一种抑制前列腺癌干细胞的药物组合物及其应用的制作方法

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种抑制前列腺癌干细胞的药物组合物及其在制备抗癌药物中的应用。

背景技术：

前列腺癌是发生在前列腺的恶性肿瘤，其病理类型包括腺癌、导管腺癌、尿路上皮癌、鳞状细胞癌、腺鳞癌等，其中前列腺腺癌占95％以上，因此，通常我们所说的前列腺癌就是指前列腺腺癌。前列腺癌是欧美男性中发病最频繁的癌症之一，并且是男性癌症患者中致死率排名第二的癌症。由于生活水平的提高和饮食结构的改变，近年来我国前列腺癌患者也呈现出显著增多的趋势。

恶性肿瘤是一种异质性的组织，肿瘤细胞受复杂的微环境影响，在增殖过程中不断获得基因突变，导致肿瘤组织中有多种表型和分化程度不同的肿瘤细胞。肿瘤干细胞(tumorstemcell，tsc；也称癌干细胞cancerstemcell，csc)是存在于肿瘤组织中具有自我更新，自我复制能力的细胞，肿瘤干细胞对化疗药物和放射线治疗具有很强的耐受性，并且可以分化出不同表型的肿瘤细胞，重建肿瘤组织的异质性。肿瘤干细胞在病人对化疗及放疗的耐药性及治疗后的复发中起到非常重要的作用。有效抑制肿瘤干细胞和诱导其凋亡，可以减少病人肿瘤的耐药性，大大提高化疗和放疗的效应并减少治疗后复发的可能性。

因此，需要一种能有效抑制前列腺癌干细胞和诱导其凋亡的药物组合物和药物制剂。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种药物组合物和药物制剂，其能有效抑制前列腺癌干细胞的生长，达到抑制前列腺癌生长的目的。

为实现上述目的，本发明所采取的技术方案是：一种抑制前列腺癌干细胞的药物组合物，所述药物组合物包括番茄碱和甲芬那酸，番茄碱和甲芬那酸的摩尔浓度比为1:2-10。

可选的，番茄碱和甲芬那酸的质量比为1:0.5-2.4。

优选的，所述番茄碱和甲芬那酸的摩尔浓度比为1:10。

本发明的药物组合物联合应用了番茄碱(α-tomatine)和甲芬那酸(mefenamicacid)。甲芬那酸(mefenamicacid)又称为甲灭酸、扑湿痛，化学名称为n-(2,3-二甲苯基)-2-氨基苯甲酸，其结构式如下式ⅰ所示：

甲芬那酸是一种非甾体消炎镇痛药，具有解热、镇痛和抗炎等作用，其中，镇痛作用较强，解热持久，但消炎作用不及保泰松和氟芬那酸。甲芬那酸对肿瘤干细胞的作用尚未见报道。

番茄碱(tomatine)又名番茄素或番茄甙，是存在于茄子、马铃薯和番茄等茄科(solanum)植物中的一种含有d-木糖，d-半乳糖及两分子葡萄糖的甾体类糖苷生物碱。其中，番茄碱在番茄(lycopersicon)植株中的含量最高，是番茄根茎、叶、青果中产生的次生代谢物。番茄碱能保护番茄植株在生长过程中免受细菌、真菌、病毒和某些昆虫的侵害，有明显的抗菌、驱虫作用。但番茄碱对肿瘤干细胞的作用未见报道，番茄碱的化学结构如下式ⅱ所示：

本发明人发现将摩尔浓度比为1:2-10(质量比为1:0.5-2.4)的番茄碱(α-tomatine)和甲芬那酸(mefenamicacid)，配伍，两者联合应用能有效抑制前列腺癌干细胞的生长，抑制其形成肿瘤微球并有效抑制前列腺癌干细胞在体内形成肿瘤的能力。

本发明还提供了一种药物制剂，所述药物制剂包括上述的药物组合物和药学上可接受的辅料。

根据制成的不同药物剂型，常用的辅料有淀粉、糊精、糖粉、乳糖、微晶纤维素、药用硫酸钙、药用碳酸钙、甘油、明胶、油酸乙酯、肉豆蔻醇、聚山梨醇酯等。

优选的，所述药物制剂的剂型为注射剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、混悬剂、乳剂、溶液剂、溶胶剂、冻干粉针剂、胶浆剂、气雾剂、微囊、微球、脂质体、胶束、缓释制剂或控释制剂。

本发明化提供了该药物组合物在制备抗癌药物中的应用；在在制备抗癌药物中，所述药物制剂可用于抑制前列腺癌干细胞的生长，可用于抑制前列腺癌干细胞形成肿瘤微球并有效抑制前列腺癌干细胞在体内形成肿瘤。

优选的，所述癌为前列腺癌。

本发明的有益效果是：本发明采用摩尔浓度比为1:2-10的番茄碱和甲芬那酸进行合理配伍，将两者联合能有效抑制前列腺癌干细胞的生长，抑制前列腺癌干细胞形成肿瘤微球并有效抑制前列腺癌干细胞在体内形成肿瘤的能力；本发明的药物组合物的浓度较低，可以减少实际使用时药物的毒副作用，减少对人体的伤害，有望成为一种高效低毒的抑制前列腺癌干细胞的治疗途径。

