方式中，有丝分裂抑制剂每日、每周、每月或每年施用一次以上。在某些实施方式中，有丝分裂抑制剂的施用每天两次以上、每天一次、每2天一次、每3天一次、每4天一次、每5天一次、每周一次、每2周一次、每3周一次、每4周一次、或在4周周期中的3周中每周一次。在某些实施方式中，根据为标准治疗剂建立的给药方案施用有丝分裂抑制剂。

在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂和/或有丝分裂抑制剂可以以最初较高的“加载(loading)”剂量施用，随后施用一次或多次较低剂量。在某些实施方式中，还可以改变施用频率。在某些实施方式中，给药方案可以包括施用初始剂量，随后每周一次、每2周一次、每3周一次或每月一次施用另外的剂量(或“维持”剂量)。例如，给药方案可以包括施用初始加载剂量，随后每周施用维持剂量，例如初始剂量一半。在某些实施方式中，给药方案可以包括施用初始加载剂量，随后施用维持剂量，例如每隔一周施用初始剂量的一半。在某些实施方式中，给药方案可以包括在3周中施用三次初始剂量，随后施用维持剂量，例如每隔一周施用相同量的维持剂量。

如本领域技术人员已知的，任何治疗剂的施用可导致副作用和/或毒性。在某些情况下，副作用和/或毒性非常严重，以致于排除以治疗有效剂量施用特定试剂。在某些情况下，必须停止药物治疗，并且可以尝试其他试剂。然而，相同治疗类别中的许多试剂经常显示相似的副作用和/或毒性，这意味着患者必须停止治疗，或者如果可能，承受与治疗剂相关的不愉快的副作用。

本文描述了在受试者中治疗癌症的方法，该方法包括使用给药方案来施用两种以上试剂，其可以减少与rspo-lgr通路抑制剂和/或有丝分裂抑制剂施用有关的副作用和/或毒性。在某些实施方式中，在人类受试者中治疗癌症的方法包括向受试者组合施用治疗有效剂量的rspo-lgr通路抑制剂和治疗有效剂量的有丝分裂抑制剂，其中根据间歇给药方案施用一种或两种抑制剂。在某些实施方式中，间歇给药方案包括向受试者施用初始剂量的rspo-lgr通路抑制剂，并且约每2周一次施用后续剂量的rspo-lgr通路抑制剂。在某些实施方式中，间歇给药方案包括向受试者施用初始剂量的rspo-lgr通路抑制剂，并且约每3周一次施用后续剂量的rspo-lgr通路抑制剂。在某些实施方式中，间歇给药方案包括向受试者施用初始剂量的rspo-lgr通路抑制剂，并且约每4周一次施用后续剂量的rspo-lgr通路抑制剂。在某些实施方式中，使用间歇给药方案施用rspo-lgr通路抑制剂，并且每周或在4周周期中的3周中的每周施用有丝分裂抑制剂。

具有以上治疗剂的组合疗法通常使用通过不同作用机制的试剂，尽管这不是必需的。使用具有不同作用机制的试剂的组合疗法可导致加合或协同作用。组合疗法可以允许每种试剂的剂量低于单一疗法中使用的剂量，从而减少毒副作用和/或增加试剂的治疗指数。组合疗法可以降低抗性肿瘤细胞发展的可能性。在某些实施方式中，组合疗法包括影响(例如抑制或杀死)非致瘤性细胞的治疗剂和影响(例如抑制或杀死)致瘤性csc的治疗剂。

在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂和有丝分裂抑制剂的组合导致加合或协同结果。在某些实施方式中，组合疗法导致rspo-lgr通路抑制剂治疗指数的增加。在某些实施方式中，组合疗法导致有丝分裂抑制剂治疗指数的增加。在某些实施方式中，组合疗法导致rspo-lgr通路抑制剂毒性和/或副作用的降低。在某些实施方式中，组合疗法导致有丝分裂抑制剂毒性和/或副作用的降低。

治疗医师可以基于测量的体液或组织中的药物停留时间和浓度来估计重复给药速率。可以通过常规技术和测定来监测治疗进展。

在某些实施方式中，除了组合施用rspo-lgr通路抑制剂与有丝分裂抑制剂之外，治疗方法可进一步包括在施用rspo-lgr通路抑制剂和/或有丝分裂抑制剂之前、同时和/或之后施用至少一种另外的治疗剂。

在某些实施方式中，另外的治疗剂将与rspo-lgr通路抑制剂或有丝分裂抑制剂基本上同时或并行施用。例如，在经受另外的治疗剂(例如，另外的化疗剂)的治疗过程的同时，可给予受试者rspo-lgr通路抑制剂和有丝分裂抑制剂。在某些实施方式中，在使用另外的治疗剂治疗的1年之内将施用rspo-lgr通路抑制剂和有丝分裂抑制剂。在某些替代实施方式中，在使用另外的治疗剂的任何治疗的10个月、8个月、6个月、4个月或2个月之内将施用rspo-lgr通路抑制剂和有丝分裂抑制剂。在某些其他实施方式中，在使用另外的治疗剂的任何治疗的4周、3周、2周或1周之内将施用rspo-lgr通路抑制剂和有丝分裂抑制剂。在某些实施方式中，在使用另外的治疗剂的任何治疗的5天、4天、3天、2天或1天之内将施用rspo-lgr通路抑制剂和有丝分裂抑制剂。还应了解的是，在使用rspo-lgr通路抑制剂或有丝分裂抑制剂的数小时或数分钟(即，基本上同时)向受试者施用所述试剂或治疗。

另外的治疗(例如、抗癌)剂的有用类别例如包括：阿司匹林、dna小沟结合剂、dna复制抑制剂、烷基化剂(例如，诸如顺铂、单(铂)、双(铂)和三核铂络合物和卡铂等铂络合物)、蒽环类、抗生素类、叶酸拮抗物类、抗代谢物类、化疗敏化剂类、杜卡霉素类、依托泊苷类、氟化嘧啶类、离子载体类、lexitropsins、亚硝脲类、铂醇类、嘌呤抗代谢物类、嘌呤霉素类、放射敏化剂类、甾类化合物、拓扑异构酶抑制剂等。在某些实施方式中，另外的治疗剂是抗代谢物、拓扑异构酶抑制剂或血管生成抑制剂。

可与rspo-lgr通路抑制剂和有丝分裂抑制剂组合施用的治疗剂包括化疗剂。因此，在某些实施方式中，该方法或治疗涉及将rspo-lgr通路抑制剂和有丝分裂抑制剂与化疗剂或多种不同的化疗剂的混合物组合施用。使用rspo-lgr通路抑制剂和有丝分裂抑制剂的治疗可在施用化学疗法之前、同时或之后发生。预期的化学疗法包括本领域已知的和市售的化学物质或药物，如吉西他滨、伊立替康、多柔比星、5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷("ara-c")、环磷酰胺、噻替派、白消安、细胞毒素、甲氨蝶呤、顺铂、美法仑和卡铂。组合施用可以包括以单个药物制剂或使用分开的制剂的共同施用，或者以任何顺序连续施用，但通常在一段时间内，使得所有活性剂可以同时发挥其生物学活性。这些化疗剂的制备和给药方案可以根据制造商的说明使用，或由本领域技术人员根据经验确定。所述化学疗法的制备和给药方案也描述于chemotherapyservice，1992，m.c.perry编，williams&wilkins，baltimore，md。

本文所述的方法中有用的化疗剂还包括但不限于：诸如噻替派和环磷酰胺等烷化剂；诸如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡等烷基磺酸盐类；诸如苯佐替派、卡波醌、美妥替哌和乌瑞替哌等氮丙啶类；包括六甲蜜胺、三乙烯蜜胺、三乙烯磷酰胺、三乙烯硫代磷酰胺和三羟甲基蜜胺的乙烯亚胺类和甲基蜜胺类；诸如苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯代磷酰胺、雌氮芥、异环磷酰胺、氮芥、盐酸氧化氮芥、美法仑、新氮芥、苯芥胆甾醇、泼尼氮芥、曲磷胺、尿嘧啶氮芥等氮芥类；诸如卡莫司汀、氯脲菌素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀等亚硝基脲类；诸如阿克拉霉素、放线菌素、安曲霉素、重氮丝氨酸、博莱霉素、放线菌素c、加利车霉素、卡洛比星、洋红霉素、嗜癌霉素、色霉素、放线菌素d、柔红霉素、地托比星、6-重氮基-5-氧代-l-正亮氨酸、多柔比星、表柔比星、依索比星、伊达比星、麻西罗霉素、丝裂霉素、霉酚酸、诺加霉素、橄榄霉素、培洛霉素、泊非霉素、嘌呤霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑菌素、链脲霉素、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星等抗生素类；诸如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-fu)等抗代谢物；诸如二甲叶酸、甲氨蝶呤、蝶罗呤、三甲曲沙等叶酸类似物；诸如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鸟嘌呤等嘌呤类似物；诸如安西他滨、阿扎胞苷、6-阿扎尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、双脱氧尿苷、去氧氟尿苷、依诺他滨、氟尿苷、5-fu等嘧啶类似物；诸如卡普睾酮、丙酸屈他雄酮、环硫雄醇、美雄烷、睾内酯等雄激素类；诸如氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦等抗肾上腺素类；诸如亚叶酸等叶酸补充剂；醋葡醛内酯；醒磷酰胺糖苷；氨基酮戊酸；安吖啶；贝曲布辛；比生群；依达曲沙；地磷酰胺；秋水仙胺；地吖醌；依氟鸟氨酸；依利醋铵；依托格鲁；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；氯尼达明；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌达醇；硝氨丙吖啶；喷司他丁；蛋氨氮芥；吡柔比星；鬼臼酸；2-乙基肼；丙卡巴肼；psk；丙亚胺；西佐非兰；锗螺胺；替奴佐酸；三亚胺醌；2,2',2”-三氯三乙胺；乌拉坦；长春地辛；达卡巴嗪；甘露醇氮芥；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；盖拓新；阿糖胞苷("ara-c")；环磷酰胺；噻替派；苯丁酸氮芥；吉西他滨；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；诸如顺铂和卡铂等铂类似物；铂；依托泊苷(vp-16)；异环磷酰胺；丝裂霉素c；米托蒽醌；诺消灵；替尼泊苷；柔红霉素；氨基蝶呤；希罗达；伊班膦酸钠；cpt11；拓扑异构酶抑制剂rfs2000；二氟甲基鸟氨酸(dmfo)；视黄酸；埃斯波霉素；卡培他滨；及上述任何物质的药学上可接受的盐、酸或衍生物。化疗剂还包括用于调节或抑制激素对肿瘤的作用的抗激素剂，诸如抗雌性激素类，其例如包括他莫昔芬、雷洛昔芬、抑制4(5)-咪唑的芳香酶、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、盐酸雷洛昔芬、ly117018、奥那司酮和托瑞米芬；及抗雄性激素类，诸如氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、亮丙瑞林和戈舍瑞林；及上述任何物质的药学上可接受的盐、酸或衍生物。

在某些实施方式中，化疗剂是拓扑异构酶抑制剂。拓扑异构酶抑制剂是干扰拓扑异构酶(例如，拓扑异构酶i或ii)的作用的化疗剂。拓扑异构酶抑制剂包括但不限于：盐酸多柔比星、柠檬酸柔红霉素、盐酸米托蒽醌、放线菌素d、依托泊苷、盐酸拓扑替康、替尼泊苷(vm-26)和伊立替康。

在某些实施方式中，化疗剂是抗代谢药。抗代谢药是具有与正常生化反应所需的代谢物相似结构的化学物质，但是该结构足够不同以干扰细胞的一种或多种正常功能，例如细胞分裂。抗代谢药包括但不限于：吉西他滨、氟尿嘧啶、卡培他滨、甲氨蝶呤钠、雷替曲塞、培美曲塞、替加氟、阿糖胞苷、硫鸟嘌呤、5-氮杂胞苷、6-巯基嘌呤、硫唑嘌呤、6-硫鸟嘌呤、喷司他丁、磷酸氟达拉滨和克拉屈滨，及任何这些物质的药学上可接受的盐、酸或衍生物。

在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂和有丝分裂抑制剂与吉西他滨组合使用。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂和有丝分裂抑制剂与吉西他滨组合使用用于胰腺癌治疗，其中，rspo-lgr通路抑制剂是omp-131r010，且有丝分裂抑制剂是紫杉醇或白蛋白结合型紫杉醇(abraxane)。

在某些实施方式中，治疗可包括施用一种或多种细胞因子(例如，淋巴因子、白细胞介素、肿瘤坏死因子和/或生长因子)或者可伴随手术切除肿瘤或肿瘤细胞或者治疗医师认为必要的任何其他治疗方法。

在某些实施方式中，治疗涉及组合施用rspo-lgr通路抑制剂和有丝分裂抑制剂与放射治疗。使用rspo-lgr通路抑制剂和有丝分裂抑制剂的治疗可在施用放射治疗之前、同时或之后发生。所述放射治疗的给药方案可由本领域技术人员确定。

在某些实施方式中，wnt通路抑制剂可与rspo-lgr通路抑制剂和有丝分裂抑制剂组合施用。使用rspo-lgr通路抑制剂和有丝分裂抑制剂的治疗可在施用wnt通路抑制剂之前、同时或之后发生。在某些实施方式中，可在使用rspo-lgr通路抑制剂或有丝分裂抑制剂的数小时或数分钟内(即，基本上同时)向受试者施用wnt通路抑制剂。例如已经在美国专利号7,723,477、8,324,361、8,765,913、7,982,013、8,507,442，和美国专利公开号2013/0034551和2013/0045209中描述了wnt通路抑制剂，此处各出于全部目的以其整体通过参考并入本文。在某些实施方式中，wnt通路抑制剂是抗wnt抗体。在某些实施方式中，wnt通路抑制剂是抗fzd抗体。在某些实施方式中，wnt通路抑制剂是特异性结合选自fzd1、fzd2、fzd3、fzd4、fzd5、fzd6、fzd7、fzd8、fzd9和fzd10的fzd中的至少一种受体的抗fzd抗体。在某些实施方式中，wnt通路抑制剂是特异性结合选自fzd1、fzd2、fzd5、fzd7和fzd8中的至少一种受体的抗fzd抗体。在某些实施方式中，wnt通路抑制剂是vantictumab(omp-18r5)。在某些实施方式中，wnt通路抑制剂是fzd-fc可溶性受体。在某些实施方式中，wnt通路抑制剂是fzd8-fc可溶性受体。在某些实施方式中，wnt通路抑制剂是ipafricept(omp-54f28)。

iii.rspo-lgr通路抑制剂

本文描述了例如包括抑制肿瘤生长、减小肿瘤大小或治疗癌症的方法等方法，所述方法包括组合施用rspo-lgr通路抑制剂与有丝分裂抑制剂。在某些实施方式中，根据连续或交错给药方案，组合使用rspo-lgr通路抑制剂与有丝分裂抑制剂，其中，在有丝分裂抑制剂前施用rspo-lgr通路抑制剂。

在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是结合rspo-lgr通路的一种或多种可溶解的细胞外组分的试剂。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是结合rspo-lgr通路的膜结合组分的一个或多个细胞外区域的试剂。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是直接调节rspo-lgr通路的一种或多种可溶解的细胞外组分的试剂。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是直接调节rspo-lgr通路的膜结合组分的一个或多个细胞外区域的试剂。

在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是直接或间接调节wnt信号通路组分的试剂。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是抑制β-连环蛋白信号传导的试剂。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是调节wnt介导的β-连环蛋白信号传导的试剂。

在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是结合一种或多种人rspo蛋白的试剂。这些试剂在本文中被称为“rspo-结合剂”。rspo-结合剂的非限制性实例可见于美国专利号8158758、8158757、8802097、8088374，及美国专利公开号2014/0017253、2014/0134703、2013/0337533、2014/0186917、2012/0263730、2012/0039912、2009/0220495、2012/0088727、2014/0056894和20150147333，此处各出于全部目的以其整体通过参考并入本文。

在某些实施方式中，rspo-结合剂是抗体。在某些实施方式中，rspo-结合剂是多肽。在某些实施方式中，rspo-结合剂结合rspo1(“rspo1-结合剂”)。在某些实施方式中，rspo-结合剂结合rspo2(“rspo2-结合剂”)。在某些实施方式中，rspo-结合剂结合rspo3(“rspo3-结合剂”)。在某些实施方式中，rspo-结合剂特异性结合一种或多种人rspo蛋白。人rspo1、rspo2、rspo3和rspo4的全长氨基酸(aa)序列是本领域已知的并且在本文中提供为seqidno:1(rspo1)、seqidno:2(rspo2)、seqidno:3(rspo3)和seqidno:4(rspo4)。

在某些实施方式中，本文所述的rspo-结合剂(例如，抗体或双特异性抗体)的抗原结合位点能够结合(或结合了)一种、两种、三种或四种rspo。在某些实施方式中，本文所述的rspo-结合剂(例如，抗体或双特异性抗体)的抗原结合位点能够结合(或结合)第一rspo蛋白(例如，rspo1)及一种、两种或三种其他rspo(例如，rspo2、rspo3和/或rspo4)。在某些实施方式中，rspo-结合剂(例如，抗体)同时特异性结合人rspo和小鼠rspo。

在本文所述方法的某些实施方式中，rspo-结合剂是在人rspo1(seqidno:1)的21-263位氨基酸内特异性结合的抗体。在某些实施方式中，rspo-结合剂是在人rspo1(seqidno:1)的31-263位氨基酸内特异性结合的抗体。在某些实施方式中，rspo-结合剂是在人rspo1(seqidno:1)的34-135位氨基酸内特异性结合的抗体。在某些实施方式中，rspo-结合剂是在人rspo1(seqidno:1)的34-85位氨基酸内特异性结合的抗体。在某些实施方式中，rspo-结合剂是在人rspo1(seqidno:1)的91-135位氨基酸内特异性结合的抗体。在某些实施方式中，rspo-结合剂是在人rspo1(seqidno:1)的147-207位氨基酸内特异性结合的抗体。在某些实施方式中，rspo-结合剂结合rspo1的富含半胱氨酸的弗林蛋白酶样结构域。在某些实施方式中，rspo-结合剂结合rspo1的富含半胱氨酸的弗林蛋白酶样结构域内的至少一个氨基酸。在某些实施方式中，rspo-结合剂结合rspo1的血小板反应蛋白结构域。在某些实施方式中，rspo-结合剂结合rspo1的血小板反应蛋白结构域内的至少一个氨基酸。

在某些实施方式中，rspo-结合剂是在人rspo2(seqidno:2)的22-243位氨基酸内特异性结合的抗体。在某些实施方式中，rspo-结合剂是在人rspo2(seqidno:2)的22-205位氨基酸内特异性结合的抗体。在某些实施方式中，rspo-结合剂是在人rspo2(seqidno:2)的35-134位氨基酸内特异性结合的抗体。在某些实施方式中，rspo-结合剂是在人rspo2(seqidno:2)的34-84位氨基酸内特异性结合的抗体。在某些实施方式中，rspo-结合剂是在人rspo2(seqidno:2)的90-134位氨基酸内特异性结合的抗体。在某些实施方式中，rspo-结合剂结合rspo2的富含半胱氨酸的弗林蛋白酶样结构域。在某些实施方式中，rspo-结合剂结合rspo2的富含半胱氨酸的弗林蛋白酶样结构域内的至少一个氨基酸。在某些实施方式中，rspo-结合剂结合rspo2的血小板反应蛋白结构域。在某些实施方式中，rspo-结合剂结合rspo2的血小板反应蛋白结构域内的至少一个氨基酸。

在某些实施方式中，rspo-结合剂是在人rspo3(seqidno:3)的22-272位氨基酸内特异性结合的抗体。在某些实施方式中，rspo-结合剂是在人rspo3(seqidno:3)的22-207位氨基酸内特异性结合的抗体。在某些实施方式中，rspo-结合剂是在人rspo3(seqidno:3)的35-135位氨基酸内特异性结合的抗体。在某些实施方式中，rspo-结合剂是在人rspo3(seqidno:3)的35-86位氨基酸内特异性结合的抗体。在某些实施方式中，rspo-结合剂是在人rspo3(seqidno:3)的92-135位氨基酸内特异性结合的抗体。在某些实施方式中，rspo-结合剂结合rspo3的富含半胱氨酸的弗林蛋白酶样结构域。在某些实施方式中，rspo-结合剂结合rspo3的富含半胱氨酸的弗林蛋白酶样结构域内的至少一个氨基酸。在某些实施方式中，rspo-结合剂结合rspo3的血小板反应蛋白结构域。在某些实施方式中，rspo-结合剂结合rspo3的血小板反应蛋白结构域中的至少一个氨基酸。

