一种多索茶碱注射液的制作方法
【专利说明】
[0001] 本申请是申请号为2013105339455、申请日为2013年11月04、发明名称为"多索 茶碱注射液有关物质测定方法"的母案的分案申请。
技术领域
[0002] 本发明属于注射液的有关物质测定领域，主要涉及一种多索茶碱注射剂的有关物 质的测定方法。
【背景技术】
[0003]多索茶碱注射液（10ml:0. 2g、10ml:0. lmg、20ml:0. 3mg)是以多索茶碱为原料的 小容量注射液。作为直接给予人体静脉给药的剂型，由于其存在较高的不良反应发生率等 安全性问题，因此注射剂的安全性问题是广大医患人群和监管部门非常重视的重大问题。 在影响注射剂的安全性问题的因素中，有关物质的确认和控制是至关重要的，因此良好的 有关物质控制和检测方法，能够从根本上解决注射液的安全性问题。多索茶碱注射液的现 有的质量标准中，只有规格l〇ml:0. 2g的质量标准中规定了有关物质检测，且无单一杂质 的限度要求，只规定总杂不得过〇. 8%，更没有杂质对照品的参与。在本领域中，研宄注射液 的有关物质时所用原料药的有关物质概况、制剂处方工艺、降解途径研宄结果等因素都会 对有关物质有影响，因此明确各有关物质的结构与溯源是比较困难的，现有技术的方法无 法定性和定量多索茶碱注射液中的有关物质，虽然多索茶碱注射液已经上市多年，但是上 述问题仍然没有得到解决。
[0004]另外，多索茶碱的合成路线较多，因此不同生产路线、储存条件和制剂工艺所带来 的有关物质也不完全相同。因此，如何分离和确定不同合成路线的有关物质，用理想的检测 方法来控制，一直是现有技术中存在的问题。
【发明内容】
[0005] 本发明首先提供了一种耐用性好、操作简便快捷的、系统适用性高的利用高效液 相色谱法有效控制多索茶碱注射液的有关物质的方法。本发明还提供了分离和合成用于 多索茶碱注射液有关物质测定的对照品的方法。
[0006] 本发明的一种多索茶碱注射液有关物质测定方法，所述方法采用高效液相色谱法 (HPLC)进行测定，所述方法是在如下色谱条件与系统适用性试验条件进行，并包括如下步 骤：
[0007] 色谱条件与系统适用性试验条件：填充剂包括十八烷基硅烷键合硅胶；流动相包 括乙腈、甲醇、磷酸盐缓冲液中的一种或几种；检测波长240-295nm ;理论板数按多索茶碱 峰计算不低于1〇〇〇 ;
[0008] 供试品溶液配制步骤：取所述多索茶碱用水稀释，作为供试品溶液；
[0009] 对照溶液配制步骤：取所述供试品溶液用水稀释，作为对照溶液；
[0010] 对照品配制步骤：取若干种对照品分别用水溶解并定量稀释制成对照品溶液，作 为对照品溶液，所述对照品至少包括茶碱、杂质A、杂质B，所述杂质A为茶碱乙醇，所述杂质 B为茶碱乙醛；
[0011] 检测步骤：将所述对照品溶液、对照溶液、供试品溶液分别注入液相色谱仪，记录 色谱图；
[0012] 判断步骤：供试品溶液的色谱图中与对照品保留时间相一致的色谱峰，按外标法 以峰面积计算，均不得过0. 2% ;其他未知杂质峰，其峰面积总和不得大于对照溶液主峰面 积的0. 4倍，杂质总和不得过0. 7%。
[0013] 本发明优选的用于多索茶碱注射液有关物质测定的色谱条件与系统适用性试验 条件为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为12 :88的乙腈和磷酸盐缓冲液，所 述磷酸盐缓冲液pH值为5. 8 ;检测波长为273nm ;理论板数按多索茶碱峰计算不低于2000。
[0014] 采用上述的色谱条件与系统适用性方法，多索茶碱注射液有关物质测定方法为：
[0015] 取所述多索茶碱注射液，用水稀释制成每1ml中含多索茶碱0. 01-5mg的溶液，作 为供试品溶液；精密量取〇. 5-5ml，置10-250ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶 液；另取茶碱对照品、杂质A对照品、杂质B对照品、用水溶解并定量稀释制成每lml中含 茶碱、杂质A、杂质B各0. 1-5 y g的溶液，作为对照品溶液；照含量测定项下的色谱条件，取 对照品溶液进样1-50 y 1，各色谱峰之间的分离度均就符合要求，且连续进样6针，其相对 标准偏差不得过2. 0% ;另取对照溶液1-50 y 1，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成 分色谱峰的峰高约为满量程的10-30%;再精密量取供试品溶液1-50 y 1，注入液相色谱仪， 记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍；供试品溶液的色谱图中与茶碱对照品、杂质A对照 品、杂质B对照品保留时间相一致的色谱峰，按外标法以峰面积计算，均不得过0. 1 % ;其他 未知杂质峰，其峰面积总和不得大于对照溶液主峰面积的〇. 2倍，杂质总和不得过0. 5%。
[0016] 进一步优选的多索茶碱注射液有关物质测定方法，所述测定方法为：
