专利名称：调节减数分裂的17β－烯丙氧基(硫代)烷基－雄甾烷衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及17β-烯丙氧基(硫代)烷基-雄甾烷衍生物，和含有此化合物的药物组合物，以及这些17β-烯丙氧基(硫代)烷基-雄甾烷衍生物在制备控制生育药物中的应用。
有性繁殖包括二倍体期和单倍体期的周期交替二倍体细胞经减数分裂过程形成单倍体细胞，而单倍体细胞在受精时成对融合形成新的二倍体细胞。减数分裂过程的特点是两次减数分裂，这是雄性和雌性胚细胞所独有的。在两细胞分裂过程中，经过一个周期的DNA复制之后，由单个二倍体细胞产生出4个单倍体细胞。染色体交叉事件(此期间有父系的和母系的遗传物质交换)发生在第一次减数分裂的前期。在第一次减数分裂末期，每个染色体对(由两条姐妹染色单体组成)中的一条分配到每一个子代细胞中。第二次减数分裂将每个姊妹染色单体分离并进入分开的单体细胞中。雄性和雌性胚细胞所经历的减数分裂过程相似，但在这些过程的调节方面具有差异。
在雄性，胚细胞衍生自未成熟胚细胞群即精原细胞干细胞的减数分裂是一连续过程。雄性的性成熟之后，由其干细胞群衍生的精原细胞开始减数分裂。进行不受干扰的第一次和第二次减数分裂最终产生4个成熟精子。
雌性，初级卵母细胞第一次减数分裂在胚胎期已经开始但停滞在前期(核网期)直至雌性性成熟。减数分裂在排卵(卵成熟)时重新开始，排卵之后第一次减数分裂完成和第二次减数分裂启动。大多数脊椎动物的第二次减数分裂停滞在中期并且只在受精后完成。在第一次和第二次减数分裂末期，细胞浆不对称分配产生2个次级卵母细胞，每个卵母细胞具有单倍数目的单条染色体，但大小差异很大一个是最终分解的小极体，而另一个是包含所有发育潜能的大细胞。最终产生一个成熟卵子。
发育中的卵母细胞自卵巢释放和就绪生殖的阶段因种属不同而有差异。无脊椎动物和脊椎动物卵巢附件细胞对产生自机体别处的多肽(促性腺激素)反应从而控制卵母细胞成熟和最终(在大多数种属)控制排卵。人类新生女婴的初级卵母细胞停滞在减数分裂I前期和大部分被单层卵泡细胞所围绕；这样一个卵母细胞和其围绕细胞构成原始卵泡。小部分原始卵泡逐渐开始生长变成发育卵泡卵泡细胞增大和增生形成多层膜围绕初级卵母细胞；卵母细胞本身增大和发育成透明带(是大部分由糖蛋白组成的细胞外基质)和皮质颗粒(在外周区域血浆膜正下方的特异分泌囊泡)，卵胞质皮质[当卵被精子激活，这些皮质颗粒以胞裂外排方式释放其内容物；这些颗粒内容物改变卵衣从而起到阻止其它精子与该卵融合的作用]。
发育卵泡连续增长，其中一部分形成充满液体的裂隙腔或窦，而变成窦性卵泡。卵泡的发育依赖于垂体腺体分泌的促性腺激素(主要是卵泡刺激激素-FSH)和卵泡细胞自身分泌的雌激素。自青春期开始，垂体分泌大量的另一种促性腺激素，促黄体激素(LH)，刺激单个窦性卵泡完成其发育包裹着的初级卵母细胞成熟完成减数分裂I，同时该受刺激卵泡迅速增大并在卵巢表面形成裂孔，释放其中的次级卵母细胞。在大多数哺乳动物，次级卵母细胞只是被精子受精时才触发进行减数分裂II。
对雄性和雌性胚细胞减数分裂过程的引发和调节控制机制的研究提示环核苷酸在调节减数分裂停滞中起一定作用。使cAMP保持高水平的化合物阻止卵母细胞的自发成熟[Eppig，J和Dovns，S.(1984)生殖生物学(Biol.Reprod.)301-11]。嘌呤，如腺嘌呤或次黄嘌呤，被认为参与cAMP介导的减数分裂停滞的维持[Eppig，J.，Ward-Bailey，P和Coleman，D.(1985)生殖生物学(Biol.Reprod.)331041-1049]。Byskov，A.等(1976)生物学进展(Dev.Biol.)52193-200首次描述了在胎鼠性腺的培养系统中存在减数分裂调节物质。据认为，减数分裂刺激物质(MAS)和减数分裂阻止物质(MPS)的浓度共同调节减数分裂过程[Byskov，A等，(1994).在“生殖生理学”(The physiology of reproduction)，Knobil，E.和Neill，J.编著，Raven Press，纽约]。最近，由人卵泡液中分离的(3β，5α，20R)-4，4-二甲基胆甾烷-8，14，24-三烯-3-醇(FF-MAS)，和由公牛睾丸分离的(3β，5α，20R-4，4-二甲基-胆甾烷-8，24-二烯-3-醇)已分别被Byskov，A等[(1995)，自然(Nature)374559-562]鉴定为人和牛内源性减数分裂刺激物质。这些甾类被证明能够刺激培养的包裹和裸露的小鼠卵母细胞的卵丘恢复减数分裂。
国际专利申请WO 96/00235，WO97/00883和WO97/00884(NOBONORDISK A/S)公开了作为减数分裂调节物质的具有饱和或不饱胆甾烷侧链的内源性甾类衍生物。
这些胆甾烷的缺点是它们倾向于在机体内迅速失活[Hall，P.F.(1985)维生素与激素(Vitamins and Hormones)，42315]，因而限制了它们作为生育控制剂的治疗潜力。
为了克服这些缺点，本发明提供具有通式I的17β-烯丙氧基(硫代)烷基-雄甾烷衍生物或其药用盐，
其中R1是(H，OR)、(H，OSO3H)或NOR；R是H，(C1-6)烷基或(C1-6)酰基；R2和R3各自独立地为氢或(C1-6)烷基；n是0、1或2；X是O、S、S(O)或S(O)2；R4和R5各自独立地为氢或(C1-4)烷基；R6、R7和R8各自独立地为氢、苯基、卤素或(C1-4)烷基，选择性地被羟基、(C1-4)烷氧基或卤素取代；或R7和R8一起与碳原子相连形成(C3-6)环烷基；或R6和R7一起与碳原子相连形成(C5-6)环烯基；和其中虚线表示Δ7或Δ8双键，或一对选自Δ7，14、Δ8，14和Δ6，8(14)的共轭双键；已经发现具有通式I的17β-烯丙氧基(硫代)烷基-雄甾烷衍生物显示出改善的减数分裂刺激活性。
本发明进一步提供包括具有通式I的17β-烯丙氧基(硫代)烷基-雄甾烷衍生物的药物组合物。
本发明的另一方面是具有通式I的17β-烯丙氧基(硫代)烷基-雄甾烷衍生物在制备控制生育的药物中的应用。
定义式I使用的术语(C1-6)烷基是指具有1-6个碳原子的支链或直链烷基，如己基、戊基、丁基、异丁基、叔丁基、丙基、异丙基、乙基和甲基。同样地，术语(C1-4)烷基指含有1-4个碳原子的烷基。
