本发明涉及一种含有双歧杆菌和嗜酸乳杆菌的益生菌复合组合物及其应用，特别涉及包含双歧杆菌B.bifidum-12(Bb-12)和嗜酸乳杆菌L.acidophilu-5(La-5)的复合组合物。
背景技术：
目前国际比较接受的益生菌定义为“益生菌是指在食用足够量时，对宿主产生有益作用的一种或多种活的微生物，能够耐胃酸、胆汁，活着到达肠道，在肠道能够定植一定时间。”迄今为止，科学家已发现的益生菌大体上可分成三大类，包括乳酸杆菌、双歧杆菌和革兰氏阳性球菌。当人体住满足够的益生菌时，人就会处于健康的状态，但是一旦体内菌群失去平衡，比如菌种间比例发生大幅变化或者超出正常数值时，那么腹泻、过敏、胃口不佳、疲倦、免疫力低等一系列病症就会随之而来，人体的健康就会亮红灯，而这时适当添加益生菌，协助体内菌群平衡，才能让人重现健康状态。
双歧杆菌在人体肠内发酵后可产生乳酸和醋酸，能提高钙、磷、铁的利用率，具有治疗慢性腹泻、治疗便秘、保护肝脏、防治心血管疾病、改善乳糖消化等的作用。经过众多专家学者的不断探索实验，已确认双歧杆菌是肠内最有益的菌群，双歧杆菌数量的减少乃至消失是“不健康”状态的标志。
嗜酸乳杆菌属于乳杆菌属，是革兰氏阳性杆菌，主要存在于小肠中，释放乳酸、乙酸和一些对有害菌起作用的抗菌素，调整肠道菌群平衡，抑制肠道不良微生物的增殖。嗜酸乳杆菌对致病微生物具有拮抗作用。嗜酸乳杆菌能分泌嗜酸乳菌素、嗜酸杆菌素、乳酸菌素等抗生素物质，对肠道致病菌产生拮抗作用。
摄入含有嗜酸乳杆菌和双歧杆菌两种活菌的乳食品对消化器官有好处，特别是对胃肠功能失调的婴幼儿和一些长期口服抗菌素而引起胃肠功能失调的病人，食用含有这两种活菌的发酵乳后，可以迅速使肠道内的菌群恢复正常平衡，抑制腐败菌的增殖，所以具有很好的营养保健作用。
“张泽生等人，菊粉低聚果糖与蔗糖低聚果糖对双歧杆菌体外增值的研究，《中国食品添加剂》，2016年，第1期，第76-80页”揭示了两种低聚果糖均能促进双歧杆菌的体外增殖，但菊粉来源的低聚果糖对双歧杆菌的体外促生长作用优于蔗糖来源的低聚果糖。
“张树海等人，益生菌对嗜酸乳杆菌LA-5生长的影响，《食品研究与开发》，2013年，第34卷，第3期，第88-90页”揭示了菊粉、麦芽低聚糖和低聚异麦芽糖三种益生菌素对LA-5的影响，其中低聚异麦芽糖对LA-5的促进作用最佳，菊粉也能促进LA-5的生长。
“杜亚军，水溶性膳食纤维促进肠道益生菌生长的研究，《中国乳品工业》，2015年，第43卷，第7期，第26-29页”揭示了各种水溶性膳食纤维作为唯一的碳源，或者添加到含葡萄糖的培养基中，均可以显著促进益生菌的生长。
传统含益生菌的产品菌种组成单一，随着保存时间的延长，益生菌的活菌数量减少，达不到真正改善肠道问题的功效。
技术实现要素：
为了克服上述益生菌产品组成单一，活菌数量随时间延长而减少的缺陷，本发明提供了一种含有双歧杆菌Bb-12和嗜酸乳杆菌La-5的益生菌复合组合物，及其在制备改善便秘、口臭、肤质的营养品方面的应用，所述益生菌复合组合物还能与羊奶粉或抗生素联合使用。为方便使用，本发明还提供了一种28单元型的益生菌复合制剂，每个益生菌复合组合物单元含有本发明所述的益生菌复合组合物和说明书。
具体来说，针对现有技术的不足，本发明提供了如下技术方案：
一方面，本发明提供了一种含有双歧杆菌和嗜酸乳杆菌的益生菌复合组合物，按重量份计算，该益生菌复合组合物包括0.2-0.8重量份的益生菌、0.1-0.7重量份的菊粉和1.5-2.7重量份的可溶性膳食纤维。
优选地，其中所述的益生菌为双歧杆菌Bifidobacterium(Bb-12)和嗜酸乳杆菌Lactobacillus acidophilus(La-5)。
