N-乙酰葡萄糖胺在制备用于诱导非小细胞肺癌细胞凋亡的制剂中的用图
【技术领域】
[0001]本发明属于生物医药技术领域，具体涉及N-乙酰葡萄糖胺在制备用于诱导非小细胞肺癌细胞凋亡的制剂中的用途。
【背景技术】
[0002]肺癌是当今世界最常见的恶性肿瘤之一，在中国，据预测到2025年肺癌患者将达到100万，居世界第I位。肺癌80 %以上为非小细胞肺癌(Non-small Cell LungCarcinoma，NSLC)，目前对其治疗尚未取得实质性突破，确诊后5年生存率仍不足15%。肺癌除了早期对原发瘤的切除，主要以化疗和放疗为主，后者在杀伤癌细胞的同时也杀伤正常细胞。为避免对正常细胞的损伤，故选择针对特异分子靶点的治疗模式，越来越被医学界所认同。
[0003]TRAIL (肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体)，是肿瘤坏死因子TNF家族的新成员，因其对肿瘤细胞杀伤的高度特异性和对正常细胞无明显毒性，而备受关注。
[0004]TRAIL通过特异性受体诱导肿瘤细胞凋亡。TRAIL受体有5种:死亡受体DR4、DR5，诱骗受体DcRl、DcR2及可溶性受体0PG。其中，死亡受体通过其死亡结构域与TRAIL结合诱导肿瘤细胞凋亡。诱骗受体因其没有死亡结构域或死亡结构域不完整，不能够介导细胞凋亡。正常组织中诱骗受体高表达，能与死亡受体竞争性结合TRAIL，而逃逸TRAIL的杀伤作用。
[0005]死亡受体DR4和DR5中任意一个出现表达水平的降低都会引起TRAIL耐受。但是DR4和DR5即使是表达在细胞膜上，也可能是无功能的，所以死亡受体的功能状态对TRAIL耐受至关重要。经死亡受体介导的凋亡通路是=TRAIL与死亡受体聚集体结合后，激活细胞内的Fas相关死亡域，募集Caspase-8前体形成死亡信号复合体DISC (Death-1nducingSignaling Complex)，激活Caspase8/3通路，引发细胞凋亡。
[0006]研究报道近50%的肿瘤细胞(如:非小细胞肺癌A549细胞)对TRAIL的作用不敏感。肿瘤细胞产生TRAIL耐受的机制是复杂多样的，其中死亡受体与配体的结合是启动TRAIL诱导凋亡的起始环节，也是关键环节。因此死亡受体的表达及活性在肿瘤细胞的TRAIL耐受机制中具有重要地位。
[0007]TRAIL能够通过死亡受体特异杀伤癌细胞，但非小细胞肺癌(NSLC)常因死亡受体异常而对其产生耐药，所以寻找增强TRAIL与死亡受体结合的“助效剂”已成为急需。
[0008]N-乙酰葡萄糖胺(N-acetylglucosamine，GlcNAc)是壳聚糖降解产物之一。低分子壳聚糖能够抑制多种癌细胞的生长，具有很强的抑瘤活性。
[0009]我国海洋辽阔，故源于虾蟹壳的甲壳素的含量极其丰富，制备工艺成熟，生物相容性优异，已广泛应用在生物医药的许多领域。壳聚糖降解产物GlcNAc不仅能有效激活免疫细胞、提高机体的免疫能力，而且GlcNAc可以与蛋白质间作用，参与一系列的生理调控作用。因此被认为是一种重要的生物效应调节剂，非常有希望在肿瘤治疗中发挥其重要作用。
[0010]而TRAIL本身就是公认的抗肿瘤靶向生物制品，其强大的抗肿瘤活性及安全性已得到大量动物或细胞实验的证实，目前国际上已开发了多个版本的TRAIL，均处于临床前研究阶段或即将进入I期临床。但是，TRAIL并非对所有的肿瘤细胞都具有明显的抑制作用，所以研究N-乙酰葡萄糖胺在增强TRAIL诱导的非小细胞肺癌凋亡中的用途意义重大。
【发明内容】
[0011]本发明提供了 N-乙酰葡萄糖胺在制备用于诱导非小细胞肺癌细胞凋亡的制剂中的用途，本发明将GlcNAc与TRAIL —起作用于非小细胞肺癌细胞，具体从细胞、动物以及分子水平评价N-乙酰葡萄糖胺协同TRAIL抑制非小细胞肺癌A549细胞的作用效果，并进一步阐释其作用机制，为寻找更有效的TRAIL “助效剂”提供理论依据，为非小细胞肺癌的药物靶向治疗提供新的思路。
[0012]为实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案予以实现:
