痴呆症治疗药或预防药的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及痴呆症治疗药或预防药。具体而言，本发明涉及具有优异的认知功能 改善效果的新的含有抗磷酸化蛋白或肽抗体和抗磷酸化tau抗体或能够诱导抗磷酸化tau 抗体的抗原的痴呆症治疗药或预防药。
【背景技术】
[0002] 痴呆症是指一且发达了的智力因后天的某种原因而下降、呈现社会性适应困难的 状态。痴呆性疾病分为神经变性疾病、血管性痴呆症、朊病毒病、感染性疾病、代谢?内分泌 疾病、外伤和脑外科疾病、中毒性疾病等（非专利文献1)。在日本，2010年时存在约210万 名左右的痴呆症患者，据报道65岁以上的高龄者中的患病率为8?10%左右或10%以上，在 全球性的高龄化潮流中被认为是大问题（非专利文献2)。看看痴呆症的基础疾病可知：约 35%为阿尔茨海默病（AD)，约15%为AD和脑血管性的混合型，5%为额叶颞叶变性病（FTLD)， 作为变性疾病的AD或FTLD等神经变性疾病占大部分比例（非专利文献2)。由神经变性疾 病引起的痴呆症是以用至少6个月以上的时间进行的记忆障碍和/或人格变化的潜在性发 病为特征的疾病。在与认知功能障碍的程度具有高度相关性的神经变性过程中一贯的特长 是神经原纤维变化（神经原纤维缠结，NFT)(非专利文献3)。
[0003] 在人体内，tau (蛋白）是指由存在于17号染色体（17q21)的MPT基因编码的蛋 白，是在中枢系统大量表达的微小管结合蛋白之一。发现tau是构成作为神经变性疾病的 代表的AD中的NFT的双股螺旋状纤维（paired helical filament)和直纤维（straight filament)的主要构成蛋白，更明确了在各种神经疾病中tau在细胞内蓄积。这种发生tau 在细胞内蓄积的疾病统称为Tau蛋白病（Tau病，Tauopathy)(非专利文献4)。作为Tau蛋 白病中包含的神经变性疾病，有阿尔茨海默病（AD)、皮质基底核变性病（CBD或CBS)、进行 性核上性麻痹、皮克病、嗜银颗粒性痴呆症（嗜银性颗粒病）、痴呆症患者多系统tau蛋白病 (Multiple system tauopathy with dementia，MSTD)、连锁于 17 号染色体的伴帕金森式综 合征的额颞型痴呆症（FTDP-17)、神经原纤维变化型痴呆症、伴有钙质沉积的弥漫性神经原 纤维变化病（DNTC)、伴有球状神经胶质封入体的白质Tau蛋白病（WMT-GGI)、伴有tau阳性 封入体的额颞叶变性病（FTLD-tau)等，即使在神经变性疾病以外，Tau蛋白病还包括：昏睡 性脑炎后遗症或亚急性硬化性全脑炎等由感染症引起的疾病、拳击者脑病等由外伤引起的 疾病（非专利文献4)。
[0004] MPT基因的基因组上的结构包含13个外显子，通过选择性剪接表达多个作为同 工型的蛋白（非专利文献4)。另外，作为tau的结构特征，依据外显子2和外显子3的选择 性剪接的29个氨基酸重复序列（N)由0?2个（NO?N2) N末端酸性结构域、含有大量脯 氨酸的中间结构域、以及包含3个（3R)或4个（4R)参与微小管结合的重复序列（R)的C 末端微小管结合结构域（由外显子9?12编码）构成（非专利文献3和4)。因此，根据包 含29个氨基酸重复序列（N)和参与微小管结合的重复序列（R)的数目，tau以3R0N (352个 氨基酸）_3R1N(381个氨基酸）_3R 2N(410个氨基酸）_4R0N(383个氨基酸）_4R1N(412 个氨基酸）和4R2N(441个氨基酸）这6种作为代表性的同工型。在这些同种型中，在胎儿 期的脑中只存在3R0N，相对于此，在成人的人脑中存在所有的6种同种型，但4R型大量存 在（非专利文献3)。同种型的3R型与4R型的不同是由包含通过选择性剪接除去外显子 10的（3R)的（4R)来决定。这样，虽然tau中存在几种同工型，但为了特定其对应位置的氨 基酸编号，用作为最长同工型的4R2N(SEQ ID NO: 1)中的氨基酸的编号（1?441)表示。 例如，记作Ser413时，在4R2N(SEQ ID NO: 1)中表示第413位的氨基酸残基即丝氨酸，在 4R1N(SEQ ID NO: 2)中表示第384位的氨基酸残基即丝氨酸、在4R0N(SEQ ID NO: 3)中 表示第355位的氨基酸残基即丝氨酸、在3R2N(SEQ ID NO: 4)中表示第382位的氨基酸残 基即丝氨酸、在3R1N(SEQ ID NO: 5)中表示第353位的氨基酸残基即丝氨酸、在3R0N(SEQ ID NO: 6)中表示第324位的氨基酸残基即丝氨酸。