优选地，按重量份计，本发明的益生菌复合组合物包括0.1-0.4重量份Bb-12、0.1-0.4重量份La-5、0.3-0.5重量份的菊粉和1.8-2.3重量份的可溶性膳食纤维。
优选地，Bb-12与La-5的重量份比为1:1。
优选地，所述可溶性膳食纤维为选自低聚异麦芽糖、聚葡萄糖、果胶、抗性糊精、燕麦β-葡聚糖、大豆低聚糖和羧甲基纤维素中的一种或一种以上，优选抗性糊精。
优选地，本发明所述益生菌复合组合物是复合肠道健康营养品。
另一方面，本发明提供了一种28单元型益生菌复合制剂，该益生菌复合制剂含有28个日用益生菌复合组合物单元，所述日用益生菌复合组合物单元含有前述益生菌复合组合物和使用说明书。
另一方面，本发明提供了所述益生菌复合组合物在制成肠胃健康营养品方面或制备改善肤质的营养品方面的应用。
优选地，将益生菌复合组合物与药学上可接受的载体制成制剂。
优选地，益生菌复合组合物与药学上可接受的载体制成的制剂为选自片剂、胶囊剂、颗粒剂和散剂中的任一种。
优选地，本发明提供了所述益生菌复合组合物在制备改善便秘、口臭或肤质的营养品或药品方面的应用。
优选地，益生菌复合组合物在制备改善便秘、口臭或肤质的营养品或药品方面的应用周期为28天。
优选地，将本发明的益生菌复合组合物与羊奶粉联合使用。
优选地，将本发明的益生菌复合组合物与抗生素联合使用，所述抗生素优选为枸橼酸铋钾、阿莫西林和/或替硝唑，更优选为枸橼酸铋钾、阿莫西林和替硝唑的组合。
本发明采用了丹麦科汉森的定制化益生菌菌落Bb-12和La-5，耐酸和耐胆汁性强，益生元和可溶性膳食纤维对益生菌的增殖产生协同作用，独特的保存技术(通常为﹣4℃保存)使得益生菌的活菌数量不会随时间而逐渐衰减，具备临床证实的健康功效。本发明所述益生菌复合组合物能改善便秘、口臭症状，改善肤质，减少抗生素副作用，提高人群的生活质量。
具体实施方式
本发明提供了一种含有双歧杆菌和嗜酸乳杆菌的益生菌复合组合物，包括以下组分：0.2-0.8重量份的益生菌、0.1-0.7重量份的菊粉和1.5-2.7重量份的可溶性膳食纤维。
在本发明的一种优选实施方式中，益生菌复合组合物包括以下组分：0.1-0.4重量份双歧杆菌B.bifidum-12(Bb-12)、0.1-0.4重量份嗜酸乳杆菌L.acidophilu-5(La-5)、0.3-0.5重量份的菊粉和1.8-2.3重量份的可溶性膳食纤维。其中，菊粉的成分为低聚果糖，可溶性膳食纤维为选自低聚异麦芽糖、聚葡萄糖、果胶、抗性糊精、燕麦β-葡聚糖、大豆低聚糖和羧甲基纤维素中的一种或几种，优选抗性糊精。本发明提供的益生菌复合组合物是复合肠道健康营养品。
在本发明的一种优选实施方式中，本发明的益生菌复合组合物制成益生菌复合制剂，该复合制剂也称为28单元型益生菌复合制剂，其含有28个日用益生菌复合组合物单元，所述日用益生菌复合组合物单元含有本发明所述的益生菌复合组合物和使用说明书。当有肠胃健康问题或者皮肤问题的人群服用时，该制剂作为复合肠道健康或皮肤健康营养品被设计为28单元型益生菌复合制剂，其临床应用周期为28天，每天服用其中一个单元。依据不同的适应证，本发明益生菌复合组合物的用法、用量不同，从而每个单元中设计的益生菌复合组合物的量也不同，每个益生菌复合组合物单元中的量是依据每天需要服用的总量设计的。
在本发明的另一种优选实施方式中，益生菌复合组合物被用于制备肠胃健康营养品或改善肤质的营养品。益生菌复合组合物与药学上可接受的载体制成片剂、胶囊、颗粒剂和散剂等不同剂型，将益生菌复合组合物制成不同剂型的一般步骤包括：
