本发明涉及多酚的制备技术领域，具体是一种抗疲劳活性的石榴皮多酚的制备工艺。
背景技术：
石榴皮是石榴干燥后的果皮，性酸、味道发涩，具有止血、涩肠、杀虫的效用，是临床常用中药。石榴皮多酚是一类具有多酚羟基化合物的总称，包括没食子单宁、鞣花单宁、鞣花酸、绿原酸、没食子酸、儿茶素、表儿茶素、花色素等多种化合物，主要存在于石榴皮中，含量约为其干重的10~20%。近年来，大量研究表明，石榴皮多酚具有抗自由基、抗诱变、抗老化、抑菌、预防心血管疾病、改善妇女更年期综合症等多种功能，在医药、日用品以及食品等领域都有广泛的作用，因此，发明一种提取效率高的提取石榴皮多酚的方法具有重要的意义。
传统的提取多酚的方法有热水提取法、热乙醇提取法等，但这些方法都具有耗时长，溶剂用量大，提取效率低等缺点。CO2 超临界萃取技术是近二十年来国际上发展迅速的化工分离新技术，其能在接近室温 ( 35～40 ℃) 及 CO2气体笼罩下进行萃取，可有效防止热敏性物质的氧化和逸散。因此，在萃取物中保持着药用植物的全部成分，而且能把高沸点，低挥发度、易热解的物质在其沸点温度以下萃取出来。同时不使用有机溶剂，无残留，100%纯天然，可以防止对人体的毒害和环境的污染。现有技术如授权公告号为CN103705647B的中国发明专利，公开了一种CO2超临界法萃取金花茶叶总黄酮的工艺方法，其包括以下步骤：1 )金花茶粉碎至20～100目，置于萃取罐中；2 )以55～85%的乙醇为携带剂，超临界CO2为溶剂；3）萃取罐温度35～55℃，压力25～35MPa，CO2流量10～20L/h；一级分离罐温度25℃，压力6～8MPa；二级分离罐温度25℃，压力6MPa；萃取时间2～4h；可得金花茶叶总黄酮的乙醇溶液；4 )减压蒸馏回收乙醇，冷冻干燥即得深褐色的金花茶叶总黄酮浸膏。利用该方法提取的总黄酮，无有机溶剂残留，简便易行，且收率高，收率可达3 .81%，可广泛应用于食品、药品等领域，可显著提升金花茶的经济效益和社会效益。这种方法在超临界萃取前未进行处理，总黄酮的提取率有待提高。现有技术如授权公告号为CN102973617B的中国发明，公开了一种石榴皮多酚的提取方法，其步骤如下：将石榴皮冲洗、干燥、粉碎成粉末后过40 目筛；将所述的石榴皮粉末加入到乙醇水溶液中，经微波处理；再经水浴回流浸提，抽滤后离心20min，离心功率为4000r/min，过滤，然后真空旋转蒸发回收乙醇，得多酚粗提液；将所述多酚粗提液配制为4mg/mL 的溶液，流过大孔树脂进行吸附，水浴振荡24h，水浴温度为25℃，振荡功率为120r/min ；将吸附后的树脂过滤，蒸馏水洗两次后滤干，用乙醇进行动态洗脱，乙醇浓度为40%，洗脱液浓缩后冷冻干燥，得到多酚提取物。该方法的提取时间过长，提取率和提取纯度都有待提高。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种提取率高，提取的多酚活性高，纯度高，操作简单的抗疲劳活性石榴皮多酚的制备工艺。
本发明针对背景技术中提到的问题采取的技术方案为：
一种抗疲劳活性石榴皮多酚的制备工艺，具体操作步骤：
1）预处理：将石榴皮洗净，粉碎，过30~100目筛；
2）酶解：加水，再加入复合酶解剂，加入的复合酶制剂的量为石榴皮粉末质量的0.2~0.8%，合酶制剂成分及其重量份为：15~20份纤维素酶，4~8份果胶酶，3~6份NaCl，0.3~0.9份半胱氨酸，1~5份木瓜蛋白酶，0.3~0.6份氧硅磷灰石和0.0002~0.0004份谷氨酰胺。水浴加热，酶解温度为30~60℃，pH为3.0~7.0，酶解时间为0.7~1.9h。搅拌，沸水浴灭酶5~15min，干燥，研磨。采用复合酶水解石榴皮，条件温和，不会产生废酸废碱，绿色环保；特殊制备的复合酶制剂针对石榴皮成分结构配置，水解速度快，酶解彻底，并且不会破坏石榴皮多酚的活性；
