二级种子罐培养，得到二级种子罐培养物； 其中，二级种子罐培养基与步骤I)的一级种子罐培养基相同，二级种子罐培养条件为:
发酵温度29°C，搅拌转数控制150至220 r/min,罐压0.05MPa，按照体积计每分钟通气比为1:1，培养24h转入二级种子罐；
3)将步骤2)得到的二级种子罐培养物转入发酵罐进行发酵，并于10h?180h时，按发酵液体积补入质量体积百分含量为0.5%?5%的有机氮源(有机氮源为玉米浆、黄豆饼粉、豆柏粉、酵母粉或棉籽蛋白粉)，得到发酵液；其中，发酵罐培养基每10ml组成为:玉米淀粉7g,黄豆饼粉3.2g，硫酸铵0.1g,氯化钠0.25g，硫酸钠0.1g,碳酸钙0.5g，泡敌0.04g，豆油lg，乳化剂0.06g，淀粉酶为淀粉量的0.15%，发酵罐培养条件为:发酵温度28°C?32°C，罐压0.03 MPa?0.08MPa，按照体积计每分钟通气比为(1:0.6)?(1:1.2)，转速80?130r/min ;进入发酵罐后，每8小时取样检测总糖、还原糖、氨氮、菌浓和pH值，48小时后根据化验检查结果进行补糖控制发酵液总糖浓度在3.0%至6.0%之间，通过补盐控制发酵液PH值在6.5至7.5之间；并于10h?180h时，按发酵液体积补入质量体积百分含量为0.5%?5%的有机氮源(有机氮源为玉米浆、黄豆饼粉、豆柏粉、酵母粉或棉籽蛋白粉)；
4)将步骤3)得到的发酵液经过板框过滤得到菌丝体；
其中，板框过滤的具体条件为:箱式隔膜板框压滤机，进料压力小于等于0.SMp ;5)将步骤4)得到的菌丝体经过闪蒸干燥制备得到粉末原料；
其中，闪蒸干燥的具体条件为:进风温度130至170摄氏度，出风温度60至80摄氏度；
6)将步骤5)得到的粉末原料加入辅料后得到那西肽含量为12%的那西肽预混剂产品； 其中，根据含量计算加入辅料沸石粉使最终那西肽的含量为12%。
[0027]从40h开始每24小时检测一次那西肽效价，具体结果如图1所示。
[0028]从图1可以看出，补料工艺调整后，有效的延长了发酵时间，提高了发酵单位，实现了将那西肽预混剂中那西肽含量由现有的8%提高至12%。
[0029]本发明的技术关键点包括以下三部分:
1、采用有机氮源的补料工艺，根据菌丝情况补入有机氮源；
2、发酵时间200-400小时，较现有技术有效延长了发酵时间； 3、终产品预混剂中那西肽的含量为12%，发酵单位提高了 58%。
[0030]最后应说明的是:以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1.一种那西肽含量为12%的那西肽预混剂的制备方法，其特征在于，是在链霉菌发酵生产那西肽的过程中补入了有机氮源。
2.根据权利要求1所述的一种那西肽含量为12%的那西肽预混剂的制备方法，其特征在于，所述有机氮源为玉米浆、黄豆饼粉、豆柏粉、酵母粉或棉籽蛋白粉。
3.根据权利要求2所述的一种那西肽含量为12%的那西肽预混剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: 1)将那西肽生产菌的斜面种子进行一级种子罐培养，得到一级种子罐培养物； 2)将步骤I)得到的一级种子罐培养物转入二级种子罐培养，得到二级种子罐培养物； 3)将步骤2)得到的二级种子罐培养物转入发酵罐进行发酵，并于10h?180h时，按发酵液体积补入质量体积百分含量为0.5%?5%的有机氮源，得到发酵液； 4)将步骤3)得到的发酵液经过板框过滤得到菌丝体； 5)将步骤4)得到的菌丝体经过闪蒸干燥制备得到粉末原料； 6)将步骤5)得到的粉末原料加入辅料沸石粉后得到那西肽含量为12%的那西肽预混剂产品。