术语(C1-6)酰基指自含有1-6个碳原子的羧酸衍生的酰基，如己酰基、戊酰基、新戊酰基、丁酰基、丙酰基、乙酰基和甲酰基。也包括在(C1-6)酰基定义之内的是衍生自二羧酸的基团，如半-戊二酰基、半-琥珀酰基和半-苹果酰基。优选的(C1-6)酰基是半-琥珀酰基。
术语(C1-4)烷氧基指含有1-4个碳原子的烷氧基，如丁氧基、丙氧基、异丙氧基、乙氧基和优选的甲氧基。
术语卤素指F、Cl、Br或I。当卤素在烷基基团上取代时，如在定义的R6、R7和R8中，优选Cl和F，最优选F。
术语(C3-6)环烷基指含有3-6个碳原子的环烷环，如环丙烷、环丁烷、环戊烷和环己烷。
术语(C5-6)环烯基指含有5或6个碳原子的环烯基。
应当理解，本发明的17β-烯丙氧基(硫代)烷基-雄甾烷衍生物具有5α、9α、10β、13β、14α天然构型。本发明优选的化合物是式I的17β-烯丙氧基烷基-雄甾烷衍生物，其中n是0，X是O。更优选的化合物是除其中R1是(H，OR)外，R的含义同前述所定义，虚线表示选自Δ7，14、Δ8，14和Δ6，8(14)的共轭双键。在优选的化合物中，特别优选具有3-OR取代基的β-构型化合物。本发明17β-烯丙氧基(硫代)烷基-雄甾烷衍生物20位的构型可以是R或S，优选是R。本发明特别优选的化合物是17β-烯丙氧基烷基-雄甾烷衍生物(3β，5α，20R)-4，4-二甲基-22-氧胆甾-8，14，24-三烯-3-醇和(3β，5α，20S)-4，4-二甲基-23-氧胆甾-8，14，25-三烯-3-醇。
测定本发明17β-烯丙氧基(硫代)烷基-雄甾烷衍生物在体外卵母细胞实验中的减数分裂刺激活性作为克服次黄嘌呤维持剥露卵母细胞(DO)减数分裂停滞的效力。该类化合物可用于刺激雄性和雌性的减数分裂并因此可用作生育调节剂。生育调节包括节育和不育症治疗。
对于雌性节育，根据通式I的17β-烯丙氧基(硫代)烷基-雄甾烷衍生物可在自然出现促性腺激素高峰之前，用于诱导仍在卵巢内的不成熟的成熟卵母细胞[Mattheij，J.等(1993)已经证实通过诱导不成熟的成熟卵母细胞降低大鼠生殖Gynecol.Obstet.Invest.36129-135]。体内给予本发明化合物特异地影响胚细胞并因而具有维持内源性激素水平和最终维持正常周期长度的优点。这种节育方法将不引起不需要的有时与甾类节育相关的副作用(例如，血栓形成、忧郁、不定期出血、恶性乳房疾病)。在这一点上，注意到本发明化合物不与甾体受体结合是重要的，因为没有发现与孕激素受体、雄激素受体、雌激素受体和糖皮质激素的结合。此外，发现化合物在诱导体外卵母细胞成熟的剂量水平上对人肾上腺细胞的甾体合成或代谢没有影响。
本发明17β-烯丙氧基(硫代)烷基-雄甾烷衍生物的另一优点是它们不能诱导机能不全的卵母细胞(由前-窦性卵泡)成熟，这表明化合物将不影响储备于卵巢的所有卵母细胞。只有来自窦性卵泡(机能健全的卵泡)才能被本发明化合物诱导成熟。
为治疗由于缺少成熟卵母细胞引起的雌性不育，可定期体内给予本发明化合物以刺激机能健全的卵母细胞成熟。
为治疗由于成熟精子数量不足造成的雄性不育，可体内给予本发明化合物以刺激精子成熟。
本发明化合物也可用于试管生殖过程中培养介质的添加物以改善卵母细胞质量。
本发明的17β-烯丙氧基(硫代)烷基-雄甾烷衍生物具有5α、9a、10β、13β、14α、17β的天然构型，并且还含有一个或多个其它的手性碳原子。因而该化合物可作为纯的非对映异构体或作为非对映异构体混合物而得到。得到纯非对映异构体的方法是本领域所熟知的，如结晶或色谱法。
由于存在有旋光活性的硫原子，其中X为S(O)的式I化合物，可以非对映异构的亚砜对形式存在。非对映异构体混合物和分开的异构体均包括在本发明之内。
为治疗应用，式I化合物的盐是那些其中抗衡离子是可药用的盐。然而，也发现根据式I的酸的盐(即其中R1是(H，OSO3H)的化合物)可用于例如，可药用化合物的制备或提纯。所有盐，无论可药用与否，均包括在本发明的范围之内。根据本发明的酸的盐的实例是无机盐如钠盐、钾盐和衍生自有机碱如氨、咪唑、乙二胺、三乙胺等的盐。
式I化合物或其可药用盐，在这里也指活性组分，可经肠内或非肠道给药。活性组分或其药物组合物的精确剂量和给药方案将必要地依赖于要达到的治疗效果(治疗不育；节育)，和将依所用特定化合物、给药途径和接受药物的个体的年龄和身体状况而异。
通常，非肠道给药较其它给药方法所需的剂量要低，这主要取决于吸收。然而，用于人的剂量优选每公斤体重含有0.0001-25mg。所需剂量可在全天内以适当间隔按单次剂量或多次分剂量给予，或者，受治者为雌性时，在整个月经周期内将剂量以适当日间隔给予。雄性和雌性受治者之间的给药剂量及给药方案是有差别的。
在体内或体外应用时，如IVF应用，本发明化合物以约0.01-5μg/ml的浓度用于孵育介质中。
本发明还涉及包括式I的17β-烯丙氧基(硫代)烷基-雄甾烷衍生物与药学可接受的(即可药用)辅剂，及任选地其它治疗剂混合的药物组合物。辅剂必须是“可接受的”指与组合物其它组分相适配并且对其受治者无损害作用。
药物组合物包括适宜于口服、经直肠、鼻内、局部(包括经眼、颊和舌下)、阴道或非肠道(包括皮下、肌内、静脉内和真皮内)给药的药物组合物。组合物可使用任何药学领域熟知的方法来制备，例如，使用例如在Gennaro等，Remington’s药物科学(Remington’sPharmaceutical Sciences)(18版，Mack出版公司，1990，特别参见第8部分药物制剂及制备(Pharmaceuticai Preparations andTheir Manufacture))所描述的那些方法。这些方法包括将活性组分与任何辅剂相混合的步骤。辅剂，也称补助剂，包括那些本领域常用辅剂(Gennaro，supra)，如填充剂、粘合剂、稀释剂、崩解剂、润滑剂、着色剂、调味剂和润湿剂。
适于口服给药的药物组合物可制成分立的剂量单位如丸剂、片剂或胶囊剂，或者粉剂或散剂，或者溶液或悬浮液形式。活性组分也可制成大丸剂或糊剂。组合物可另外加工成直肠给药的栓剂或灌肠剂。
对于非肠道给药，适宜组合物包括含水和不含水的无菌注射液。组合物可制成单-剂量或多-剂量包装物，例如封口的小瓶和安瓿，并以冷冻-干燥的(冻干)状态贮存，使用前只是需要加入无菌液体载体例如水。
