本发明属于医药应用领域，具体涉及一种红参麦冬组合物在制备化疗药物增强剂中的应用。
(二)
背景技术：
肿瘤是常见病、多发病，其中恶性肿瘤是人类死亡最主要的原因之一，是一类难以根治的全身性疾病。治疗癌症尚缺乏特效的根治方法，化疗药物是目前肿瘤治疗主要手段之一。但一般化疗药物均是属于非特异性的细胞毒性药物，长期使用化疗药会引起严重的毒副反应，损伤患者免疫系统，并会产生耐药，从而导致化疗的中断或失败。
靶向治疗能专门针对特异性的肿瘤细胞，作用机制与传统化疗有根本的区别，其副作用较化疗小一些。药物被吸收进入血液之后，由循环系统运送至各脏器、组织、体液、细胞，抑制细胞生长因子，阻断靶点细胞的分裂、繁殖。为了使药物能选择性地分布到被作用靶点，尽量减少药物向其他不必要的组织器官分布，提高有效性，增强对肿瘤相关分子靶点的特异性，现代医疗对靶向治疗的关注日益提高。目前的研究表明，靶向治疗对于治疗恶性肿瘤是一种非常有效的策略。然而靶向治疗并不适合所有的患者，需检测患者体内是否有符合条件的基因，对靶向治疗的时期和适用人群做精准判断。此外，长期使用靶向药物亦会产生副作用，还可能对某些器官的功能造成伤害，比如乳腺癌赫赛汀药物会对心脏功能有一定损害。
中药使用历史悠久，由于其天然来源、毒副作用小，在肿瘤的治疗中联合化疗药物起到减毒增效的作用得到了研究证实。近年来抗肿瘤中成药的使用呈逐年上升趋势，且在肿瘤的综合治疗中表现出良好的作用。研究表明有2/3以上的恶性肿瘤患者在接受化疗药物治疗的同时也采用中医药治疗。临床上应用，以七叶灵颗粒联合化药治疗150例晚期非小细胞肺癌患者，以复方参芪丸联合化疗药治疗60例肺癌患者，以华蟾素联合肝癌栓塞化疗治疗236例原发性肝癌，以榄香烯注射液联合化疗药治疗130例晚期胃癌患者等，皆获得了较好的疗效，提高了患者生活质量，不良反应可耐受。在现有的技术中，中药与化疗药物对肿瘤联合用药虽然能达到减毒增效作用，但并未有一例对靶向治疗的辅助作用的报道。
以红参麦冬组合物制备的参麦注射液，由红参和麦冬两味中药提取精制而成，具有益气固脱、养阴生津、生脉的作用，近年来被广泛用于治疗恶性肿瘤。参麦注射液在联合化疗药物治疗肿瘤的临床应用上，主要用于治疗冠心病、慢性肺心病等心血管疾病。本次研究在验证红参麦冬组合物在减毒增效上的作用时意外发现，在保证高效低毒的基本要求的同时，参麦注射液还可以增加化疗药物在肿瘤组织中的分布。这项应用开创了中药药物组合物靶向治疗的先河，改变了人们对中药用于减毒增效原理的认识，为靶向治疗提供了新方法。
(三)
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种红参麦冬组合物在制备化疗药物增强剂中的应用。
本发明采用如下技术方案：
一种红参麦冬组合物在制备化疗药物增强剂中的应用。
本发明中，所述的红参麦冬组合物由原料药红参(Panax ginseng C.A.Mey.)、麦冬(Ophiopogonjaponicus(Linn.f.)Ker-Gawl.)经醇提得到；所述的原料药红参与麦冬的重量比为1：0.5～2，优选1：1。
本发明所述的麦冬优选为浙江产的麦冬，简称浙麦冬。
具体的，所述红参麦冬组合物按如下醇提方法制备得到：
将原料药红参按液料质量比1：3加入80wt％～90wt％的乙醇水溶液中，75～90℃(微沸状态)下浸提2次，每次2h，合并各次所得提取液，减压蒸除溶剂，得到红参提取物；
将原料药麦冬按液料质量比1：3加入80wt％～90wt％的乙醇水溶液中，75～90℃(微沸状态)下浸提2次，每次2h，合并各次所得提取液，减压蒸除溶剂，得到麦冬提取物；
将所得红参提取物与麦冬提取物混合，即得所述的红参麦冬组合物；所述的原料药红参、原料药麦冬的重量比为1：0.5～2，优选1：1。