3）超临界萃取：将步骤2得到的粉末置于超临界萃取仪的萃取罐中萃取，以超临界CO2为溶剂，浓度为30~50%的乙醇为携带剂。萃取罐温度为35~60℃，压力为20~30Mpa，CO2流量为15~25L/h；一级分离温度为20~30℃，压力为5~9 Mpa；二级分离温度为15~25℃，压力为3~5Mpa。减压蒸馏回收乙醇，真空度为0.004~0.008 Mpa，温度为40~60℃，时间为0.4~1.2h，得到抗疲劳活性石榴皮多酚浸膏。多酚在超临界CO2中的溶解度高，在得到多酚超临界CO2物质之后，只需改变压力和温度就能去除溶剂，无有机溶剂残留，绿色安全，操作简单，成本低廉；最重要的是采用超临界CO2提取的多酚具有很高的活性，抗疲劳效果很好；
4）纯化：采用大孔吸附树脂为：HP-20 或X-5 型大孔吸附树脂，依次用水和35~55％v/v乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩，真空冷冻干燥，研磨，得到抗疲劳活性石榴皮多酚粉末。利用不同大孔吸附树脂的吸附特性，去除了抗疲劳活性石榴皮多酚浸膏中易溶于超临界CO2的杂质，使多酚的纯度大大提高。采用上述方法提取石榴皮多酚操作简单，成本低廉，不会有有机溶剂残留，绿色安全；最后得到的抗疲劳活性石榴皮多酚粉末纯度高，多酚的活性强，抗疲劳效果明显。
与现有技术相比，本发明的优点在于：先采用复合酶水解石榴皮，破坏石榴皮细胞，使其中的有效成分多酚流出；酶解条件温和，不会产生废酸废碱，绿色环保；特殊制备的复合酶制剂针对石榴皮成分结构配置，水解速度快，酶解彻底，并且不会破坏石榴皮多酚的活性；接着采用超临界CO2提取多酚，多酚在超临界CO2中的溶解度高，在得到多酚超临界CO2物质之后，只需改变压力和温度就能去除溶剂，无有机溶剂残留，绿色安全，操作简单，成本低廉；最重要的是采用超临界CO2提取的多酚具有很高的活性，抗疲劳效果很好；最后再利用不同大孔吸附树脂的吸附特性，去除了抗疲劳活性石榴皮多酚浸膏中易溶于超临界CO2的杂质，使多酚的纯度大大提高。采用上述方法提取石榴皮多酚操作简单，成本低廉，不会有有机溶剂残留，绿色安全；最后得到的抗疲劳活性石榴皮多酚粉末纯度高，多酚的活性强，抗疲劳效果明显。
具体实施例
下面通过实施例对本发明方案作进一步说明：
实施例1：
一种抗疲劳活性石榴皮多酚的制备工艺，具体操作步骤：
1）预处理：将石榴皮洗净，粉碎，过30~100目筛；
2）酶解：加水，再加入复合酶解剂，加入的复合酶制剂的量为石榴皮粉末质量的0.2~0.8%，合酶制剂成分及其重量份为：15~20份纤维素酶，4~8份果胶酶，3~6份NaCl，0.3~0.9份半胱氨酸，1~5份木瓜蛋白酶，0.3~0.6份氧硅磷灰石和0.0002~0.0004份谷氨酰胺。水浴加热，酶解温度为30~60℃，pH为3.0~7.0，酶解时间为0.7~1.9h。搅拌，沸水浴灭酶5~15min，干燥，研磨。采用复合酶水解石榴皮，条件温和，不会产生废酸废碱，绿色环保；特殊制备的复合酶制剂针对石榴皮成分结构配置，水解速度快，酶解彻底，并且不会破坏石榴皮多酚的活性；