适于经鼻吸入的适宜给药组合物或制剂包括可通过加压气溶胶、烟雾剂或吹入剂而产生的计量剂量的微细粉末或喷雾。
本发明17β-烯丙氧(硫代)烷基-雄胆甾烷衍生物也可以以可植入药学装置的形式给药，装置由释放-速度调节膜包封的活性材料芯组成。此植入体可用于皮下或局部，并将以接近恒定的速度在相对长的时段内(如几周～几年)释放活性组分。可植入药物装置等的制备方法为本领域所已知，例如在欧洲专利0,303,306(AKZO N.V.)中描述的。
本发明化合物可使用有机化学领域特别是甾类化学领域通常已知的各种方法来制备[参见，例如Fried，J和Edwards，J.A.，“甾类化学的有机反应”(“Organic Reactions in Steroid Chemistry”)，第I和第II卷，Van Nostrand Reinhold Company，纽约，(1972)]。制备式I化合物的适宜方法是将通式II的化合物，
其中，R2和R3独立地为氢或(C1-6)烷基，R9是羟基-保护基团如烷氧烷基(如乙氧乙基或四氢吡喃基(THP))，n是0、1或2，虚线代表Δ7或Δ8双键，或选自Δ6，8(14)、Δ7，14或Δ8，14的一对共轭双键，Y是OH或SH，与式III的2-丙烯基衍生物Z-C(R4R5)-CR6＝CR7R8式III其中，R4、R5、R6、R7和R8定义同前，而Z是卤素(优选为溴)或离去基团(如甲苯磺酰氧基或甲磺酰氧基)进行缩合，或者将Y是卤素(优选为溴)或离去基团(如甲苯磺酰氧基或甲磺酰氧基)的式II化合物与其中Z是OH或SH的式III化合物进行缩合，此后将17-烯丙氧烷基-雄甾烷衍生物选择地氧化成相应的亚砜(X＝SO)或砜(X＝SO2)衍生物，然后除去所有存留的保护基，产物的3-OH基团选择地转化为3-OR基团，其中R定义同前，或者其中3-OH基团氧化并将产生的3-酮基转化为NOR，其中R的定义同前。
使用本领域已知的方法可完成式II化合物与式III化合物的缩合反应。
例如，其中X是O的式I化合物可通过其中Y是OH的式II化合物与未取代或适当取代的2-丙烯基卤化物或未取代或适当取代的2-丙烯-1-醇衍生物(具有式III的化合物)进行醚化反应而制得，其中羟基转化为离去基团，如甲苯磺酰氧基或甲磺酰氧基。该反应可通过威廉森醚合成(Williamson ether synthesis)或使用联合叔-BuOK/18-冠醚-6/甲苯[Kubodera，N.等，药物化学通报(Chem.Pharm.Bull.)41，1659(1993)]，或通过使用本领域已知的其它技术而实现。适宜的2-丙烯基卤化物包括2-丙烯基氯化物、2-丙烯基溴化物和2-丙烯基碘化物。
醚化反应也可以相反方向进行，即将其中Y是离去基团(如溴化物、碘化物、甲苯磺酰氧基和甲磺酰氧基)的通式II化合物与适当取代的2-丙烯基-1-醇衍生物(此前已转化为钠或钾盐)进行反应。
其中X是S的式I化合物可通过其中Y是SH的金属(Na，K)化式II化合物与适当取代的2-丙烯基卤代物或适当取代的2-丙烯基-1-醇衍生物进行缩合反应而制备，此间羟基转化为离去基团[Schoberl，A.等，Methoden der Organischen Chemie(Houben-Weyl)，Band IX，第93页，Georg Thieme Verlag，Stuttgart，1955]。
式I化合物(X＝S)可通过其中Y是离去基团(如溴代物、碘代物、甲苯磺酰氧基和甲磺酰氧基)的通式II化合物与此前已转化为钠或钾盐的适当取代的2-丙烯基硫醇(Z是SH的式III化合物)进行反应而制备。
X是S(O)或S(O)2的通式I化合物可通过使用能够将硫醚转化为亚砜或砜的试剂(例如H2O2等)氧化由其中X是S的式I化合物来制备[参见Varma，R.S.等，Tetrahedron Lett.38，6525(1997)和其引用的参考]。
通式I化合物(X＝S(O)2；n＝1，2)也可直接将其中Y是离去基团(例如溴代物、碘代物、甲苯磺酰氧基和甲磺酰氧基)的式II化合物与未取代或适宜取代的烯丙基亚磺酸衍生物(此前已转化为钠或钾盐)直接反应而制备[参见例如Hiscock，S.D.等，有机化学杂志(J.Org.Chem.)60，7166(1996)]。
制备其中n＝0和Y是OH的式II化合物的通常起始物料是市售的(3β)-3-羟孕-5-烯-20-酮(化合物1；参见路线1)。可行的合成路线(具体实例由实施例1和路线1示例)是以通过醚类保护基团(例如乙氧基乙醚或THP醚，或甲硅烷基醚)将C-3位的羟基加以保护而起始。这些和其它适宜的保护基团为本领域所公知，例如在Greene，T.W.和Wuts，P.G.M.有机合成中的保护基团(Protective groups inOrganic Synthesis)，Wiley，纽约，1991中所介绍的。
第二步，C-20羰基官能团被还原为羟基。可通过使用氢化物还原剂，如氢化铝锂、硼氢化钠等来完成还原反应，此间主要形成20R异构体[Antia，N.J.等，化学协会杂志(J.Chem.Soc.)1218(1954)]。也可使用在烷醇中的碱金属[Meystre，C.Hev.Chim.Acta29，33(1946)]或使用硼烷[Midland，M.M.等，美国化学协会杂志(J.Amer.Chem.Soc.)105，3725(1983)]完成还原反应，这导致主要形成20S异构体。
另一供选择的路线是，3-保护的孕-5-烯-3，20-二醇可通过将适宜保护的孕烷-5，17-二烯-3-醇衍生物硼氢化而制得[Murayama，E.等，药物化学通报(Chem.Pharm.Bull.)34，4410(1986)；Yoshizawa，I.等，药物化学通报(Chem.Pharm.Bull.)31，3819(1983)]。
C-20位的羟基转变为酯，如乙酸酯或苯甲酸酯等，3-羟基官能团脱保护。后者被氧化成羰基，该反应可用奥本瑙尔(Oppenauer)氧化反应或Swern氧化反应，或者使用铬(VI)试剂，如琼斯试剂(Jonesreagent)、重铬酸吡啶鎓、氯铬酸吡啶鎓或其它本领域已知的氧化剂来完成。用皂化反应将C-20位的羟基脱保护，然后再保护为甲硅烷基醚，如二异丙基甲硅烷基醚、叔-丁基二甲基甲硅烷基醚或叔-丁基二苯基甲硅烷基醚。
