技术领域本发明涉及一种二氢杨梅素脂质体的制备方法。
背景技术：
二氢杨梅素(Dihydromyricetin，DMY)是从葡萄科蛇葡萄属的一种野生木质藤本植物中提取出来的纯天然物质。其中主要活性成分为黄酮类化合物。二氢杨梅素易溶于丙酮，溶于甲醇、乙醇，极微溶于醋酸乙酯，不溶于石油醚、氯仿，其亲脂性和亲水性较弱，使其食品中应用范围受到限制。近年来改进二氢杨梅素亲水性的研究有，在“二氢杨梅素脂质体的处方优化及性质考察”(齐娜,黄凤香,廖迎,等.世界科学技术:中医药现代化,2014(6):1427-1433.)中用薄膜-超声法制备二氢杨梅素脂质体，以包封率为指标考察处方及工艺，采用透射电镜观察其形态，采用动态透析法考察其体外释放的特性，并进行初步稳定性研究。优化后脂质体的包封率为58.1％，在电镜下呈近球形小囊泡状。在“二氢杨梅素分散片制备工艺及质量控制”(刘颢,郁建平.山地农业生物学报,2014,33(1):24-27.)等将二氢杨梅素制备成分散片，以崩解时间为指标，采用紫外分光光度法考察二氢杨梅素分散片的含量和累积溶出度。制备二氢杨梅素分散片。结果表明优选二氢杨梅素分散片处方为：25％二氢杨梅素提取物，40％微晶纤维素，20％预胶化淀粉，5％交联聚乙烯吡咯烷酮，2.5％低取代羟丙基纤维素和1％硬脂酸镁。分散片平均崩解时间为69s，15min内溶出度达到90％以上。在“喷雾干燥法微胶囊化二氢杨梅素的研究”(姚茂君,黄继红.四川食品与发酵,2007,43(4):16-19.)等通过对二氢杨梅素进行微胶囊化来改变二氢杨梅素的溶解性，同时可防止氧、碱、金属离子等造成二氢杨梅素自身发生变化。此实验选用麦芽糊精和阿拉伯胶作壁材，采用喷雾干燥法制备二氢杨梅素微胶囊，并研究其壁材组成及工艺条件。在“藤茶中二氢杨梅素β-环糊精包合物制备工艺研究”(梁晓岚,李云耀,何桂霞,等.湖南中医药大学学报,2011,31(1):43-45.)中研究二氢杨梅素β-环糊精包合的最佳工艺，β-环糊精包合物可用于改善难溶性物质的溶解度，此文利用紫外分光光度计并采用正交实验法，以包合温度、β-环糊精、包合时间与二氢杨梅素的比例作为考察因素，以二氢杨梅素包合率为指标，确定包合的最佳工艺。在“双氢杨梅黄素磷脂复合物与固体分散体的研究”(袁永越，沈阳药科大学,2005)中采用溶剂法制备了二氢杨梅素固体分散体，以提高有效成分的溶出速率和溶出度作为考察对象。数据显示，磷脂复合物和固体分散体的生物利用度分别为二氢杨梅素的175.3％和202.5％，相对生物利用度均有显著提高。但是现有技术制备的二氢杨梅素固体脂质颗粒存在亲水性差的问题。
技术实现要素：
本发明的目的是要解决现有技术制备的二氢杨梅素固体脂质颗粒存在亲水性差的问题，而提供一种二氢杨梅素固体脂质颗粒的制备方法。二氢杨梅素固体脂质颗粒的制备方法，具体是按以下步骤完成的：一、制备有机相：二氢杨梅素、硬脂酸和卵磷脂加入到乙醇/丙酮的混合溶剂中，在73℃～74℃下水浴加热完全溶解，得到澄清的有机相，该澄清的有机相作为有机相A；所述二氢杨梅素的质量与乙醇/丙酮的混合溶剂的体积比为(27mg～30mg):12mL；所述的硬脂酸与卵磷脂的质量比1:1；所述硬脂酸和卵磷脂的总质量与乙醇/丙酮的混合溶剂的体积比为300mg:12mL；二、制备吐温-80/乙醇混合液：将吐温-80加入乙醇水溶液中，得到吐温-80/乙醇混合液，该吐温-80/乙醇混合液作为体系B；所述的乙醇溶液中乙醇的质量份数为25％；所述的吐温-80与乙醇水溶液的体积比为2.4mL:20mL；三、准备水相C：将质量份数为25％的乙醇