本发明所述的红参麦冬组合物可与药学上可接受的辅料制备成注射液、片剂、胶囊剂、颗粒、滴丸等制剂形式。
本发明所述的化疗药物包括但不限于5-氟尿嘧啶、阿霉素、紫杉醇中的一种或两种以上任意比例的混合药物，所述的5-氟尿嘧啶、阿霉素、紫杉醇可以是本领域已知的化疗药物的制剂形式。
本发明所述的肿瘤包括但不限于结肠癌、直肠癌、乳腺癌等。
本发明的有益效果在于：本发明所述的红参麦冬组合物用于制备化疗药物增强剂，可增加血浆和肿瘤组织中5-氟尿嘧啶、阿霉素、紫杉醇的浓度，进而增强抗肿瘤作用。
(四)具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，并不是对本发明的限制。
实施例1：参麦注射液对化疗药物的减毒增效，以及增加化疗药物在肿瘤组织及细胞中的靶向分布的作用
以下试验中所述的SMI指参麦注射液，5-FU指5-氟尿嘧啶，ADR指阿霉素，PTX指紫杉醇。
1材料：
1.1细胞株：
人结肠腺癌细胞株Caco-2，人结肠癌细胞株LoVo，人乳腺癌细胞株MCF-7及人乳腺癌耐阿霉素细胞株MCF-7/ADR，培养在37℃，含5％CO2的环境中进行传代。
1.2动物模型：
SPF级雄性荷LoVo人结肠癌Balb/c小鼠，9周，18～22g，在中国药科大学SPF级专用动物房适应性饲养3天。
1.3药物与试剂：
由红参和浙麦冬提取液混合制成的SMI(浙)；由红参和川麦冬提取液混合制成的SMI(川)；5-FU标准品购于Sigma-Aldrich(St.Louis，MO)；注射用盐酸阿霉素购于浙江海正药业有限公司(浙江，中国)；紫杉醇注射剂购自扬子江药业有限公司(江苏，中国)。
BCA蛋白浓度测定试剂盒购于碧云天生物技术研究所(江苏，中国)；二甲基硫代二苯基四噻唑(MTT)、胰蛋白酶(Trypsin)均购于Amerso(Solon,Ohio,USA)。
1.4仪器：
岛津AUW 120D型及岛津AW120型电子分析天平(Kyoto，Japan)；Syergy H1多功能酶标仪(Bio-Tek Instruments，USA)高效液相色谱－四极杆串联质谱联用仪(含日本岛津高效液相色谱系统(LC-20A)、美国AB质谱系统(API4000)、电喷雾离子源、及Analyst 1.5.1工作站)。
联用5-FU对肿瘤细胞的减毒增效作用
(1)细胞MTT试验：
将细胞以1×104个/孔的密度接种于96孔板中培养24h。Caco-2细胞上5-FU的给药浓度为：0.1，0.3，1，3，10，20μM，LoVo细胞上5-FU的给药浓度为：0.03，0.1，0.3，1，3，10μM，与5-FU联合用药时SMI(浙)\SMI(川)的给药浓度为1μl/ml和2μl/ml。每种细胞同时设置溶剂对照组(0.1％DMSO)。用酶标仪于570/695nm测定吸光度值(A)，带入下面的公式计算抑制率：
抑制率(％)＝{A(给药组)-A(本底)}/{A(对照药)-A(本底)}×100％
(2)细胞摄取实验：
将细胞以1×105个/cm2的密度接种于24孔板中培养，5-FU联合用药时SMI(浙)\SMI(川)的给药浓度为22μl/ml，5-FU浓度为5μM。以BCA法测定蛋白浓度，药物的吸收用细胞中每克蛋白质吸收的药物量表示。
(3)药物浓度测定
采用高效液相色谱－四极杆串联质谱联用仪(API4000)进行分析。
(4)实验结果
1)SMI对5-FU细胞毒作用的影响
如表1、表2所示，5-FU与低浓度(1ul/ml)或高浓度(2ul/ml)SMI联用均能增加5-FU对癌细胞的生长抑制作用，且高浓度联用作用更为明显。由此得出：SMI在结肠癌LoVo、Caco-2细胞上可以浓度依赖地增加5-FU的细胞毒作用。同时结果还显示，SIM(浙)的联用作用优于SIM(川)。
