本发明涉及一种天然产物的提取方法，具体涉及卤虫卵孵化液提取物的制备方法。
背景技术：
卤虫也称丰年虾，是一种生活在高盐水域中的甲壳类生物。卤虫含有丰富的蛋白质、氨基酸、不饱和脂肪酸和无机元素，被广泛用作饵料生物和实验动物材料。卤虫卵一般指卤虫休眠卵，主要用来孵化卤虫无节幼体，用作水产饵料。由于卤虫卵营养丰富且易于保存，可以随用随取，其用途也逐渐扩大，卤虫卵、卵壳已开始用于化妆品、食品等传统用途以外的领域，尤其是孵化过程中卵壳、孵化膜以及孵化液中包含的活性成分也在日益受到关注。这些成分在孵化后期卵壳及孵化膜破裂后，部分释放至孵化液中，含量极低，包含一系列和孵化有关的酶，直接影响卵的激活和孵化特性。对其进行分离和提取，对于进一步研究和开发其功能具有重要意义。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种卤虫卵孵化液提取物的制备方法，简单高效的分离孵化液中的活性成分。
为实现上述目的，本发明采取的技术措施如下：
1.将卤虫卵充分清洗、水合后，按每克干卵50-100毫升人工海水的比例将卵分散于三角瓶中，摇床100rpm/min振荡，温度25℃；
2.孵化24-30小时后，孵化液中加入0.5%-1%聚乙二醇，超声波处理20秒，功率密度0.1w-4w/cm2，离心分离，收集孵化液。将沉淀重新溶于100毫升人工海水，搅拌5分钟，离心分离，将两次离心上清液合并；
3.将孵化液离心，转速500g，5分钟，上清液加入硫酸铵，将沉淀用磷酸盐缓冲液重新溶解，凝胶层析脱盐，冷冻干燥。
本发明有以下优点：超声波在孵化液中的的高频振荡有效提高了孵化膜内含物的释放，缩短了提取时间，保护了提取物活性。同时聚乙二醇有效保护了无节幼体免于破碎，减少了杂质的引入。用人工海水所有成分已知，减少了天然海水中杂质对提取物的影响。
具体实施方式
下面结合具体的实施例对本发明方法做进一步的详细说明。
实施例1
1.将卤虫卵充分清洗、水合后，按每克干卵80毫升人工海水的比例将卵分散于三角瓶中，摇床100rpm/min振荡，温度25℃；
2.孵化24小时后，孵化液中加入0.5%聚乙二醇，超声波处理20秒，功率密度0.5w/cm2，离心分离，收集孵化液。将沉淀重新溶于100毫升人工海水，搅拌5分钟，离心分离，将两次离心上清液合并；
3.将孵化液离心，转速500g，5分钟，上清液加入硫酸铵至饱和度为50%，将沉淀用磷酸盐缓冲液重新溶解，葡聚糖凝胶sephadexg-25层析脱盐，冻干。
经bradford法测定，提取物中蛋白含量53%，以干卤虫卵计得率为0.87%。
实施例2
1.将卤虫卵充分清洗，按每克干卵100毫升人工海水的比例将卵分散于三角瓶中，摇床100rpm/min振荡，温度25℃；
2.孵化28小时后，孵化液中加入0.8%聚乙二醇，超声波处理20秒，功率密度0.5w/cm2，离心分离，收集孵化液。将沉淀重新溶于100毫升人工海水，搅拌5分钟，离心分离，将两次离心上清液合并；
3.将孵化液离心，转速500g，5分钟，上清液加入硫酸铵至饱和度为55%，将沉淀用磷酸盐缓冲液重新溶解，葡聚糖凝胶sephadexg-25层析脱盐，冻干。
经bradford法测定，提取物中蛋白含量55%，以干卤虫卵计得率为0.94%。