1)菌株的发酵培养：菌种活化→接斜面培养→F瓶培养→卡氏罐培养→种子罐培养→商品罐培养→离心分离→压滤→造粒→干燥→成品；
2)混匀益生菌复合组合物的各原料成分；
3)加入辅料(载体)成分；
4)混合原料和辅料；
5)按照常规方法制成不同剂型、包装。
本发明益生菌复合组合物的适用对象为有便秘、口臭、皮肤问题以及服用抗生素的人群，也能与羊奶粉联合使用，促进人体对羊奶粉的吸收。
对于便秘、口臭、有皮肤问题以及使用抗生素的人群，每次服用本发明益生菌复合组合物的用量中含有的益生菌复合组合物成分为10-40mg菌株Bb-12、10-40mg菌株La-5，10-70mg菊粉和150-270mg抗性糊精。
本发明所述的菊粉是一种生物多糖，也叫菊糖，以能量的形式存在于多种植物和蔬菜里，尤其存在于菊科植物例如菊芋、菊苣的块根中。菊粉分子约由31个β-D-呋喃果糖和1～2个吡喃菊糖残基聚合而成，果糖残基之间能通过β-2,1-键连接。
下面通过实施例来具体说明本发明，本领域技术人员应当理解的是，这不应被理解为对本发明权利要求范围的限制。
实施例中所用的仪器与试剂说明如下：
1.仪器
混合机：长沙市雨花区中诚制药机械厂
一步制粒机：FL-120C型沸腾制粒器，上海远东制药机械总厂
压片机：ZP-9B旋转式压片机，上海绿翊机械制造有限公司
包衣机：湖南中诚制药机械厂
胶囊填充剂：北京翰林精工科技有限公司NJP-1200
颗粒包装机：北京迈威机械有限责任公司PW129-CO
2.试剂
益生菌株Bb-12和La-5：购自丹麦科汉森公司；
菊粉：河南正兴食品添加剂有限公司；
抗性糊精：山东天美生物技术有限公司
奶粉：内蒙古伊利实业集团股份有限公司
淀粉：湖北中料化工有限公司
制备实施例
实施例1
将益生菌复合组合物制成片剂的步骤包括：
(1)用常规方法发酵扩大培养Bb-12和La-5菌株；
(2)取1g菌株Bb-12、1g菌株La-5，加入1g菊粉，混合，加入15g抗性糊精，混匀；
(3)淀粉过80目筛，作为制剂中的辅料备用；
(4)将步骤(3)得到的淀粉加入到步骤(2)所得的混合粉中，直至重量为100g；
(5)采用一步制粒机对上述混合粉末造粒，过10目筛，然后加入0.4％硬脂酸镁，采用常规压片机进行压片(规格为1g/片)，接着包衣(常规薄膜衣)，装瓶。
实施例2
本实施例采用与实施例1基本相同的方法制备片剂，不同之处在于各组分的用量变为3g菌株Bb-12、3g菌株La-5，5g菊粉，23g抗性糊精，淀粉为载体。片剂规格为1g/片。
实施例3
本实施例采用与实施例1基本相同的方法制备胶囊剂。不同之处在于各组分用量变为：2g菌株Bb-12、2g菌株La-5，3g菊粉，18g抗性糊精，淀粉为载体。采用一步制粒机对所有混合粉末造粒，过10目筛，然后用全自动胶囊充填机将造粒所得的颗粒装入胶囊，得到胶囊剂(规格为内容物0.5g/胶囊)。
实施例4
本实施例采用与实施例1基本相同的方法制备颗粒剂。不同之处在于各组分用量变为：4g菌株Bb-12、4g菌株La-5，7g菊粉，27g抗性糊精，以淀粉为载体。采用一步制粒机对所得的混合物粉末造粒，过10目筛，然后用颗粒包装机将所得颗粒封装入袋，得到颗粒剂(1g/袋)。
实施例5
本实施例采用与实施例1基本相同的方法制备散剂。不同之处在于各组分用量变为：2g菌株Bb-12、2g菌株La-5，4g菊粉，21g低聚异麦芽糖，淀粉为载体。直接将混合物粉末包装入袋，即可得到散剂(1g/袋)。
实施例6
本实施例采用与实施例1基本相同的方法制备散剂。不同之处在于各组分用量变为：2g菌株Bb-12、2g菌株La-5，5g菊粉，21g抗性糊精，以奶粉为载体。直接将混合物粉末包装入袋，即可得到散剂(1g/袋)。