本发明提供了 N-乙酰葡萄糖胺在制备用于诱导非小细胞肺癌细胞凋亡的制剂中的用途。
[0013]对上述技术方案的进一步改进:所述N-乙酰葡萄糖胺与肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体协同制备用于诱导非小细胞肺癌凋亡的制剂。
[0014]对上述技术方案的进一步改进:50 μ M的所述N-乙酰葡萄糖胺与50ng/mL的所述肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体协同制备用于诱导非小细胞肺癌凋亡的制剂。
[0015]对上述技术方案的进一步改进:所述N-乙酰葡萄糖胺协同肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对非小细胞肺癌细胞的增殖和迀移都具有显著抑制作用。
[0016]对上述技术方案的进一步改进:所述N-乙酰葡萄糖胺能够明显诱导肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的死亡受体DR5的聚集，增强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对非小细胞肺癌细胞的杀伤性。
[0017]对上述技术方案的进一步改进:将用量为2mg/kg/d的所述肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体结合50mg/kg/d的所述N-乙酰葡萄糖胺共同作用于动物。
[0018]对上述技术方案的进一步改进:所述非小细胞肺癌为A549肺癌细胞。
[0019]与现有技术相比，本发明的优点和技术效果是:
I)从细胞和移植瘤动物模型两方面，验证GlcNAc增强TRAIL诱导凋亡的作用。明确GlcNAc能够与TRAIL协同作用，增强TRAIL对非小细胞肺癌的抑瘤作用。
[0020]2)本发明从分子水平揭示二者协同作用后死亡受体活性的改变与其凋亡复合体形成间的关系，阐释GlcNAc促进TRAIL诱导非小细胞肺癌凋亡的作用机制。
[0021]3)本发明探讨GlcNAc协同TRAIL通过影响TRAIL诱导的死亡受体的活性来增强非小细胞肺癌对TRAIL的敏感性。
[0022]本发明首次将GlcNAc与TRAIL协同作用应用于抗非小细胞肺癌的研究中，这对于提高肿瘤细胞对TRAIL的敏感性，扩大其应用范围意义重大。本发明通过GlcNAc介导的死亡受体聚集来促进起始凋亡复合体的形成，进而促进TRAIL的诱导凋亡作用，是一种新的“助效剂”。
【附图说明】
[0023]图1表明本发明中TRAIL与GlcNAc对A549细胞增殖性的影响，其中1、对照组；
2、GlcNAc 组；3、TRAIL 组；4、TRAIL 与 GlcNAc 共同作用组；
图2表明本发明中TRAIL和GlcNAc对细胞的诱导凋亡的流式检测结果(A)及细胞凋亡率的比较(B)，其中a、A549对照组；b、TRAIL组；c、GlcNAc组；d、TRAIL与GlcNAc联合作用组；
图3表明本发明中通过16h时细胞划痕实验结果(A)及细胞迀移率的比较(B)来评价GlcNAc与TRAIL对A549细胞迀移能力的影响，其中a、A549对照组；b、TRAIL组；c、GlcNAc组；d、TRAIL与GlcNAc联合作用组；
图4是本发明中GlcNAc与TRAIL对荷瘤小鼠瘤重的比较实验结果；
图5是本发明中非还原Western blot分别检测从左到右依次为A549对照组、GlcNAc组、TRAIL组、TRAIL与GlcNAc联合作用组1.5h，4.5h，20h时DR5受体的聚集；
图6是本发明中Western blot分别检测从左到右依次为A549对照组、GlcNAc组、TRAIL组、TRAIL与GlcNAc联合作用组1.5h，4.5h，20h时DR5受体的蛋白表达量。
【具体实施方式】
[0024]本发明结合附图和具体实施例对本发明的技术方案做进一步详细的说明。
[0025]实施例1、GlcNAc协同TRAIL对非小细胞肺癌A549细胞的抑制作用 1、