水溶液置于温度为4℃下进行冷藏，得到温度为4℃、质量份数为25％的乙醇水溶液，该温度为4℃、质量份数为25％的乙醇水溶液作为水相C；四、乳化：将有机相A倾入体系B中，在温度为73℃～74℃下恒温搅拌乳化，乳化时间为0.75h～1h，得到初乳D；所述的有机相A与体系B的体积比为(18～21)mL:22.4mL；五、制备混悬液：初乳D倾入水相C中，在冰浴条件下磁力搅拌混匀，即得二氢杨梅素固体脂质颗粒混悬液；所述的初乳D与水相C的体积比为(16～20)mL:20mL；六、冷冻干燥：将二氢杨梅素固体脂质颗粒混悬液与冻干保护剂搅拌混匀，然后置于温度为-75℃的冰箱中预冻24h，再置于温度为-60℃的冻干机冻干24h，即得到二氢杨梅素固体脂质颗粒；所述的二氢杨梅素固体脂质颗粒混悬液与冻干保护剂的体积比为1:1。本发明优点：本发明采用方法简单、易操作的高温乳化-低温固化的方法制备二氢杨梅素固体脂质颗粒，得到的二氢杨梅素固体脂质颗粒包封率较好，且具有较好的亲水性；本发明制备的二氢杨梅素固体脂质颗粒在水中的溶解度与二氢杨梅素相比较提高了2倍以上。具体实施方式具体实施方式一：本实施方式是二氢杨梅素固体脂质颗粒的制备方法，它是按以下步骤完成的：一、制备有机相：二氢杨梅素、硬脂酸和卵磷脂加入到乙醇/丙酮的混合溶剂中，在73℃～74℃下水浴加热完全溶解，得到澄清的有机相，该澄清的有机相作为有机相A；所述二氢杨梅素的质量与乙醇/丙酮的混合溶剂的体积比为(27mg～30mg):12mL；所述的硬脂酸与卵磷脂的质量比1:1；所述硬脂酸的质量与乙醇/丙酮的混合溶剂的体积比为150mg:12mL；二、制备吐温-80/乙醇混合液：将吐温-80加入乙醇水溶液中，得到吐温-80/乙醇混合液，该吐温-80/乙醇混合液作为体系B；所述的乙醇溶液中乙醇的质量份数为25％；所述的吐温-80与乙醇水溶液的体积比为2.4mL:20mL；三、准备水相C：将质量份数为25％的乙醇水溶液置于温度为4℃下进行冷藏，得到温度为4℃、质量份数为25％的乙醇水溶液，该温度为4℃、质量份数为25％的乙醇水溶液作为水相C；四、乳化：将有机相A倾入体系B中，在温度73℃～74℃下恒温搅拌乳化，乳化时间为0.75h～1h，得到初乳D；所述的有机相A与体系B的体积比为18～21mL:22.4mL；五、制备混悬液：初乳D倾入水相C中，在冰浴条件下磁力搅拌混匀，即得二氢杨梅素固体脂质颗粒混悬液；所述的初乳D与水相C的体积比为16～20mL:20mL；六、冷冻干燥：将二氢杨梅素固体脂质颗粒混悬液与冻干保护剂搅拌混匀，然后置于温度为-75℃的冰箱中预冻24h，再置于温度为-60℃的冻干机冻干24h，即得到二氢杨梅素固体脂质颗粒；所述的二氢杨梅素固体脂质颗粒混悬液与冻干保护剂的体积比为1:1。除了背景技术中介绍的几种改善二氢杨梅素亲水性的研究，再没有将二氢杨梅素制备成固体脂质颗粒来改变其溶解性能的相关报道。固体脂质颗粒是一种新型纳米胶囊的有效成分传递系统，以毒性低、生物可降解的、生物相容性好、高熔点的天然或合成的类脂为载体，并将有效成分吸附或包裹于脂膜中制成的新一代颗粒传递系统，具有可控制活性成分释放、避免有效成分的降解等优点。其制备方法有高压均质法、薄膜-超声法，乳化沉淀法、高温乳化-低温固化法和微乳法等。本实施方式采用高温乳化-低温固化的方法制备二氢杨梅素固体脂质颗粒来增强二氢杨梅素的亲水能力。高温乳化-低温固化法制备固体脂质颗粒的优点是所需要的设备简单、实验操作简便、适合工业化生产、制得的固体脂质颗粒粒径大小均匀等，不需要均乳或超声等高能乳化过程，实现了低能乳化，因此是一种值得应用的制备方法。