在某些实施方式中，rspo-结合剂或抗体以约1μm以下、约100nm以下、约40nm以下、约20nm以下、约10nm以下、约1nm以下或约0.1nm以下的解离常数(kd)结合至少一种rspo蛋白。在某些实施方式中，rspo-结合剂或抗体约1μm以下、约100nm以下、约40nm以下、约20nm以下、约10nm以下、约1nm以下或约0.1nm以下的解离常数(kd)结合至少一种rspo蛋白。在某些实施方式中，rspo-结合剂或抗体以约20nm以下的解离常数(kd)结合至少一种rspo蛋白。在某些实施方式中，rspo-结合剂或抗体以约10nm以下的解离常数(kd)结合至少一种rspo蛋白。在某些实施方式中，rspo-结合剂或抗体以约1nm以下的解离常数(kd)结合至少一种rspo蛋白。在某些实施方式中，rspo-结合剂或抗体以约0.5nm以下的解离常数(kd)结合至少一种rspo蛋白。在某些实施方式中，rspo-结合剂或抗体以约0.1nm以下的解离常数(kd)结合至少一种rspo蛋白。在某些实施方式中，本文所述的rspo-结合剂或抗体结合至少两种rspo蛋白。在某些实施方式中，rspo-结合剂以约10nm以下的kd结合人rspo和小鼠rspo。在某些实施方式中，rspo-结合剂以约1nm以下的kd结合人rspo和小鼠rspo。在某些实施方式中，rspo-结合剂以约0.1nm以下的kd结合人rspo和小鼠rspo。在某些实施方式中，结合剂(例如，抗体)与rspo蛋白的解离常数是使用包含固定在biacore芯片上的至少一部分rspo蛋白的rspo融合蛋白测定的解离常数。在某些实施方式中，结合剂(例如，抗体)与rspo蛋白的解离常数是使用biacore芯片上的抗人类igg抗体和rspo蛋白捕获的结合剂测定的解离常数。

在某些实施方式中，rspo-结合剂(例如，抗体)以约1μm以下、约100nm以下、约40nm以下、约20nm以下、约10nm以下、约1nm以下或约0.1nm以下的半数最大有效浓度(ec50)与至少一种人rspo蛋白结合。在某些实施方式中，rspo-结合剂(例如，抗体)以约1μm以下、约100nm以下、约40nm以下、约20nm以下、约10nm以下、约1nm以下或约0.1nm以下的半数最大有效浓度(ec50)与至少一种人rspo结合。

在某些实施方式中，rspo-结合剂是特异性结合人rspo1的rspo1-结合剂(例如，抗体)，其中，rspo1-结合剂(例如，抗体)包含抗体89m5的一个、两个、三个、四个、五个和/或六个cdr(参见表1)。

表1

在某些实施方式中，rspo-结合剂是特异性结合人rspo1的rspo1-结合剂(例如，抗体)，其中，rspo1-结合剂包含含有tgytmh(seqidno:5)的重链cdr1、含有ginpnnggttynqnfkg(seqidno:6)的重链cdr2和含有kefsdgyyffay(seqidno:7)的重链cdr3。在某些实施方式中，rspo1-结合剂进一步包含含有kasqdvifava(seqidno:8)的轻链cdr1、含有wastrht(seqidno:9)的轻链cdr2，和含有qqhystpw(seqidno:10)的轻链cdr3。在某些实施方式中，rspo1-结合剂包含含有kasqdvifava(seqidno:8)的轻链cdr1、含有wastrht(seqidno:9)的轻链cdr2和含有qqhystpw(seqidno:10)的轻链cdr3。在某些实施方式中，rspo1-结合剂包含：(a)含有tgytmh(seqidno:5)的重链cdr1、含有ginpnnggttynqnfkg(seqidno:6)的重链cdr2和含有kefsdgyyffay(seqidno:7)的重链cdr3；及(b)含有kasqdvifava(seqidno:8)的轻链cdr1、含有wastrht(seqidno:9)的轻链cdr2和含有qqhystpw(seqidno:10)的轻链cdr3。

在某些实施方式中，rspo-结合剂是特异性结合人rspo1的rspo1-结合剂(例如，抗体或双特异性抗体)，其中，rspo1-结合剂包含：(a)含有tgytmh(seqidno:5)或其包含1个、2个、3个或4个氨基酸取代的变体的重链cdr1；(b)含有ginpnnggttynqnfkg(seqidno:6)或其包含1个、2个、3个或4个氨基酸取代的变体的重链cdr2；(c)含有kefsdgyyffay(seqidno:7)或其包含1个、2个、3个或4个氨基酸取代的变体的重链cdr3；(d)含有kasqdvifava(seqidno:8)或其包含1个、2个、3个或4个氨基酸取代的变体的轻链cdr1；(e)含有wastrht(seqidno:9)或其包含1个、2个、3个或4个氨基酸取代的变体的轻链cdr2；及(f)含有qqhystpw(seqidno:10)或其包含1个、2个、3个或4个氨基酸取代的变体的轻链cdr3。在某些实施方式中，氨基酸取代是保守性取代。在某些实施方式中，取代作为种系人源化过程的一部分进行。

在某些实施方式中，rspo-结合剂是特异性结合rspo1的rspo1-结合剂(例如，抗体)，其中，rspo1-结合剂包含与seqidno:11具有至少约80％的序列同一性的重链可变区和/或与seqidno:12具有至少80％的序列同一性的轻链可变区。在某些实施方式中，rspo1-结合剂包含与seqidno:11具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％的序列同一性的重链可变区。在某些实施方式中，rspo1-结合剂包含与seqidno:12具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％的序列同一性的轻链可变区。在某些实施方式中，rspo1-结合剂包含与seqidno:11具有至少约95％的序列同一性的重链可变区和/或与seqidno:12具有至少约95％的序列同一性的轻链可变区。在某些实施方式中，rspo1-结合剂包含含有seqidno:11的重链可变区和/或含有seqidno:12的轻链可变区。在某些实施方式中，rspo1-结合剂包含含有seqidno:11的重链可变区和含有seqidno:12的轻链可变区。在某些实施方式中，rspo1-结合剂包含由seqidno:11组成的重链可变区和由seqidno:12组成的轻链可变区。

在某些实施方式中，rspo-结合剂是特异性结合rspo1的rspo1-结合剂(例如，抗体)，其中，rspo1-结合剂包含与seqidno:44具有至少约80％的序列同一性的重链可变区和/或与seqidno:45具有至少80％的序列同一性的轻链可变区。在某些实施方式中，rspo1-结合剂包含与seqidno:44具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％的序列同一性的重链可变区。在某些实施方式中，rspo1-结合剂包含与seqidno:45具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％的序列同一性的轻链可变区。在某些实施方式中，rspo1-结合剂包含与seqidno:44具有至少约95％的序列同一性的重链可变区和/或与seqidno:45具有至少约95％的序列同一性的轻链可变区。在某些实施方式中，rspo1-结合剂包含含有seqidno:44的重链可变区和/或含有seqidno:45的轻链可变区。在某些实施方式中，rspo1-结合剂包含含有seqidno:44的重链可变区和含有seqidno:45的轻链可变区。在某些实施方式中，rspo1-结合剂包含由seqidno:44组成的重链可变区和由seqidno:45组成的轻链可变区。

在某些实施方式中，rspo-结合剂是特异性结合rspo1的rspo1-结合剂(例如，抗体)，其中，rspo1-结合剂包含：(a)与seqidno:13或seqidno:14具有至少90％的序列同一性的重链；和/或(b)与seqidno:15或seqidno:16具有至少90％的序列同一性的轻链。在某些实施方式中，rspo1-结合剂包含：(a)与seqidno:13或seqidno:14具有至少95％的序列同一性的重链；和/或(b)与seqidno:15或seqidno:16具有至少95％的序列同一性的轻链。在某些实施方式中，rspo1-结合剂包含含有seqidno:14的重链和/或含有seqidno:16的轻链。在某些实施方式中，rspo1-结合剂包含含有seqidno:14的重链和含有seqidno:16的轻链。

在某些实施方式中，rspo-结合剂是特异性结合rspo1的rspo1-结合剂(例如，抗体)，其中，rspo1-结合剂包含：(a)与seqidno:46或seqidno:47具有至少90％的序列同一性的重链；和/或(b)与seqidno:48或seqidno:49具有至少90％的序列同一性的轻链。在某些实施方式中，rspo1-结合剂包含：(a)与seqidno:46或seqidno:47具有至少95％的序列同一性的重链；和/或(b)与seqidno:48或seqidno:49具有至少95％的序列同一性的轻链。在某些实施方式中，rspo1-结合剂包含含有seqidno:47的重链和/或含有seqidno:49的轻链。在某些实施方式中，rspo1-结合剂包含含有seqidno:47的重链和含有seqidno:49的轻链。

在某些实施方式中，rspo1-结合剂包含抗体h89m5-h8l5的重链可变区和轻链可变区。在某些实施方式中，rspo1-结合剂包含抗体h89m5-h8l5的重链和轻链(具有或不具有前导序列)。在某些实施方式中，rspo1-结合剂是抗体h89m5-h8l5。在某些实施方式中，rspo1-结合剂包含抗体嵌合形式的抗体h89m5-h8l5的重链可变区和/或轻链可变区。在某些实施方式中，抗rspo1抗体是h89m5-h8l5。

在某些实施方式中，rspo1-结合剂包含抗体h89m5-h2l2的重链可变区和轻链可变区。在某些实施方式中，rspo1-结合剂包含抗体h89m5-h2l2的重链和轻链(具有或不具有前导序列)。在某些实施方式中，rspo1-结合剂是抗体h89m5-h2l2。在某些实施方式中，rspo1-结合剂包含抗体嵌合形式的抗体h89m5-h2l2的重链可变区和/或轻链可变区。在某些实施方式中，抗rspo1抗体是h89m5-h2l2。

在某些实施方式中，rspo1-结合剂包含抗体89m5的重链cdr和/或轻链cdr。产生89m5抗体的杂交瘤细胞系根据布达佩斯条约的条件于2011年6月30日保藏于atcc，10801universityboulevard，manassas，va，usa，并分配atcc保藏指定号为pta-11970。

编码抗体h89m5-h8l5重链和轻链的质粒根据布达佩斯条约的条件于2014年8月15日保藏于atcc，10801universityboulevard，manassas，va，usa，并分配atcc保藏指定号为pta-121494和pta-121495。在某些实施方式中，rspo1-结合剂包含由保藏于atcc并指定为pta-121494的质粒编码的重链可变区。在某些实施方式中，rspo1-结合剂包含由保藏于atcc并指定为pta-121495的质粒编码的轻链可变区。在某些实施方式中，rspo1-结合剂包含由保藏于atcc并指定为pta-121494的质粒编码的重链可变区和由保藏于atcc并指定为pta-121495的质粒编码的轻链可变区。在某些实施方式中，rspo1-结合剂包含由保藏于atcc并指定为pta-121494的质粒编码的重链。在某些实施方式中，rspo1-结合剂包含由保藏于atcc并指定为pta-121495的质粒编码的轻链。在某些实施方式中，rspo1-结合剂包含由保藏于atcc并指定为pta-121494的质粒编码的重链和由保藏于atcc并指定为pta-121495的质粒编码的轻链。

在某些实施方式中，rspo1-结合剂包含抗体h89m5-h8l5、主要由抗体h89m5-h8l5组成、或由抗体h89m5-h8l5组成。在某些实施方式中，rspo1-结合剂包含抗体89m5的变体、主要由抗体89m5的变体组成、或由抗体89m5的变体组成。在某些实施方式中，rspo1-结合剂包含抗体h89m5-h8l5的变体、主要由抗体h89m5-h8l5的变体组成、或由抗体h89m5-h8l5的变体组成。

在某些实施方式中，rspo1-结合剂包含抗体h89m5-h2l2、主要由抗体h89m5-h2l2组成、或由抗体h89m5-h2l2组成。在某些实施方式中，rspo1-结合剂包含抗体89m5的变体、主要由抗体89m5的变体组成、或由抗体89m5的变体组成。在某些实施方式中，rspo1-结合剂包含抗体h89m5-h2l2的变体、主要由抗体h89m5-h2l2的变体组成，或由抗体h89m5-h2l2的变体组成。

在本文所述方法的某些实施方式中，rspo-结合剂是特异性结合人rspo2的rspo2-结合剂(例如，抗体)，其中，rspo2-结合剂(例如，抗体)包含抗体130m23的一个、两个、三个、四个、五个和/或六个cdr(参见表1)。

在某些实施方式中，rspo-结合剂是特异性结合人rspo2的rspo2-结合剂(例如，抗体)，其中，rspo2-结合剂包含含有ssyams(seqidno:17)的重链cdr1、含有sissggstyypdsvkg(seqidno:18)的重链cdr2和含有rggdpgvyngdyedamdy(seqidno:19)的重链cdr3。在某些实施方式中，rspo2-结合剂进一步包含含有kasqdvssava(seqidno:20)的轻链cdr1、含有wastrht(seqidno:21)的轻链cdr2和含有qqhystp(seqidno:22)的轻链cdr3。在某些实施方式中，rspo2-结合剂包含含有kasqdvssava(seqidno:20)的轻链cdr1、含有wastrht(seqidno:21)的轻链cdr2和含有qqhystp(seqidno:22)的轻链cdr3。在某些实施方式中，rspo2-结合剂包含：(a)含有ssyams(seqidno:17)的重链cdr1、含有sissggstyypdsvkg(seqidno:18)的重链cdr2和含有rggdpgvyngdyedamdy(seqidno:19)的重链cdr3；及(b)含有kasqdvssava(seqidno:20)的轻链cdr1、含有wastrht(seqidno:21)的轻链cdr2和含有qqhystp(seqidno:22)的轻链cdr3。

在某些实施方式中，rspo-结合剂是特异性结合人rspo2的rspo2-结合剂(例如，抗体或双特异性抗体)，其中，rspo2-结合剂包含：(a)含有ssyams(seqidno:17)或其包含1个、2个、3个或4个氨基酸取代的变体的重链cdr1；(b)含有sissggstyypdsvkg(seqidno:18)或其包含1个、2个、3个或4个氨基酸取代的变体的重链cdr2；(c)含有rggdpgvyngdyedamdy(seqidno:19)或其包含1个、2个、3个或4个氨基酸取代的变体的重链cdr3；(d)含有kasqdvssava(seqidno:20)或其包含1个、2个、3个或4个氨基酸取代的变体的轻链cdr1；(e)含有wastrht(seqidno:21)或其包含1个、2个、3个或4个氨基酸取代的变体的轻链cdr2；及(f)含有qqhystp(seqidno:22)或其包含1个、2个、3个或4个氨基酸取代的变体的轻链cdr3。在某些实施方式中，所述氨基酸取代是保守性取代。在某些实施方式中，取代作为种系人源化过程的一部分进行。

在某些实施方式中，rspo-结合剂是特异性结合rspo2的rspo2-结合剂(例如，抗体)，其中，rspo2-结合剂包含与seqidno:23具有至少约80％的序列同一性的重链可变区和/或与seqidno:24或seqidno:50具有至少80％的序列同一性的轻链可变区。在某些实施方式中，rspo2-结合剂包含与seqidno:23具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％的序列同一性的重链可变区。在某些实施方式中，rspo2-结合剂包含与seqidno:24具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％的序列同一性的轻链可变区。在某些实施方式中，rspo2-结合剂包含与seqidno:50具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％的序列同一性的轻链可变区。在某些实施方式中，rspo2-结合剂包含与seqidno:23具有至少约95％的序列同一性的重链可变区和/或与seqidno:24或seqidno:50具有至少约95％的序列同一性的轻链可变区。在某些实施方式中，rspo2-结合剂包含含有seqidno:23的重链可变区和/或含有seqidno:24或seqidno:50的轻链可变区。在某些实施方式中，rspo2-结合剂包含含有seqidno:23的重链可变区和含有seqidno:24的轻链可变区。在某些实施方式中，rspo2-结合剂包含含有seqidno:23的重链可变区和含有seqidno:50的轻链可变区。在某些实施方式中，rspo2-结合剂包含由seqidno:23组成的重链可变区和由seqidno:24组成的轻链可变区。在某些实施方式中，rspo2-结合剂包含由seqidno:23组成的重链可变区和由seqidno:50组成的轻链可变区。

在某些实施方式中，rspo-结合剂是特异性结合rspo2的rspo2-结合剂(例如，抗体)，其中，rspo2-结合剂包含：(a)与seqidno:25或seqidno:26具有至少90％的序列同一性的重链；和/或(b)与seqidno:27或seqidno:28具有至少90％的序列同一性的轻链。在某些实施方式中，rspo2-结合剂包含：(a)与seqidno:25或seqidno:26具有至少95％的序列同一性的重链；和/或(b)与seqidno:27或seqidno:28具有至少95％的序列同一性的轻链。在某些实施方式中，rspo2-结合剂包含含有seqidno:26的重链和/或含有seqidno:28的轻链。在某些实施方式中，rspo2-结合剂包含含有seqidno:26的重链和含有seqidno:28的轻链。

在某些实施方式中，rspo-结合剂是特异性结合rspo2的rspo2-结合剂(例如，抗体)，其中，rspo2-结合剂包含：(a)与seqidno:25或seqidno:26具有至少90％的序列同一性的重链；和/或(b)与seqidno:51或seqidno:52具有至少90％的序列同一性的轻链。在某些实施方式中，rspo2-结合剂包含：(a)与seqidno:25或seqidno:26具有至少95％的序列同一性的重链；和/或(b)与seqidno:51或seqidno:52具有至少95％的序列同一性的轻链。在某些实施方式中，rspo2-结合剂包含含有seqidno:26的重链和/或含有seqidno:52的轻链。在某些实施方式中，rspo2-结合剂包含含有seqidno:26的重链和含有seqidno:52的轻链。

在某些实施方式中，rspo2-结合剂包含抗体h130m23-h1l6的重链可变区和轻链可变区。在某些实施方式中，rspo2-结合剂包含抗体h130m23-h1l6的重链和轻链(具有或不具有前导序列)。在某些实施方式中，rspo2-结合剂是抗体h130m23-h1l6。在某些实施方式中，rspo2-结合剂包含抗体嵌合形式的抗体h130m23-h1l6的重链可变区和/或轻链可变区。在某些实施方式中，抗rspo2抗体是h130m23-h1l6。

在某些实施方式中，rspo2-结合剂包含抗体h130m23-h1l2的重链可变区和轻链可变区。在某些实施方式中，rspo2-结合剂包含抗体h130m23-h1l2的重链和轻链(具有或不具有前导序列)。在某些实施方式中，rspo2-结合剂是抗体h130m23-h1l2。在某些实施方式中，rspo2-结合剂包含抗体嵌合形式的抗体h130m23-h1l2的重链可变区和/或轻链可变区。在某些实施方式中，抗rspo2抗体是h130m23-h1l2。

在本文所述方法的某些实施方式中，rspo2-结合剂包含抗体130m23的重链cdr和/或轻链cdr。产生130m23抗体的杂交瘤细胞系根据布达佩斯条约的条件于2011年8月10日保藏于atcc，10801universityboulevard，manassas，va，usa，并分配atcc保藏指定号为pta-12021。

在某些实施方式中，rspo2-结合剂包含抗体h130m23-h1l6、主要由抗体h130m23-h1l6组成、或由抗体h130m23-h1l6组成。在某些实施方式中，rspo2-结合剂包含抗体130m23的变体、主要由抗体130m23的变体组成、或由抗体130m23的变体组成。在某些实施方式中，rspo2-结合剂包含抗体h130m23-h1l6的变体、主要由抗体h130m23-h1l6的变体组成、或由抗体h130m23-h1l6的变体组成。

在某些实施方式中，rspo2-结合剂包含抗体h130m23-h1l2、主要由抗体h130m23-h1l2组成、或由抗体h130m23-h1l2组成。在某些实施方式中，rspo2-结合剂包含抗体130m23的变体、主要由抗体130m23的变体组成、或由抗体130m23的变体组成。在某些实施方式中，rspo2-结合剂包含抗体h130m23-h1l2的变体、主要由抗体h130m23-h1l2的变体组成、或由抗体h130m23-h1l2的变体组成。

在本文所述方法的某些实施方式中，rspo-结合剂是特异性结合人rspo3的rspo3-结合剂(例如，抗体)，其中，rspo3-结合剂(例如，抗体)包含抗体131r010的一个、两个、三个、四个、五个和/或六个cdr(参见本文的表1)。