表1 Caco-2细胞上的生长抑制率(％)
表2 LoVo细胞上的生长抑制率(％)
2)SMI对5-FU细胞内累积的影响
通过细胞摄取实验考察SMI对5-FU在不同结肠癌细胞内累积的影响，结果如表3、表4所示，在Caco-2细胞上，SMI在90min，120min，180min，240min几个时间点可显著增加5-FU累积量；在LoVo细胞上，SMI在30min，45min，60min，90min，120min几个时间点可显著增加5-FU累积量。同时结果还显示，SIM(浙)对5-FU的细胞内累积影响较SIM(川)明显。
表3 Caco-2细胞上的蛋白浓度
*与单用5-FU组相比P<0.05，**与单用5-FU组相比P<0.01
表4 LoVo细胞上的蛋白浓度
*与单用5-FU组相比P<0.05，**与单用5-FU组相比P<0.01
联用ADR、PTX对肿瘤细胞的减毒增效作用
(1)细胞MTT试验：
将细胞以1×104个/孔的密度接种于96孔板中培养24h。Caco-2细胞上，ADR的给药浓度为：0.03，0.1，0.3，1，3μM，PTX的给药浓度为0.003，0.01，0.03，0.1，0.3，1，3μM，与ADR或PTX联合用药时SMI(浙)的给药浓度为1μl/ml和2μl/ml。每种细胞同时设置溶剂对照组(0.1％DMSO)。用酶标仪于570/695nm测定吸光度值(A)，带入下面的公式计算抑制率：
抑制率(％)＝{A(给药组)-A(本底)}/{A(对照药)-A(本底)}×100％
(2)细胞摄取实验：
将细胞以1×105个/cm2的密度接种于24孔板中培养，与ADR或PTX联合用药时SMI(浙)的给药浓度为0.5，1，2μl/ml，ADR浓度为5μM，PTX浓度为5μM。以BCA法测定蛋白浓度，药物的吸收用细胞中每克蛋白质吸收的药物量表示。
(3)药物浓度测定
采用高效液相色谱－四极杆串联质谱联用仪(API4000)进行分析。
(4)实验结果
1)SMI对ADR细胞毒作用的影响
如表5所示，ADR与低浓度(1ul/ml)或高浓度(2ul/ml)SMI联用均能增加Caco-2的细胞生长抑制率，且高浓度的联用作用更为明显。由此得出：SIM在结肠癌Caco-2细胞能增加ADR的细胞毒作用，且具有浓度依赖性。
表5 Caco-2细胞上的生长抑制率(％)
*与单用5-FU组相比P<0.05，**与单用5-FU组相比P<0.01
2)SMI对PTX细胞毒作用的影响
如表6所示，PTX与低浓度(1ul/ml)或高浓度(2ul/ml)SMI联用均能增加Caco-2的细胞生长抑制率，且高浓度的联用作用更为明显。由此得出：SIM在结肠癌Caco-2细胞能增加PTX的细胞毒作用，且具有浓度依赖性。
表6 Caco-2细胞上的生长抑制率(％)
*与单用5-FU组相比P<0.05
3)SMI对ADR细胞内累积的影响
如表7所示，随着SMI联用剂量的增加，ADR在结肠癌细胞Caco-2的累积量相应增加，呈现SMI浓度依赖性。结果表明，SMI对细胞内ADR的药物吸收量的增加有显著影响。
表7 Caco-2细胞上的蛋白浓度
**与单用ADR组相比P<0.01，***与单用ADR组相比P<0.001
4)SMI对PTX细胞内累积的影响
如表8所示，随着SMI联用剂量的增加，PTX在结肠癌细胞Caco-2的累积量相应增加，呈现SMI浓度依赖性。结果表明，SMI对细胞内PTX的药物吸收量的增加有显著影响。
表8 Caco-2细胞上的蛋白浓度