具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤一中所述二氢杨梅素的质量与乙醇/丙酮的混合溶剂的体积比为28.27mg:12mL。其他与具体实施方式一相同。具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二之一不同点是：步骤一中所述乙醇/丙酮的混合溶剂由乙醇和丙酮按体积比1:1混合而成。其他与具体实施方式一或二相同。具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一至三之一不同点是：步骤四中在温度为73℃～74℃下恒温搅拌乳化，乳化时间为0.75h。其他与具体实施方式一至三相同。具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一至四之一不同点是：步骤六中所述的冻干保护剂为质量分散为4％～5％的山梨聚糖水溶液、质量分散为4％～5％的海藻糖水溶液或质量分散为4％～5％的葡萄糖水溶液。其他与具体实施方式一至四相同。具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式一至五之一不同点是：步骤六中所述的冻干保护剂为质量分散为5％的海藻糖水溶液。其他与具体实施方式一至五相同。本发明内容不仅限于上述各实施方式的内容，其中一个或几个具体实施方式的组合同样也可以实现发明的目的。采用下述试验验证本发明效果实施例1：二氢杨梅素固体脂质颗粒的制备方法，它是按以下步骤完成的：一、制备有机相：28.27mg二氢杨梅素、150mg硬脂酸和150mg卵磷脂加入到12mL乙醇/丙酮的混合溶剂中，在73℃～74℃下水浴加热完全溶解，得到澄清的有机相，该澄清的有机相作为有机相A；所述乙醇/丙酮的混合溶剂由乙醇和丙酮按体积比1:1混合而成；二、制备吐温-80/乙醇混合液：将2.4mL吐温-80加入20mL乙醇水溶液中，得到吐温-80/乙醇混合液，该吐温-80/乙醇混合液作为体系B；所述的乙醇溶液中乙醇的质量份数为25％；三、准备水相C：将质量份数为25％的乙醇水溶液置于温度为4℃下进行冷藏，得到温度为4℃、质量份数为25％的乙醇水溶液，该温度为4℃、质量份数为25％的乙醇水溶液作为水相C；四、乳化：将18～21mL有机相A倾入22.4mL体系B中，在温度为74℃下恒温搅拌乳化，乳化时间为0.75h，得到初乳D；五、制备混悬液：16～20mL初乳D倾入20mL水相C中，在冰浴条件下磁力搅拌混匀，即得二氢杨梅素固体脂质颗粒混悬液；六、冷冻干燥：将二氢杨梅素固体脂质颗粒混悬液与冻干保护剂搅拌混匀，然后置于温度为-75℃的冰箱中预冻24h，再置于温度为-60℃的冻干机冻干24h，即得到二氢杨梅素固体脂质颗粒；所述的二氢杨梅素固体脂质颗粒混悬液与冻干保护剂的体积比为1:1。将本实施例制备的二氢杨梅素固体脂质颗粒和现有二氢杨梅素分别溶解于水中，通过计算可知，本实施例制备的二氢杨梅素固体脂质颗粒的溶解度为86.45mg/mL(86.45mg二氢杨梅素脂质颗粒中含有二氢杨梅素1.417mg)，现有二氢杨梅素的溶解度为0.5916mg/mL，即本实施例制备的二氢杨梅素固体脂质颗粒在水中的溶解度与二氢杨梅素相比较提高了2.4倍。根据“双氢杨梅黄素磷脂复合物与固体分散体的研究”(袁永越，沈阳药科大学,2005)提供的信息，采用溶剂法制备二氢杨梅素固体分散体，制备的二氢杨梅素固体分散体在水中的溶解度为1.881mg/mL。