在某些实施方式中，rspo-结合剂是特异性结合人rspo3的rspo3-结合剂(例如，抗体)，其中，rspo3-结合剂包含含有dysih(seqidno:29)的重链cdr1、含有yiypsngdsgynqkfk(seqidno:30)的重链cdr2和含有tyfannfd(seqidno:31)或atyfannfdy(seqidno:32)的重链cdr3。在某些实施方式中，rspo3-结合剂进一步包含含有kasqsvdydgdsymn(seqidno:33)的轻链cdr1、含有aasnles(seqidno:34)或aas(seqidno:35)的轻链cdr2和含有qqsnedplt(seqidno:36)或qqsnedpltf(seqidno:37)的轻链cdr3。在某些实施方式中，rspo3-结合剂包含含有kasqsvdydgdsymn(seqidno:33)的轻链cdr1，含有aasnles(seqidno:34)或aas(seqidno:35)的轻链cdr2，和含有qqsnedplt(seqidno:36)或qqsnedpltf(seqidno:37)的轻链cdr3。在某些实施方式中，rspo3-结合剂包含：(a)含有dysih(seqidno:29)的重链cdr1，含有yiypsngdsgynqkfk(seqidno:30)的重链cdr2，和含有tyfannfd(seqidno:31)的重链cdr3；及(b)含有kasqsvdydgdsymn(seqidno:33)的轻链cdr1，含有aasnles(seqidno:34)的轻链cdr2，和含有qqsnedplt(seqidno:36)的轻链cdr3。在某些实施方式中，rspo3-结合剂包含：(a)含有dysih(seqidno:29)的重链cdr1，含有yiypsngdsgynqkfk(seqidno:30)的重链cdr2，和含有atyfannfdy(seqidno:32)的重链cdr3；及(b)含有kasqsvdydgdsymn(seqidno:33)的轻链cdr1，含有aasnles(seqidno:34)的轻链cdr2，和含有qqsnedplt(seqidno:36)的轻链cdr3。

在某些实施方式中，rspo-结合剂是特异性结合人rspo3的rspo3-结合剂(例如，抗体或双特异性抗体)，其中，rspo3-结合剂包含：(a)含有dysih(seqidno:29)或其包含1个、2个、3个或4个氨基酸取代的变体的重链cdr1；(b)含有yiypsngdsgynqkfk(seqidno:30)或其包含1个、2个、3个或4个氨基酸取代的变体的重链cdr2；(c)含有tyfannfd(seqidno:31)、atyfannfdy(seqidno:32)或其包含1个、2个、3个或4个氨基酸取代的变体的重链cdr3；(d)含有kasqsvdydgdsymn(seqidno:33)其包含1个、2个、3个或4个氨基酸取代的变体的轻链cdr1或；(e)含有aasnles(seqidno:34)、aas(seqidno:35)或其包含1个、2个、3个或4个氨基酸取代的变体的轻链cdr2；及(f)含有qqsnedplt(seqidno:36)、qqsnedpltf(seqidno:37)或其包含1个、2个、3个或4个氨基酸取代的变体的轻链cdr3。在某些实施方式中，所述氨基酸取代是保守性取代。在某些实施方式中，取代作为种系人源化过程的一部分进行。

在某些实施方式中，rspo-结合剂是特异性结合rspo3的rspo3-结合剂(例如，抗体)，其中，rspo3-结合剂包含与seqidno:38具有至少约80％的序列同一性的重链可变区和/或与seqidno:39具有至少80％的序列同一性的轻链可变区。在某些实施方式中，rspo3-结合剂包含与seqidno:38具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％的序列同一性的重链可变区。在某些实施方式中，rspo3-结合剂包含与seqidno:39具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％的序列同一性的轻链可变区。在某些实施方式中，rspo3-结合剂包含与seqidno:38具有至少约95％的序列同一性的重链可变区和/或与seqidno:39具有至少约95％的序列同一性的轻链可变区。在某些实施方式中，rspo3-结合剂包含含有seqidno:38的重链可变区和/或含有seqidno:39的轻链可变区。在某些实施方式中，rspo3-结合剂包含含有seqidno:38的重链可变区和含有seqidno:39的轻链可变区。在某些实施方式中，rspo3-结合剂包含由seqidno:38组成的重链可变区和由seqidno:39组成的轻链可变区。

在某些实施方式中，rspo-结合剂是特异性结合rspo3的rspo3-结合剂(例如，抗体)，其中，rspo3-结合剂包含：(a)与seqidno:40或seqidno:41具有至少90％的序列同一性的重链；和/或(b)与seqidno:42或seqidno:43具有至少90％的序列同一性的轻链。在某些实施方式中，rspo3-结合剂包含：(a)与seqidno:40或seqidno:41具有至少95％的序列同一性的重链；和/或(b)与seqidno:42或seqidno:43具有至少95％的序列同一性的轻链。在某些实施方式中，rspo3-结合剂包含含有seqidno:41的重链和/或含有seqidno:43的轻链。在某些实施方式中，rspo3-结合剂包含含有seqidno:41的重链和含有seqidno:43的轻链。

在某些实施方式中，rspo3-结合剂包含抗体131r010的重链可变区和轻链可变区。在某些实施方式中，rspo3-结合剂包含抗体131r010的重链和轻链(具有或不具有前导序列)。在某些实施方式中，rspo3-结合剂是抗体131r010。在某些实施方式中，rspo3-结合剂包含以抗体的嵌合形式的抗体131r010的重链可变区和/或轻链可变区。在某些实施方式中，rspo3-结合剂包含抗体131r010的重链cdr和/或轻链cdr。在某些实施方式中，抗rspo3抗体是131r010。

编码抗体131r010重链和轻链的质粒根据布达佩斯条约的条件于2013年6月18日保藏在美国典型培养物保藏中心(atcc)，10801universityboulevard，manassas，va，usa，并分配保藏指定号为pta-120420和pta-120421。在某些实施方式中，rspo3-结合剂包含由保藏于atcc并命名为pta-120420的质粒编码的重链可变区。在某些实施方式中，rspo3-结合剂包含由保藏于atcc并命名为pta-120421的质粒编码的轻链可变区。在某些实施方式中，rspo3-结合剂包含由保藏于atcc并命名为pta-120420的质粒编码的重链可变区和由保藏于atcc并命名为pta-120421的质粒编码的轻链可变区。在某些实施方式中，rspo3-结合剂包含由保藏于atcc并命名为pta-120420的质粒编码的重链。在某些实施方式中，rspo3-结合剂包含由保藏于atcc并命名为pta-120421的质粒编码的轻链。在某些实施方式中，rspo3-结合剂包含由保藏于atcc并命名为pta-120420的质粒编码的重链和由保藏于atcc并命名为pta-120421的质粒编码的轻链。

在某些实施方式中，rspo3-结合剂包含抗体131r010，主要由抗体131r010组成或由抗体131r010组成。在某些实施方式中，rspo3-结合剂包含抗体131r010的变体，主要由抗体131r010的变体组成或由抗体131r010的变体组成。

本文描述了包含包括但不限于特异性结合至少一种人rspo蛋白的抗体的多肽的方法。在某些实施方式中，多肽结合人rspo1。在某些实施方式中，多肽结合人rspo2。在某些实施方式中，多肽结合人rspo3。

在某些实施方式中，所述多肽包含抗体89m5的一个、两个、三个、四个、五个和/或六个cdr(参见本文的表1)。在某些实施方式中，所述多肽包含抗体130m23的一个、两个、三个、四个、五个和/或六个cdr(参见本文的表1)。在某些实施方式中，所述多肽包含抗体131r010的一个、两个、三个、四个、五个和/或六个cdr(参见本文的表1)。在某些实施方式中，所述多肽包含具有至多四个(即，0个、1个、2个、3个或4个)氨基酸取代/cdr的cdr。在某些实施方式中，重链cdr包含在重链可变区内。在某些实施方式中，轻链cdr包含在轻链可变区内。

在某些实施方式中，rspo-结合剂是特异性结合人rspo1的多肽，其中，所述多肽包含与seqidno:11和/或seqidno:12具有至少约80％的序列同一性的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述多肽包含与seqidno:13具有至少约80％的序列同一性的氨基酸序列和/或与seqidno:15具有至少约80％的序列同一性的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述多肽包含与seqidno:14具有至少约80％的序列同一性的氨基酸序列和/或与seqidno:16具有至少约80％的序列同一性的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述多肽包含与seqidno:11、seqidno:12、seqidno:13、seqidno:14、seqidno:15或seqidno:16具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％的序列同一性的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述多肽包含与seqidno:11具有至少约95％的序列同一性的氨基酸序列和/或与seqidno:12具有至少约95％的序列同一性的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述多肽包含与seqidno:13具有至少约95％的序列同一性的氨基酸序列和/或与seqidno:15具有至少约95％的序列同一性的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述多肽包含与seqidno:14具有至少约95％的序列同一性的氨基酸序列和/或与seqidno:16具有至少约95％的序列同一性的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述多肽包含seqidno:11的氨基酸序列和/或seqidno:12的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述多肽包含seqidno:13的氨基酸序列和/或seqidno:15的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述多肽包含seqidno:14的氨基酸序列和/或seqidno:16的氨基酸序列。

在某些实施方式中，rspo-结合剂是特异性结合人rspo1的多肽，其中，所述多肽包含与seqidno:44和/或seqidno:45具有至少约80％的序列同一性的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述多肽包含与seqidno:46具有至少约80％的序列同一性的氨基酸序列和/或与seqidno:48具有至少约80％的序列同一性的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述多肽包含与seqidno:47具有至少约80％的序列同一性的氨基酸序列和/或与seqidno:49具有至少约80％的序列同一性的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述多肽包含与seqidno:44、seqidno:45、seqidno:46、seqidno:47、seqidno:48或seqidno:49具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％的序列同一性的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述多肽包含与seqidno:44具有至少约95％的序列同一性的氨基酸序列和/或与seqidno:45具有至少约95％的序列同一性的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述多肽包含与seqidno:46具有至少约95％的序列同一性的氨基酸序列和/或与seqidno:48具有至少约95％的序列同一性的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述多肽包含与seqidno:47具有至少约95％的序列同一性的氨基酸序列和/或与seqidno:49具有至少约95％的序列同一性的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述多肽包含seqidno:44的氨基酸序列和/或seqidno:45的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述多肽包含seqidno:46的氨基酸序列和/或seqidno:48的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述多肽包含seqidno:47的氨基酸序列和/或seqidno:49的氨基酸序列。

在某些实施方式中，rspo-结合剂是特异性结合人rspo2的多肽，其中，所述多肽包含与seqidno:23和/或seqidno:24具有至少约80％的序列同一性的氨基酸序列。在某些实施方式中，rspo-结合剂是特异性结合人rspo2的多肽，其中，所述多肽包含与seqidno:23和/或seqidno:50具有至少约80％的序列同一性的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述多肽包含与seqidno:25具有至少约80％的序列同一性的氨基酸序列和/或与seqidno:27或seqidno:51具有至少约80％的序列同一性的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述多肽包含与seqidno:26具有至少约80％的序列同一性的氨基酸序列和/或与seqidno:28或seqidno:52具有至少约80％的序列同一性的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述多肽包含与seqidno:23、seqidno:24、seqidno:25、seqidno:26、seqidno:27、seqidno:28、seqidno:50、seqidno:51或seqidno:52具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％的序列同一性的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述多肽包含与seqidno:23具有至少约95％的序列同一性的氨基酸序列和/或与seqidno:24或seqidno:50具有至少约95％的序列同一性的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述多肽包含与seqidno:25具有至少约95％的序列同一性的氨基酸序列和/或与seqidno:27或seqidno:51具有至少约95％的序列同一性的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述多肽包含与seqidno:26具有至少约95％的序列同一性的氨基酸序列和/或与seqidno:28或seqidno:52具有至少约95％的序列同一性的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述多肽包含seqidno:23的氨基酸序列和/或seqidno:24的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述多肽包含seqidno:23的氨基酸序列和/或seqidno:50的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述多肽包含seqidno:25的氨基酸序列和/或seqidno:27的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述多肽包含seqidno:25的氨基酸序列和/或seqidno:51的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述多肽包含seqidno:26的氨基酸序列和/或seqidno:28的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述多肽包含seqidno:26的氨基酸序列和/或seqidno:52的氨基酸序列。

在某些实施方式中，rspo-结合剂是特异性结合人rspo3的多肽，其中，所述多肽包含与seqidno:38和/或seqidno:39具有至少约80％的序列同一性的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述多肽包含与seqidno:40至少约80％的序列同一性的氨基酸序列和/或与seqidno:42具有至少约80％的序列同一性的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述多肽包含与seqidno:41具有至少约80％的序列同一性的氨基酸序列和/或与seqidno:43具有至少约80％的序列同一性的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述多肽包含与seqidno:38、seqidno:39、seqidno:40、seqidno:41、seqidno:42或seqidno:43具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％的序列同一性的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述多肽包含与seqidno:38具有至少约95％的序列同一性的氨基酸序列和/或与seqidno:39具有至少约95％的序列同一性的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述多肽包含与seqidno:40具有至少约95％的序列同一性的氨基酸序列和/或与seqidno:42具有至少约95％的序列同一性的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述多肽包含与seqidno:41具有至少约95％的序列同一性的氨基酸序列和/或与seqidno:43具有至少约95％的序列同一性的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述多肽包含seqidno:38的氨基酸序列和/或seqidno:39的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述多肽包含seqidno:40的氨基酸序列和/或seqidno:42的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述多肽包含seqidno:41的氨基酸序列和/或seqidno:43的氨基酸序列。

在某些实施方式中，rspo-结合剂是与包含抗体89m5的cdr的抗体竞争与rspo1的特异性结合的rspo1-结合剂(例如，抗体)。在某些实施方式中，rspo-结合剂是与包含抗体130m23的cdr的抗体竞争与rspo2的特异性结合的rspo2-结合剂(例如，抗体)。在某些实施方式中，rspo-结合剂是与包含抗体131r010的cdr的抗体竞争与rspo3的特异性结合的rspo3-结合剂(例如，抗体)。

在某些实施方式中，rspo-结合剂是在rspo1上结合与包含抗体89m5的cdr的抗体所结合的相同的表位或基本上相同的表位的rspo1-结合剂(例如，抗体)。在某些实施方式中，rspo-结合剂是在rspo2上结合与包含抗体130m23的cdr的抗体所结合的相同的表位或基本上相同的表位的rspo2-结合剂(例如，抗体)。在某些实施方式中，rspo-结合剂是在rspo3上结合与包含抗体131r010的cdr的抗体所结合的相同的表位或基本上相同的表位的rspo3-结合剂(例如，抗体)。

在某些实施方式中，rspo-结合剂是结合与通过包含抗体89m5的cdr的抗体结合的rspo1上的表位重叠的rspo1的表位的rspo1-结合剂(例如，抗体)。在某些实施方式中，rspo-结合剂是结合与通过包含抗体130m23的cdr的抗体结合的rspo2上的表位重叠的rspo2的表位的rspo2-结合剂(例如，抗体)。在某些实施方式中，rspo-结合剂是结合与通过包含抗体131r010的cdr的抗体结合的rspo3上的表位重叠的rspo3的表位的rspo3-结合剂(例如，抗体)。

在某些实施方式中，rspo-结合剂是美国专利公开号20150147333中公开的rspo3-结合剂(例如，抗体)，此处各出于所有目的以其整体通过引用并入本文。在某些实施方式中，rspo-结合剂是美国专利公开号20150147333中公开的抗rspo3抗体4h1、4d4、5c2、5d6、5e11、6e9、21c2或26e11。在某些实施方式中，rspo-结合剂是包含抗rspo3抗体4h1、4d4、5c2、5d6、5e11、6e9、21c2或26e11的6个cdr的抗rspo3抗体。在某些实施方式中，rspo-结合剂是包含抗rspo3抗体4h1、4d4、5c2、5d6、5e11、6e9、21c2或26e11的vh和/或vl区的抗rspo3抗体。在某些实施方式中，rspo-结合剂是在rspo3上结合与抗rspo3抗体4h1、4d4、5c2、5d6、5e11、6e9、21c2或26e11所结合的相同的表位或基本上相同的表位的rspo3-结合剂(例如、抗体)。

在某些实施方式中，rspo-结合剂是美国专利公开号20150147333中公开的rspo2-结合剂(例如，抗体)，此处出于全部目的以其整体通过引用并入本文。在某些实施方式中，rspo-结合剂是美国专利公开号20150147333中公开的抗rspo2抗体1a1、11f11、26e11、36d2或49g5。在某些实施方式中，rspo-结合剂是包含抗rspo2抗体1a1、11f11、26e11、36d2或49g5的6个cdr的抗rspo2抗体。在某些实施方式中，rspo-结合剂是包含抗rspo2抗体1a1、11f11、26e11、36d2或49g5的vh和/或vl区的抗rspo2抗体。在某些实施方式中，rspo-结合剂是在rspo2上结合与抗rspo2抗体1a1、11f11、26e11、36d2或49g5所结合的相同的表位或基本上相同的表位的rspo2-结合剂(例如，抗体)。

在本文所述方法的某些实施方式中，rspo-结合剂(例如，抗体)至少结合一种人rspo蛋白并且调节rspo活性。在某些实施方式中，rspo-结合剂是rspo拮抗剂并且降低rspo活性。在某些实施方式中，rspo-结合剂是rspo拮抗剂并且降低β-连环蛋白活性。

在某些实施方式中，rspo1-结合剂(例如，抗体)结合人rspo1并且调节rspo1活性。在某些实施方式中，rspo1-结合剂是rspo1拮抗剂并且降低rspo1活性。在某些实施方式中，rspo1-结合剂是rspo1拮抗剂并且降低β-连环蛋白活性。在某些实施方式中，rspo2-结合剂(例如，抗体)结合人rspo2并且调节rspo2活性。在某些实施方式中，rspo2-结合剂是rspo2拮抗剂并且降低rspo2活性。在某些实施方式中，rspo2-结合剂是rspo2拮抗剂并且降低β-连环蛋白活性。在某些实施方式中，rspo3-结合剂(例如，抗体)结合人rspo3并且调节rspo3活性。在某些实施方式中，rspo3-结合剂是rspo3拮抗剂并且降低rspo3活性。在某些实施方式中，rspo3-结合剂是rspo3拮抗剂并且降低β-连环蛋白活性。

在某些实施方式中，rspo-结合剂(例如，抗体)是至少一种人rspo蛋白的拮抗剂。在某些实施方式中，rspo-结合剂是至少一种rspo的拮抗剂并且抑制rspo活性。在某些实施方式中，rspo-结合剂抑制至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约50％、至少约75％、至少约90％或约100％的rspo活性。在某些实施方式中，rspo-结合剂抑制一种、两种、三种或四种rspo蛋白活性。在某些实施方式中，rspo-结合剂抑制人rspo1、rspo2、rspo3和/或rspo4的活性。

在某些实施方式中，rspo-结合剂(例如，抗体)是至少一种人rspo蛋白的拮抗剂。在某些实施方式中，rspo-结合剂抑制至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约50％、至少约75％、至少约90％或约100％的rspo信号。在某些实施方式中，rspo-结合剂抑制一种、两种、三种或四种rspo蛋白的信号。在某些实施方式中，rspo-结合剂抑制人rspo1、rspo2、rspo3和/或rspo4的信号。

在某些实施方式中，rspo-结合剂(例如，抗体)是β-连环蛋白信号传导的拮抗剂。在某些实施方式中，rspo-结合剂抑制至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约50％、至少约75％、至少约90％或约100％的β-连环蛋白信号传导。

在某些实施方式中，rspo-结合剂(例如，抗体)抑制至少一种rspo蛋白与受体的结合。在某些实施方式中，rspo-结合剂抑制人rspo蛋白与一种或多种其受体的结合。在某些实施方式中，rspo-结合剂抑制rspo蛋白与至少一种lgr蛋白的结合。在某些实施方式中，rspo-结合剂抑制rspo蛋白与lgr4(seqidno:53)、lgr5(seqidno:54)和/或lgr6(seqidno:55)的结合。在某些实施方式中，rspo-结合剂对至少一种lgr蛋白的结合的抑制为至少约10％、至少约25％、至少约50％、至少约75％、至少约90％或至少约95％。在某些实施方式中，抑制至少一种rspo与至少一种lgr蛋白的结合的rspo-结合剂进一步抑制β-连环蛋白信号传导。

在某些实施方式中，rspo-结合剂(例如，抗体)阻断至少一种rspo与受体的结合。在某些实施方式中，rspo-结合剂阻断人rspo蛋白与一种或多种其受体的结合。在某些实施方式中，rspo-结合剂阻断rspo与至少一种lgr蛋白的结合。在某些实施方式中，rspo-结合剂阻断至少一种rspo蛋白与lgr4(seqidno:53)、lgr5(seqidno:54)和/或lgr6(seqidno:55)的结合。在某些实施方式中，rspo-结合剂对至少一种lgr蛋白的结合的阻断为至少约10％、至少约25％、至少约50％、至少约75％、至少约90％或至少约95％。在某些实施方式中，阻断至少一种rspo蛋白与至少一种lgr蛋白的结合的rspo-结合剂进一步抑制β-连环蛋白信号传导。

在某些实施方式中，rspo-结合剂(例如，抗体)抑制β-连环蛋白信号传导。应当理解的是，在某些实施方式中，抑制β-连环蛋白信号传导的rspo-结合可抑制通过β-连环蛋白信号传导通路中的一种或多种受体的信号传导，但不需要抑制通过所有受体的信号传导。在某些替代实施方式中，可抑制通过所有人类受体的β-连环蛋白信号传导。在某些实施方式中，抑制了通过选自由lgr4(seqidno:53)、lgr5(seqidno:54)和/或lgr6(seqidno:55)组成的组中的一种或多种受体的β-连环蛋白信号传导。在某些实施方式中，通过rspo-结合剂对β-连环蛋白信号传导的抑制是使β-连环蛋白信号传导的水平降低至少约10％、至少约25％、至少约50％、至少约75％、至少约90％或至少约95％。

