一种新型双亲性载药温敏凝胶的制备方法及应用与流程

本发明涉及药物制备技术领域，尤其涉及一种新型双亲性载药温敏凝胶的制备方法及应用。

背景技术：

信筒子醌(Embelin)是一种从植物的果实白花酸腾果中抽提出的有效活性成分。经研究发现，Embelin可抑制小鼠胰腺癌肿瘤发展(Cancer Letters.2014 Nov 28,354(2):407-16)和抑制小鼠EAE的的发病(Mol Neurobiol,2014,49(2):1087-101)。目前，用于研究Embelin治疗作用的实验，大多选择给小鼠口服或腹腔注射。但是Embelin不易溶于水，常需要使用DMSO进行溶解，而DMSO对生物体有毒性，而且Embelin达到一定剂量时会显现明显的毒性。因此，长期给小鼠口服或腹腔注射Embelin会严重损害小鼠的胃肠功能和腹腔脏器。基于现有技术存在的不足，我们提出一种无生物毒性的新型双亲性载药温敏凝胶的制备方法及应用。

技术实现要素：

本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种新型双亲性载药温敏凝胶的制备方法及应用。

一种新型双亲性载药温敏凝胶的制备方法，包括以下步骤：

S1、ε-己内酯的精制：向ε-己内酯内加入CaH2，干燥时间为46～50h，干燥结束后进行过滤，取续滤液进行减压蒸馏，收集5mmHg下95～96℃的馏分，得到纯净的无色透明液体，即为精制后的ε-己内酯；

S2、乙二醇缩酮-ε-己内酯的制备：在单口瓶中加入1,4-环己二酮单乙二醇缩酮，再加入二氯甲烷将1,4-环己二酮单乙二醇缩酮溶解，然后分批加入间氯过氧苯甲酸，反应完毕后，过滤，将二氯甲烷旋干，并在乙醚中重结晶2～3次，得到纯净的乙二醇缩酮-ε-己内酯；

S3、含环醚侧基聚己内酯聚乙二醇三嵌段共聚物的合成：在三口瓶中加入聚乙二醇、ε-己内酯与乙二醇缩酮-ε-己内酯，进行除水操作，除水结束后向三口瓶中加入辛酸亚锡，并在125～135℃反应10～14h，反应结束即得粗产品，然后向三口瓶中加入二氯甲烷将粗产品溶解，得混合物A，将混合物A缓慢滴加到温度为-20℃的冷乙醚中，静置，待沉淀完全进行过滤，并将滤液在真空条件下干燥，即得含环醚侧基聚己内酯聚乙二醇三嵌段共聚物；

S4、新型双亲性载药温敏凝胶的合成：分别称取信筒子醌和含环醚侧基聚己内酯聚乙二醇三嵌段共聚物，并加入四氢呋喃将信筒子醌和含环醚侧基聚己内酯聚乙二醇三嵌段共聚物溶解，得混合液B，将混合液B加入到双蒸水中，持续搅拌4～8h，然后离心，待无药物沉淀后将上清液置于冻干机中冻干，即得新型双亲性载药温敏凝胶。

优选的，所述干燥时间为48h。

优选的，所述聚乙二醇为聚乙二醇1500。

优选的，所述信筒子醌和含环醚侧基聚己内酯聚乙二醇三嵌段共聚物的质量比为20～30：100。

优选的，所述信筒子醌和含环醚侧基聚己内酯聚乙二醇三嵌段共聚物的质量比为25：100。

优选的，所述混合液B和双蒸水的体积比为3.5～4.5：1000，进一步优选的，所述混合液B和双蒸水的体积比为4：1000。

本发明还提出了一种新型双亲性载药温敏凝胶在提高信筒子醌对肿瘤的治疗作用中的应用。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：含环醚侧基聚己内酯聚乙二醇三嵌段共聚物为环醚侧基修饰的新型三嵌段双亲性共聚物，ε-己内酯为疏水性物质、聚乙二醇1500为亲水性物质，从而使含环醚侧基聚己内酯聚乙二醇三嵌段共聚物可以在常温下快速溶解于水中，并形成稳定性良好的壳核结构的纳米粒水溶液；而新型双亲性载药温敏凝胶中的信筒子醌为疏水性物质，当壳核结构形成时，信筒子醌可与含环醚侧基聚己内酯聚乙二醇三嵌段共聚物中的ε-己内酯疏水嵌段结合并被包裹于纳米粒壳核结构内部，同时使聚乙二醇1500的亲水嵌段外露于水中；另外，由于环醚侧基的引入又可赋予ε-己内酯一定的亲水性，这样整个新型双亲性载药温敏凝胶载药系统就具有了亲、疏水双亲性，既可使含环醚侧基聚己内酯聚乙二醇三嵌段共聚物能与信筒子醌形成良好的结合关系，又可使新型双亲性载药温敏凝胶易溶于水中，而且因新型双亲性载药温敏凝胶部分亲水性的存在，使得细胞摄取药物的能力增强，从而提高了药物的作用效果，加之含环醚侧基聚己内酯聚乙二醇三嵌段共聚物的缓释作用，整个治疗过程中只需要一次给药，大大减轻了信筒子醌的使用剂量，从而降低了信筒子醌的副作用影响。