效果实施例
实施例7 改善便秘症状
(1)诊断标准
功能性便秘诊断标准采用国际功能性胃肠疾病(FGIDS)-RomeⅢ功能性便秘诊断标准：①必须符合以下二项或二项以上：a.至少25％的排便感到费力；b.至少25％的排便为干球状便或硬便；c.至少25％的排便有不尽感；d.至少25％的排便有肛门直肠梗阻感/阻塞感；e.至少25％的排便需要手法帮助(如用手指帮助排便、盆底支持)；f.排便次数<3次/周；②在不使用泻药的情况下时很少出现稀便；③没有足够的证据诊断肠道易激综合征(IBS)。诊断前症状出现至少6个月，且近3个月症状符合以上诊断标准。
(2)纳入标准
符合功能性便秘诊断标准的受试者：年龄18-80岁，共300例，签署知情同意书。
(3)服用方法
所有的受试者被随机平均分成6组，将实施例1-6制备的益生菌复合组合物片剂、胶囊、颗粒剂和散剂，分别按照早晚各一次，每次服用1片/袋、或者两粒(胶囊)，连续服用28天。相应地，被设计成28单元型益生菌复合制剂的每个单元中含有一天的用量，即每个单元中含有分两次服用的用量，早晚各一次，每次服用1片/袋、或者两粒(胶囊)。
(4)评分标准
按照便秘评估量表1，对排便频率、排便困难程度、排便不尽感、腹痛和排便时间分别进行积分，将每位受试者的得分相加之和作为症状积分(0-12分)。
表1 便秘评估量
使用本发明的益生菌复合组合物后，症状积分减少2分以上为有效，减少2分以下无效。统计受试者每天的排便情况，第14、28天的研究结果见表2。
表2 受试者服用本发明益生菌复合组合物后的效果
从表2可以看出，连续使用本发明的益生菌复合组合物后，受试者的便秘症状得到改善，尤其连续服用28天后的症状改善更为明显，效果最好的益生菌复合组合物为实施例3制备的规格为0.5g的胶囊，每次用量含有的益生菌复合组合物成分为20mg菌株Bb-12、20mg菌株La-5，30mg菊粉，180mg抗性糊精，最好长期服用。
实施例8 改善口臭
(1)纳入标准
采用感官分析法来确定口臭的级别。感官分析法又称鼻测法，是一种通过检查者的嗅觉来检测口臭是否存在的主观检测法。最常用的嗅觉判断标准是艾莉森(Allison)和卡茨(Katz)于1919年提出的0-5级分类法。
感官分析的具体操作是采用吸管法，将一次性塑料管放入受试者口中，受试者闭口通过塑料管将口腔中其他呼出，检查者在另一端嗅气体进行判断，并确定嗅觉评分。计分在2或2以上的诊断为口臭。共360名由于工作忙碌、生活习惯等原因导致口臭的人群参与试验，年龄18-45岁。
(2)服用方法
所有的受试者被随机平均分成6组，将实施例1-6制备的益生菌复合组合物片剂、胶囊、颗粒剂和散剂，按照早中晚各一次，每次服用1片/袋、或者两粒(胶囊)，连续服用28天。相应地，被设计成28单元型益生菌复合制剂的每个单元中含有一天的用量，即每个单元中含有分3次服用的用量，早中晚各一次，每次服用1片/袋、或者两粒(胶囊)。
(3)评分
在试验期间，每隔5天以及在第14天和28天进行一次口臭的感官评价，统计受试者的评分变化，第14、28天的评分结果见表3。
表3 受试者连续服用本发明益生菌复合组合物14、28天后的效果
从表3可以看出，连续服用本发明的益生菌复合组合物后，受试者的口臭症状均得到改善，到第28天更明显，效果最好的益生菌复合组合物为实施例4制备的规格为1g的颗粒剂，每次用量含有的益生菌复合组合物成分为40mg菌株Bb-12、40mg菌株La-5，70mg菊粉，270mg抗性糊精，最好长期服用。实施例9改善肤质
(1)纳入标准