在某些实施方式中，rspo-结合剂(例如，抗体)抑制β-连环蛋白的激活。应当理解的是，在某些实施方式中，抑制β-连环蛋白的激活的rspo-结合剂可抑制通过一种或多种受体的β-连环蛋白的激活，但不一定抑制通过所有受体的β-连环蛋白的激活。在某些替代实施方式中，可抑制通过所有人类受体的β-连环蛋白的激活。在某些实施方式中，抑制了通过选自由lgr4(seqidno:53)、lgr5(seqidno:54)和lgr6(seqidno:55)组成的组中的一种或多种受体的β-连环蛋白的激活。在某些实施方式中，通过rspo-结合剂对β-连环蛋白激活的抑制是使β-连环蛋白的激活水平降低至少约10％、至少约25％、至少约50％、至少约75％、至少约90％或至少约95％。

在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是结合一种或多种人lgr蛋白的试剂。这些试剂在本文中被称为“lgr-结合剂”。lgr-结合剂的非限制性实例可见于美国专利号8158758、8158757、8802097，及美国专利公开号2012/0135422、2013/0209473、2014/0044713，此处出于所有目的以其整体通过引用并入本文。

在某些实施方式中，lgr-结合剂至少结合一种人lgr蛋白。在替代实施方式中，lgr-结合剂结合两种以上人lgr蛋白。在某些实施方式中，lgr-结合剂是抗体。在某些实施方式中，lgr-结合剂(部分或全部地)抑制至少一种rspo蛋白(例如，rspo1、rspo2、rspo3和/或rspo4)与至少一种lgr蛋白(例如，lgr4、lgr5和/或lgr6)的结合。在某些实施方式中，lgr-结合剂抑制rspo激活的lgr信号传导，诸如lgr5信号传导。在某些实施方式中，lgr-结合剂抑制β-连环蛋白信号传导。

在某些实施方式中，lgr-结合剂是抗体，例如，结合至少一种lgr蛋白的抗体。因此，lgr-结合剂可以是特异性结合lgr5的抗体。在某些替代实施方式中，lgr-结合剂是特异性结合lgr4或lgr6的抗体。

在某些实施方式中，lgr-结合剂特异性结合至少一种人lgr蛋白的抗体。在某些实施方式中，所述抗体特异性结合选自由lgr4、lgr5和lgr6组成的组中的至少一种人lgr蛋白。在某些实施方式中，所述抗体特异性结合lgr5。在某些实施方式中，所述抗体特异性结合选自由lgr4、lgr5和lgr6组成的组中的两种以上人lgr蛋白。在某些实施方式中，特异性结合至少一种人lgr蛋白的抗体还抑制至少一种rspo蛋白(例如，rspo1、rspo2、rspo3和/或rspo4)与至少一种人lgr蛋白(例如，lgr5)的结合。在某些实施方式中，特异性结合至少一种人lgr蛋白的抗体的特征在于抑制rspo激活lgr信号的能力和/或抑制β-连环蛋白信号传导的能力。在某些实施方式中，特异性结合至少一种人lgr蛋白的抗体的特征在于抑制肿瘤生长的能力，诸如实体瘤的生长。在某些实施方式中，特异性结合至少一种人lgr蛋白的抗体的特征在于抑制肿瘤生长的能力，诸如包含实体瘤干细胞的实体瘤的生长。例如，在某些实施方式中，特异性结合至少一种人lgr蛋白的抗体，破坏或抑制rspo与lgr的结合，并抑制肿瘤生长。在某些替代实施方式中，特异性结合至少一种lgr蛋白的抗体还破坏lgr信号的rspo激活并抑制肿瘤生长。在某些替代实施方式中，特异性结合至少一种lgr蛋白的抗体还抑制lgr信号的rspo激活和/或β-连环蛋白信号传导并抑制肿瘤生长。

在某些实施方式中，在体外或体内测定中，抑制rspo蛋白与lgr蛋白结合的lgr-结合剂抑制了至少约25％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％或至少约90％的rspo蛋白与lgr蛋白的结合。

类似地，在某些实施方式中，在体外或体内测定中，抑制(a)lgr信号的rspo激活和/或(b)β-连环蛋白信号传导的lgr-结合剂抑制了至少约25％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％或至少约90％的信号传导。

在某些实施方式中，lgr-结合剂是与人lgr蛋白的细胞外结构域特异性结合并抑制实体瘤生长的分离的抗体。在某些实施方式中，lgr-结合剂是与人lgr蛋白的细胞外结构域特异性结合并且抑制包含实体瘤干细胞的实体瘤生长的分离的抗体。在某些实施方式中，所述细胞外结构域包含人lgr5的22-564位氨基酸(seqidno:56)。在某些实施方式中，所述抗体是单克隆抗体。在某些实施方式中，所述抗体是人源化或人抗体。

在某些实施方式中，lgr-结合剂是与人lgr蛋白的细胞外结构域特异性结合并且破坏lgr信号的rspo激活的分离的抗体。在某些实施方式中，所述细胞外结构域包含人lgr5的22-564位氨基酸(seqidno:56)。在某些实施方式中，所述抗体是单克隆抗体。在某些实施方式中，所述抗体是人源化或人抗体。

在某些实施方式中，lgr-结合剂是单克隆抗lgr5抗体88m1。产生88m1单克隆抗体的杂交瘤细胞系于2008年7月2日根据布达佩斯条约保藏于美国典型培养物保藏中心(atcc)，10801universityblvd，manassas，virginia，20110，usa，atcc保藏号为pta-9342。在某些实施方式中，lgr-结合剂是特异性结合人lgr5的抗体，并且(a)包含与88m1的重链可变区具有至少约95％的序列同一性(例如，至少约98％或约100％的序列同一性)的重链可变区；(b)包含与88m1的轻链可变区具有至少约95％(例如，至少约98％或约100％的序列同一性)的序列同一性的轻链可变区；(c)包含88m1的重链cdr；(d)包含88m1的轻链cdr；(e)结合与88m1结合的表位；和/或(f)在竞争性结合测定中与88m1竞争。

在某些实施方式中，rspo-结合剂或lgr-结合剂是抗体。在某些实施方式中，所述抗体是重组抗体。在某些实施方式中，所述抗体是单克隆抗体。在某些实施方式中，所述抗体是嵌合抗体。在某些实施方式中，所述抗体是人源化抗体。在某些实施方式中，所述抗体是人抗体。在某些实施方式中，所述抗体是iga、igd、ige、igg或igm抗体。在某些实施方式中，所述抗体是igg1抗体。在某些实施方式中，所述抗体是igg2抗体。在某些实施方式中，所述抗体是igg4抗体。在某些实施方式中，所述抗体是包含抗原结合位点的抗体片段。在某些实施方式中，所述抗体是双特异性抗体或多特异性抗体。在某些实施方式中，所述抗体是单价抗体。在某些实施方式中，所述抗体是单特异性抗体。在某些实施方式中，所述抗体是二价抗体。在某些实施方式中，所述抗体与细胞毒性部分缀合。在某些实施方式中，所述抗体是分离的。在某些实施方式中，所述抗体是基本上纯的。

可以通过本领域已知的任何方法测定rspo结合剂和lgr-结合剂(例如，抗体)的特异性结合。可以使用的免疫测定包括但不限于：使用诸如biacore分析、facs分析、免疫荧光、免疫细胞化学、western印迹分析、放射免疫测定、elisa、“夹心”免疫测定、免疫沉淀测定、沉淀反应、凝胶扩散沉淀素反应、免疫扩散测定、凝集测定、补体固定测定、免疫放射测定、荧光免疫测定和蛋白a免疫测定等技术的竞争性和非竞争性测定系统。这样的测定法是常规的并且是本领域公知的(例如参见，ausubel等编，1994至今，currentprotocolsinmolecularbiology，johnwiley&sons，inc.，newyork，ny)。

例如，使用elisa可测定试剂(例如，rspo-结合剂或lgr-结合剂)与人rspo蛋白或人lgr蛋白的特异性结合。elisa测定包括制备抗原，用抗原包被96孔微孔板的孔，向孔中加入与诸如酶底物等可检测化合物缀合的rspo-结合剂或lgr-结合剂(例如辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶)，温育一段时间，并检测与抗原结合的试剂的存在。在某些实施方式中，rspo-结合剂或lgr-结合剂不与可检测化合物缀合，而是缀合识别rspo-结合剂或lgr-结合剂(例如，抗fc抗体)的第二抗体，并且与添加到孔中的可检测化合物缀合。在某些实施方式中，代替使用抗原包被孔，可将rspo-结合剂或lgr-结合剂包被到孔中，并且可在向包被过的孔中加入抗原后加入与可检测化合物缀合的第二抗体。本领域技术人员将了解，可以修改以增加检测信号的参数及本领域已知的elisa的其他变体。

在另一个实例中，使用facs可确定试剂(例如，rspo-结合剂或lgr-结合剂)与人rspo蛋白或人lgr蛋白的特异性结合。facs筛选测定可包括产生表达抗原(例如，rspo或lgr)的cdna构建体，可选地，作为融合蛋白(例如，rspo-cd4tm或lgr-cd4tm)，将构建体转染到细胞中，在细胞表面上表达抗原，混合rspo-结合剂或lgr-结合剂与转染的细胞，并且温育一段时间。使用与可检测化合物缀合的第二抗体(例如，pe-缀合的抗fc抗体)和流式细胞仪可鉴定由rspo-结合剂或lgr-结合剂结合的细胞。本领域技术人员将了解，可以修改以优化所检测信号的参数及可以增强筛选(例如筛选阻断抗体)的facs的其他变体。

试剂(例如，rspo-结合剂或lgr-结合剂)与抗原的结合亲和力和试剂-抗原相互作用的解离速率可以通过竞争性结合测定来确定。竞争性结合测定的一个实例是放射免疫测定，其包括在增加量的未标记的抗原存在下，将标记的抗原(例如，用³h或¹²⁵i标记)或其片段或变体与感兴趣的结合剂温育，随后检测与标记抗原结合的试剂。试剂对抗原的亲和力和结合解离可以通过scatchard图分析的数据确定。在某些实施方式中，使用biacore动力学分析来确定结合抗原的试剂的结合和解离速率。在某些实施方式中，biacore动力学分析包括用其表面上的固定抗原分析来自芯片的抗体的结合和解离。在某些实施方式中，biacore动力学分析包括用其表面上的固定结合剂分析来自芯片的抗原的结合和解离。

用于确定rspo-结合剂或lgr-结合剂是否抑制β-连环蛋白信号传导的体内和体外测定是本领域已知的。例如，使用含有萤火虫荧光素酶报告基因的tcf-结合结构域上游的多个拷贝的tcf/luc报告载体的基于细胞的荧光素酶报告测定可用于体外测量β-连环蛋白信号传导水平(gazit等，1999，oncogene，18；5959-66；topflash，millipore，billericama)。在存在rspo-结合剂或lgr-结合剂时具有或不具有rspo蛋白或rspo条件培养基的一种或多种wnt(例如，通过转染细胞表达或通过wnt条件培养基提供的wnt)的存在下的β-连环蛋白信号传导的水平与不存在rspo-结合剂或lgr-结合剂的信号水平进行比较。除了tcf/luc报告测定，通过测量所述试剂对β-连环蛋白调节基因的表达水平的作用可在体外或体内测量rspo-结合剂或lgr-结合剂对β-连环蛋白信号传导的作用，所述β-连环蛋白调节基因如c-myc(he等，1998，science，281：1509-12)、细胞周期蛋白d1(tetsu等，1999，nature，398：422-6)和/或纤连蛋白(gradl等，1999，mol.cellbiol.，19：5576-87)。在某些实施方式中，还可通过测量所述试剂对dishevelled-1、dishevelled-2、dishevelled-3、lrp5、lrp6和/或β-连环蛋白磷酸化状态的作用来评估rspo-结合剂或lgr-结合剂对β-连环蛋白信号传导的影响。

在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂(例如，rspo-结合剂和lgr-结合剂)是多克隆抗体。可通过任何已知的方法制备多克隆抗体。在某些实施方式中，通过多次皮下或腹腔内注射相关抗原(例如，纯化肽片段、全长重组蛋白或融合蛋白)来免疫动物(例如，兔、大鼠、小鼠、山羊、驴)而产生多克隆抗体。可选地，所述抗原可与诸如钥孔戚血蓝素(klh)或血清白蛋白等载体缀合。在无菌盐水中稀释所述抗原(具有或不具有载体蛋白)，并且通常与佐剂(例如，完全或不完全弗氏佐剂)结合以形成稳定乳液。经过足够的时间后，从免疫动物的血液和/或腹水中回收多克隆抗体。根据本领域的标准方法，可以从血清或腹水中纯化多克隆抗体，所述方法包括但不限于：亲和色谱、离子交换色谱、凝胶电泳和透析。

在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂(例如，rspo-结合剂或lgr-结合剂)是单克隆抗体。可以使用本领域技术人员已知的杂交瘤方法制备单克隆抗体。在某些实施方式中，使用所述杂交瘤方法，如上所述免疫小鼠、仓鼠或其他适合的宿主动物，以从淋巴细胞产生将特异性结合免疫抗原的抗体。在某些实施方式中，淋巴细胞可以在体外免疫。在某些实施方式中，所述免疫抗原可以是人类蛋白或其一部分。在某些实施方式中，所述免疫抗原可以是小鼠蛋白或其一部分。

免疫后，分离淋巴细胞并使用例如聚乙二醇与适合的骨髓瘤细胞系融合，以形成杂交瘤细胞，杂交瘤细胞随后可以从未融合的淋巴细胞和骨髓瘤细胞中选出。可以通过多种方法鉴定产生针对所选抗原的单克隆抗体的杂交瘤，所述方法包括但不限于：免疫沉淀、免疫印迹和体外结合测定(例如，流式细胞术、facs、elisa和放射免疫测定)。杂交瘤可以使用标准方法在体外培养中繁殖或在动物体内作为腹水肿瘤繁殖。可以根据本领域的标准方法从培养基或腹水中纯化单克隆抗体，所述方法包括但不限于：亲和色谱、离子交换色谱、凝胶电泳和透析。

在某些实施方式中，单克隆抗体可以使用本领域技术人员已知的重组dna技术制备。编码单克隆抗体的多核苷酸从成熟b细胞或杂交瘤细胞分离，例如通过使用寡核苷酸引物的rt-pcr，所述引物特异性扩增编码抗体的重链和轻链的基因，并且其序列使用常规技术测定。然后将编码重链和轻链的分离的多核苷酸克隆到合适的表达载体中，所述载体在转染至宿主细胞时产生单克隆抗体，所述宿主细胞如大肠杆菌、猿猴cos细胞、中国仓鼠卵巢(cho)细胞或不另外产生免疫球蛋白的骨髓瘤细胞。在其它实施方式中，重组单克隆抗体或其片段可以分离自噬菌体展示文库。

编码单克隆抗体的多核苷酸可以使用重组dna技术以多种不同方式进一步修饰以产生替代抗体。在某些实施方式中，例如小鼠单克隆抗体的轻链和重链的恒定结构域可以取代例如人抗体的那些区域，以产生嵌合抗体，或取代非免疫球蛋白多肽以产生融合抗体。在某些实施方式中，恒定区被截短或去除以产生单克隆抗体的所需抗体片段。在某些实施方式中，可变区的定点或高密度诱变可用于优化单克隆抗体的特异性、亲和力等。

在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂(例如，rspo-结合剂或lgr-结合剂)是人源化抗体。通常，人源化抗体是使用本领域技术人员已知的方法用来自具有期望的特异性、亲和力和/或结合能力的非人类物种(例如，小鼠、大鼠、兔、仓鼠等)的cdr的残基替代来自其中的cdr的残基的人类免疫球蛋白。在某些实施方式中，人类免疫球蛋白的框架区残基被来自非人类物种的抗体中的相应残基替代。在某些实施方式中，所述人源化抗体可以通过在框架区和/或替代的非人类残基内替代另外的残基来进一步修饰以改善和优化抗体特异性、亲和力和/或容量。通常，人源化抗体将包含含有对应于非人类免疫球蛋白的全部或基本上全部cdr的可变结构域区，而全部或基本上全部的框架区均为人类免疫球蛋白序列。在某些实施方式中，人源化抗体还可以包含免疫球蛋白恒定区或恒定区结构域(fc)的至少一部分，其通常是人类免疫球蛋白的一部分。在某些实施方式中，这样的人源化抗体在治疗上使用，因为当施用于人类受试者时，它们可以降低抗原性和hama(人类抗小鼠抗体)应答。

在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂(例如，rspo-结合剂或lgr-结合剂)是人抗体。可使用本领域已知的各种技术直接制备人抗体。在某些实施方式中，可以产生体外免疫的或从产生针对靶标抗原的抗体的免疫个体分离的永生化人类b淋巴细胞。在某些实施方式中，所述人抗体可选自噬菌体文库，其中所述噬菌体文库表达人抗体。作为另一种选择，可使用噬菌体展示技术从来自未免疫供体的免疫球蛋白可变结构域基因库中体外产生人抗体和抗体片段。用于产生和使用抗体噬菌体文库的技术是本领域公知的，且抗体噬菌体文库可商购。亲和力成熟策略包括但不限于：链改组和定点诱变，其可用于产生高亲和力的人抗体。

在某些实施方式中，可以在含有人类免疫球蛋白基因座的转基因小鼠中制备人抗体。这些小鼠在免疫后能够在不存在内源性免疫球蛋白产生的情况下产生人抗体的全部谱系。

在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂(例如，rspo-结合剂或lgr-结合剂)是特异性识别至少一种人rspo蛋白或至少一种lgr蛋白的双特异性抗体。双特异性抗体能够特异性识别并结合至少两个不同的表位。不同的表位可在相同分子内(例如，人rspo3上的两个不同的表位)或在不同分子上(例如，rspo3上的一个表位和第二蛋白上的不同表位)。在某些实施方式中，所述双特异性抗体是单克隆人抗体或人源化抗体。在某些实施方式中，所述双特异性抗体是完整抗体。在某些实施方式中，所述双特异性抗体是抗体片段。在某些实施方式中，所述抗体是多特异性的。在某些实施方式中，所述抗体可特异性识别并结合第一抗原靶标(例如，lgr蛋白)及第二抗原靶标，诸如白细胞上的效应器分子(例如，cd2、cd3、cd28、cd80或cd86)或fc受体(例如，cd64、cd32或cd16)，以将细胞防御机制集中到表达第一抗原靶标的细胞上。在某些实施方式中，所述抗体可用于将细胞毒性剂引导至表达特定靶标抗原的细胞。这些抗体具有抗原结合臂和结合诸如eotube、dpta、dota或teta等细胞毒性剂或放射性核素螯合剂的臂。用于制造双特异性或多特异性抗体的技术是本领域技术人员已知的。

在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂(例如，rspo-结合剂或lgr-结合剂)是单特异性抗体。例如，在某些实施方式中，抗体包含的一个或多个抗原结合位点的每一个能够结合(或结合了)不同蛋白上的同源表位。

在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是包含抗原结合位点的抗体片段。抗体片段可以具有与完整抗体不同的功能或能力；例如，抗体片段可以具有增加的肿瘤渗透性。产生抗体片段的各种技术是已知的，其包括但不限于完整抗体的蛋白水解消化。在某些实施方式中，抗体片段包括通过胃蛋白酶消化抗体分子而产生的f(ab')2片段。在某些实施方式中，抗体片段包括通过还原f(ab')2片段的二硫键而产生的fab片段。在其他实施方式中，抗体片段包括通过用木瓜蛋白酶和还原剂治疗抗体分子而产生的fab片段。在某些实施方式中，重组产生抗体片段。在某些实施方式中，抗体片段包括fv或单链fv(scfv)片段。fab、fv和scfv抗体片段可以在大肠杆菌或其他宿主细胞中表达并分泌，从而使得能够产生大量的这些片段。在某些实施方式中，如本文所讨论的，从抗体噬菌体文库分离抗体片段。例如，可以使用方法来构建fab表达文库，以便快速有效地鉴定具有对于rspo或lgr蛋白或其衍生物、片段、类似物或同系物所需的特异性的单克隆fab片段。在某些实施方式中，抗体片段是线性抗体片段。在某些实施方式中，抗体片段是单特异性或双特异性的。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是scfv。可以使用各种技术来产生对一种或多种人rspo蛋白或一种或多种人lgr蛋白特异性的单链抗体。

进一步理想的是，特别是在抗体片段的情况下，为了增加其血清半衰期而修饰抗体。这可以例如通过将抗体片段中的适当区域的突变引入抗体片段中或通过将表位引入到肽标签中，然后所述肽标签在任一末端或在中间与所述抗体片段融合(例如，通过dna或肽合成)而实现。在某些实施方式中，修饰抗体以降低其血清半衰期。