附图说明

图1为本发明提出的新型双亲性载药温敏凝胶在体内缓释实验中注射新型双亲性载药温敏凝胶5min后的图像；

图2为本发明提出的新型双亲性载药温敏凝胶在体内缓释实验中注射新型双亲性载药温敏凝胶7天后的图像；

图3为本发明提出的新型双亲性载药温敏凝胶在体内缓释实验中注射新型双亲性载药温敏凝胶21天后的胞图像；

图4为本发明提出的新型双亲性载药温敏凝胶在体内缓释实验中注射新型双亲性载药温敏凝胶28天后的图像；

图5为本发明提出的新型双亲性载药温敏凝胶相比于信筒子醌和不载药的新型双亲性温敏凝胶对肿瘤的治疗作用对比实验中第一组肿瘤细胞图像；

图6为本发明提出的新型双亲性载药温敏凝胶相比于信筒子醌和不载药的新型双亲性温敏凝胶对肿瘤的治疗作用对比实验中第二组肿瘤细胞图像；

图7为本发明提出的新型双亲性载药温敏凝胶相比于信筒子醌和不载药的新型双亲性温敏凝胶对肿瘤的治疗作用对比实验中第三组肿瘤细胞图像；

图8为本发明提出的新型双亲性载药温敏凝胶相比于信筒子醌和不载药的新型双亲性温敏凝胶对肿瘤的治疗作用对比实验中第四组肿瘤细胞图像；

图9为本发明提出的新型双亲性载药温敏凝胶相比于信筒子醌和不载药的新型双亲性温敏凝胶对肿瘤的治疗作用对比实验中第五组肿瘤细胞图像。

具体实施方式

参照图1-9，下面结合具体实施例对本发明作进一步解说。

实施例，本发明提出的一种新型双亲性载药温敏凝胶的制备方法，包括以下步骤：

S1、ε-己内酯的精制：向ε-己内酯内加入CaH2，干燥时间为46～50h，干燥结束后进行过滤，取续滤液进行减压蒸馏，收集5mmHg下95～96℃的馏分，得到纯净的无色透明液体，即为精制后的ε-己内酯；

S2、乙二醇缩酮-ε-己内酯的制备：在单口瓶中加入1,4-环己二酮单乙二醇缩酮，再加入二氯甲烷将1,4-环己二酮单乙二醇缩酮溶解，然后分批加入间氯过氧苯甲酸，反应完毕后，过滤，将二氯甲烷旋干，并在乙醚中重结晶2～3次，得到纯净的乙二醇缩酮-ε-己内酯；

S3、含环醚侧基聚己内酯聚乙二醇三嵌段共聚物的合成：在三口瓶中加入聚乙二醇、ε-己内酯与乙二醇缩酮-ε-己内酯，进行除水操作，除水结束后向三口瓶中加入辛酸亚锡，并在125～135℃反应10～14h，反应结束即得粗产品，然后向三口瓶中加入二氯甲烷将粗产品溶解，得混合物A，将混合物A缓慢滴加到温度为-20℃的冷乙醚中，静置，待沉淀完全进行过滤，并将滤液在真空条件下干燥，即得含环醚侧基聚己内酯聚乙二醇三嵌段共聚物；

S4、新型双亲性载药温敏凝胶的合成：分别称取信筒子醌和含环醚侧基聚己内酯聚乙二醇三嵌段共聚物，并加入四氢呋喃将信筒子醌和含环醚侧基聚己内酯聚乙二醇三嵌段共聚物溶解，得混合液B，将混合液B加入到双蒸水中，持续搅拌4～8h，然后离心，待无药物沉淀后将上清液置于冻干机中冻干，即得新型双亲性载药温敏凝胶。

利用与上述实施例的制备方法相同的方法制备不载药的新型双亲性温敏凝胶用于对照。

动物实验：

1)本发明提出的新型双亲性载药温敏凝胶在体内缓释实验：

选取实验小鼠，分别皮下注射新型双亲性载药温敏凝胶，并于注射5min、第7天、第21天和第28天时分别取小鼠观察新型双亲性载药温敏凝胶体积大小，结果显示随着新型双亲性载药温敏凝胶的使用时间的延长，新型双亲性载药温敏凝胶的体积逐步降低，表明本发明提出的新型双亲性载药温敏凝胶在体内是缓慢释放的。

2)本发明提出的新型双亲性载药温敏凝胶相比于信筒子醌和不载药的新型双亲性温敏凝胶对肿瘤的治疗作用对比实验：

选取实验小鼠，分别在小鼠肝脏注射肿瘤细胞进行建模，然后将建模成功后的小鼠均分为5组，第一组注射空白溶剂；第二组注射0.5mg的信筒子醌；第三组注射6mg的信筒子醌；第四组注射0.5mg不载药的新型双亲性温敏凝胶；第五组注射0.5mg实施例制备的新型双亲性载药温敏凝胶，并于第28天观察小鼠肿瘤细胞的情况，结果显示本相比于第一组的空白溶剂第二到第五组小鼠肿瘤细胞有所减小，且第28天小鼠肿瘤细胞由大到小的顺序依次为第一组、第四组、第二组、第三组、第五组，表明本发明提出的新型双亲性载药温敏凝胶对肿瘤的治疗作用效果要好于单独的信筒子醌，也高于不载药的新型双亲性温敏凝胶，且比使用大剂量的信筒子醌治疗肿瘤细胞的作用还明显，进而表面本发明制备的新型双亲性载药温敏凝胶治疗肿瘤时使用剂量小，疗效好。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。