[0017] 取所述多索茶碱注射液，用水稀释制成每lml中基本上含多索茶碱1. Omg或1. 2mg 的溶液，作为供试品溶液；精密量取lml，置200ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照 溶液；另取茶碱对照品、杂质A对照品、杂质B对照品、用水溶解并定量稀释制成每lml中基 本上含茶碱、杂质A、杂质B各0. 5 y g的溶液，作为对照品溶液；照含量测定项下的色谱条 件，取对照品溶液进样10 y 1，各色谱峰之间的分离度均就符合要求，且连续进样6针，其相 对标准偏差不得过2. 0% ;另取对照溶液10 y 1，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成 分色谱峰的峰高约为满量程的20% ;再精密量取供试品溶液10 y 1，注入液相色谱仪，记录 色谱图至主成分峰保留时间的2倍；供试品溶液的色谱图中与茶碱对照品、杂质A对照品、 杂质B对照品保留时间相一致的色谱峰，按外标法以峰面积计算，均不得过0. 1% ;其他未 知杂质峰，其峰面积总和不得大于对照溶液主峰面积的0.2倍（0. 1% )，杂质总和不得过 (0. 5% ) 〇
[0018] 本发明的"基本上含"与本领域的"约含"的术语概念相同，一方面应理解为溶液中 含有相应的溶质的数量是以实际称量数为准的，并且该称量数应符合有效数字保留位数的 要求，另一方面，由于测量工具精度范围限制，必然存在测量误差，因而不可能正好称量或 量取整数。比如，制备"用水稀释制成每lml中基本上含多索茶碱1. Omg的溶液"，制备lml 含有0. 90mg-l. 10mg的多索茶碱都是可以的，而且符合本发明的检测要求。
[0019] 本发明的多索茶碱注射液有关物质测定方法，所述对照品还包括杂质A"、杂质C、 杂质D、杂质E和杂质G中的一种或若干种，各杂质的结构式如下：
[0020]
[0021] 杂质的化学名如下：
[0022] 杂质A"：l-((1，3-二氧戊烷-2-基）甲基）-N_甲基_4_(甲基氨基）-lH_咪 唑-5-甲酰胺
[0023] 杂质 C :7-(2,2_ 二甲氧基乙基）_1，3_ 二甲基-1H-嘌呤-2,6(3H，7H)_ 二酮
[0024] 杂质 D :7_(2, 2-二乙氧基乙基）_1，3-二甲基-1H-嘌呤-2, 6(3H，7H)-二酮
[0025] 杂质E:2-(l，2, 3, 6-四氢-1,3-二甲基-2, 6-二氧代嘌呤-7-基）乙酸
[0026] 杂质G:2-(l，2, 3, 6-四氢-1，3-二甲基-2, 6-二氧代嘌呤-7-基）乙酸乙酯。
[0027] 本发明的多索茶碱注射液有关物质测定方法，所述对照品还包括杂质咖啡因、三 甲基黄嘌呤、杂质C'、杂质D'、杂质E'、杂质2和茶碱乙酸中的一种或若干种：
[0028] 部分杂质的化学名如下：
[0029] 杂质C' ：N-(6_氨基-1，3-二甲基-2, 4-二氧代-1，2, 3, 4-四氢嘧啶-5-基）甲 酰胺、
[0030] 杂质D' ：N_甲基_5_(甲基氨基）-lH_咪唑-4-甲酰胺、
[0031] 杂质 E' ：1，3_ 二甲基-7,9-二氢-1H-嘌呤-2,6,8(3H)_ 三酮、
[0032] 杂质2 :1，3-二甲基-2, 6-酮-7-乙醛_1，2, 3, 6-四氢吡啶。
[0033] 本发明特别提供了制备本发明所述多索茶碱注射液所用的多索茶碱，按如下合成 路线发生如下反应制得：
[0034]
[0035] 在甲醇中醋酸乙烯酯（II)与溴素发生加成反应、并同时醇解，生成溴乙醛缩二 甲醇（III);溴乙醛缩二甲醇（III)经二氯甲烷萃取后，直接在对甲苯磺酸催化下，与乙二 醇发生缩醛交换，生成新的缩醛，即溴甲基二氧五环（IV)，该过程先通过分馏，逐渐除去低 沸点的溶剂及新产生的甲醇，以便促进反应的顺利进行，再经减压蒸馏收集溴甲基二氧五 环（IV);以N，N_二甲基甲酰胺为溶剂、在无水碳酸钾作用下，茶碱（V)与溴甲基二氧五环 (IV)顺利发生取代反应，即可生成多索茶碱（I);最后经乙醇重结晶，即可获得药用要求的 合格产品。
[0036] 用上述方法制得的多索茶碱注射液的有关物质，所述有关物质包括杂质A"、杂质 B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质A、杂质G、茶碱，各个杂质的合成路线优选如下：
[0037] 其中杂质A"按如下合成路线发生如下反应：
[0038]
[0039] 取多索茶碱30.(^(112.6臟〇1)，加入20%氢氧化钠水溶液6011^，缓慢加热至 80°C、在持续保温反应3小时，HPLC监控反应结束；加入无水乙醇200mL，冰水浴冷却下以 盐酸调pH = 8,析出大量固体，过滤；滤液减压浓缩，所得粗品经乙酸乙酯柱层析（或乙酸 乙酯重结晶），得杂质A"。
[0040] 其中杂质B按如下合成路线发生如下反应：
[0041]
[0042] 取多索茶碱10. 0g (37. 5mmol)，加入35mL水后加热溶解，再加入2M盐酸约6mL，调 pH值为1，反应回流8h，TLC监测无原料剩余，浓缩剩约10mL溶剂，加入20mL四氢呋喃分 散，抽滤得白色固体，用少量四氢呋喃淋洗得杂质B。
[0043] 其中杂质C按如下合成路线发生如下反应：
[0044]
[0045] 将7H-茶碱9. 0g(50.0 mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺80mL，然后将溴乙醛缩二 甲醇7. 3mL(60mmol)和粉末状无水碳酸钾20. 7g(150mmol)依次加入混合液中，缓慢升至 120°C，持续搅拌反应5h，TLC监测几乎无原料剩余；冷却，抽滤去除无机盐，滤液减压浓缩 DMF，向其中加入无水甲醇30mL，室