在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是异源缀合抗体。异源缀合抗体由两种共价连接的抗体组成。例如，已经提出这样的抗体将免疫细胞靶向不需要的细胞。还预期可以使用包括涉及交联剂的那些合成蛋白化学中的已知方法体外制备异源缀合抗体。例如，可以使用二硫化物交换反应或通过形成硫醚键来构建免疫毒素。用于此目的的适合试剂的实例包括亚氨基硫醇和4-巯基丁酰亚氨酸甲酯。

应当理解的是，经修饰的抗体可以包含提供抗体与靶标(即，人rspo蛋白或人lgr蛋白)结合的任何类型的可变区。在此方面，可变区可以包含或源自任何类型的哺乳动物，所述哺乳动物可被诱导以产生体液应答，并针对所需的肿瘤相关抗原产生免疫球蛋白。因此，经修饰的抗体的可变区可以例如是人类、鼠、非人灵长类(例如食蟹猴、猕猴等)或兔来源。在某些实施方式中，经修饰的免疫球蛋白的可变区和恒定区均是人的。在其他实施方式中，相容抗体(通常源自非人类来源)的可变区可被工程改造或专门设计以改善结合性质或降低分子的免疫原性。在此方面，可变区可以通过包含引入的氨基酸序列进行人源化或以其他方式改变。

在某些实施方式中，重链和轻链中的可变结构域通过至少部分置换一个或多个cdr，并且如果需要，通过部分框架区替换和序列修饰和/或变动来改变。虽然cdr可源自与衍生框架区的抗体相同类别或甚至亚类的抗体，但可以设想cdr优选来自不同物种的抗体。可能没有必要用来自供体可变区的所有cdr替代所有cdr以将一个可变结构域的抗原结合能力转移到另一个。相反，可能仅需要转移维持抗原结合位点的活性所必需的那些残基。

对于可变区的改变，尽管本领域技术人员将理解，经修饰的抗体将包括其中fc区的至少一部分被缺失或以其他方式改变的抗体(例如，全长抗体或其免疫反应性片段)，从而提供所需的生化特性，当与包含天然或未改变的恒定区的大致相同的免疫原性的抗体相比时，例如增加的肿瘤定位和/或增加的血清半衰期。在某些实施方式中，经修饰的抗体的恒定区将包含人恒定区。对恒定区的修饰包括在一个或多个结构域中的一个或多个氨基酸的添加、缺失或取代。本文公开的经修饰的抗体可以包括对三个重链恒定结构域(ch1、ch2或ch3)和/或对轻链恒定结构域(cl)中的一个或多个的改变或修饰。在某些实施方式中，从经修饰的抗体的恒定区部分或整个缺失一个或多个结构域。在某些实施方式中，所述经修饰的抗体将包含整个ch2结构域被除去的结构域缺失构建体或变体(δch2构建体)。在某些实施方式中，省略的恒定区结构域由短氨基酸间隔子(例如，10个氨基酸残基)代替，其提供通常由缺失的恒定区结构域赋予的某些分子柔性。

在某些实施方式中，经修饰的抗体被工程改造以将ch3结构域直接融合到所述抗体的铰链区。在其他实施方式中，将肽间隔子插入铰链区和经修饰的ch2和/或ch3结构域之间。例如，可以表达构建体，其中ch2结构域已经被缺失，并且剩余的ch3结构域(经修饰的或未经修饰的)用5至20个氨基酸的间隔子连接到铰链区。可以加入这种间隔子以确保恒定结构域的调控元件保持自由和可接近，或者铰链区保持柔性。然而，应当注意的是，在某些情况下，可证明氨基酸间隔子是免疫原性的，并引发针对该构建体的不需要的免疫应答。因此，在某些实施方式中，添加到构建体中的任何间隔子将是相对非免疫原性的，以保持经修饰的抗体的所需生物学特性。

在某些实施方式中，经修饰的抗体可以仅具有恒定结构域的部分缺失或几个或甚至单个氨基酸的取代。例如，ch2结构域的选定区域中单个氨基酸的突变可足以显著减少fc结合，从而增加癌细胞定位和/或肿瘤渗透。类似地，可能理想的是简单地删除控制特定效应器功能(例如补体c1q结合)的一个或多个恒定区的部分。恒定区的这种部分缺失可以改善抗体的所选特征(血清半衰期)，同时完全留下与受试者恒定区结构域相关的其他所需功能。此外，如上所述，所公开的抗体的恒定区可以通过增加所得构建体的特征的一个或多个氨基酸的突变或取代来修饰。在此方面，可以在基本上保持经修饰的抗体的构型和免疫原性特征的同时，破坏由保守性结合位点提供的活性(例如，fc结合)。在某些实施方式中，修饰抗体包括向恒定区添加一个或多个氨基酸以增强所需特征，例如降低或增加效应器功能或提供更多的细胞毒素或碳水化合物附着位点。

本领域已知恒定区介导若干效应器功能。例如，补体的c1组分与igg或igm抗体的fc区(与抗原结合)的结合激活补体系统。补体的激活在细胞病原体的调理作用和裂解中是重要的。补体的激活还刺激炎性反应，并且还可参与自身免疫性超敏反应。此外，抗体的fc区可以结合表达fc受体(fcr)的细胞。存在许多对不同类型抗体特异性的fc受体，其包括igg(γ受体)、ige(ε受体)、iga(α受体)和igm(μ受体)。抗体与fc受体在细胞表面的结合触发许多重要和多样化的生物学反应，其包括吞噬和破坏抗体包被的颗粒、清除免疫复合物、通过杀伤细胞裂解抗体包被的靶细胞、释放炎症介质、胎盘转移和控制免疫球蛋白产生。

在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是提供改变的效应器功能的抗体。这些改变的效应器功能可影响所施用的抗体的生物学特征。例如，在某些实施方式中，恒定区结构域的缺失或失活(通过点突变或其他方式)可以减少循环修饰抗体(例如，抗rspo抗体)的fc受体结合，从而增加癌细胞定位和/或肿瘤渗透。在其他实施方式中，恒定区修饰增加或减少抗体的血清半衰期。在某些实施方式中，修饰恒定区以消除二硫键或寡糖部分。使用公知的生物化学或分子工程技术可以很好地在本领域技术人员的范围内对该恒定区进行修饰。

在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是不具有一种或多种效应器功能的抗体。例如，在某些实施方式中，所述抗体不具有adcc活性和/或不具有cdc活性。在某些实施方式中，所述抗体不结合fc受体和/或补体因子。在某些实施方式中，所述抗体不具有效应器功能。

与本文所述的嵌合、人源化和人抗体或它们的抗体片段基本同源的变体和等同物也可用于本文所述的方法中。这些可以例如包括保守性取代突变。

在某些实施方式中，本文所述的抗体是分离的。在某些实施方式中，本文所述的抗体是基本上纯的。

在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是可溶性受体。在某些实施方式中，rspo-结合剂是可溶性受体。在某些实施方式中，可溶性受体包含lgr蛋白的细胞外结构域或lgr蛋白细胞外结构域的片段。在某些实施方式中，lgr蛋白是lgr5。例如，在某些实施方式中，rspo-结合剂是包含lgr5受体片段的融合蛋白。在某些实施方式中，rspo-结合剂是包含lgr5受体片段和抗体的fc部分的融合蛋白。

在某些实施方式中，rspo-结合剂是抑制包含实体瘤干细胞的实体瘤生长的包含人lgr蛋白的细胞外结构域或其片段的可溶性受体。在某些实施方式中，所述细胞外结构域包含人lgr5的22-564位氨基酸(seqidno:56)。在某些实施方式中，人lgr5细胞外结构域在框架内与非lgr蛋白序列连接。在某些实施方式中，非lgr蛋白是人fc。

在某些实施方式中，rspo-结合剂是抑制lgr信号的rspo激活的包含人lgr蛋白细胞外结构域或其片段的可溶性受体。在某些实施方式中，所述细胞外结构域包含人lgr5的22-564位氨基酸(seqidno:56)。在某些实施方式中，人lgr5的细胞外结构域在框架内与非lgr蛋白序列连接。在某些实施方式中，非lgr蛋白是人类fc。可溶性lgr受体的非限制性实例可美国专利号8158758和8158757中找到，此处各出于所有目的以其整体通过引用并入本文。

在某些实施方式中，rspo-结合剂是抑制实体瘤生长的包含人lgr蛋白的细胞外结构域的可溶性受体。在某些实施方式中，rspo-结合剂是抑制包含实体瘤干细胞的实体瘤生长的包含人lgr蛋白的细胞外结构域的可溶性受体。在某些实施方式中，所述细胞外结构域包含人lgr5的22-564位氨基酸(seqidno:56)。在某些实施方式中，所述细胞外结构域包含人lgr5的22-564位氨基酸(seqidno:56)的片段。在某些实施方式中，人lgr5的细胞外结构域或其片段在框架与非lgr蛋白序列内连接。在某些实施方式中，非lgr蛋白是人fc。

在某些实施方式中，可溶性受体包含含有一种或多种(例如，一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种、十种等)保守性取代的人lgr蛋白的上述细胞外结构域的变体，并且能够结合rspo蛋白。

在某些实施方式中，诸如包含人lgr蛋白的细胞外结构域的试剂等可溶性受体进一步包含非lgr(例如，异源)多肽。在某些实施方式中，可溶性受体可包括与其他非lgr功能和结构多肽连接的lgrecd，其包括但不限于：人fc区、至少一种蛋白标签(例如，myc、flag、gst、gfp)、其他内源蛋白或蛋白片段或包括lgrecd和第二多肽之间的任何接头区的任何其他有用的蛋白序列。在某些实施方式中，非lgr多肽包含人fc区。fc区可获自任何种类的免疫球蛋白(igg、iga、igm、igd和ige)。在某些实施方式中，fc区是人igg1fc区。在某些实施方式中，fc区是人igg2fc区。在某些实施方式中，fc区是野生型fc区。在某些实施方式中，fc区是突变的fc区。在某些实施方式中，fc区在n-末端截短了1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸(例如，在铰链结构域中)。在某些实施方式中，改变铰链结构域中的氨基酸以阻碍不期望的二硫键形成。在某些实施方式中，丝氨酸代替半胱氨酸以阻止不期望的二硫键形成。在某些实施方式中，fc区在c-末端截短了1、2、3个以上氨基酸。在某些实施方式中，fc区在c-末端截短了1个氨基酸。在某些实施方式中，非lgr多肽包含seqidno:58、seqidno:59、seqidno:60、seqidno:61或seqidno:62。在某些实施方式中，非lgr多肽主要由seqidno:58、seqidno:59、seqidno:60、seqidno:61或seqidno:62组成。在某些实施方式中，非lgr多肽包含seqidno:61。在某些实施方式中，非lgr多肽主要由seqidno:61组成。

在某些实施方式中，可溶性受体是包含能够结合rspo蛋白的lgr多肽的细胞外结构域和fc区的融合蛋白。如本文使用的，“融合蛋白”是由包含至少两个基因的核苷酸序列的核酸分子表达的杂合蛋白。在某些实施方式中，第一多肽的c-末端连接到免疫球蛋白fc区的n-末端。在某些实施方式中，第一多肽(例如，lgr多肽的细胞外结构域)直接连接到fc区(即没有插入的肽接头)。在某些实施方式中，第一多肽经由接头连接到fc区。

在某些实施方式中，所述融合蛋白包含seqidno:57。在某些实施方式中，所述融合蛋白包含seqidno:63。在某些实施方式中，所述可溶性受体包含seqidno:63。在某些实施方式中，rspo-结合剂包含seqidno:63。

如本文使用的，术语“接头(linker)”是指插入到第一多肽(例如，lgr组分)和第二多肽(例如，fc区)之间的接头。在某些实施方式中，所述接头是肽接头。接头不应该不利地影响多肽的表达、分泌或生物活性。接头不应该是抗原性的并且不应该引起免疫应答。适合的接头是本领域技术人员已知的，并且通常包括甘氨酸和丝氨酸残基的混合物，并且通常包括空间上不受阻碍的氨基酸。可引入有用接头的其他氨基酸包括苏氨酸和丙氨酸残基。接头的长度范围可以例如为：1-50个氨基酸长度、1-22个氨基酸长度、1-10个氨基酸长度、1-5个氨基酸长度或1-3个氨基酸长度。如本文使用的“接头”是不包括来自第一多肽的c末端(例如，lgr组分)或第二多肽的n末端(例如，fc区)的氨基酸残基的插入肽序列。

在某些实施方式中，rspo-结合剂(例如，可溶性受体)包含免疫球蛋白的fc区。本领域技术人员将会理解，某些结合剂将包含其中fc区的至少一部分具有缺失或以其他方式改变的融合蛋白，从而提供所需的生化特性，例如，当与包含天然或未改变的恒定区的大致相同的免疫原性的融合蛋白相比时增加的癌细胞定位、增加的肿瘤渗透、降低的血清半衰期或增加的血清半衰期。对fc区的修饰可以包括在一个或多个结构域中的一个或多个氨基酸的添加、缺失或取代。本文公开的经修饰的融合蛋白可以包括对两个重链恒定结构域(ch2或ch3)或对铰链区的一个或多个改变或修饰。在其他实施方式中，可除去整个ch2结构域(δch2构建体)。在某些实施方式中，省略的恒定区结构域由短氨基酸间隔子(例如，10个残基)代替，其提供通常由缺失的恒定区结构域赋予的某些分子柔性。

在某些实施方式中，经修饰的融合蛋白被工程改造以将ch3结构域直接连接到铰链区。在其他实施方式中，将肽间隔子插入铰链区和经修饰的ch2和/或ch3结构域之间。例如，可以表达构建体，其中ch2结构域已经被缺失，并且剩余的ch3结构域(经修饰的或未经修饰的)用5-20个氨基酸的间隔子连接到铰链区。可以加入这种间隔子以确保恒定结构域的调控元件保持自由和可及，或者铰链区保持柔性。然而，应当注意的是，在某些情况下，氨基酸间隔子经证明是免疫原性的，并引发针对该构建体的不需要的免疫应答。因此，在某些实施方式中，添加到构建体中的任何间隔子将是相对非免疫原性的，以保持融合蛋白的所需生物学特性。

在某些实施方式中，经修饰的融合蛋白可以仅具有恒定结构域的部分缺失或几个或甚至单个氨基酸的取代。例如，ch2结构域的选定区域中单个氨基酸的突变可足以显著减少fc结合，从而增加癌细胞定位和/或肿瘤渗透。类似地，可能理想的是简单地删除控制特定效应器功能(例如补体c1q结合)的一个或多个恒定区结构域的部分。恒定区的这种部分缺失可以改善结合剂的所选特征(血清半衰期)，同时完全留下与受试者恒定区结构域相关的其他所需功能。此外，如上所述，所公开的融合蛋白的恒定区可以通过增加所得构建体的特征的一个或多个氨基酸的突变或取代来修饰。在此方面，可以在基本上保持修饰的融合蛋白的构型和免疫原性特征的同时，破坏由保守性结合位点提供的活性(例如，fc结合)。在某些实施方式中，经修饰的融合蛋白包括向恒定区添加一个或多个氨基酸以增强所需特征，例如降低或增加效应器功能或提供更多的细胞毒素或碳水化合物附着位点。

本领域已知恒定区介导若干效应器功能。例如，补体的c1组分与igg或igm抗体的fc区(与抗原结合)的结合激活补体系统。补体的激活在细胞病原体的调理作用和裂解中是重要的。补体的激活还刺激炎性反应，并且还可参与自身免疫性超敏反应。此外，免疫球蛋白的fc区可以与表达fc受体(fcr)的细胞结合。存在许多对不同类型抗体是特异性的fc受体，其包括igg(γ受体)、ige(ε受体)、iga(α受体)和igm(μ受体)。抗体与fc受体在细胞表面的结合触发许多重要和多样化的生物学反应，其包括吞噬和破坏抗体包被的颗粒、清除免疫复合物、通过杀伤细胞裂解抗体包被的靶细胞、释放炎症介质、胎盘转移和控制免疫球蛋白产生。

在某些实施方式中，所述经修饰的融合蛋白提供改变的效应器功能，其转而影响所施用试剂的生物学特征。例如，在某些实施方式中，恒定区结构域的缺失或失活(通过点突变或其他方式)可以减少循环修饰抗体的fc受体结合，从而增加癌细胞定位和/或肿瘤渗透。在其他实施方式中，恒定区修饰增加或减少所述试剂的血清半衰期。在某些实施方式中，修饰恒定区以消除二硫键或寡糖部分。

在某些实施方式中，经修饰的融合蛋白不具有通常与fc区相关的一种或多种效应器功能。在某些实施方式中，所述试剂不具有抗体-依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)活性和/或不具有补体-依赖性细胞毒性(cdc)活性。在某些实施方式中，所述试剂不与fc受体和/或补体因子结合。在某些实施方式中，所述试剂不具有效应器功能。

在某些实施方式中，修饰本文所述的rspo-结合剂(例如，可溶性受体)以降低免疫原性。通常，当将这些蛋白质用作治疗剂时，针对完全正常的人类蛋白质的免疫应答是罕见的。然而，尽管许多融合蛋白质包含与天然发现的序列相同的多肽序列，但已有几种治疗性融合蛋白在哺乳动物中显示出免疫原性。在一些研究中，发现包含接头的融合蛋白比不含接头的融合蛋白具有更高的免疫原性。因此，在某些实施方式中，通过计算方法分析多肽以预测免疫原性。在某些实施方式中，分析多肽是否存在t细胞和/或b细胞表位。如果鉴定和/或预测出任何t细胞或b细胞表位，则可以对这些区域进行修饰(例如，氨基酸取代)以破坏或破除表位。可用于预测t细胞和/或b细胞表位的各种算法和软件是本领域已知的。例如软件程序syfpeithi、hlabind、pepvac、rankpep、discotope、ellipro和抗体表位预测都是可公开获得的。

在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是多肽。所述多肽可以是结合至少一种人rspo蛋白或至少一种lgr蛋白的抗体或其片段的重组多肽、天然多肽或合成多肽。应当认识到，可以改变某些氨基酸序列而不会对蛋白质的结构或功能产生显著影响。因此，本文所述的方法进一步包括使用显示出实质活性的多肽的变体，或者包括针对人rspo蛋白或lgr蛋白的抗体或其片段的区域的变体。在某些实施方式中，rspo结合多肽或lgr结合多肽的氨基酸序列变异可以包括缺失、插入、倒置、重复和/或其他类型的取代。

可以进一步修饰其多肽、类似物和变体以包含通常不是多肽部分的其他化学部分。衍生部分可以改善多肽的溶解度、生物半衰期和/或吸收。所述部分还可以减少或消除多肽和变体的任何不期望的副作用。化学部分的综述可见于remington：thescienceandpracticeofpharmacy，第22版，2012，pharmaceuticalpress，london。

包括抗体和可溶性受体的多种蛋白包含引导蛋白质转运到各个位置的信号序列。信号序列(也称为信号肽或前导序列)位于新生多肽的n末端(例如，人lgr5(seqidno:54)的氨基酸1-21)。它们将多肽靶向内质网，并且将蛋白质分选到其目的地，例如分选到细胞器的内部空间、内膜、细胞外膜或通过分泌到外部的细胞。大部分信号序列在将蛋白质运送到内质网后，通过信号肽酶从蛋白质切割。来自多肽的信号序列的切割通常发生在氨基酸序列的特定位点，并且依赖于信号序列内的氨基酸残基。尽管通常有一个特定的切割位点，但多于一个切割位点可以被识别和/或可被信号肽酶使用，从而导致多肽的非均匀n末端。例如，在信号序列内使用不同的切割位点可导致用不同的n-末端氨基酸表达的多肽。因此，在某些实施方式中，本文所述的多肽可以包含具有不同n-末端的多肽的混合物。在某些实施方式中，n-末端的长度区别在1、2、3、4或5个氨基酸。在某些实施方式中，所述多肽基本上是均匀的，即多肽具有相同的n-末端。在某些实施方式中，与“天然”"或“亲本”信号序列相比，所述多肽的信号序列包含一种或多种(例如，一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种、十种等)氨基酸取代和/或缺失。在某些实施方式中，所述多肽的信号序列包含允许一个切割位点占优势的氨基酸取代和/或缺失，从而导致具有一个n-末端的基本上显着的多肽。在某些实施方式中，所述多肽的信号序列影响多肽的表达水平，例如增加的表达或降低的表达。

本文所述的分离的多肽可以通过本领域已知的任何适合的方法制备。所述方法包括直接的蛋白质合成法到构建编码多肽序列的dna序列并在适合的宿主中表达那些序列。在某些实施方式中，使用重组技术通过分离或合成编码感兴趣的野生型蛋白的dna序列来构建dna序列。可选地，可以通过位点特异性诱变来诱变序列以提供其功能类似物。

在某些实施方式中，可以通过使用寡核苷酸合成仪的化学合成来构建编码感兴趣的多肽的dna序列。可以基于所需多肽的氨基酸序列设计寡核苷酸，并选择在其中将产生感兴趣的重组多肽的宿主细胞中的有利的密码子。可以应用标准方法来合成编码感兴趣的分离多肽的多核苷酸序列。例如，可以使用完整的氨基酸序列构建反向翻译的基因。此外，可以合成含有编码特定分离多肽的核苷酸序列的dna寡聚体。例如，可以合成几种编码所需多肽的部分的小寡核苷酸，然后将其连接。个体寡核苷酸通常含有5'或3'突出端用于互补组装。