任选地，目前的所得产物在C-4可是单-或二烷基化的，例如，可用甲基进行二烷基化。可使用标准工艺进行烷基化[如，在叔-丁醇/四氢呋喃中的叔-丁醇钾/碘代甲烷Dolle，R.E.等，有机化学杂志(J.Org.Chem.)51，4047(1986)]，也可使用其它技术，例如在四氢呋喃中的二异丙基氨化锂/碘代甲烷，和本领域类似的方法来完成烷化。或者，通过与碱反应然后用水淬火而将Δ4化合物转化为Δ5衍生物[Jones，J.B.等，加拿大化学杂志(Can.J.Chem.)46，1459(1968)]。在这两种情况中，C-3位的羰基还原为羟基。可使用的还原剂包括氢化铝锂、硼氢化钠或其它本领域已知的氢化物还原剂。产生的3-羟基化合物以酯的形式(如，乙酸酯、苯甲酸酯或新戊酸酯等)被保护。
现在通过下述程序可将Δ5系统转化为Δ5，7-二烯系统C-7位溴化，接着脱去溴化氢。溴化反应可在加热[Schroepfer，G.J.，等，脂类物理化学(Chem.Phys.Lipids)47，187(1988)]或光化学[Prelle，A.等，杂环化合物(Heterocycles)28，333(1989)]下完成。在两种情况中，可使用的溴化剂是N-溴代琥珀酰胺、1，3-二溴-5，5-二甲基甲内酰脲等。脱溴化氢剂包括N，N-二异丙基乙胺、2，4，6-三甲基吡啶、三甲基亚磷酸、氟化四丁铵等。
Δ5，7二烯系可转化为Δ6，8(14)二烯系、Δ7，14二烯系或Δ8，14二烯系。使用的方法为本领域所已知。为转化为Δ6，8(14)衍生物，可参见例如Kaneko，C.等，药物化学通报(Chem.Pharm.Bull.)26，3582(1978)。为转化为Δ7，14衍生物，可参见例如Wilson，W.K.等，有机化学杂志(J.Org.Chem.)53，1713(1988)。为转化为Δ8，14衍生物，可参见例如Schroepfer，G.J.，Jr.等，脂类物理化学(Chem.Phys.Lipids)47，187(1988)或Dolle，R.E.等，有机化学杂志(J.Org.Chem.)53，1563(1988)。Δ5，7二烯系转化为Δ6，8(14)二烯系、Δ7，14二烯系或Δ8，14二烯系，可产生这些异构体的混合物。得到纯化合物的方法是本领域所熟知的，例如使用结晶或负载银盐的硅胶柱色谱。Δ7化合物通过在液氨中用锂还原[Lederer，F.等，法国化学协会通报(Bull.Soc.Chim.Fr.)1295(1965)]或通过氢化还原Δ5，7二烯系制得。可使用的氢化催化剂包括阮内镍(Raney nickel)[Gautschi，F等，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)233，1343(1958)]、Wilkinson’s催化剂[Canonica，L等，甾类化合物(Steroids)11，287(1968)]等。Δ8按下述顺序由Δ8，14二烯制备Δ14双键选择性硼氢化，接着产生的15-羟基化合物脱氧[Dolle，R.E.等，美国化学协会杂志(J.Amer.Chem.Soc.)111，287(1989)]。
对双键的处理可伴随着C-20位的羟基脱保护。在这些情况中，20-羟基可按前述方法以甲硅烷基醚形式再被保护起来。C-3位的酯官能团通过氢化铝锂还原反应或被本领域已知的其它氢化物还原剂而被除去，此后，3-羟基可再保护成醚(如乙氧乙基醚或四氢吡喃醚)。最后，用氟化剂(如氟化钾、氟化四丁铵)或其它本领域已知的试剂处理，然后产生其中n＝0和Y是OH的式II的不饱和的3-保护的孕烷-3，20-二醇衍生物。
其中n＝1和Y为OH的式II化合物可通过类似于前述的顺序反应由例如(20S)-21-羟基-20-甲基孕-4-烯-3-酮制得[Trost，B.M.等，美国化学协会杂志(J.Amer.Chem.Soc.)105，5075(1983)]。
其中n＝2和Y是OH的式II化合物可通过同系化反应由其中n＝1和Y是OH的式I化合物制得，例如通过下面序反应21-羟基转化为离去基团，与氰化钾反应，腈基还原为相应的羧醛(carboxaldehyde)，最后，还原为乙醇。作为可选择的途径，以相应20-羧醛起始的一碳同系化反应可通过与(Ph)3P＝CHOMe进行Wittig缩合并水解该中间烯醇醚而完成。同系化反应技术是本领域熟知的，参见例如Mathieu，J.等C-C键的形成(Formation of C-C Bonds)，第I-III卷，Georg Thieme Publishers，Stuttgart，1973。
式II化合物(Y＝SH；n＝0，1，2)可由式II化合物(Y＝OH；n＝0，1，2)与硫代乙酸通过Mitsunobu反应，接着通过还原或皂化作用转化为硫醇而制得[参见Hughes，D.L.，有机反应(OrganicReactions)42，335(1992)]。或者，可由其中Y是离去基团(如溴化物、碘化物、甲苯磺酰氧基和甲磺酰氧基)的通式II化合物(n＝1，2)与硫脲反应，随后与碱(如氢氧化钠或氢氧化钾)反应而制得[参见例如Allewaert，K.等，Bioorganic & Med.Chem.Lett.3，1859(1993)]。
具有式III的2-丙烯基衍生物，Z-C(R4R5)-CR6＝CR7R8，可由市售或使用本领域已知的方法制备而得到。其中R1是(H，OH)的式I化合物可以作为起始物料，使用本领域已知方法，合成其中R1是(H，OR)、(H，OSO3H)或NOR和R是H、(C1-6)烷基或(C1-6)酰基的式I化合物。
通过下面实施例进一步阐明本发明。
路线1
