如"基本由……组成"和"基本上由……组成"具有美国专利法中 对它们所赋予的含义，例如，它们允许没有明确提及的要素，但是排除现有技术中存在或影 响本发明基本特征或新特征的要素。
[0056] 组合物
[0057]本发明涉及在动物中激发、诱导或刺激反应的猪链球菌疫苗或组合物，它可以包 含减毒猪链球菌菌株和可药用或可兽用载体、赋形剂或媒介物。
[0058] 术语"核酸"和"多核苷酸"指线性或分支的、单链或双链的RNA或DNA，或其杂交 体。该术语还包括RNA/DNA杂交体。以下是多核苷酸的非限制性例子：一个基因或基因片 段、外显子、内含子、mRNA、tRNA、rRNA、核酶、cDNA、重组多核苷酸、支化多核苷酸、质粒、载 体、任意序列的分离DNA、任意序列的分离RNA、核酸探针和引物。多核苷酸可以包含修饰的 核苷酸（如甲基化核苷酸）与核苷酸类似物、尿嘧啶（uracyl)、其他糖及连接基团如氟代核 糖与硫代醋（thiolate)和核苷酸分支（nucleotidebranche)。可以在聚合后进一步修饰 核苷酸的序列，如通过与标记组分缀合。这个定义中所包括的其他类型的修饰是加帽、将一 个或多个天然存在的核苷酸置换成类似物和引入使多核苷酸与蛋白质、金属离子、标记组 分、其他多核苷酸或固相支持物接合的手段。多核苷酸可以通过化学合成获得或衍生自微 生物。
[0059] 术语"基因"广泛地用来指与生物学功能相关的多核苷酸的任何区段。因此，基因 包括如基因组序列中那样的内含子和外显子或如cDNA中那样的仅编码序列和/或它们表 达所要求的调节序列。例如，基因还指表达mRNA或功能性RNA或编码特定蛋白质并包含调 调节序列的核酸片段。
[0060] "分离的"生物学组分（如核酸或蛋白质或细胞器）指一种组分，所述组分已经 与其中该组分天然存在的生物的细胞中的其他生物学组分（例如，其他染色体和染色体外 DNA和RNA、蛋白质和细胞器）基本上分离或纯化。已经"分离"的核酸和蛋白质包括通过 标准纯化方法纯化的核酸和蛋白质。该术语还包括通过重组技术以及化学合成法制备的核 酸和蛋白质。
[0061] 术语"保守变异"指一个氨基酸残基由另一个生物学相似的残基替换，或如此替换 核酸序列中的一个核苷酸，从而编码的氨基酸残基不变或是另一个生物学上相似的残基。 在这个方面，特别优选的置换将通常在本质上是保守的，如上文所述的。
[0062] 术语"重组"意指在自然界中不存在或与另一个多核苷酸以自然界中不存在的布 局连接的半合成或合成来源的多核苷酸。
[0063] "异源"意指衍生自一个实体，所述实体在遗传上与正在同它比较的其余实体不 同。例如，多核苷酸可以通过基因工程技术被置入从不同来源衍生的质粒或载体中并且是 异源多核苷酸。从其天然编码序列中取出并与编码序列而非天然序列有效连接的启动子是 异源启动子。
[0064] 本发明的多核苷酸可以包含额外序列，如在相同转录单位内部的额外编码序列、 控制元件如启动子、核糖体结合位点、5'UTR、3'UTR、转录终止子、多聚腺苷化位点、处于 相同或不同启动子控制下的额外转录单位、允许克隆、表达、同源重组和转化宿主细胞的序 列、和如可能需要以提供本发明实施方案的任何这类构建体。
[0065] 使用方法和制造品
[0066] 本发明包括以下方法实施方案。在一个实施方案中，公开了一种接种动物的方法， 所述方法包括向动物施用包含减毒猪链球菌菌株和可药用或可兽用载体、赋形剂或媒介物 的组合物。在这个实施方案的一个方面，动物是猪类动物。
[0067] 在本发明的一个实施方案中，可以使用初免-强化（prime-boost)方案，它由使 用至少一个共同多肽、抗原、表位或免疫原的至少一个首次施用和至少一个强化施用组成。 一般，首次施用中使用的免疫学组合物或疫苗在本质上不同于作为增强剂使用的那些。然 而，应当指出相同组合物可以作为首次施用和强化施用使用。这种施用方案称作"初免-强 化"。
[0068] 初免-强化方案包括使用至少一种共同多肽和/或变体或其片段的至少一个初免 施用和至少一个强化免疫施用。初免施用中使用的疫苗可以在本质上不同于作为后续增强 剂疫苗使用的那些。初免施用可以包括一次或多次施用。类似地，强化施用可以包括一次 或多次施用。
[0069] 针对作为哺乳动物的目标物种的组合物的剂量体积，例如，基于细菌抗原的猪 (或猪（swine))用组合物的剂量体积通常在约0. 1至约2. Oml之间、在约0. 1至约1.0 ml 之间和在约〇. 5ml至约1.0 ml之间。
[0070] 可以在终末免疫后约2至4周通过用猪链球菌强毒菌株攻击动物如猪类动物，检 验疫苗的效力。同源菌株和异源菌株均用于攻击以检验疫苗的效力。可以通过IM或SC注 射、喷雾、鼻内、眼内、气管内和/或经口方式攻击动物。可以在攻击之前和之后采集来自关 节、肺、脑和/或口的样品并且可以对其分析猪链球菌特异性抗体的存在。