一旦经组装(通过合成、定点诱变或另一种方法)，可以将编码感兴趣的特定多肽的多核苷酸序列插入到表达载体中，并可操作地连接到适于在理想宿主中表达蛋白质的表达控制序列。可以通过核苷酸测序、限制性内切酶图谱和/或在适合的宿主中生物活性多肽的表达来确认正确的组装。如本领域公知的，为了在宿主中获得转染基因的高表达水平，该基因必须可操作地连接到在所选择的表达宿主中有功能的转录和翻译表达控制序列。

重组表达载体可用于扩增和表达编码结合人rspo蛋白或人lgr蛋白的试剂(例如，抗体或可溶性受体)或其片段的dna。例如，重组表达载体可以是具有编码与来源于哺乳动物、微生物、病毒或昆虫基因的适合的转录和/或翻译调控元件可操作地连接的rspo结合剂、lgr结合剂、抗-rspo抗体或其片段、抗lgr抗体或其片段或lgr-fc可溶性受体的多肽链的合成或cdna来源的dna片段的可复制dna构建体。转录单元通常包含以下的组装体：(1)在基因表达中具有调节作用的遗传元件，例如转录启动子或增强子，(2)被转录成mrna并翻译成蛋白质的结构或编码序列，和(3)适当的转录和翻译起始和终止序列。调控元件可以包括控制转录的操纵子序列。通常由复制起点赋予的宿主中复制能力以及促进转化体识别的选择基因也可另外的并入。当dna区域在功能上彼此相关时，dna区域“可操作地连接”。例如，如果信号肽的dna(分泌型前导序列)表达为参与多肽分泌的前体，则信号肽的dna与多肽的dna可操作地连接；如果启动子控制序列的转录，则启动子可操作地连接到编码序列；或者如果核糖体结合位点被定位以允许翻译，则核糖体结合位点可操作地连接到编码序列。旨在用于酵母表达系统的结构元件可以包括能够通过宿主酵母细胞细胞外分泌翻译的蛋白的前导序列。当重组蛋白质在没有前导序列或转运序列的情况下表达时，其可以包括n-末端甲硫氨酸残基。可选地，随后可以从表达的重组蛋白中切割该残基，以提供最终产物。

表达控制序列和表达载体的选择取决于宿主的选择。可以使用多种表达宿主/载体组合。用于真核宿主的有用的表达载体例如包括，包含来自sv40、牛乳头瘤病毒、腺病毒和巨细胞病毒的表达控制序列的载体。用于细菌宿主的有用的表达载体包括诸如来自大肠杆菌的质粒等已知的细菌质粒(包括pcr1、pbr322、pmb9及其衍生物)，以及更宽的宿主范围质粒，例如m13和其他丝状单链dna噬菌体。

用于表达rspo-结合或lgr-结合剂(或用作抗原的蛋白)的适合的宿主细胞包括原核生物、酵母细胞、昆虫细胞或高级真核细胞。原核生物包括革兰氏阴性或革兰氏阳性生物体，例如大肠杆菌或芽孢杆菌。高等真核细胞包括如下所述的已建立的哺乳动物来源的细胞系。也可以使用无细胞翻译系统。适用于细菌、真菌、酵母和哺乳动物细胞宿主的克隆和表达载体是本领域技术人员已知的。

各种哺乳动物细胞培养系统用于表达重组多肽。重组蛋白在哺乳动物细胞中的表达可以是优选的，因为这些蛋白质通常被正确折叠、适当修饰并具有生物功能。适合的哺乳动物宿主细胞系的实例包括cos-7(猴肾脏来源的)、l-929(鼠成纤维细胞来源的)、c127(鼠乳腺肿瘤来源的)、3t3(鼠成纤维细胞来源的)、cho(中国仓鼠卵巢来源的)、hela(人类宫颈癌来源的)、bhk(仓鼠肾脏成纤维细胞来源的)、hek-293(人类胚胎肾脏来源的)细胞系和它们的变体。哺乳动物表达载体可以包含非转录元件(如复制起点、与待表达的基因连接的适合的启动子和增强子、和其他5'或3'侧翼非转录序)以及5'或3'非翻译序列，如必需的核糖体结合位点、聚腺苷酸化位点、剪接供体和受体位点、和转录终止序列。

重组蛋白在昆虫细胞培养系统(例如杆状病毒)中的表达也提供了用于产生正确折叠和生物功能性蛋白质的可靠方法。用于在昆虫细胞中产生异源蛋白的杆状病毒系统是本领域技术人员公知的。

可以根据任何适合的方法纯化由转化宿主产生的蛋白质。标准方法包括色谱法(例如离子交换、亲和力和筛分柱色谱)、离心、溶解度差异、或通过任何其他用于蛋白质纯化的标准技术。如六组氨酸、麦芽糖结合结构域、流感衣壳序列和谷胱甘肽-s-转移酶等亲和标签可以连接到蛋白质上，以便通过适合的亲和柱容易地纯化。分离的蛋白质也可以使用诸如蛋白质水解、质谱法(ms)、核磁共振(nmr)、高效液相色谱(hplc)和x射线晶体学等技术进行物理表征。

在某些实施方式中，可以使用市售的蛋白质浓度过滤器(例如，amicon或milliporepellicon超滤单元)首先浓缩来自将重组蛋白分泌到培养基中的表达系统的上清液。在浓缩步骤之后，浓缩物可以应用于适合的纯化基质。在某些实施方式中，可以使用阴离子交换树脂，例如具有侧链二乙基氨基乙基(deae)基团的基质或底物。该基质可以是丙烯酰胺、琼脂糖、葡聚糖、纤维素或通常用于蛋白纯化的其他类型。在某些实施方式中，可以采用阳离子交换步骤。适合的阳离子交换剂包括包含磺丙基或羧甲基的各种不溶性基质。在某些实施方式中，可以采用羟基磷灰石介质，其包括但不限于陶瓷羟基磷灰石(cht)。在某些实施方式中，可以使用采用疏水性rp-hplc介质的一个或多个反相hplc步骤，例如具有侧甲基或其他脂肪族基团的硅胶，以进一步纯化结合剂。上述各种组合的纯化步骤中的一些或全部也可用于提供均质的重组蛋白。

在某些实施方式中，可以分离细菌培养物中产生的重组蛋白，例如通过从细胞球团的初次提取，然后进行一次或多次浓缩、盐析、水相离子交换或大小排阻色谱步骤。hplc可用于最终纯化步骤。可以通过任何方便的方法破坏用于表达重组蛋白的微生物细胞，包括冻融循环、超声处理、机械破碎或使用细胞裂解剂。

在某些实施方式中，所述结合剂可用于多种缀合(即，免疫缀合物或放射性缀合物)或非缀合形式中的任何一种。在某些实施方式中，抗体可以非缀合形式使用以利用包括补体依赖性细胞毒性和抗体依赖性细胞毒性的受试者的天然防御机制以消除恶性或肿瘤细胞。

在某些实施方式中，所述结合剂与细胞毒性剂缀合。在某些实施方式中，细胞毒性试剂是化疗剂、其包括但不限于：甲氨蝶呤、阿霉素、多柔比星、美法仑、丝裂霉素c、苯丁酸氮芥、柔红霉素或其他嵌入剂。在某些实施方式中，细胞毒性剂是细菌、真菌、植物或动物来源的酶促活性毒素或其片段，其包括但不限于：白喉a链、白喉毒素的非结合活性片段、外毒素a链、蓖麻毒素a链、相思豆毒素a链、蒴莲根毒蛋白a链、α-帚曲霉素、油桐蛋白、香石竹毒蛋白、垂序登陆(phytolacaamericana)蛋白(papi、papii和pap-s)、苦瓜蛋白抑制剂、麻疯树毒蛋白、巴豆毒蛋白、肥皂草抑制剂、白树毒素、米托菌素、局限曲菌素、酚霉素、依诺霉素和新月毒素。在某些实施方式中，细胞毒性剂是产生放射性缀合物或放射性缀合抗体的放射性同位素。多种放射性核素可用于产生放射性缀合抗体，其包括但不限于：⁹⁰y、¹²⁵i、¹³¹i、¹²³i、¹¹¹in、¹³¹in、¹⁰⁵rh、¹⁵³sm、⁶⁷cu、⁶⁷ga、¹⁶⁶ho、¹⁷⁷lu、¹⁸⁶re、¹⁸⁸re和²¹²bi。在某些实施方式中，可产生抗体和诸如加利车霉素、美登木素生物碱、单端孢菌烯和cc1065等一种或多种小分子毒素，及具有毒素活性的那些毒素的衍生物的缀合物。在某些实施方式中，使用如下的多种制备抗体和细胞毒性剂的缀合物：诸如n-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫醇)丙酸酯(spdp)、亚氨基四氢噻吩(it)等双官能团蛋白-偶联剂、亚氨酸酯类的双官能团衍生物(诸如二甲基己二酰亚胺酯盐酸盐)、活性酯(诸如二琥珀酰亚胺基辛二酸酯)、醛类(诸如戊二醛)、双叠氮基化合物(诸如双(对叠氮苯甲酰基)己二胺)、双重氮衍生物(诸如双(对重氮基苯甲酰基)-乙二胺)、二异氰酸酯类(诸如甲苯2,6-二异氰酸酯)和双活性氟化合物(诸如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)。

在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂(例如，抗体或可溶性受体)是至少一种rspo蛋白(即，1种、2种、3种或4种rspo蛋白)的拮抗剂。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂抑制与其结合的rspo蛋白的活性。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂抑制至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约50％、至少约75％、至少约90％或约100％的与其结合的rspo蛋白的活性。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂抑制rspo3的活性。

在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂(例如，抗体或可溶性受体)抑制至少一种人rspo与适合受体的结合。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂抑制至少一种人rspo蛋白与一种或多种人lgr蛋白的结合。在某些实施方式中，至少一种rspo蛋白选自由rspo1、rspo2、rspo3和rspo4组成的组。在某些实施方式中，至少一种rspo蛋白是rspo3。在某些实施方式中，一种或多种人lgr蛋白选自由lgr4、lgr5和lgr6组成的组。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂抑制一种或多种rspo蛋白与lgr4、lgr5和/或lgr6的结合。在某些实施方式中，特定rspo与lgr蛋白的结合被rspo-lgr通路抑制剂抑制至少约10％、至少约25％、至少约50％、至少约75％、至少约90％或至少约95％。在某些实施方式中，抑制rspo与lgr蛋白的结合的rspo-lgr通路抑制剂还抑制rspo-lgr通路信号传导。在某些实施方式中，抑制人rspo通路信号传导的rspo-lgr通路抑制剂是抗体。在某些实施方式中，抑制人rspo-lgr通路信号传导的rspo-lgr通路抑制剂是抗rspo抗体。在某些实施方式中，抑制人rspo-lgr通路信号传导的rspo-lgr通路抑制剂是抗rspo3抗体。在某些实施方式中，抑制人rspo-lgr通路信号传导的rspo-lgr通路抑制剂是omp-131r010。在某些实施方式中，抑制人rspo-lgr通路信号传导的rspo-lgr通路抑制剂是包含omp-131r010的6个cdr的抗体。在某些实施方式中，抑制人rspo-lgr通路信号传导的rspo-lgr通路抑制剂是抗lgr抗体。在某些实施方式中，抑制人rspo-lgr通路信号传导的rspo-lgr通路抑制剂是lgr-fc可溶性受体。在某些实施方式中，抑制人rspo-lgr通路信号传导的rspo-lgr通路抑制剂是lgr5-fc可溶性受体。在某些实施方式中，lgr5-fc可溶性受体包含seqidno:57的氨基酸序列。在某些实施方式中，lgr5-fc可溶性受体包含seqidno:63的氨基酸序列。

在某些实施方式中，本文所述的rspo-lgr通路抑制剂(例如，抗体或可溶性受体)是至少一种人rspo蛋白的拮抗剂并且抑制rspo活性。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂抑制至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约50％、至少约75％、至少约90％或约100％的rspo活性。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂抑制一种、两种、三种或四种rspo蛋白的活性。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂抑制选自由rspo1、rspo2、rspo3和rspo4组成的组的至少一种人rspo蛋白的活性。在某些实施方式中，rspo-结合剂至少结合rspo3。在某些实施方式中，抑制人rspo活性的rspo-lgr通路抑制剂是抗体。在某些实施方式中，抑制人rspo活性的rspo-lgr通路抑制剂是抗rspo抗体。在某些实施方式中，抑制人rspo活性的rspo-lgr通路抑制剂是抗rspo3抗体。在某些实施方式中，抑制人rspo活性的rspo-lgr通路抑制剂是omp-131r010。在某些实施方式中，抑制人rspo活性的rspo-lgr通路抑制剂是包含omp-131r010的6个cdr的抗体。在某些实施方式中，抑制人rspo活性的rspo-lgr通路抑制剂是lgr-fc可溶性受体。在某些实施方式中，抑制人rspo活性的rspo-lgr通路抑制剂是lgr5-fc可溶性受体。在某些实施方式中，lgr5-fc可溶性受体包含seqidno:57的氨基酸序列。在某些实施方式中，lgr5-fc可溶性受体包含seqidno:63的氨基酸序列。

在某些实施方式中，本文所述的rspo-lgr通路抑制剂是至少一种人lgr蛋白的拮抗剂并且抑制lgr活性。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂抑制lgr至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约50％、至少约75％、至少约90％或约100％的活性。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂抑制选自由lgr4、lgr5和lgr6组成的组的至少一种人lgr蛋白的活性。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂抑制lgr5的活性。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是抗lgr抗体。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是包含88m1的3个重链cdr和/或88m1的3个轻链cdr的抗lgr抗体。在某些实施方式中，抗lgr抗体包含88m1的重链可变区和/或88m1的轻链可变区。

在某些实施方式中，本文所述的rspo-lgr通路抑制剂是至少一种人rspo蛋白的拮抗剂并且抑制rspo信号。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂抑制至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约50％、至少约75％、至少约90％或约100％的rspo信号。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂抑制一种、两种、三种或四种rspo蛋白信号。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂抑制选自由rspo1、rspo2、rspo3和rspo4组成的组的至少一种rspo蛋白的信号。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂至少抑制rspo3信号。在某些实施方式中，抑制rspo信号的rspo-lgr通路抑制剂是抗体。在某些实施方式中，抑制rspo信号的rspo-lgr通路抑制剂是抗rspo抗体。在某些实施方式中，抑制rspo信号的rspo-lgr通路抑制剂是抗rspo3抗体。在某些实施方式中，抑制rspo信号的rspo-lgr通路抑制剂是omp-131r010。在某些实施方式中，抑制rspo信号的rspo-lgr通路抑制剂是包含omp-131r010的6个cdr的抗体。在某些实施方式中，抑制rspo信号的rspo-lgr通路抑制剂是可溶性受体。在某些实施方式中，抑制rspo信号的rspo-lgr通路抑制剂是lgr-fc可溶性受体。在某些实施方式中，抑制rspo信号的rspo-lgr通路抑制剂是lgr5-fc可溶性受体。在某些实施方式中，lgr5-fc可溶性受体包含seqidno:57的氨基酸序列。在某些实施方式中，lgr5-fc可溶性受体包含seqidno:63的氨基酸序列。

在某些实施方式中，本文所述的rspo-lgr通路抑制剂是β-连环蛋白信号传导的拮抗剂。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂抑制至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约50％、至少约75％、至少约90％或约100％的β-连环蛋白信号传导。在某些实施方式中，抑制β-连环蛋白信号传导的rspo-lgr通路抑制剂是抗体。在某些实施方式中，抑制β-连环蛋白信号传导的rspo-lgr通路抑制剂是抗rspo抗体。在某些实施方式中，抑制β-连环蛋白信号传导的rspo-lgr通路抑制剂是抗rspo3抗体。在某些实施方式中，抑制β-连环蛋白信号传导的rspo-lgr通路抑制剂是omp-131r010。在某些实施方式中，抑制β-连环蛋白信号传导的rspo-lgr通路抑制剂是包含omp-131r010的6个cdr的抗体。在某些实施方式中，抑制β-连环蛋白信号传导的rspo-lgr通路抑制剂是抗lgr抗体。在某些实施方式中，抑制β-连环蛋白信号传导的rspo-lgr通路抑制剂是包含88m1的3个重链cdr和/或88m1的3个轻链cdr的抗lgr抗体。在某些实施方式中，抗lgr抗体包含88m1的重链可变区和/或88m1的轻链可变区。在某些实施方式中，抑制β-连环蛋白信号传导的rspo-lgr通路抑制剂是可溶性受体。在某些实施方式中，抑制β-连环蛋白信号传导的rspo-lgr通路抑制剂是lgr-fc可溶性受体。在某些实施方式中，抑制β-连环蛋白信号传导的rspo-lgr通路抑制剂是lgr5-fc可溶性受体。在某些实施方式中，lgr5-fc可溶性受体包含seqidno:57的氨基酸序列。在某些实施方式中，lgr5-fc可溶性受体包含seqidno:63的氨基酸序列。

在某些实施方式中，本文所述的rspo-lgr通路抑制剂抑制至少一种rspo蛋白与受体的结合。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂抑制至少一种人rspo蛋白与其一种或多种受体的结合。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂抑制至少一种rspo蛋白与至少一种lgr蛋白的结合。在某些实施方式中，rspo-结合剂抑制至少一种rspo蛋白与lgr4、lgr5和/或lgr6的结合。在某些实施方式中，至少一种rspo与至少一种lgr蛋白的结合被抑制了至少约10％、至少约25％、至少约50％、至少约75％、至少约90％或至少约95％。在某些实施方式中，抑制至少一种rspo与至少一种lgr蛋白的结合的rspo-lgr通路抑制剂进一步抑制rspo-lgr通路信号传导和/或β-连环蛋白信号传导。在某些实施方式中，抑制至少一种人rspo与至少一种lgr蛋白的结合的rspo-lgr通路抑制剂是抗体。在某些实施方式中，抑制至少一种人rspo与至少一种lgr蛋白的结合的rspo-lgr通路抑制剂是抗lgr抗体。在某些实施方式中，抑制至少一种人rspo与至少一种lgr蛋白的结合的rspo-lgr通路抑制剂是包含88m1的3个重链cdr和/或88m1的3个轻链cdr的抗lgr抗体。在某些实施方式中，抗lgr抗体包含88m1的重链可变区和/或88m1的轻链可变区。在某些实施方式中，抑制至少一种人rspo与至少一种lgr蛋白的结合的rspo-lgr通路抑制剂是可溶性受体。在某些实施方式中，抑制至少一种人rspo与至少一种lgr蛋白的结合的rspo-lgr通路抑制剂是lgr-fc可溶性受体。在某些实施方式中，抑制至少一种人rspo与至少一种lgr蛋白的结合的rspo-lgr通路抑制剂是lgr5-fc可溶性受体。在某些实施方式中，lgr5-fc可溶性受体包含seqidno:57的氨基酸序列。在某些实施方式中，lgr5-fc可溶性受体包含seqidno:63的氨基酸序列。

在某些实施方式中，本文所述的rspo-lgr通路抑制剂阻断至少一种rspo与受体的结合。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂阻断至少一种人rspo蛋白与其一种或多种受体的结合。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂阻断至少一种rspo与至少一种lgr蛋白的结合。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂阻断至少一种rspo蛋白与lgr4、lgr5和/或lgr6的结合。在某些实施方式中，至少一种rspo与至少一种lgr蛋白的结合被阻断至少约10％、至少约25％、至少约50％、至少约75％、至少约90％或至少约95％。在某些实施方式中，阻断至少一种rspo蛋白与至少一种lgr蛋白的结合的rspo-lgr通路抑制剂进一步抑制rspo-lgr通路信号传导和/或β-连环蛋白信号传导。在某些实施方式中，阻断至少一种人rspo与至少一种lgr蛋白的结合的rspo-lgr通路抑制剂是抗体。在某些实施方式中，阻断至少一种人rspo与至少一种lgr蛋白的结合的rspo-lgr通路抑制剂是抗lgr抗体。在某些实施方式中，阻断至少一种人rspo与至少一种lgr蛋白的结合的rspo-lgr通路抑制剂是包含88m1的3个重链cdr和/或88m1的3个轻链cdr的抗lgr抗体。在某些实施方式中，抗lgr抗体包含88m1的重链可变区和/或88m1的轻链可变区。在某些实施方式中，阻断至少一种人rspo与至少一种lgr蛋白的结合的rspo-lgr通路抑制剂是可溶性受体。在某些实施方式中，阻断至少一种人rspo与至少一种lgr蛋白的结合的rspo-lgr通路抑制剂是lgr-fc可溶性受体。在某些实施方式中，阻断至少一种人rspo与至少一种lgr蛋白的结合的rspo-lgr通路抑制剂是lgr5-fc可溶性受体。在某些实施方式中，lgr5-fc可溶性受体包含seqidno:57的氨基酸序列。在某些实施方式中，lgr5-fc可溶性受体包含seqidno:63的氨基酸序列。