实施例1(3β，5α，20S)-4，4-二甲基-22-氧胆甾烷-8，14，24-三烯-3-醇(19；路线I)i)将对-甲苯磺酰吡啶鎓(6.32g)加到(3β)-3-羟孕-5-烯-20-酮(1；100g)的二氯甲烷(600ml)和乙基乙烯醚(200ml)溶液中。室温下搅拌反应混合物1小时后，加入三乙胺(20ml)，在此基础上将混合物倒入饱和的碳酸氢钠水溶液(1l)中。将产物萃取到二氯甲烷中；用盐水洗涤合并的有机相，硫酸钠干燥，减压浓缩得到不需要纯化就用于下一步骤的(3β)-3-[(1-乙氧乙基)氧]孕-5-烯-20-酮(2；125.6g)。ii)-用2小时时间以小批量将钠(8.98g)加入到(3β)-3-[(1-乙氧乙基)氧]孕-5-烯-20-酮(20g)的无水正-丁醇(587ml)回流溶液中。再继续加热2小时；然后冷却反应混合物并倒入饱和的碳酸氢钠水溶液(1.5l)中。将产物萃取到乙酸乙酯中；用盐水洗涤合并的有机相，硫酸钠干燥，减压浓缩。柱色谱法得到(3β，20R)-3-[(1-乙氧乙基)氧]孕-5-烯-20-醇(5.08g)和(3β，20S)-3-[(1-乙氧乙基)氧]孕-5-烯-20-醇的粗产品(化合物3；7.21g)。iii)-在室温下搅拌(3β，20S)-3-[(1-乙氧乙基)氧]孕-5-烯-20-醇(56.9g)的无水吡啶(144ml)和醋酸酐(72.4ml)混合物溶液18小时。加入水(482ml)再继续搅拌1小时。将产物萃取到乙酸乙酯中；用饱和的碳酸氢钠水溶液和用盐水洗涤合并的有机相，硫酸钠干燥，减压浓缩。得到不需要进一步纯化即可用于下一步骤的((3β，20S)-3-[(1-乙氧乙基)氧]孕-5-烯-20-醇乙酸酯(化合物4；66.1g)。iv)-用4M盐酸水溶液(13.2ml)处理((3β，20S)-3-[(1-乙氧乙基)氧]孕-5-烯-20-醇乙酸酯(66.1g)的丙酮溶液(1330ml)。搅拌反应混合物45分钟，随后倒入水(3l)和饱和的碳酸氢钠水溶液(500ml)的混合物中。过滤收集产生的沉淀物并溶于二氯甲烷中。乙酸乙酯萃取滤液。二氯甲烷和乙酸乙酯溶液用饱和的碳酸氢钠水溶液和用盐水进行洗涤，硫酸钠干燥，减压浓缩。得到不需要进一步纯化即可用于下一步骤的((3β，20S)-孕-5-烯-3，20-二醇20-乙酸酯(化合物5；53.5g)。v)-将异丙醇铝(18.1g)加入((3β，20S)-孕-5-烯-3，20-二醇20-乙酸酯(21.9g)的无水甲苯(252ml)和无水2-丁酮(156ml)溶液中。回流加热混合物2小时，然后冷却，加入酒石酸钠钾四水合物(91.4g)溶于水(90ml)的溶液。搅拌混合物30分钟并过滤。将滤液倒入盐水中，乙酸乙酯萃取产物。盐水洗涤合并的有机相，硫酸钠干燥，减压浓缩。柱色谱法得到(20S)-20-(乙酰氧基)孕-4-烯-3-酮(化合物6；17.9g)。vi)-将氢氧化钾(22.5g)加入到(20S)-20-(乙酰氧基)孕-4-烯-3-酮(17.9g)的四氢呋喃(418ml)、甲醇(380ml)和水(125ml)的溶液中。室温搅拌混合物3小时然后倒入水(2l)中。乙酸乙酯萃取产物；盐水洗涤合并的有机相，硫酸钠干燥，减压浓缩。柱色谱法得到(20S)-20-羟孕-4-烯-3-酮(化合物7；35.4g)。vii)-叔-丁基二甲基甲硅烷基氯(39.6g)加入到(20S)-20-羟孕-4-烯-3-酮(36.3g)和咪唑(53.5g)的无水N，N-二甲基甲酰胺(345ml)溶液中。室温搅拌反应混合物2.5小时然后倒入水中。乙酸乙酯萃取产物；水和盐水洗涤合并的有机相，硫酸钠干燥，减压浓缩。柱色谱法得到(20S)-20-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧]孕-4-烯-3-酮(化合物8；41.6g)。viii)-叔丁醇钾(46.3)加入(20S)-20-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧]孕-4-烯-3-酮(40.6g)的无水叔-丁醇(1000ml)和无水四氢呋喃(146ml)溶液中。于45℃加热混合物10分钟，然后加入碘代甲烷(52.4ml)。相同温度下加热反应混合物过夜，然后倒入水(2l)中。乙酸乙酯萃取产物；盐水洗涤合并的有机相，硫酸钠干燥，减压浓缩。柱色谱法得到(20S)-20-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧]-4，4-二甲基孕-5-烯-3-酮(化合物9；40.7g)。ix)-化合物9(39.4g)的无水四氢呋喃(400ml)溶液滴入冰冷却的氢化铝锂(9.81g)的四氢呋喃(490ml)悬浮液中。室温搅拌混合物1小时。反应冷却至0℃，然后用饱和的硫酸钠水溶液淬火。硅藻土过滤反应混合物，将滤液减压浓缩得到不需要进一步纯化即可用于下一步骤的(3β，20S)-20-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧]-4，4-二甲基孕-5-烯-3-醇(化合物10；38.9g)。x)-5分钟内将苯甲酰氯(19.9ml)加入到冰冷的(3β，20S)-20-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧]-4，4-二甲基孕-5-烯-3-醇(38.9g)的无水吡啶(395ml)溶液中。室温搅拌反应混合物2小时，然后倒入冰水(2l)中。对产生的悬浮液搅拌过夜并过滤；用40-50℃的水(1.5l)洗涤残余物，然后溶于二氯甲烷。盐水洗涤二氯甲烷溶液，硫酸钠干燥，减压浓缩。柱色谱法得到(3β，20S)-20-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧]-4，4-二甲基孕-5-烯-3-醇苯甲酸酯(化合物11；45.9g)。xi)-将(3β，20S)-20-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧]-4，4-二甲基孕-5-烯-3-醇苯甲酸酯(44.6g)、无水甲苯(394ml)、无水环己烷(394ml)和N-溴代琥珀酰胺(17.8g)混合物在回流温度加热10分钟。冷却反应混合物，加入另一部分N-溴代琥珀酰胺(17.8g)，再继续回流10分钟。冷却反应产物，加入饱和的硫代硫酸钠(802ml)水溶液，将产生的混合物搅拌30分钟。分离水相和有机相，用甲苯萃取有机相两次。合并的有机相用硫酸钠干燥并减压浓缩。将得到的粗产品的无水甲苯(1381ml)和N，N-二异丙基乙胺(138ml)溶液加热回流1.5小时。然后冷却，用饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化铵水溶液和盐水洗涤，每次用乙酸乙酯萃取水相。