[0071] 初免-强化方案中所用的包含本发明减毒细菌菌株的组合物包含于可药用或可 兽用的媒介物、稀释剂或赋形剂中。本发明的方案保护动物免于猪链球菌影响和/或防止 感染的动物中病情进展。
[0072] 多种施用优选地相隔1至6周实施。优选的时间间隔是3至5周，并且根据一个 实施方案最佳地是4周，还构思了年度增强剂。动物，例如猪，可以在第一次施用时是至少 3-4周年龄。
[0073] 本领域技术人员应当理解，本文的公开内容通过示例方式提供并且本发明不限于 此。从本文中的公开内容和本领域知识，在不进行任何过多实验的情况下，技术人员可以确 定施用次数、施用途径和待用于每种注射方案的剂量。
[0074] 本发明的另一个实施方案是用于开展在动物中激发或诱导针对猪链球菌的免疫 反应或保护性反应的方法的试剂盒，所述试剂盒包含减毒猪链球菌免疫学组合物或疫苗和 用于实施按有效量递送以在动物中激发免疫反应的方法的说明书。
[0075] 本发明的另一个实施方案是用于开展在动物中诱导针对猪链球菌的免疫反应或 保护性反应的方法的试剂盒，所述试剂盒包含组合物或疫苗，所述组合物或疫苗包含本发 明的减毒猪链球菌，和用于实施按有效量递送以在动物中激发免疫反应的方法的说明书。
[0076] 本发明的又一个方面涉及用于如上文所述的本发明初免-强化接种的试剂盒。该 试剂盒可以包含至少两个小瓶：含有用于本发明初次接种的疫苗或组合物的第一小瓶，和 含有用于本发明强化接种的疫苗或组合物的第二小瓶。试剂盒可以有利地含有用于额外初 次接种或额外强化接种的额外第一或第二小瓶。
[0077] 可药用或可兽用载体或媒介物或赋形剂是本领域技术人员熟知的。例如，可药用 或可兽用载体或媒介物或赋形剂可以是〇. 9% NaCl (例如，盐水）溶液或磷酸盐缓冲液。可 以用于本发明方法的其他可药用或可兽用载体或媒介物或赋形剂包括但不限于聚（L-谷 氨酸）或聚乙烯吡咯烷酮。可药用或可兽用载体或载体或赋形剂可以是任何化合物或化合 物组合促进施用载体（或从本发明载体体外表达的蛋白质）；有利地，载体、媒介物或赋形 剂可以促进转染和/或改善载体（或蛋白质）保存。剂量和剂量体积在本文于总体描述中 讨论并且还可以在不进行任何过多实验的情况下，由技术人员因本公开阅读内容连同本领 域知识而决定。
[0078] 本发明的免疫学组合物和疫苗可以包含一种或多种佐剂或基本上由其组成。用 于本发明实施的合适佐剂是（1)丙烯酸或甲基丙烯酸、马来酐的聚合物和烯基衍生物聚合 物，（2)免疫刺激序列（ISS)，如具有一个或多个非甲基化CpG单位的寡脱氧核糖核苷酸序 列（Klinman等人，1996;W098/16247)，（3)水包油乳液，如在M.Powell，M.Newman，Plenum Press1995 出版的"VaccineDesign，TheSubunitandAdjuvantApproach" 第 147 页上 描述的SPT乳液和在相同著作第183页上描述的乳液MF59,（4)含有季铵盐的阳离子脂质， 例如，DDA，（5)细胞因子，（6)氢氧化铝或磷酸铝，（7)皂素或，（8)在通过引用方式援引并 并入本申请的任何文献中讨论的其他佐剂，或（9)任何组合或它们的混合物。
[0079] 在一个实施方案中，佐剂包括促进改善透过粘膜衬层吸收的那些。一些例子 包括MPULTK63、毒素、PLG微粒子和几种其他佐剂（Vajdy，M.ImmunologyandCell Biology(2004)82,617 - 627)。在一个实施方案中，佐剂可以是壳聚糖（Vandei*Lubben等 人，2001;Patel等人，2005;Majithiya等人，2008;US专利系列号 5, 980. 912)。
[0080] 在一个实施方案中、佐剂可以是灭活的细菌、灭活的病毒、灭活细菌的部分、细菌 脂多糖、细菌毒素或其衍生物或组合。
[0081] 在一个实施方案中，佐剂包括完整细菌和/或病毒，包括副猪嗜血杆菌、芽孢梭 菌、猪免疫缺陷病毒（SIV)、猪圆环病毒（PCV)、猪繁殖和呼吸综合征病毒（PRRSV)、曼氏杆 菌、巴氏杆菌、嗜血杆菌、沙门氏菌、大肠杆菌或其组合和/或变种。在几个实施方案中，佐 剂增加动物的IgM、IgG、IgA和/或其组合的产量。
[0082] 参考文献
[0083] 1 ?AlIgaier，A?等人 200 1 ?ReIatednessofStreptococcussuis isolatesofvariousserotypesandclinicalbackgroundsasevaluatedby macrorestrictionanalysisandexpressionofpotentialvirulencetraits.J.Clin. Microbiol. 39, 445-453.
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[0085] 3.Baums，C.G.等人，2009.Streptococcussu