**与单用ADR组相比P<0.01，***与单用ADR组相比P<0.001
联用5-FU对肿瘤组织的减毒增效作用
(1)动物给药方案：
荷瘤鼠随机分成4组，每组16只，连续给药15天，最后一次给药前禁食12小时。对照组每天腹腔注射生理盐水(0.1ml/10g)，每三天腹腔注射生理盐水(0.05ml/10g)。单用SMI组每天腹腔注射SMI(浙)10ml/kg(0.1ml/10g)，每三天腹腔注射生理盐水(0.05ml/10g)。单用5-FU组每天腹腔注射生理盐水(0.1ml/10g)，每三天腹腔注射5-FU 15mg/kg(1.5mg/ml，0.05ml/10g)。与5-FU联用组每天腹腔注射SMI(浙)10ml/kg(0.1ml/10g)，每三天腹腔注射5-FU 15mg/kg(3mg/ml，0.05ml/10g)。
(2)肿瘤生长情况考察：
动物于每天给药前进行称重，观察体重变化。给药期间观察动物进食量及生长状态；每两天测量瘤长径a和短径b，按公式V＝1/2×a×b2计算肿瘤体积，计算体积增长率并绘制肿瘤体积增长曲线，公式如下：
体积增长率(％)＝给药组平均瘤体积/对照组平均瘤体积×100％
最后一次给药后20min和60min后分别眼眶取血，剥离瘤体组织，摘取心、肝、肺、肾后分别称重。根据不同给药组的肿瘤组织质量和体积变化判断药物抗肿瘤药效。利用肿瘤组织称重结果，计算不同给药组的质量抑瘤率，公式如下：
抑瘤率(％)＝(1-给药组平均瘤质量/对照组平均瘤质量)×100％。
(3)药物浓度测定
采用高效液相色谱－四极杆串联质谱联用仪(API4000)进行分析。
(4)病理学检测
长期给药(13天)后采集荷瘤鼠肿瘤组织，福尔马林固定后，送于江苏省中医院病理科进行组织病理学检测(H&E染色法)，肿瘤组织损伤由专业病理学检测人员阅片评分。
(5)数据处理
实验数据以mean±SD表示，数据统计分析经Student’s t检验或方差分析，p<0.05代表数据差异具有统计学意义。
(6)实验结果
1)联合5-FU对实体瘤的生长抑制作用
如表9所示，长期给药15天后，单用SMI组和单用5-FU组质量抑瘤率均大于生理盐水组，SIM联用5-FU组的抑瘤率则大大超出其他三组。单用SMI组和单用5-FU组的肿瘤体积增长率均较生理盐水组低很多，而SIM联用5-FU组则低于其他三组。上述实验结果表明，在LoVo结肠癌裸鼠模型上，单用SIM有一定的抑瘤作用；与单用5-FU组相比，联合给予SMI能显著抑制肿瘤组织的增长，增加5-FU的抗肿瘤作用。
表9质量抑瘤率和瘤体积增长率
*与单用5-FU组相比P<0.05
2)联合5-FU对心、肝、肺、肾的影响
将送检动物样品分为正常组、荷瘤对照组、单用SMI组、单用5-FU组、SIM联用5-FU组，送检组织为心、肝、肾和肺。送检组织进行常规石蜡包埋、HE染色和光镜检查。所有形态改变根据轻重标记为“±”“+”“++”“+++”，分别表示轻微、轻度、中度、重度，无病变标记为“-”，缺失记“无”。
如表10所示，各组心脏均无明显的病理学改变；与正常组比较，荷瘤组和各给药组均有部分例肝脏不同程度灶性坏死；各组肾脏，包括正常组，肾小管上皮细胞轻度水肿；个别例肺脏程度较轻出血和肺气肿，其它未见与实验相关的明显病理改变。
表10重要器官的病理学检验
3)SMI对血浆、肿瘤组织中5-FU浓度的影响
对荷瘤鼠血浆及肿瘤组织中的药物浓度进行测定，如表11所示，在20min时测定血浆中5-FU血药浓度，SMI联用组为单用组的5.08倍，具有统计学差异(P<0.01)；20min时测定肿瘤组织中5-FU血药浓度，SMI联用组为单用组的3.94倍，具有统计学差异(P<0.01)。由此可得，在20min时，SMI能显著增加5-FU在血浆中及瘤内药物浓度。