3）超临界萃取：将步骤2得到的粉末置于超临界萃取仪的萃取罐中萃取，以超临界CO2为溶剂，浓度为30~50%的乙醇为携带剂。萃取罐温度为35~60℃，压力为20~30Mpa，CO2流量为15~25L/h；一级分离温度为20~30℃，压力为5~9 Mpa；二级分离温度为15~25℃，压力为3~5Mpa。减压蒸馏回收乙醇，真空度为0.004~0.008 Mpa，温度为40~60℃，时间为0.4~1.2h，得到抗疲劳活性石榴皮多酚浸膏。多酚在超临界CO2中的溶解度高，在得到多酚超临界CO2物质之后，只需改变压力和温度就能去除溶剂，无有机溶剂残留，绿色安全，操作简单，成本低廉；最重要的是采用超临界CO2提取的多酚具有很高的活性，抗疲劳效果很好；
4）纯化：采用大孔吸附树脂为：HP-20 或X-5 型大孔吸附树脂，依次用水和35~55％v/v乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩，真空冷冻干燥，研磨，得到抗疲劳活性石榴皮多酚粉末。利用不同大孔吸附树脂的吸附特性，去除了抗疲劳活性石榴皮多酚浸膏中易溶于超临界CO2的杂质，使多酚的纯度大大提高。采用上述方法提取石榴皮多酚操作简单，成本低廉，不会有有机溶剂残留，绿色安全；最后得到的抗疲劳活性石榴皮多酚粉末纯度高，多酚的活性强，抗疲劳效果明显。
实施例2：
一种抗疲劳活性石榴皮多酚的制备工艺，最优选操作步骤：
1）预处理：将石榴皮洗净，粉碎，过50目筛；
2）酶解：加水，再加入复合酶解剂，加入的复合酶制剂的量为石榴皮粉末质量的0.6%，复合酶制剂成分及其最优选重量份为：18份纤维素酶，7份果胶酶，5份NaCl，0.7份半胱氨酸，3份木瓜蛋白酶，0.5份氧硅磷灰石和0.0004份谷氨酰胺。水浴加热，酶解温度为40℃，pH为5.5，酶解时间为1.0h。搅拌，沸水浴灭酶12min，干燥，研磨。采用复合酶水解石榴皮，条件温和，不会产生废酸废碱，绿色环保；特殊制备的复合酶制剂针对石榴皮成分结构配置，水解速度快，酶解彻底，并且不会破坏石榴皮多酚的活性；
3）超临界萃取：将步骤2得到的粉末置于超临界萃取仪的萃取罐中萃取，以超临界CO2为溶剂，浓度为75%的乙醇为携带剂。萃取罐温度为40℃，压力为25Mpa，CO2流量为20L/h；一级分离温度为26℃，压力为8 Mpa；二级分离温度为24℃，压力为4Mpa。减压蒸馏回收乙醇，真空度为0.006Mpa，温度为45℃，时间为0.9h，得到抗疲劳活性石榴皮多酚浸膏。多酚在超临界CO2中的溶解度高，在得到多酚超临界CO2物质之后，只需改变压力和温度就能去除溶剂，无有机溶剂残留，绿色安全，操作简单，成本低廉；最重要的是采用超临界CO2提取的多酚具有很高的活性，抗疲劳效果很好；
4）纯化：将得到的浸膏配置成4mg/mL 的溶液，以3BV/h 的流速流过HP-20 型大孔树脂，吸附2h，水浴振荡24h，振荡功率为120r/min。将吸附后的树脂过滤，蒸馏水洗两次后滤干，用40%的乙醇进行动态洗脱，洗脱速率为2BV/h，合并洗脱液，减压浓缩，回收乙醇和水后，真空冷冻干燥浓缩液，研磨，得到抗疲劳活性石榴皮多酚粉末。利用不同大孔吸附树脂的吸附特性，去除了抗疲劳活性石榴皮多酚浸膏中易溶于超临界CO2的杂质，使多酚的纯度大大提高。采用上述方法提取石榴皮多酚操作简单，成本低廉，不会有有机溶剂残留，绿色安全；最后得到的抗疲劳活性石榴皮多酚粉末纯度高，多酚的活性强，抗疲劳效果明显。
本发明的操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知，在此不进行赘述。
复合酶制剂的量不仅限于为石榴皮粉末质量的0.2~0.8%，还包括0.202%或0.204%或0.206%，……，或0.796%或0.798%或0.8%。
以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。