在某些实施方式中，本文所述的rspo-lgr通路抑制剂抑制rspo通路信号传导。应当理解的是，在某些实施方式中，抑制rspo-lgr通路信号的rspo-lgr通路抑制剂可以抑制rspo-lgr信号通路中的一种或多种受体的信号传导，但不一定抑制所有受体的信号传导。在某些替代实施方式中，可抑制所有人受体的rspo通路信号传导。在某些实施方式中，抑制选自由lgr4、lgr5和lgr6组成的组的一种或多种受体的rspo通路信号传导。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂对rspo-lgr通路信号传导的抑制是使rspo-lgr通路信号传导的水平降低至少约10％、至少约25％、至少约50％、至少约75％、至少约90％或至少约95％。在某些实施方式中，抑制rspo-lgr通路信号传导的rspo-lgr通路抑制剂是抗体。在某些实施方式中，抑制rspo-lgr通路信号传导的rspo-lgr通路抑制剂是抗lgr抗体。在某些实施方式中，抑制rspo-lgr通路信号传导的rspo-lgr通路抑制剂是包含88m1的3个重链cdr和/或88m1的3个轻链cdr的抗lgr抗体。在某些实施方式中，抗lgr抗体包含88m1的重链可变区和/或88m1的轻链可变区。在某些实施方式中，抑制rspo-lgr通路信号传导的rspo-lgr通路抑制剂是可溶性受体。在某些实施方式中，抑制rspo-lgr通路信号传导的rspo-lgr通路抑制剂是lgr-fc可溶性受体。在某些实施方式中，抑制rspo-lgr通路信号传导的rspo-lgr通路抑制剂是lgr5-fc可溶性受体。在某些实施方式中，lgr5-fc可溶性受体包含seqidno:57的氨基酸序列。在某些实施方式中，lgr5-fc可溶性受体包含seqidno:63的氨基酸序列。

在某些实施方式中，本文所述的rspo-lgr通路抑制剂抑制β-连环蛋白的激活。应当理解的是，在某些实施方式中，抑制β-连环蛋白激活的rspo-lgr通路抑制剂可抑制一种或多种受体对β-连环蛋白的激活，但不一定抑制所有受体对β-连环蛋白的激活。在某些替代实施方式中，可抑制全部人受体对β-连环蛋白的激活。在某些实施方式中，抑制了选自由lgr4、lgr5和lgr6组成的组的一种或多种受体对β-连环蛋白的激活。在某些实施方式中，rspo-结合剂或lgr-结合剂对β-连环蛋白激活的抑制是使β-连环蛋白的活化水平降低至少约10％、至少约25％、至少约50％、至少约75％、至少约90％或至少约95％。在某些实施方式中，抑制β-连环蛋白激活的rspo-lgr通路抑制剂是抗体。在某些实施方式中，抑制β-连环蛋白激活的rspo-lgr通路抑制剂是抗lgr抗体。在某些实施方式中，抑制β-连环蛋白激活的rspo-lgr通路抑制剂是包含88m1的3个重链cdr和/或88m1的3个轻链cdr的抗lgr抗体。在某些实施方式中，抗lgr抗体包含88m1的重链可变区和/或88m1的轻链可变区。在某些实施方式中，抑制β-连环蛋白激活的rspo-lgr通路抑制剂是可溶性受体。在某些实施方式中，抑制β-连环蛋白激活的rspo-lgr通路抑制剂是lgr-fc可溶性受体。在某些实施方式中，抑制β-连环蛋白激活的rspo-lgr通路抑制剂是lgr5-fc可溶性受体。在某些实施方式中，lgr5-fc可溶性受体包含seqidno:57的氨基酸序列。在某些实施方式中，lgr5-fc可溶性受体包含seqidno:63的氨基酸序列。

在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂具有以下一种或多种作用：抑制肿瘤细胞增殖、抑制肿瘤生长、降低肿瘤中的癌干细胞频率、降低肿瘤致瘤性、通过降低肿瘤中的癌干细胞频率降低肿瘤致瘤性、触发细胞肿瘤细胞死亡、诱导肿瘤中的细胞分化、将致瘤性细胞分化为非致瘤状态、在肿瘤细胞中诱导分化标志物的表达、预防肿瘤细胞的转移或降低肿瘤细胞的存活。

在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂能够抑制肿瘤生长和/或减小肿瘤大小。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂能够在体内(例如，在异种移植小鼠模型和/或在患有癌症人类中)抑制肿瘤生长和/或减小肿瘤大小。在某些实施方式中，所述所述肿瘤是选自由以下组成的组中的肿瘤：结肠直肠肿瘤、结肠肿瘤、胰腺肿瘤、肺肿瘤、卵巢肿瘤、肝脏肿瘤、乳腺肿瘤、肾脏肿瘤、前列腺肿瘤、胃肠肿瘤、黑素瘤、宫颈肿瘤、膀胱肿瘤、胶质母细胞瘤和头颈肿瘤。在某些实施方式中，所述所述肿瘤是乳腺肿瘤。在某些实施方式中，所述所述肿瘤是卵巢肿瘤。在某些实施方式中，所述所述肿瘤是肺肿瘤。在某些实施方式中，所述所述肿瘤是胰腺肿瘤。在某些实施方式中，所述所述肿瘤是rspo-依赖性肿瘤、lgr-依赖性肿瘤或β-连环蛋白-依赖性肿瘤。

在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂能够降低肿瘤的致瘤性。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂能够在诸如小鼠异种移植模型等动物模型中降低包含癌干细胞的肿瘤的致瘤性。在某些实施方式中，所述肿瘤中癌干细胞的数量或频率减少至少约2倍、约3倍、约5倍、约10倍、约50倍、约100倍或约1000倍。在某些实施方式中，通过使用动物模型的有限稀释检验来确定癌干细胞数量或频率的减少。关于使用有限稀释检验来确定肿瘤中癌干细胞数量或频率的减少的其他实例和指南可以见于例如可在国际公开号wo2008/042236及美国专利公开号2008/0064049和2008/0178305，此处出于所有目的以其整体通过引用并入本文。

在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂在体内活化至少1小时、至少约2小时、至少约5小时、至少约10小时、至少约24小时、至少约2天、至少约3天、至少约1周或至少约2周。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是在体内活化至少1小时、至少约2小时、至少约5小时、至少约10小时、至少约24小时、至少约2天、至少约3天、至少约1周或至少约2周的igg(例如，igg1或igg2)抗体。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是在体内活化至少1小时、至少约2小时、至少约5小时、至少约10小时、至少约24小时、至少约2天、至少约3天、至少约1周或至少约2周的融合蛋白。

在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂在小鼠、食蟹猴或人类中具有至少约5小时、至少约10小时、至少约24小时、至少约2天、至少约3天、至少约1周或至少约2周的循环半衰期。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是在小鼠、食蟹猴或人类中具有至少约5小时、至少约10小时、至少约24小时、至少约2天、至少约3天、至少约1周或至少约2周的循环半衰期的igg(例如，igg1或igg2)抗体。在某些实施方式中，rspo-lgr通路抑制剂是在小鼠、食蟹猴或人类中具有至少约5小时、至少约10小时、至少约24小时、至少约2天、至少约3天、至少约1周或至少约2周的循环半衰期的融合蛋白。增加(或减少)诸如多肽和抗体等试剂的半衰期的方法是本领域已知的。例如，增加igg抗体循环半衰期的已知方法包括在fc区引入突变，其增加所述抗体与新生fc受体(fcrn)的ph-依赖性结合。增加缺少fc区的抗体片段循环半衰期的已知方法包括诸如peg化等技术。

iv.有丝分裂抑制剂

本文描述了抑制肿瘤生长、减小肿瘤大小和/或治疗癌症的方法，所述方法包括组合施用rspo-lgr通路抑制剂和有丝分裂抑制剂。有丝分裂抑制剂或抗有丝分裂剂包括但不限于：微管结合剂、微管酶抑制剂、有丝分裂检查点激酶(chk)抑制剂、和有丝分裂酶抑制剂。微管结合剂包括但不限于：紫杉烷、紫杉醇、长春花生物碱、生物碱、埃博霉素和软海绵素。

在某些实施方式中，有丝分裂抑制剂选自由紫杉烷、长春花生物碱、埃博霉素或软海绵素组成的组。在某些实施方式中，有丝分裂抑制剂是紫杉烷。紫杉烷类通过抑制微管解聚(即，稳定微管聚合物)来诱导有丝分裂细胞-周期阻滞。有丝分裂细胞-周期阻滞导致有丝分裂停滞和细胞凋亡。在某些实施方式中，紫杉烷选自由以下组成的组：紫杉醇(taxol)、白蛋白结合型紫杉醇(abraxane)、多西他赛(taxotere)、卡巴他赛(jevtana)、替西他赛、拉罗星、奥曲他啶、dha-紫杉醇、pg-紫杉醇和它们药学上可接受的盐、酸或衍生物。在某些实施方式中，紫杉烷是紫杉醇。在某些实施方式中，紫杉烷是白蛋白结合型紫杉醇。在某些实施方式中，有丝分裂抑制剂是长春花生物碱。在某些实施方式中，长春花生物碱选自由以下组成的组：长春花碱(velban)、长春新碱(marqibo)、长春瑞滨(navelbine)、长春蔓佛明、长春地辛、长春氟宁、小长春蔓辛和它们药学上可接受的盐、酸或衍生物。在某些实施方式中，有丝分裂抑制剂是诸如新霉素等生物碱。在某些实施方式中，有丝分裂抑制剂是埃博霉素。在某些实施方式中，埃博霉素是伊沙匹隆(ixempra)。在某些实施方式中，有丝分裂抑制剂是软海绵素b。在某些实施方式中，软海绵素是甲磺酸艾日布林(halaven)类似物。在某些实施方式中，有丝分裂抑制剂是微管酶抑制剂。在某些实施方式中，微管酶抑制剂选自由以下组成的组：arq621、emd534085和ly2523355。在某些实施方式中，有丝分裂抑制剂是有丝分裂检查点激酶抑制剂。在某些实施方式中，有丝分裂检查点激酶抑制剂是ly2603618。在某些实施方式中，有丝分裂抑制剂是有丝分裂酶抑制剂。在某些实施方式中有丝分裂酶抑制剂是auroraa或plk1的抑制剂。在某些实施方式中，有丝分裂酶抑制剂选自由以下组成的组：mln8237、enmd-0276、azd1152、gsk1070916a、pha-739358、sns-314、cyc116、pf-03814735、at9238、as703569和bi6727。

实施例

实施例1

抗rspo3抗体omp-131r010与化疗剂组合在体内卵巢肿瘤模型中的活性

本文所述的oncomed异种移植物模型是在昂考梅德药品有限公司从最小传代的患者来源的肿瘤标本中建立。肿瘤标本由病理学家检查，并被分类为特定肿瘤类型。除非对任何特定肿瘤进行进一步分析并认为有必要重新分类，否则oncomed遵循这些分类。

将异种移植物omp-ov19卵巢肿瘤细胞(1×10⁵个细胞)的单细胞悬液皮下注射到nod/scid小鼠中。允许肿瘤生长39天，直到达到大约为120mm³的平均体积。将携带肿瘤的小鼠随机分为四组(n＝8至9只动物/组)。携带肿瘤的小鼠用以下治疗：(i)对照抗体，(ii)仅紫杉醇，(iii)在同一天给药的抗rspo3抗体omp-131r010加紫杉醇或(iv)抗rspo3抗体omp-131r010加紫杉醇(其中在施用紫杉醇前2天施用所述抗体)。抗体以25mg/kg给药，并且每隔一周施用一次。紫杉醇以20mg/kg给药，并且每隔一周施用一次。在治疗后的指定天数测量肿瘤体积，并且显示为图1a中的平均值±sem。图1b中显示第61天的两个组合治疗组中的各动物的肿瘤体积。出乎意料的是，在施用紫杉醇前施用omp-131r010的omp-131r010和紫杉醇的交错施用导致比在同一天给药更大地抑制肿瘤生长。实际上，omp-131r010和紫杉醇的交错施用不仅抑制肿瘤生长，而且在治疗过程中实际上减小了肿瘤的大小。

实施例2

抗rspo3抗体omp-131r010和化疗剂组合在体内肺癌模型中的活性

将异种移植物omp-lu77肺肿瘤细胞(5×10⁴个细胞)的单细胞悬液皮下注射到nod/scid小鼠中。允许肿瘤生长34天，直到达到大约为125mm³的平均体积。将携带肿瘤的小鼠随机分为四组(n＝9只动物/组)。携带的肿瘤小鼠用以下治疗：(i)对照抗体，(ii)仅紫杉醇，(iii)在同一天给药的抗rspo3抗体omp-131r010加紫杉醇或(iv)抗rspo3抗体omp-131r010加紫杉醇(其中在施用紫杉醇前2天施用所述抗体)。抗体以25mg/kg给药，紫杉醇以20mg/kg给药，两种试剂均每3周施用一次。在治疗后的指定天数测量肿瘤体积。结果示于图2。如实施例1的卵巢肿瘤模型所见，在施用紫杉醇前施用omp-131r010的omp-131r010和紫杉醇的交错施用导致比在同一天给药更大地抑制肿瘤生长。实际上，omp-131r010和紫杉醇的交错施用不仅抑制肿瘤生长，而且在治疗过程中实际上减小了肿瘤的大小。

实施例3

抗rspo3抗体omp-131r010和化疗剂组合在体内结肠直肠癌模型中的活性

将异种移植物omp-c8结肠肿瘤细胞(5×10⁴个细胞)的单细胞悬液皮下注射到nod/scid小鼠中。omp-c8结肠肿瘤细胞在apc基因中包含失活突变并且表达低水平的rspo3(数据未示出)。允许肿瘤生长23天，直到达到大约为100mm³的平均体积。将携带肿瘤的小鼠随机分为四组(n＝9只动物/组)。携带的肿瘤小鼠用以下治疗：(i)对照抗体，(ii)仅白蛋白结合型紫杉醇(abraxane)，(iii)在同一天给药的抗rspo3抗体omp-131r010加白蛋白结合型紫杉醇，(iv)抗rspo3抗体omp-131r010加白蛋白结合型紫杉醇(其中在施用紫杉醇前2天施用所述抗体)，(v)氟尿嘧啶和伊立替康，(vi)在同一天给药的抗rspo3抗体omp-131r010加氟尿嘧啶和伊立替康，或(vii)抗rspo3抗体omp-131r010加氟尿嘧啶和伊立替康(其中在施用氟尿嘧啶和伊立替康前2天施用所述抗体)。抗体以25mg/kg每周给药，紫白结合型紫杉醇以30mg/kg给药，氟尿嘧啶以50mg/kg给药，且伊立替康以5mg/kg给药。抗体每隔一周施用一次且化学治疗每周施用。在治疗后的指定天数测量肿瘤体积。

结果示于图3a和3b中。在施用白蛋白结合型紫杉醇前施用omp-131r010的omp-131r010和白蛋白结合型紫杉醇的交错施用，导致比在同一天给药更大地抑制肿瘤生长。与此相反，omp-131r010与氟尿嘧啶和伊立替康组合的交错施用未导致比在同一天给药更大地抑制肿瘤生长。此外，以连续方式的omp-131r010和白蛋白结合型紫杉醇的组合施用比omp-131r010与不是有丝分裂抑制剂的化疗剂的组合在抑制肿瘤生长方面具有更高的功效。

这些研究表明，给药顺序可以对肿瘤生长抑制的程度具有显著影响，特别是在相继施用rspo-lgr通路抑制剂和紫杉醇的情况下。此外，这些研究表明紫杉烷类与抗rspo3抗体组合可能是结肠癌的新治疗选择，因为通常不认为紫杉烷类是结肠癌或结肠直肠癌治疗的标准治疗药物。

应理解的是，本文描述的实施例和实施方式仅出于说明性目的，本领域技术人员据此可以想到多种修改或改变，且这些修改和改变也包含在本申请的主旨和范围内。

本文引用的所有公开物、专利、专利申请、互联网网址以及登录号/数据库序列(包括多核苷酸和多肽序列)出于所有目的通过引用并入本文，其程度等同于将每个单独的公开物、专利、专利申请、互联网网址或登录号/数据库序列均专门且单独地指明如此通过引用并入。

以下是本申请公开的序列：

具有信号序列的人rspo1氨基酸序列(seqidno:1)

mrlglcvvalvlswthltissrgikgkrqrrisaegsqacakgcelcsevngclkcspklfillerndirqvgvclpscppgyfdarnpdmnkcikckiehceacfshnfctkckeglylhkgrcypacpegssaangtmecsspaqcemsewspwgpcskkqqlcgfrrgseertrrvlhapvgdhaacsdtketrrctvrrvpcpegqkrrkggqgrrenanrnlarkeskeagagsrrrkgqqqqqqqgtvgpltsagpa

具有信号序列的人rspo2氨基酸序列(seqidno:2)

mqfrlfsfaliilncmdyshcqgnrwrrskrasyvsnpickgclscskdngcsrcqqklffflrregmrqygeclhscpsgyyghrapdmnrcarcriencdscfskdfctkckvgfylhrgrcfdecpdgfapleetmecvegcevghwsewgtcsrnnrtcgfkwgletrtrqivkkpvkdtipcptiaesrrckmtmrhcpggkrtpkakekrnkkkkrklieraqeqhsvflatdranq

具有信号序列的人rspo3氨基酸序列(seqidno:3)

mhlrliswlfiilnfmeyigsqnasrgrrqrrmhpnvsqgcqggcatcsdyngclsckprlffalerigmkqigvclsscpsgyygtrypdinkctkckadcdtcfnknfctkcksgfylhlgkcldncpegleannhtmecvsivhcevsewnpwspctkkgktcgfkrgtetrvreiiqhpsakgnlcpptnetrkctvqrkkcqkgergkkgrerkrkkpnkgeskeaipdskslesskeipeqrenkqqqkkrkvqdkqksvsvstvh

具有信号序列的人rspo4氨基酸序列(seqidno:4)

mraplcllllvahavdmlalnrrkkqvgtglggnctgciicseengcstcqqrlflfirregirqygkclhdcppgyfgirgqevnrckkcgatcescfsqdfcirckrqfylykgkclptcppgtlahqntrecqgecelgpwggwspcthngktcgsawglesrvreagragheeaatcqvlsesrkcpiqrpcpgerspgqkkgrkdrrprkdrkldrrldvrprqpglqp

89m5重链cdr1(seqidno:5)

tgytmh

89m5重链cdr2(seqidno:6)

ginpnnggttynqnfkg

89m5重链cdr3(seqidno:7)

kefsdgyyffay

89m5轻链cdr1(seqidno:8)

kasqdvifava

89m5轻链cdr2(seqidno:9)

wastrht

89m5轻链cdr3(seqidno:10)

qqhystpw

h89m5-h8l5重链可变区氨基酸序列(seqidno:11)

evqlvqsgaevkkpgeslrisckgsgysftgytmhwvrqmpgkglewmgginpnnggttynqnfkghvtisadksistaylqwsslkasdtamyycarkefsdgyyffaywgqgtlvtvss

h89m5-h8l5轻链可变区氨基酸序列(seqidno:12)

divmtqspdslavslgeratinckasqdvifavawyqqkpgqppklliywastrhtgvpdrfsgsgsgtdftltisslqaedvavyycqqhystpwtfgggtkveik

具有加下划线的预测信号序列的h89m5-h8l5重链氨基酸序列(seqidno:13)

mdwtwrilflvaaatgahsevqlvqsgaevkkpgeslrisckgsgysftgytmhwvrqmpgkglewmgginpnnggttynqnfkghvtisadksistaylqwsslkasdtamyycarkefsdgyyffaywgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk

无预测信号序列的h89m5-h8l5重链氨基酸序列(seqidno:14)

evqlvqsgaevkkpgeslrisckgsgysftgytmhwvrqmpgkglewmgginpnnggttynqnfkghvtisadksistaylqwsslkasdtamyycarkefsdgyyffaywgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk

具有加下划线的预测信号序列的h89m5-h8l5轻链氨基酸序列(seqidno:15)

mvlqtqvfislllwisgaygdivmtqspdslavslgeratinckasqdvifavawyqqkpgqppklliywastrhtgvpdrfsgsgsgtdftltisslqaedvavyycqqhystpwtfgggtkveikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsntltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec

无预测信号序列的h89m5-h8l5轻链氨基酸序列(seqidno:16)

divmtqspdslavslgeratinckasqdvifavawyqqkpgqppklliywastrhtgvpdrfsgsgsgtdftltisslqaedvavyycqqhystpwtfgggtkveikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsntltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec

130m23重链cdr1(seqidno:17)

ssyams

130m23重链cdr2(seqidno:18)

sissggstyypdsvkg

130m23重链cdr3(seqidno:19)

rggdpgvyngdyedamdy

130m23轻链cdr1(seqidno:20)

kasqdvssava

130m23轻链cdr2(seqidno:21)

wastrht

130m23轻链cdr3(seqidno:22)

qqhystp

h130m23-h1l6重链可变区氨基酸序列(seqidno:23)

evqlvesggglvkpggslrlscaasgftfssyamswvrqapgkglewvssissggstyypdsvkgrftisrdnaknslylqmnslraedtavyycarggdpgvyngdyedamdywgqgttvtvss

h130m23-h1l6轻链可变区氨基酸序列(seqidno:24)

diqmtqspsslsasvgdrvtitckasqdvssavawyqqkpgkapklliywastrhtgvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqqhystpwtfgqgtkveik

具有加下划线的预测信号序列的h130m23-h1l6重链氨基酸序列(seqidno:25)

melglrwvflvailegvqcevqlvesggglvkpggslrlscaasgftfssyamswvrqapgkglewvssissggstyypdsvkgrftisrdnaknslylqmnslraedtavyycarggdpgvyngdyedamdywgqgttvtvssastkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktverkccvecppcpappvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstfrvvsvltvvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk

无预测信号序列的h130m23-h1l6重链氨基酸序列(seqidno:26)

evqlvesggglvkpggslrlscaasgftfssyamswvrqapgkglewvssissggstyypdsvkgrftisrdnaknslylqmnslraedtavyycarggdpgvyngdyedamdywgqgttvtvssastkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktverkccvecppcpappvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstfrvvsvltvvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk

具有加下划线的预测信号序列的h130m23-h1l6轻链氨基酸序列(seqidno:27)

mgikmesqiqafvfvflwlsgvdgdiqmtqspsslsasvgdrvtitckasqdvssavawyqqkpgkapklliywastrhtgvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqqhystpwtfgqgtkveikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsntltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec

无预测信号序列的h130m23-h1l6轻链氨基酸序列(seqidno:28)

diqmtqspsslsasvgdrvtitckasqdvssavawyqqkpgkapklliywastrhtgvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqqhystpwtfgqgtkveikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsntltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec

131r010重链cdr1(seqidno:29)

dysih

131r010重链cdr2(seqidno:30)

yiypsngdsgynqkfk

131r010重链cdr3(seqidno:31)

tyfannfd

131r010替代重链cdr3(seqidno:32)

atyfannfdy

131r010轻链cdr1(seqidno:33)

kasqsvdydgdsymn

131r010轻链cdr2(seqidno:34)

aasnles

131r010替代轻链cdr2(seqidno:35)

aas

131r010轻链cdr3(seqidno:36)

qqsnedplt

131r010替代轻链cdr3(seqidno:37)

qqsnedpltf

131r010重链可变区氨基酸序列(seqidno:38)

qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgytftdysihwvrqapgqglewigyiypsngdsgynqkfknrvtmtrdtststaymelsrlrsedtavyycatyfannfdywgqgttltvss

131r010轻链可变区氨基酸序列(seqidno:39)

diqmtqspsslsasvgdrvtitckasqsvdydgdsymnwyqqkpgkapklliyaasnlesgvpsrfsgsgsgtdftltispvqaedfatyycqqsnedpltfgagtklelkr

具有加下划线的预测信号序列的131r010重链氨基酸序列(seqidno:40)

mkhlwfflllvaaprwvlsqvqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgytftdysihwvrqapgqglewigyiypsngdsgynqkfknrvtmtrdtststaymelsrlrsedtavyycatyfannfdywgqgttltvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk

无预测信号序列的131r010重链氨基酸序列(seqidno:41)

qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgytftdysihwvrqapgqglewigyiypsngdsgynqkfknrvtmtrdtststaymelsrlrsedtavyycatyfannfdywgqgttltvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk

具有加下划线的预测信号序列的131r010轻链氨基酸序列(seqidno:42)

mkhlwfflllvaaprwvlsdiqmtqspsslsasvgdrvtitckasqsvdydgdsymnwyqqkpgkapklliyaasnlesgvpsrfsgsgsgtdftltispvqaedfatyycqqsnedpltfgagtklelkrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec

无预测信号序列的131r010轻链氨基酸序列(seqidno:43)

diqmtqspsslsasvgdrvtitckasqsvdydgdsymnwyqqkpgkapklliyaasnlesgvpsrfsgsgsgtdftltispvqaedfatyycqqsnedpltfgagtklelkrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec

h89m5-h2l2重链可变区氨基酸序列(seqidno:44)

qvqlvqsgaevkkpgasvkvscktsgytftgytmhwvrqapgqrlewmgginpnnggttynqnfkgrvtitrdtsastaymelsslrsedtavyycarkefsdgyyffaywgqgtlvtvss

h89m5-h2l2轻链可变区氨基酸序列(seqidno:45)

diqmtqspsslsasvgdrvtitckasqdvifavawyqqkpgkapklliywastrhtgvpsrfsgsgsgtdytltisslqpedfatyycqqhystpwtfgggtkveik

具有加下划线的预测信号序列的h89m5-h2l2重链氨基酸序列(seqidno:46)

mdwtwrilflvaaatgahsqvqlvqsgaevkkpgasvkvscktsgytftgytmhwvrqapgqrlewmgginpnnggttynqnfkgrvtitrdtsastaymelsslrsedtavyycarkefsdgyyffaywgqgtlvtvssastkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktverkccvecppcpappvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstfrvvsvltvvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk

无预测信号序列的h89m5-h2l2重链氨基酸序列(seqidno:47)

qvqlvqsgaevkkpgasvkvscktsgytftgytmhwvrqapgqrlewmgginpnnggttynqnfkgrvtitrdtsastaymelsslrsedtavyycarkefsdgyyffaywgqgtlvtvssastkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktverkccvecppcpappvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstfrvvsvltvvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk

具有加下划线的预测信号序列的h89m5-h2l2轻链氨基酸序列(seqidno:48)

mdmrvpaqllgllllwlrgarcdiqmtqspsslsasvgdrvtitckasqdvifavawyqqkpgkapklliywastrhtgvpsrfsgsgsgtdytltisslqpedfatyycqqhystpwtfgggtkveikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsntltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec

无预测信号序列的h89m5-h2l2轻链氨基酸序列(seqidno:49)

diqmtqspsslsasvgdrvtitckasqdvifavawyqqkpgkapklliywastrhtgvpsrfsgsgsgtdytltisslqpedfatyycqqhystpwtfgggtkveikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsntltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec

h130m23-h1l2轻链可变区氨基酸序列(seqidno:50)

diqmtqspsslsasvgdrvtitckasqdvssavawyqqkpgkapklliywastrhtgvpsrfsgsgsgtdftltissvqaedfatyycqqhystpwtfgqgtkveik

具有加下划线的预测信号序列的h130m23-h1l2轻链氨基酸序列(seqidno:51)

mkyllptaaagllllaaqpamadiqmtqspsslsasvgdrvtitckasqdvssavawyqqkpgkapklliywastrhtgvpsrfsgsgsgtdftltissvqaedfatyycqqhystpwtfgqgtkveikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsntltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec

无预测信号序列的h130m23-h1l2轻链氨基酸序列(seqidno:52)

diqmtqspsslsasvgdrvtitckasqdvssavawyqqkpgkapklliywastrhtgvpsrfsgsgsgtdftltissvqaedfatyycqqhystpwtfgqgtkveikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsntltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec

人lgr4蛋白序列(nm_018490；seqidno:53)

mpgplgllcflalgllgsagpsgaapplcaapcscdgdrrvdcsgkgltavpeglsaftqaldismnnitqlpedafknfpfleelqlagndlsfihpkalsglkelkvltlqnnqlktvpseairglsalqslrldanhitsvpedsfeglvqlrhlwlddnsltevpvhplsnlptlqaltlalnkissipdfaftnlsslvvlhlhnnkirslsqhcfdgldnletldlnynnlgefpqaikalpslkelgfhsnsisvipdgafdgnpllrtihlydnplsfvgnsafhnlsdlhslvirgasmvqqfpnltgtvhlesltltgtkissipnnlcqeqkmlrtldlsynnirdlpsfngchaleeislqrnqiyqikegtfqglislrildlsrnliheihsrafatlgpitnldvsfneltsfpteglnglnqlklvgnfklkealaakdfvnlrslsvpyayqccafwgcdsyanlntednslqdhsvaqekgtadaanvtstleneehsqiiihctpstgafkpceyllgswmirltvwfiflvalffnllvilttfasctslpssklfiglisvsnlfmgiytgiltfldavswgrfaefgiwwetgsgckvagflavfssesaifllmlatverslsakdimkngksnhlkqfrvaallaflgatvagcfplfhrgeysasplclpfptgetpslgftvtlvllnslafllmaviytklycnlekedlsensqssmikhvawliftnciffcpvaffsfaplitaisispeimksvtliffplpaclnpvlyvffnpkfkedwkllkrrvtkksgsvsvsissqggcleqdfyydcgmyshlqgnltvcdccesflltkpvsckhlikshscpalavascqrpegywsdcgtqsahsdyadeedsfvsdssdqvqacgracfyqsrgfplvryaynlprvkd

人lgr5蛋白序列(seqidno:54)

mdtsrlgvllslpvllqlatggssprsgvllrgcpthchcepdgrmllrvdcsdlglselpsnlsvftsyldlsmnnisqllpnplpslrfleelrlagnaltyipkgaftglyslkvlmlqnnqlrhvptealqnlrslqslrldanhisyvppscfsglhslrhlwlddnalteipvqafrslsalqamtlalnkihhipdyafgnlsslvvlhlhnnrihslgkkcfdglhsletldlnynnldefptairtlsnlkelgfhsnnirsipekafvgnpslitihfydnpiqfvgrsafqhlpelrtltlngasqitefpdltgtanlesltltgaqisslpqtvcnqlpnlqvldlsynlledlpsfsvcqklqkidlrhneiyeikvdtfqqllslrslnlawnkiaiihpnafstlpslikldlssnllssfpitglhglthlkltgnhalqslissenfpelkviempyayqccafgvcenaykisnqwnkgdnssmddlhkkdagmfqaqderdledflldfeedlkalhsvqcspspgpfkpcehlldgwlirigvwtiavlaltcnalvtstvfrsplyispiklligviaavnmltgvssavlagvdaftfgsfarhgawwengvgchvigflsifasessvflltlaalergfsvkysakfetkapfsslkviillcallaltmaavpllggskygasplclplpfgepstmgymvalillnslcflmmtiaytklycnldkgdleniwdcsmvkhialllftncilncpvaflsfsslinltfispevikfillvvvplpaclnpllyilfnphfkedlvslrkqtyvwtrskhpslmsinsddvekqscdstqalvtftsssitydlppssvpspaypvteschlssvafvpcl

人lgr6蛋白序列(bc047905；seqidno:55)

mgrprltlvcqvsiiisardlsmnnltelqpglfhhlrfleelrlsgnhlshipgqafsglyslkilmlqnnqlggipaealwelpslqslrldanlislvpersfeglsslrhlwlddnalteipvralnnlpalqamtlalnrishipdyafqnltslvvlhlhnnriqhlgthsfeglhnletldlnynklqefpvairtlgrlqelgfhnnnikaipekafmgnpllqtihfydnpiqfvgrsafqylpklhtlslngamdiqefpdlkgttsleiltltragirllpsgmcqqlprlrvlelshnqieelpslhrcqkleeiglqhnriweigadtfsqlsslqaldlswnairsihpeafstlhslvkldltdnqlttlplaglgglmhlklkgnlalsqafskdsfpklrilevpyayqccpygmcasffkasgqweaedlhlddeesskrplgllarqaenhydqdldelqlemedskphpsvqcsptpgpfkpceylfeswgirlavwaivllsvlcnglvlltvfaggpvplppvkfvvgaiagantltgiscgllasvdaltfgqfseygarwetglgc大鼠gflavlgseasvllltlaavqcsvsvscvraygkspslgsvragvlgclalaglaaalplasvgeygasplclpyappegqpaalgftvalvmmnsfcflvvagayiklycdlprgdfeavwdcamvrhvawlifadgllycpvaflsfasmlglfpvtpeavksvllvvlplpaclnpllyllfnphfrddlrrlrpragdsgplayaaageleksscdstqalvafsdvdlileaseagrppgletygfpsvtliscqqpgaprlegshcvepegnhfgnpqpsmdgelllraegstpaggglsggggfqpsglafashv

lgr5ecd22-564位氨基酸(seqidno:56)

gssprsgvllrgcpthchcepdgrmllrvdcsdlglselpsnlsvftsyldlsmnnisqllpnplpslrfleelrlagnaltyipkgaftglyslkvlmlqnnqlrhvptealqnlrslqslrldanhisyvppscfsglhslrhlwlddnalteipvqafrslsalqamtlalnkihhipdyafgnlsslvvlhlhnnrihslgkkcfdglhsletldlnynnldefptairtlsnlkelgfhsnnirsipekafvgnpslitihfydnpiqfvgrsafqhlpelrtltlngasqitefpdltgtanlesltltgaqisslpqtvcnqlpnlqvldlsynlledlpsfsvcqklqkidlrhneiyeikvdtfqqllslrslnlawnkiaiihpnafstlpslikldlssnllssfpitglhglthlkltgnhalqslissenfpelkviempyayqccafgvcenaykisnqwnkgdnssmddlhkkdagmfqaqderdledflldfeedlkalhsvqcspspgpfkpcehlldgwlirigv

lgr5-fc蛋白序列(seqidno:57)

mdtsrlgvllslpvllqlatggssprsgvllrgcpthchcepdgrmllrvdcsdlglselpsnlsvftsyldlsmnnisqllpnplpslrfleelrlagnaltyipkgaftglyslkvlmlqnnqlrhvptealqnlrslqslrldanhisyvppscfsglhslrhlwlddnalteipvqafrslsalqamtlalnkihhipdyafgnlsslvvlhlhnnrihslgkkcfdglhsletldlnynnldefptairtlsnlkelgfhsnnirsipekafvgnpslitihfydnpiqfvgrsafqhlpelrtltlngasqitefpdltgtanlesltltgaqisslpqtvcnqlpnlqvldlsynlledlpsfsvcqklqkidlrhneiyeikvdtfqqllslrslnlawnkiaiihpnafstlpslikldlssnllssfpitglhglthlkltgnhalqslissenfpelkviempyayqccafgvcenaykisnqwnkgdnssmddlhkkdagmfqaqderdledflldfeedlkalhsvqcspspgpfkpcehlldgwlirigvgradkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk

人igg1fc区(seqidno:58)

dkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk

人igg1fc区(seqidno:59)

dkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk

人igg1fc区(seqidno:60)

kssdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk

人igg1fc区(seqidno:61)

epkssdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk

人igg2fc区(seqidno:62)

cvecppcpappvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstfrvvsvltvvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk

无预测信号序列的lgr5-fc蛋白序列(seqidno:63)

gssprsgvllrgcpthchcepdgrmllrvdcsdlglselpsnlsvftsyldlsmnnisqllpnplpslrfleelrlagnaltyipkgaftglyslkvlmlqnnqlrhvptealqnlrslqslrldanhisyvppscfsglhslrhlwlddnalteipvqafrslsalqamtlalnkihhipdyafgnlsslvvlhlhnnrihslgkkcfdglhsletldlnynnldefptairtlsnlkelgfhsnnirsipekafvgnpslitihfydnpiqfvgrsafqhlpelrtltlngasqitefpdltgtanlesltltgaqisslpqtvcnqlpnlqvldlsynlledlpsfsvcqklqkidlrhneiyeikvdtfqqllslrslnlawnkiaiihpnafstlpslikldlssnllssfpitglhglthlkltgnhalqslissenfpelkviempyayqccafgvcenaykisnqwnkgdnssmddlhkkdagmfqaqderdledflldfeedlkalhsvqcspspgpfkpcehlldgwlirigvgradkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk

权利要求书(按照条约第19条的修改)

1.一种治疗癌症的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的rspo-lgr通路抑制剂和治疗有效量的有丝分裂抑制剂，其中，使用交错给药方案施用rspo-lgr抑制剂和有丝分裂抑制剂，并且首先施用rspo-lgr抑制剂；其中，所述rspo-lgr抑制剂是：

(a)特异性结合至少一种人rspo蛋白的抗体，

(b)特异性结合至少一种人lgr蛋白的抗体，或

(c)包含能够结合至少一种人rspo蛋白的人lgr蛋白的细胞外结构域的可溶性受体。

2.如权利要求1所述的方法，其中，在施用所述rspo-lgr通路抑制剂或抗体约1天、2天、3天、4天、5天或6天后施用所述有丝分裂抑制剂。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中，约每周一次、约每2周一次、约每3周一次或约每4周一次施用所述rspo-lgr通路抑制剂或抗体。

4.如权利要求1～3中任一项所述的方法，其中，约每周一次、约每2周一次、约每3周一次或在4周周期中的3周中约每周一次施用所述有丝分裂抑制剂。

5.如权利要求1～4中任一项所述的方法，其中，所述rspo-lgr通路抑制剂或抗体施用2、3、4、5、6、7、8个以上周期，和/或所述有丝分裂抑制剂施用2、3、4、5、6、7、8个以上周期。

6.如权利要求1～5中任一项所述的方法，其中，所述rspo-lgr通路抑制剂是特异性结合选自由rspo1、rspo2和rspo3组成的组中的至少一种人rspo蛋白的抗体。

7.如权利要求6所述的方法，其中，所述抗体：

(a)特异性结合人rspo1，并且包含含有tgytmh(seqidno:5)的重链cdr1、含有ginpnnggttynqnfkg(seqidno:6)的重链cdr2和含有kefsdgyyffay(seqidno:7)的重链cdr3以及含有kasqdvifava(seqidno:8)的轻链cdr1、含有wastrht(seqidno:9)的轻链cdr2和含有qqhystpw(seqidno:10)的轻链cdr3；

(b)特异性结合人rspo2，并且包含含有ssyams(seqidno:17)的重链cdr1、含有sissggstyypdsvkg(seqidno:18)的重链cdr2和含有rggdpgvyngdyedamdy(seqidno:19)的重链cdr3以及含有kasqdvssava(seqidno:20)的轻链cdr1、含有wastrht(seqidno:21)的轻链cdr2和含有qqhystp(seqidno:22)的轻链cdr3；或

(c)特异性结合人rspo3，并且包含含有dysih(seqidno:29)的重链cdr1、含有yiypsngdsgynqkfk(seqidno:30)的重链cdr2和含有tyfannfd(seqidno:31)或atyfanntdy(seqidno:32)的重链cdr3以及含有kasqsvdydgdsymn(seqidno:33)的轻链cdr1、含有aasnles(seqidno:34)或aas(seqidno:35)的轻链cdr2和含有qqsnedplt(seqidno:36)或qqsnedpltf(seqidno:37)的轻链cdr3。

8.如权利要求6所述的方法，其中，所述抗体：

(a)特异性结合人rspo1，并且包含含有seqidno:11的重链可变区和含有seqidno:12的轻链可变区或者包含含有seqidno:44的重链可变区和含有seqidno:45的轻链可变区；

(b)特异性结合人rspo2，并且包含含有seqidno:23的重链可变区和含有seqidno:24的轻链可变区；或

(c)特异性结合人rspo3，并且包含含有seqidno:38的重链可变区和含有seqidno:39的轻链可变区。

9.如权利要求1～5中任一项所述的方法，其中，所述rspo-lgr通路抑制剂是特异性结合选自由lgr4、lgr5和lgr6组成的组中的至少一种人lgr蛋白的抗体。

10.如权利要求1～9中任一项所述的方法，其中，所述抗体是单克隆抗体、重组抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体或包含抗原结合位点的抗体片段、单特异性抗体、双特异性抗体、igg1抗体或igg2抗体。

11.如权利要求1～8或10中任一项所述的方法，其中，所述rspo-lgr通路抑制剂是抗rspo3抗体omp-131r010。

12.如权利要求1～5中任一项所述的方法，其中，所述rspo-lgr通路抑制剂是包含人lgr蛋白的细胞外结构域的可溶性受体，其中，所述细胞外结构域能够结合人rspo蛋白，可选地，所述人lgr蛋白是lgr5。

13.如权利要求1～12中任一项所述的方法，其中，所述有丝分裂抑制剂是紫杉烷、长春花生物碱、埃博霉素或甲磺酸艾日布林。

14.如权利要求13所述的方法，其中，所述有丝分裂抑制剂是选自由紫杉醇、白蛋白结合型紫杉醇、多西他赛和它们的衍生物组成的组的紫杉烷。

15.如权利要求13所述的方法，其中，所述有丝分裂抑制剂是选自由长春花碱、长春新碱、长春瑞滨和它们的衍生物组成的组的长春花生物碱。

16.如权利要求1～15中任一项所述的方法，其中，所述癌症是结肠直肠癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌或胰腺癌。

17.如权利要求1～16中任一项所述的方法，其进一步包括施用至少一种另外的治疗剂。

18.如权利要求17所述的方法，其中，所述另外的治疗剂是化疗剂。