因肠道消化功能紊乱，导致排毒不畅，代谢物质在体内堆积从而产生皮肤问题。共50名受试者参加实验，其中25名为女性，所有的受试者都有比如气色差、皮肤暗黄、长斑或长痘等皮肤问题，年龄18-35岁。
(2)服用方法
将实施例6制备的益生菌复合组合物散剂，按照每天1次，每次服用1袋，连续服用28天。相应地，被设计成28单元型益生菌复合制剂的每个单元含有一天的用量，即每个单元含有1次服用的量；每个单元含有1袋实施例6制备的散剂。
(3)评分
在试验期间，跟踪受试者的皮肤变化，包括气色是否变好、斑和痘的严重程度是否得到改善。结果发现，连续服用本发明益生菌复合组合物7天后，受试者的皮肤状况开始改善，连续服用28天后，皮肤状况改善明显的受试者占80％，女性受试者占50％，说明本发明的益生菌复合组合物能够改善人群的肤质，尤其是有皮肤问题的人群在服用本发明的益生菌复合组合物后，肤质明显变好，而且女性服用益生菌复合组合物的效果比男性好。为改善肤质并长期维持好的肤质，最好长期服用本发明益生菌复合组合物。
实施例10与抗生素联合使用
由于幽门螺杆菌感染而采用抗生素三联疗法的人群，在治疗期间容易出现包括腹泻、便秘、呕吐在内的常见副作用。
共140名因幽门螺杆菌感染而使用抗生素三联疗法的受试者参加试验，所述抗生素三联疗法为同时服用50mg枸橼酸铋钾、500mg阿莫西林和200mg替硝唑；受试者的年龄为45-55岁。
服用方法：
采用安慰剂对照平行试验，受试者被随机平均分成7组，其中1组为安慰剂组，共20名受试者，服用不含益生菌复合组合物的空白载体；
另外6组为试验组，试验组受试者服用益生菌复合组合物的方法如下：
将实施例1-6制备的益生菌复合组合物制剂，按照每天早晚各1次，每次服用1片/袋、或者两粒(胶囊)，在三联疗法期间和治疗结束后的三周内继续服用。
研究结果：
因三联疗法导致的副作用发生率明显下降，幽门螺杆菌的清除率提高，受试者的治疗顺应性提高，即完成三联疗法的受试者比例提高，具体结果见表4。
表4 三联疗法期间同时服用益生菌复合组合物的效果
从表4可知，受试者在三联疗法期间同时服用本发明的益生菌复合组合物后，副作用的发生率下降40-50％，幽门螺杆菌清除率提高10-13％，完成三联疗法的受试者比例提高25-30％，说明本发明益生菌复合组合物能够明显改善三联疗法给患者带来的肠道不适，提高完成三联疗法的容易度。
受试者在三联疗法结束后，继续服用本发明的益生菌复合组合物三周，经检测表明，受试者粪便中的双歧杆菌占厌氧菌的比例恢复到抗生素(三联疗法)治疗前的水平，即肠道双歧杆菌菌群得以恢复，说明本发明益生菌复合组合物能够重建肠道菌群。
实施例11 与羊奶粉联合使用
招募60名受试者参与试验，年龄为10-15岁，试验周期为28天。将受试者随机平均分成A和B两组:
A组在试验期间同时服用羊奶粉和益生菌复合组合物(实施例2制备的片剂)，具体为：每天1次，每次1袋羊奶粉和1片益生菌复合组合物；
B组在试验期间服用与A组相同量的羊奶粉和空白载体(不含益生菌复合组合物)；
在试验期间，记录受试者的食欲变化、出现肠道不适的几率和出现感冒的几率；结果发现，在28天的试验周期内，A组受试者的食欲普遍要比B组高，A组受试者中出现肠道不适或感冒的人数为2人，其中一人出现肠道不适的原因是由饮食不当造成的，与本试验无关；B组受试者出现肠道不适或感冒的人数为6人，相比之下，说明益生菌复合组合物与羊奶粉联合使用后，能够加强改善胃肠道功能，建议青少年在食用羊奶粉的时候同时食用本发明的益生菌复合组合物，达到营养的充分吸收，促进肠道健康。
以上所述仅为本发明较佳实施例，并不用于局限本发明，凡在本发明的精神和原则之内所做的修改、等同替换和改进等，均需要包含在发明的保护范围之内。