附图说明

图1是前列腺癌干细胞在cscm^tm干细胞培养基中形成肿瘤微球的图像；

图2是甲芬那酸、番茄碱、甲芬那酸和番茄碱联用、对照试验分别对肿瘤微球形成率的影响；

图3是甲芬那酸、番茄碱、甲芬那酸和番茄碱联用、对照试验分别对肿瘤微球大小的影响。

具体实施方式

实施例1

一种抑制前列腺癌干细胞的药物组合物，所述药物组合物包括以下重量的组分：

番茄碱50mg，

甲芬那酸120mg。

实施例2

一种抑制前列腺癌干细胞的药物组合物，所述药物组合物包括以下重量的组分：

番茄碱150mg，

甲芬那酸120mg。

实施例3

一种抑制前列腺癌干细胞的药物组合物，所述药物组合物包括摩尔浓度比为1:10的番茄碱和甲芬那酸。

实施例4

一种抑制前列腺癌干细胞的药物组合物，所述药物组合物包括摩尔浓度比为1:5的番茄碱和甲芬那酸。

实施例5

此实施例为前列腺癌干细胞的培养。

通过spheroids悬浮培养法从前列腺癌du145细胞株中富集前列腺癌干细胞。spheroids悬浮培养法是目前常用的培养扩增肿瘤干细胞的方法，此方法是利用肿瘤干细胞接种于超低贴壁培养皿在无血清干细胞培养基中能够以单细胞的形式悬浮生长并形成肿瘤微球(tumorspheroids)的特性来富集扩增肿瘤干细胞。

在本实施例中，首先将前列腺癌du145细胞消化为单个细胞，以1×10³细胞/毫升的密度将细胞接种到corning^tm超低贴壁的24孔细胞培养皿中，用promocell公司的cancerstemcellmedium(cscm^tm)无血清肿瘤干细胞培养液进行富集培养，前列腺癌干细胞在干细胞培养基中的生长情况如图1所示。

由图1可知，前列腺癌干细胞在干细胞培养基中悬浮生长扩增并形成肿瘤微球。

实施例6

此实施例为甲芬那酸和番茄碱对前列腺癌干细胞的抑制作用。

采用实施例5的培养方法来培养前列腺癌du145细胞，并采用甲芬那酸、番茄碱、联用甲芬那酸和番茄碱和对照组，检测对肿瘤微球(tumorspheroids)的抑制作用。

将前列腺癌du145细胞消化为单个细胞，以1×10³细胞/毫升的密度将细胞接种到超低贴壁的24孔细胞培养皿，每孔加入培养基1毫升，第一组为对照组加入溶剂dmso(1微升)，第二组加入10mm甲芬那酸1微升(形成甲芬那酸浓度为10μm)，第三组加入1mm番茄碱1微升(形成番茄碱浓度为1μm)，第四组加入10mm甲芬那酸1微升和1mm番茄碱1微升(形成甲芬那酸浓度10μm和番茄碱浓度1μm)。在cscm^tm无血清肿瘤干细胞培养液中培养9天之后检测肿瘤微球形成率和肿瘤微球的大小，所得结果如图2和图3所示。

图2是甲芬那酸、番茄碱、甲芬那酸和番茄碱联用、对照试验分别对肿瘤微球形成率的影响。由图2可知，与对照组相比，单用甲芬那酸对肿瘤微球形成基本没有抑制作用，单用番茄碱对肿瘤微球的形成具有一定的抑制作用。而将甲芬那酸和番茄碱联用对肿瘤微球的形成有明显的抑制作用。

图3是甲芬那酸、番茄碱、甲芬那酸和番茄碱联用、对照试验分别对肿瘤微球大小的影响。由图3可知，与对照组相比，单用甲芬那酸时前列腺癌细胞所形成的>200μm的肿瘤微球所占的比例、单用番茄碱时前列腺癌细胞所形成的>200μm的肿瘤微球所占的比例、联用甲芬那酸和番茄碱时前列腺癌细胞所形成的>200μm的肿瘤微球所占的比例依次减小。联用甲芬那酸和番茄碱时前列腺癌细胞所形成的>200μm的肿瘤微球所占的比例比对照组和单独用药组的比例有了明显的降低。这说明了联用甲芬那酸和番茄碱，不但可以减少肿瘤微球的形成率，还可以抑制肿瘤干细胞的增殖。

实施例7

此实施例为检测甲芬那酸和番茄碱抑制前列腺癌干细胞的成瘤性。

在小鼠移植瘤模型中的强致瘤性是肿瘤干细胞的特性之一。

将du145细胞经过干细胞培养基培养后形成的肿瘤微球用胰酶消化形成单细胞悬液，将细胞以1×10³细胞/毫升的密度将细胞接种到超低贴壁的24孔细胞培养皿，每孔加入培养基1毫升，第一组为对照组加入溶剂dmso(1微升)，第二组加入10mm甲芬那酸1微升(形成甲芬那酸浓度为10μm)，第三组加入1mm番茄碱1微升(形成番茄碱浓度为1μm)，第四组加入10mm甲芬那酸1微升和1mm番茄碱1微升(形成甲芬那酸浓度10μm和番茄碱浓度1μm)。将经药物处理6天后的4组细胞分别以1×10⁴个细胞/只小鼠的密度接种到nod-scid小鼠皮下(每组5只小鼠)，接种后一个月后检查小鼠接种部位肿瘤形成的情况，所得结果如表1所示。

由表1可以看出，对照组的细胞在5只小鼠全部形成肿瘤，接种甲芬那酸(10μm)处理过的细胞的5只小鼠也全部形成肿瘤，接种番茄碱(1μm)处理过的细胞的5只小鼠中有4只形成肿瘤，而接种甲芬那酸(10μm)和番茄碱(1μm)联用处理过的细胞的5只小鼠中仅有2只形成肿瘤。由此可见，甲芬那酸和番茄碱联用可以明显抑制前列腺癌干细胞的致瘤性。

表1.抑制前列腺癌细胞小鼠成瘤的实验结果