doff管分 装，-20°C存储，同时0. 2 ym滤器过滤无水乙醇以备对照组之用。
[0023] L 3 实验试剂：DMEM(GIBCO 公司 Cat. No. 12100-061Lot. No. 758137);胎牛血清 (浙江天杭生物科技有限公司Lot. No. 100419) ;NaHC03(上海久亿化学试剂有限公司Cat. No.11810-033Lot. No. 1088387) Jrypsin(AMRESC0 公司批号：2010/04) ;EDTA(AMRESCO 公司批号：2009/10) ;Penicillin G Sodium Salt(AMRESC0公司批号：2010242); Str印tomycin Sulfate(AMRESO)公司批号：2010382);无水乙醇（南京化学试剂有限公司 批号：080310182) ;MTT(Biosharp 批号：0793) ;PBS(实验室自配）；
[0024] 1. 4实验器材：莱卡倒置显微镜（德国Leica型号：DMlL);可见-紫外光微孔板检 测仪（美国MD公司型号：SPECTRA MAX 190) ;C02培养箱（FORMA型号：3111);超净台（苏 净集团安泰公司制造型号：SW-CJ-ZFD);纯水仪（美国Spring公司型号：S/N 020579);精 密移液器（法国吉尔森公司型号：P2);电子天平（德国赛多利斯有限公司型号：BT323S); 全自动高压灭菌锅（日本SANK)公司型号：MLS-3020);台式电热鼓风干燥箱（上海精密 实验设备公司型号：DHG9123A);冰箱（西门子公司型号：KG18V21TI);液氮罐（CBS型号： 2001);低速离心机（上海安亭科学仪器厂型号：KA-1000) ;0. 2μπι滤器（MILLIP0RE型号： SLGP033RB) ;10cm培养皿（NEST公司）、96孔培养板（NEST公司）；细胞计数板；离心管、移 液管、Tips若干。
[0025] 2实验方法：1)U937细胞用DMEM+10% FBS于37°C、5% C02进行常规培养（10cm 培养皿），当细胞生长至对数期时，收集细胞，弃去培养液，PBS轻洗3遍，加入3ml 0. 25% 胰蛋白酶-0. 04% EDTA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培养基中和反应，吹打细胞 后将其转入离心管中，1000 rpm离心5min，调整细胞悬液浓度3X 104个/ml。2)将细胞种 入96孔培养板中，每孔加入细胞悬液180 μ 1，培养板放入细胞培养箱中（37°C，5% C02)常 规培养。3)根据细胞生长情况，一般长至50% -70%，加入抑眩宁胶囊溶液，继续培养24h。 4) 24h后加入20 μ I MTT溶液（5mg/ml，即0. 5% MTT)，继续培养4h。5) 4h后扣板法倒去上 清，用吸水纸轻轻拍干，每孔加入200 μ 1二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物 充分溶解。在酶联免疫检测仪490nm处测量各孔的吸光值。6)同时设置本底（不加细胞， 只加培养液），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜），每组 设定6个复孔。7)结果以药物对细胞的抑制率表示：细胞增值抑制率（％) = (对照孔OD 值-给药孔OD值）/对照孔OD值X 100%。实验重复3次。
[0026] 3实验结果：MTT法实验后统计结果显示，与对照组比较，当剂量达到5mg/ml时，对 U937细胞增殖抑制有差异（P〈0. 05)，剂量在10mg/ml时该差异具有显著性（P〈0. 01)，当剂 量达到15-20mg/ml时有极显著性差异（P〈0. 001)。
[0027] 表1抑眩宁胶囊对大鼠神经胶质瘤C6细胞增殖抑制影响研宄（X土SD)
[0028]
【主权项】
1. 一种抑眩宁胶囊的制备方法，由炒苍耳子20g、菊花15g、胆南星15g、黄芩15g、竹茹 15g、煅牡蛎20g、山楂10g、陈皮15g、白芍15g、生铁落15g、茯苓20g、枸杞子20g作为原料 药制成，其特征在于所述的方法由下列步骤组成：取煅牡蛎20g、生铁落15g加药材重量10 倍量的水，用盐酸调节pH值为4. 0,煎煮2小时，煎煮液中加入炒苍耳子20g、菊花15g、胆 南星15g、黄芩15g、竹茹15g、山楂10g、陈皮15g、白芍15g、茯苓20g、枸杞子20g，再加入到 〇)2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压 力15-30MPa，温度30-50°C，CO2流量l-3ml/g生药?min，萃取时间150-180min，得超临界 萃取物，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，装胶囊，制成800粒，每片重0. 3g。
2. 根据权利要求1所述抑眩宁胶囊的制备方法，其特征在于所述CO2超临界萃取夹带 剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%。
3. 根据权利要求1所述抑眩宁胶囊的制备方法，其特征在于所述CO2超临界萃取的萃 取压力20MPa，温度40°C，CO2流量2ml/g生药?min，萃取时间160min。
4. 根据权利要求1所述抑眩宁胶囊在制备抑制大鼠神经胶质瘤C6细胞增殖药物中的 应用，其特征在于所述的方法由下列步骤组成：取煅牡蛎20g、生铁落15g加药材重量10倍 量的水，用盐酸调节pH值为4. 0,煎煮2小时，煎煮液中加入炒苍耳子20g、菊花15g、胆南星 15g、黄芩15g、竹茹15g、山楂10g、陈皮15g、白芍15g、茯苓20g、枸杞子20g，再加入到CO2 超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力 15-30MPa，温度30-50°C，CO2流量l-3ml/g生药.min,萃取时间150-180min，得超临界萃取 物，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，装胶囊，制成800粒，每片重0. 3g。
5. 根据权利要求4所述抑眩宁胶囊在制备抑制大鼠神经胶质瘤C6细胞增殖药物中的 应用，其特征在于抑眩宁的制备方法中所述CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百 分比为5%。
6. 根据权利要求4所述抑眩宁胶囊在制备抑制大鼠神经胶质瘤C6细胞增殖药物中的 应用，其特征在于抑眩宁的制备方法中所述〇)2超临界萃取的萃取压力20MPa，温度40°C， CO2流量2ml/g生药?min，萃取时间160min。
【专利摘要】本发明属于中药制剂领域，具体提供一种抑眩宁胶囊的制备方法，由炒苍耳子20g、菊花15g、胆南星15g、黄芩15g、竹茹15g、煅牡蛎20g、山楂10g、陈皮15g、白芍15g、生铁落15g、茯苓20g、枸杞子20g作为原料药制成，采用加盐酸提取和超临界萃取制备而成，使得含量有很大提高，用量减少，本发明还提供了抑眩宁胶囊在制备抑制大鼠神经胶质瘤C6细胞增殖药物中的应用。
【IPC分类】A61K35-618, A61K9-48, A61K33-26, A61P35-00, A61K36-899
【公开号】CN104840797
【申请号】CN201510283399
【发明人】孟令旭, 姜华, 姜珂
【申请人】吉林省正和药业集团股份有限公司
【公开日】2015年8月19日
【申请日】2015年5月28日