表11 5-FU在血浆、肿瘤组织中的浓度
4)SMI对心、肝、肺、肾中5-FU浓度的影响
将送检动物样品分为单用5-FU组和SIM联用5-FU组，分别测定最后一次给药20min和60min后心、肝、脾、肺及肾中5-FU的药物浓度。如表12、表13所示，与单用5-FU组相比，SIM联用组在心、肝、脾、肺、肾内的5-FU浓度无显著差异，由此可知SMI不会增加5-FU对重要脏器的毒副作用。
表12 20min后心，肝，脾，肺及肾组织中5-FU药物浓度(mM)
表13 60min后心，肝，脾，肺及肾组织中5-FU药物浓度(mM)
上述结果表明，本发明药物组合物不仅可用于对化疗药物的减毒增效，还可以增加化疗药物在肿瘤组织及细胞中的靶向分布。
实施例2：参麦注射液对阿霉素在结肠癌组织中的增敏作用
参麦注射液的制备：
称取红参150g，加入90％的乙醇，浸润充分后，连续回流提取2次，每次2小时，每次回流液减压浓缩后，合并浓缩液，冷藏后过滤，加入1％的活性炭，搅拌均匀后过滤，用NaOH调节pH值6.8，减压浓缩上清液，加注射用水至含生药量约1.55g/ml，冷藏滤过后，得到红参提取液50g，备用。
称取浙麦冬150g，加入90％的乙醇，浸润充分后，连续回流提取2次，每次2小时，每次回流液减压浓缩后，合并浓缩液，冷藏后过滤，加入1％的活性炭，搅拌均匀后过滤，用NaOH调节pH值6.8，减压浓缩上清液，加注射用水至含生药量约1.55g/ml，冷藏滤过后，得到浙麦冬提取液50g，备用。
合并红参提取液和浙麦冬提取液，加提取液总量约2/3的注射用水，冷藏，过滤，加0.5％的聚山梨酯-80搅匀，加400L注射用水，调节pH值至7.3～7.5，将药液灌装，制得参麦注射液。
动物给药方法：
SPF级雄性荷LoVo人结肠癌Balb/c小鼠随机分成6组，每组16只，连续给药13天，最后一次给药前禁食12小时。分组及给药方案如下：
(1)生理盐水对照组：每天腹腔注射生理盐水(0.1mL/10g)，每三天腹腔注射生理盐水(0.05mL/10g)。无菌条件给药。
(2)单用SMI组：每天腹腔注射参麦注射液10mL/kg(0.1mL/10g)，每三天腹腔注射生理盐水(0.05mL/10g)。无菌条件给药。
(3)单用ADR组：每天腹腔注射生理盐水(0.1mL/10g)，每三天腹腔注射ADR 2mg/kg(0.4mg/mL，0.05mL/10g)。无菌条件给药。
(4)SMI与ADR联用组：每天腹腔注射参麦注射液10mL/kg(0.1mL/10g)，每三天腹腔注射ADR 2mg/kg(0.4mg/mL，0.05mL/10g)。无菌条件给药。
测定血液及肿瘤组织内的药物浓度：
分别于最后一次给药40min和120min后，眼眶静脉丛取小鼠全部血液置于肝素化炮弹管，8000rpm/min离心5min，取50μL上清测定药物浓度。脱颈椎处死小鼠，取出肿瘤、心脏组织，滤纸吸干水分，称取0.1g(不足0.1g的组织需在样品测定后进行剂量校正)，加入1mL超纯水，用匀浆机制成组织匀浆，取50μL样品测定药物浓度。
结果如表14所示：给药后40min，SMI与ADR联用组血浆中药物浓度为单用ADR组的1.55倍，且差异具有统计学意义(p<0.05)；给药后40min，SMI与ADR联用组肿瘤组织中药物浓度为单用ADR组的1.90倍，且差异具有统计学意义(p<0.01)。
表14 ADR在血浆、肿瘤组织中的浓度
*与单用5-FU组相比P<0.05，**与单用5-FU组相比P<0.01
药物浓度测定结果表明，在LoVo结肠癌裸鼠模型上，与单用ADR组相比，联用SMI能够短时间内显著增加ADR在血浆和肿瘤组织中的药物浓度。