硫酸钠干燥合并的甲苯和乙酸乙酯溶液并且减压浓缩。柱色谱法得到(3β，20S)-20-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧]-4，4-二甲基孕烷-5，7-二烯-3-醇苯甲酸酯(化合物12；40.0g)。xii)-将化合物12(36.6g)、甲苯(91ml)、乙醇(622ml；96％)和浓盐酸(91ml)混合物回流加热4小时。冷却反应混合物并倒入饱和碳酸氢钠水溶液中(1l)。乙酸乙酯萃取产物。用饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤合并的有机相，硫酸钠干燥，减压浓缩。柱色谱法和结晶得到(3β，5α，20S)-4，4-二甲基孕烷-8，14-二烯-3，20-二醇3-苯甲酸酯(化合物13；7.89g)和(3β，5α，20S)-4，4-二甲基孕烷-6，8(14)-二烯-3，20-二醇3-苯甲酸酯(3.69g)。xiii)-类似于步骤vii的过程，将(3β，5α，20S)-4，4-二甲基孕烷-8，14-二烯-3，20-二醇3-苯甲酸酯(7.05g)转化为(3β，5α，20S)-20-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧]-4，4-二甲基孕-8，14-二烯-3-醇苯甲酸酯(化合物14；9.47g)。xiv)-类似于步骤ix的过程，将(3β，5α，20S)-20-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧]-4，4-二甲基孕-8，14-二烯-3-醇苯甲酸酯(9.47g)转化为(3β，5α，20S)-20-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧]-4，4-二甲基孕-8，14-二烯-3-醇(化合物15；7.08g)。xv)-类似于步骤i的过程，将化合物15(6.63g)转化为(3β，5α，20S)-20-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧]-3-[(1-乙氧乙基)氧]-4，4-二甲基孕-8，14-二烯(化合物16；8.00g)。xvi)-室温下搅拌(3β，5α，20S)-20-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧]-3-[(1-乙氧乙基)氧]-4，4-二甲基孕烷-8，14-二烯(化合物16；7.40g)的1M氟化四丁铵的四氢呋喃(42ml)溶液24小时。反应混合物倒入水中，乙酸乙酯萃取产物。盐水洗涤合并的有机相，减压浓缩。柱色谱法得到(3β，5α，20S)-3-[(1-乙氧乙基)氧]-4，4-二甲基孕-8，14-二烯-20-醇(化合物17；5.21g)。xvii)-(3β，5α，20S)-3-[(1-乙氧乙基)氧]-4，4-二甲基孕烷-8，14-二烯-20-醇(化合物17；1.65g)、无水甲苯(115ml)、叔-丁醇钾(5.68g)、18-冠醚-6(0.99g)和4-溴-2-甲基-2-丁烯(4.44ml)混合物70℃加热1小时。冷却后，将反应混合物倒入水中，乙酸乙酯萃取产物。水和盐水洗涤合并的有机相，硫酸钠干燥，减压浓缩，得到不需要进一步纯化即可用于下一步骤的(3β，5α，20S)-3-[(1-乙氧乙基)氧]-4，4-二甲基-22-氧胆甾烷-8，14，24-三烯(化合物18；2.30g)。xviii)-类似于步骤iv的过程，将(3β，5α，20S)-3-[(1-乙氧乙基)氧]-4，4-二甲基-22-氧胆甾烷-8，14，24-三烯(2.30g)转化为(3β，5α，20S)-4，4-二甲基-22-氧胆甾烷-8，14，24-三烯-3-醇(化合物19；1.13g)，熔点110.5-113.5℃。实施例2(3β，5α，20S)-4，4-二甲基-22-氧胆甾烷-8，14，24-三烯-3-醇丁二氢酸酯(hydrogen butanedionate)(3β，5α，20S)-4，4-二甲基-22-氧胆甾烷-8，14，24-三烯-3-醇(实施例1；0.50g)、无水吡啶(8ml)、琥珀酸酐(3.0g)和4-二甲基氨基吡啶(20mg)混合物60℃加热过夜。冷却后，反应混合物倒入0.1M盐酸水溶液中。乙酸乙酯萃取产物。水和盐水洗涤合并的有机相，硫酸钠干燥，减压浓缩，柱色谱得到(3β，5α，20S)-4，4-二甲基-22-氧胆甾烷-8，14，24-三烯-3醇丁二氢酸酯(0.35g)。熔点60-67℃。实施例3(3β，5α，20R)-4，4-二甲基-22-氧胆甾烷-8，14，24-三烯-3-醇由(3β，5α，20R)-3-[(1-乙氧乙基)氧]孕烷-5-烯-20-醇(实施例1；步骤ii)开始，用类似于实施例1的方式制备标题化合物。熔点117-120℃。实施例4(3β，5α，20S)-4，4-二甲基-22-氧胆甾烷-6，8(14)，24-三烯-3-醇由(3β，20S)-4，4-二甲基孕-6，8(14)-二烯-3，20-二醇3-苯甲酸酯(实施例1；步骤xii)开始，用类似于实施例1的方式制备标题化合物。熔点171-174℃。实施例5(3β，5α，20R)-4，4-二甲基-22-氧胆甾烷-6，8(14)，24-三烯-3-醇丁二酸氢酯由(3β，5α，20S)-4，4-二甲基-22-氧胆甾烷-6，8(14)，24-三烯-3-醇(实施例4)开始，用类似于实施例2的过程制备标题化合物。熔点96-99℃。实施例6(3β，5α，20S)-4，4-二甲基-23-氧胆甾烷-8，14，25-三烯-3-醇i)-(20S)-3-氧孕-4-烯-20-羧醛(125g)的无水乙醇(1250ml)溶液冷却至-10℃。在30分钟内加入硼氢化钠(4.4g)的无水乙醇(80ml)溶液。于-10℃搅拌混合物2小时，加入50％乙酸水溶液将反应淬火。减压下将反应混合物浓缩到其起始容积的25％，然后倒入冰水(5l)中。将产生的悬浮液搅拌过夜并过滤。用水洗涤剩余物，干燥得到不需要进一步纯化即可用于下一步骤的(20S)-21-羟基-20-甲基孕-4烯-3-酮(124g)。