[0005] 神经变性疾病中的tau的参与在与连锁于最初17号染色体伴帕金森式综合征 的额颞型痴呆症（FTDP-17)中存在着由MPT基因突变与tau蓄积的关系解明的原委，在 FTDP-17中报道了 MAPT基因中的40种以上的基因突变（非专利文献4)。这样的基因突变 会引起tau同工型的比率变化或突变tau与微小管的相互作用的变化，暗示参与病态形成 的可能性。但是，不同于家族性神经变性疾病，在AD等散发性神经变性疾病中，往往看不到 MAPT的突变。另外，作为在神经变性疾病中蓄积的tau的特征，具有高度接受磷酸化修饰的 特征。另外，在显示出轻度的认知功能障碍的患者（MCI)中，在骨髓液中的磷酸化tau量与 下垂体萎缩之间发现了相关性，认为磷酸化tau是关于Tau蛋白病患者中的神经变性的可 靠性高的生物标志物（非专利文献5)。因此，为了抑制tau的磷酸的过剩磷酸化，尝试着在 治疗中使用针对作为与磷酸化有关的酶的激酶、其中特别是GSK-3々的酶抑制剂，并进行 了开发（非专利文献5)。但认为GSK-3,等激酶不仅在病态下、在正常生理作用中也与功 能控制有关，因此担心副作用等。事实上，在tau被GSK-3，磷酸化的位点中，有若干个位 点与在胎儿或正常人的脑中看到的tau的磷酸化位点一致（非专利文献3)，由此还考虑到 其影响到正常tau功能的可能性。
[0006] 另外，按照以往的考虑，认为存在于细胞外的tau由于变性了的神经细胞的细胞 死亡而泄露到细胞外，但根据最近的研究，认为tau在细胞内被过度磷酸化后，接受加工而 能动地分泌到细胞外。认为分泌到细胞外的磷酸化tau在一部分的磷酸化位点接受脱磷酸 化，之后与周围细胞的毒蕈碱型受体的Ml和M3作用，参与细胞内的tau磷酸化亢进或细胞 死亡的诱导等作用（非专利文献6、非专利文献7)。这样，认为tau发挥在细胞外作用的因 子的作用，因此以难以在细胞内发挥作用的抗体等高分子作为药效成分的治疗药的可能性 也逐渐受到重视。但是，如上所述，分泌到细胞外的tau -部分接受加工，还接受脱磷酸化 等，根据迄今为止作为靶向的过度磷酸化的tau的结构信息，存在着进一步接受改变的可 能性。而且，还考虑到与脱磷酸化的tau部分作用的药物对正常tau功能也有影响的可能 性。在抗体等中以病态中的tau为靶时，选择什么样的病态特异性位点、即与tau的磷酸化 表位作用的位点较为重要，但由于具有这样的复杂信息，可以说选择这样的表位会变得更 加困难。
[0007] 作为指向与tau的特异性作用的尝试，报道了关于以tau蛋白为靶的Tau蛋白病 的免疫学治疗的发明（非专利文献5、专利文献1、专利文献2、专利文献3)。免疫学治疗是 指以通过给予肽疫苗等诱导特异性抗体的产生为目的而进行的疗法，由于对靶蛋白或肽的 特异性高，因此期待着减轻副作用。作为这样的搭配，报道了通过使用磷酸化的tau的部分 肽（相当于Ser396和Ser404的氨基酸残基被磷酸化了的肽、以及相当于Ser262的氨基酸 残基被磷酸化了的肽）的疫苗对表达突变tau的动物模型进行免疫，改善该模型动物的运 动功能改善等。但是，在这些报道中，是使用导入了 P301L(作为tau的第301位氨基酸残 基的脯氨酸转变成亮氨酸的突变）等基因突变的转基因小鼠（tg小鼠）的研究，该tg小鼠 虽然是关于作为家族性神经变性疾病之一的FTDP-17的基因突变模型，但未必表现出不伴 有Tau蛋白病所包含的tau基因突变的神经变性疾病中的大多数、特别是散发性神经变性 疾病的病态。另外，P30ILtg小鼠是运动功能障碍的模型，并不是表现在人的痴呆症等中成 为问题的认知功能障碍的模型（非专利文献8)，因此根据该动物模型中的结果，难以知晓 能否适于人痴呆症的治疗。在专利文献4中，给予与Ser409被磷酸化的tau肽发生抗原抗 体反应的抗体，观察关于Tau蛋白病治疗的效果。但是，作为昂贵的肽疫苗，总给药量多、且 直至体现出效果的期间长。另外，给药的人或动物的免疫应答反应性根据遗传背景而不同， 肽疫苗的效果未必在所有个体中均可有效地诱导抗体产生。因此，考虑采用通过抗体进行 被动免疫的免疫疗法，但在tau中存在非常多的接受磷酸化的位点，使用针对其中的哪一 个磷酸化位点的抗体才有效，这样的信息基本上不存在。另外，即使看到目前存在的抗体在 动物模型中的效果，也不认为就具有足以用于治疗的功能。
[0008] 而且，使用抗体作为治疗药或预防药的主剂时，由于避免副作用或医疗经济上的 问题，对