4.根据权利要求3所述的一种那西肽含量为12%的那西肽预混剂的制备方法，其特征在于，所述步骤I)中，那西肽生产菌为筛选后的链霉菌Streptomyces.sp N1209D ;种子罐培养基每10ml组成为:蔗糖2.0g,玉米浆2.5g，蛋白胨lg，硫酸铵0.2g，碳酸钙0.5g，泡敌0.02g，豆油0.3g ;一级种子罐培养条件为:发酵温度29°C，搅拌转数为150-220r/min，罐压0.05MPa，按照体积计每分钟通气比为1:1，培养48h转入二级种子罐。
5.根据权利要求4所述的一种那西肽含量为12%的那西肽预混剂的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中，二级种子罐培养基与步骤I)的一级种子罐培养基相同，二级种子罐培养条件为:发酵温度29°C，搅拌转数为150-220r/min，罐压0.05MPa，按照体积计每分钟通气比为1:1，培养24h转入二级种子罐。
6.根据权利要求5所述的一种那西肽含量为12%的那西肽预混剂的制备方法，其特征在于，所述步骤3)中，发酵罐培养基每10ml组成为:玉米淀粉7g，黄豆饼粉3.2g，硫酸铵0.1g,氯化钠0.25g，硫酸钠0.1g,碳酸钙0.5g，泡敌0.04g，豆油Ig,乳化剂0.06g，淀粉酶为淀粉量的0.15% ;发酵罐培养条件为:发酵温度28V?32°C，罐压0.03 MPa?0.08MPa，按照体积计每分钟通气比为(1:0.6)?(1:1.2)，转速80?130r/min ;进入发酵罐后，每8小时取样检测总糖、还原糖、氨氮、菌浓和pH值，48小时后根据化验检查结果进行补糖、补盐，通过补糖控制发酵液总糖浓度为3%-6%，通过补盐控制发酵液pH值为6.5-7.5 ; 10h?180h时，按发酵液体积补入质量体积百分含量为0.5%?5%的有机氮源。
7.根据权利要求6所述的一种那西肽含量为12%的那西肽预混剂的制备方法，其特征在于，所述步骤4)中，板框过滤的具体条件为:采用箱式隔膜板框压滤机，进料压力小于等于 0.8Mp。
8.根据权利要求7所述的一种那西肽含量为12%的那西肽预混剂的制备方法，其特征在于，所述步骤5)中，闪蒸干燥的具体条件为:进风温度130-170°C，出风温度60-80°C。
9.根据权利要求8所述的一种那西肽含量为12%的那西肽预混剂的制备方法，其特征在于，所述步骤6)中，根据含量计算加入辅料沸石粉使最终那西肽的含量为12%。
【专利摘要】本发明公开了一种那西肽含量为12%的那西肽预混剂的制备方法，是在链霉菌发酵生产那西肽的过程中补入了有机氮源。本发明的有益效果为：本发明提供的一种那西肽含量为12%的那西肽预混剂的制备方法，通过补入有机氮源，有效的延长了发酵周期，提高了发酵单位，提高了那西肽产生菌菌丝体内的那西肽含量，生产出12%的那西肽预混剂。本发明有效的改善了菌丝的状况，使发酵得以继续进行，提高了发酵液的发酵单位58%，提高了原材料的转化率。
【IPC分类】A61K38-08, A61K9-14, C12R1-465, A23K1-16, C12P21-02, A61P31-04
【公开号】CN104826091
【申请号】CN201510228460
【发明人】孙海远, 贾永飞, 杨涛, 杨萍, 张剑, 杨锐
【申请人】新疆天富阳光生物科技有限公司
【公开日】2015年8月12日
【申请日】2015年5月7日...