ii)-类似于实施例1的vii，viii，ix，x和xi所描述的过程，将得自于前一步骤的醇转化为(3β，20S)-21-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧]-4，420-三甲基孕烷-5，7-二烯-3-醇苯甲酸酯。iii)-上述二烯(30.9g)、氯仿(300ml)和HCl的乙酸溶液(1M，300ml)的混合物室温下搅拌45分钟，然后再加热回流45分钟。冷却后，将混合物倒入水中，二氯甲烷萃取产物。用水、饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤合并的有机相，硫酸钠干燥，减压浓缩。柱色谱法得到5∶1的(3β，5α，20S)-4，4，20-三甲基孕烷-8，14-二烯-3，21-二醇21-乙酸酯3-苯甲酸酯和(3β，5α，20S)-4，4，20-三甲基孕烷-6，8(14)-二烯-3，21-二醇21-乙酸酯3-苯甲酸酯混合物(10.2g)。该混合物用于下一步反应。iv)-按照实施例1步骤vi描述的类似过程，将前一步的产物(10.2g)转化为21-羟化合物。柱色谱法得到用于下一步骤的5∶1的(3β，5α，20S)-4，4，20-三甲基孕烷-8，14-二烯-3，21-二醇3-苯甲酸酯和(3β，5α，20S)-4，4，20-三甲基孕烷-6，8(14)-二烯-3，21-二醇3-苯甲酸酯混合物(8.23g)。v)-按照实施例1步骤vii、xi和i描述的类似过程，将(3β，5α，20S)-4，4，20-三甲基孕烷-8，14-二烯-3，21-二醇3-苯甲酸酯转化为(3β，5α，20S)-21-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧]-3-[(1-乙氧乙基)氧]-4，4，20-三甲基孕烷-8，14-二烯。vi)-(3β，5α，20S)-21-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧]-3-[(1-乙氧乙基)氧]-4，4，20-三甲基孕烷-8，14-二烯(11.6g)在1M氟化四丁胺的四氢呋喃(43ml)溶液于50℃搅拌1小时。将反应混合物倒入水中，乙酸乙酯萃取产物。饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤合并的有机相，硫酸钠干燥，减压浓缩。柱色谱法得到(3β，5α，20S)-3-[(1-乙氧乙基)氧]-4，4，20-三甲基孕烷-8，14-二烯-21-醇(9.11g)。vii)-(3β，5α，20S)-3-[(1-乙氧乙基)氧]-4，4，20-三甲基孕烷-8，14-二烯-21-醇(1.0g)、无水甲苯(67ml)、叔-丁醇钾(3.34g)、18-冠醚-6(0.581g)和3-氯-2-甲基-1-丙烯(1.14ml)的混合物于70℃加热1.5小时。冷却后，将反应混合物倒入水中，乙酸乙酯萃取产物。盐水洗涤合并的有机相，硫酸钠干燥，减压浓缩得到不需要进一步纯化即可用于下一步骤的(3β，5α，20S)-3-[(1-乙氧乙基)氧]-4，4-二甲基-23-氧胆甾烷-8，14，25-三烯(1.21g)。viii)-按照类似于实施例1步骤iv的过程，将(3β，5α，20S)-3-[(1-乙氧乙基)氧]-4，4-二甲基-23-氧胆甾烷-8，14，25-三烯(1.21g)转化为3-羟基化合物。经色谱柱法和结晶得到(3β，5α，20S)-4，4-二甲基-23-氧胆甾烷-8，14，25-三烯-3-醇(0,189g)。熔点113-115℃。实施例7(3β，5α，20S)-4，4-二甲基-23-硫代胆甾烷-8，14，25-三烯-3-醇i)-对-甲苯磺酸酐(9.09g)加入(3β，5α，20S)-3-[(1-乙氧乙基)氧]-4，4，20-三甲基孕烷-8，14-二烯-21-醇(实施例6，步骤vi；5.98g)的无水吡啶(56ml)溶液中。反应混合物在室温下搅拌1.5小时，然后倒入水中。乙酸乙酯萃取产物；盐水洗涤合并的有机相，硫酸钠干燥，减压浓缩，得到(3β，5α，20S)-3-[(1-乙氧乙基)氧]-4，4，20-三甲基-21-[[(4-甲苯基)磺酰]氧]孕烷-8，14-二烯(8.0g)。产物不需要进一步纯化即可用于下一步骤。ii)-硫脲(3.86g)加入到前一步骤得到的甲苯磺酸酯(7.42g)的无水二甲亚砜(63.5ml)溶液中，于50-60℃加热混合物2小时。加入3-氯-2-甲基-1-丙烯(5.08ml)和粉状氢氧化钾(4.67g)，在40-50℃继续搅拌3.5小时。将混合物倒入水中，乙酸乙酯萃取产物。水和盐水洗涤合并的有机相，硫酸钠干燥，减压浓缩。用柱色谱法和结晶得到(3β，5α，20S)-4，4-二甲基-23-硫代胆甾烷-8，14，25-三烯-3-醇(0.199g)。熔点128-132℃。实施例8[3β，5α，20S，(21R)]-4，4，20-三甲基-21-[(2-甲基-2-丙烯基)亚硫酰基]孕烷-8，14-二烯-3-醇和[3β，5α，20S，(21S)]-4，4，20-三甲基-21-[(2-甲基-2-丙烯基)亚硫酰基]孕烷-8，14-二烯-3-醇过氧化氢(0.766ml)和三氟丙酮(0.069ml)加入(3β，5α，20S)-4，4-二甲基-23-硫代胆甾烷-8，14，25-三烯-3-醇(实施例7，步骤ii；1.64g)的二氯甲烷(19ml)溶液中。室温搅拌5小时后，将反应混合物倒入硫代硫酸钠饱和水溶液中。二氯甲烷萃取产物。用硫代硫酸钠饱和水溶液和盐水洗涤合并的有机相，硫酸钠干燥，减压浓缩。用柱色谱法和结晶得到[3β，5α，20S，(21R)]-4，4，20-三甲基-21-[(2-甲基-2-丙烯基)亚硫酰基]孕烷-8，14-二烯-3-醇(0.242g)，熔点195-206℃和[3β，5α，20S，(21S)]-4，4，20-三甲基-21-[(2-甲基-2-丙烯基)亚硫酰基]孕烷-8，14-二烯-3-醇(0.231g)，熔点205-213℃。后者含有40％的[3β，20S，(21S)]-4，4，20-三甲基-21-[(2-甲基-2-丙烯基)亚硫酰基]孕-5-烯-3-醇。实施例9卵母细胞实验停滞在减数分裂的卵母细胞含有被称为胚囊(GV)的完整核膜围绕着的弥散的染色体。中期促性腺激素峰再激活减数分裂后，染色体重新凝聚及GV分裂(GVBD)。体内试验时，卵母细胞暴露于次黄嘌呤(HX)，其保持卵母细胞停滞在减数分裂前期。通过将次黄嘌呤加入培养介质可在体外模拟减数分裂停滞。测定本发明化合物的活性作为克服次黄嘌呤维持剥露的卵母细胞(DO)减数分裂停滞的效力，即体外诱导减数分裂恢复。分离包裹着卵母细胞的卵丘卵巢取自成熟雌性小鼠(B6D2-F1，品系C57BL×DBA)。19、20或21天大的小鼠皮下注射单剂量为20IU促卵泡激素(Organon，TheNetherlands)的盐水。48小时后，拉颈处死注射了促卵泡激素的小鼠。取出卵巢，去净外周组织，放入37℃含1ml标本介质的多孔培养板(multidish)中。用添加了牛血清白蛋白(3mg.ml-1)的L-15 Leibovitz介质(Gibco，pH7.3±0.1)、L-谷酰胺(0.23mM)，丙酮酸钠(2mM)和次黄嘌呤(4mM)用作标本介质。在解剖显微镜下使用附带2个27号针头的2个1ml注射器穿刺卵巢的窦性卵泡。用限口(mouth-controlled)的滴管选择均匀大小的包裹卵母细胞的卵丘(CEO)并在0.5ml新鲜标本介质中漂净。一个卵巢取出约20个CEO。分离剥露的卵母细胞使用细小内径的限口滴管通过轻轻地冲洗CEO得到从卵丘细胞中游离出来的卵母细胞即剥露的卵母细胞(DO)。在新鲜培养介质中轻轻漂洗DO两次并贮于处于37℃100％湿度5％CO2空气氛围的培养介质中。试验设计卵母细胞实验以3个区段进行，每一区段代表一个小鼠的卵巢(随机区段设计)。时间＝0时，在含0.5ml培养介质并加入了本发明17β-烯丙基氧(硫代)烷基-雄甾烷衍生物的4-孔多孔板上，将第一只小鼠的第一个卵巢的DO分布于孔1和3，第二个卵巢的卵母细胞分布于孔2和4(第一区段)。培养介质用作对照。对第2、3只小鼠(区段2和3)进行同样的操作。使用的培养介质是用CO2饱和并添加了牛血清白蛋白(3mg.ml-1)的MEMα基质(Gibco，pH7.3±0.1)、L-谷酰胺(0.23mM)，丙酮酸钠(2mM)和次黄嘌呤(4mM)。总之，每一对照和测试化合物在30个卵母细胞(每个区段10个卵母细胞)上进行。时间＝0时，在配有差异干涉相衬设备的倒置显微镜下计数完整胚泡(GV)或破裂胚泡(GVBD)的DO数目。只将具有完整GV的卵母细胞用于试验。在37℃100％湿度5％CO2空气的氛围中培养卵母细胞22小时。培养期末计数每组GV或GVBD的卵母细胞。为统计分析，计数一个区段中每组破裂胚泡的百分比。这些百分比进行arcsin转变，用ANOVA检验对随机区段设计的对照和测试化合物之间的差异性进行分析。所得结果列于表I。表I存在测试化合物条件下培养后卵母细胞中破裂胚泡(GVBD)百分比(DO分析)*化合物(实施例) GVBD(％)试验(对照)(3β，5α，20S)-4，4-二甲基-22-氧胆甾烷-8，14，24-三烯-3-醇(1) 38(2)(3β，5α，20S)-4，4-二甲基-22-氧胆甾烷-8，14，24-三烯-3-醇丁二氢1(0)酸酯(2)(3β，5α，20R)-4，4-二甲基-22-氧胆甾烷-8，14，24-三烯-3-醇(3) 100(0)(3β，5α，20S)-4，4-二甲基-22-氧胆甾烷-6，8(14)，24-三烯-3-醇(4) 0(0)(3β，5α，20S)-4，4-二甲基-22-氧胆甾烷-6，8(14)，24-三烯-3-醇丁二67(0)酸氢酯(5)(3β，5α，20S)-4，4-二甲基-23-氧胆甾烷-8，14，25-三烯-3-醇(6) 100(0)(3β，5α，20S)-4，4-二甲基-23-硫代胆甾烷-8，14，25-三烯-3-醇(7)[3β，5α，20S，(21R)]-4，4，20-三甲基-21-[(2-甲基-2-丙烯基)亚硫酰基]孕烷-8，14-二烯-3-醇(8A)[3β，5α，20S，(21S)]-4，4，20-三甲基-21-[(2-甲基-2-丙烯基)亚硫酰基]孕烷-8，14-二烯-3-醇(8B)(3β，5α，20R)-4，4-二甲基胆甾烷-8，14，24-三烯-3-醇 84(7)(FF-MAS；对照化合物)*每个化合物在10μM浓度进行测试。
权利要求
1.具有通式I的17β-烯丙氧基(硫代)烷基-雄甾烷衍生物或它们的可药用盐
其中R1是(H，OR)、(H，OSO3H)或NOR；R是H，(C1-6)烷基或(C1-6)酰基；R2和R3各自独立地为氢或(C1-6)烷基；n是0、1或2；X是O、S、S(O)或S(O)2；R4和R5各自独立地为氢或(C1-4)烷基；R6、R7和R8各自独立地为氢、苯基、卤素或(C1-4)烷基，选择性地被羟基、(C1-4)烷氧基或卤素取代；或R7和R8一起与碳原子相连形成(C3-6)环烷基；或R6和R7一起与碳原子相连形成(C5-6)环烯基；和其中虚线表示Δ7或Δ8双键，或一对选自Δ7，14、Δ8，14和Δ6，8(14)的共轭双键。
2.权利要求1所述的17β-烯丙氧基烷基-雄甾烷衍生物，其特征在于n是0和X是O。
3.权利要求2所述的17β-烯丙氧基烷基-雄甾烷衍生物，其特征在于R1是(H，OR)，R是H或(C1-6)酰基，虚线表示一对选自Δ7，14、Δ8，14和Δ6，8(14)的共轭双键，和3-OR取代基的构型是β-构型。
4.17β-烯丙氧基烷基-雄甾烷衍生物选自(3β，5α，20R)-4，4-二甲基-22-氧胆甾烷-8，14，24-三烯-3-醇和(3β，5α，20S)-4，4-二甲基-23-氧胆甾烷-8，14，25-三烯-3-醇。
5.具有通式I的17β-烯丙氧基(硫代)烷基-雄甾烷衍生物在治疗中的应用。
6.药物组合物，其包括通式I的17β-烯丙氧基(硫代)烷基-雄甾烷或其可药用盐及可药用辅剂。
7.具有通式I的17β-烯丙氧基(硫代)烷基-雄甾烷衍生物或其可药用盐在制备控制生育药物中的应用。
全文摘要
本发明涉及具有通式(Ⅰ)的17β－烯丙氧基(硫代)烷基－雄甾烷衍生物,其中R
文档编号A61K31/575GK1259138SQ98805807
公开日2000年7月5日 申请日期1998年5月28日 优先权日1997年6月4日
发明者J·A·J·利姆慧斯, J·范德尔劳, M·B·格罗恩 申请人:阿克佐诺贝尔公司