°C条件下搅拌反应12小时，反应结束后 采用减压旋转干燥法蒸除溶剂，将所得固态物质用二甲亚砜溶解，并用滤纸过滤掉不溶物， 收集滤液，采用减压旋转干燥法蒸除滤液中的溶剂，即得到DPPE-PEG2000-KLA。
[0058] 实施例4
[0059] 本实施例所述可交联线粒体靶向聚乙二醇化二月桂酰磷脂酰乙醇胺 (DLPE-PEG2000-KLA)，其结构式为：
[0061] 制备方法如下：
[0062] 以二月桂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-马来酰亚胺（DLPE-PEG2000_Mal)、多 肽 D-(KLAKLAK)2-C#P三乙胺为原料，多肽 D-(KLAKLAK) 2_C5、三乙胺、DLPE-PEG2000-Mal 的 摩尔比为3:3:1 ;
[0063] 在氮气保护下，将DLPE-PEG2000_Mal、三乙胺、氯仿混合均匀得到第一溶液，所 述氯仿的用量为使第一溶液中DLPE-PEG2000-Mal的浓度为100mm 〇l/L，三乙胺的浓度为 300mmol/L ；
[0064] 在氮气保护下，将多肽D-(KLAKLAk)2-C5溶于甲醇中得到第二溶液，甲醇的用量为 使第二溶液中多肽D-(KLAKLAk)2-C5浓度为100m〇l/L ;
[0065] 将第一溶液和第二溶液混合，在避光、20°C条件下搅拌反应48小时，反应结束后 采用减压旋转干燥法蒸除溶剂，将所得固态物质用氯仿溶解，并用滤纸过滤掉不溶物，收集 滤液，采用减压旋转干燥法蒸除滤液中的溶剂，即得到DLPE-PEG2000-KLA。
[0066] 实施例5 :材料细胞毒性实验
[0067] 将密度为I X IO5个/mL的L929细胞（购自中国科学院细胞库）悬液接种于96孔 培养板内，每孔接种〇. lmL，并向每孔加入0.1 mL完全培养基（DMEM培养基+10 %胎牛血清 +lOOg/mL链霉素），然后置于37°C、5% CO2、饱和湿度的细胞恒温培养箱中孵育24h。分别将 实施例1~4所制备的可交联线粒体靶向聚乙二醇化磷脂药用材料用完全培养基稀释作为 试验组，终浓度分别为〇? 01mg/mL、0. 05mg/mL、0. 30mg/mL、I. 0mg/mL。以完全培养基为阴性 对照组。各试验组和阴性对照组均设平行样品3个。将各试验组和阴性对照组置于37°C、 5% CO2、饱和湿度的细胞恒温培养箱中继续培养，培养48h后弃去每孔中的上清液，用PBS 缓冲液（135mM NaCl，2. 7mM KC1，I. 5mM KH2PO4,，8mM K2HPO4, pH = 7. 4)洗涤 2 次，然后每 孔加入200L PBS缓冲液，再加入20L 5mg/mL的MTT溶液（将0? 5g MTT溶于IOOmL PBS缓 冲液中得到），继续培养4h，继后吸尽上清液，加入100L二甲基亚砜（DMSO)，振荡10min，用 酶联免疫检测仪测定波长为570nm处的光密度值（OD)，通过与阴性对照组的OD值比较得到 各试验组的细胞存活率。
[0068]细胞毒性试验结果见图3，从图中可以看出，实施例1~4制备的可交联线粒体靶 向聚乙二醇化磷脂药用材料均无明显细胞毒性。
[0069] 实施例6 :长循环实验
[0070] 将大豆磷脂、胆固醇、实施例1制备的DSPE-PEG2000-KLA和紫杉醇溶于氯仿-甲 醇混合溶剂中（氯仿与甲醇的体积比为3:1)，其中大豆磷脂、胆固醇和DSPE-PEG-KLA摩尔 比为90:7:3,紫杉醇与大豆磷脂的质量比为1:10,所述混合溶剂量的量为使大豆磷脂摩尔 浓度为0. lmmol/L。减压旋转蒸发除去溶剂，得到干燥的脂膜。向所得脂膜中加入磷酸盐缓 冲液（PBS)，所述PBS的量使大豆磷脂的摩尔浓度为ImM。然后置于50°C水浴中超声15min， 继以探头超声5min，得到脂质体悬液。向脂质体悬液中加入DSPE-PEG2000-KLA二倍摩尔的 乙二硫醇，并持续通氧气10分钟，再以3500r/min的转速离心3min以除去游离的紫杉醇， 所得上清液即为载紫杉醇的交联线粒体靶向脂质体，结构见图9。
[0071] 将大豆磷脂、胆固醇、DSPE-PEG2000-MAL和紫杉醇溶于氯仿-甲醇混合溶剂中（氯 仿与甲醇的体积比为3:1)，其中大豆磷脂、胆固醇和DSPE-PEG-MAL摩尔分数比为90:7:3， 紫杉醇与脂质材料的质量分数比为1:10,其余制备方法同上，得到普通紫杉醇脂质体。
[0072] 将12只Wistar大鼠（购自四川大学动物实验中心）随机分为两组，每组分别尾 静脉注射载紫杉醇的线粒体靶向脂质体和普通紫杉醇脂质体，给药剂量为5mg/kg。分别于 尾静脉注射给药后的51^11、3〇1^11、111、211、411、811、1211、2411、4811通过尾静脉取血。采用高效 液相法检测药物浓度，采用DAS药动学软件计算药物生物半衰期（t 1/2)。载紫杉醇的线粒体 靶向脂质体的t1/2为22. 5h，普通紫杉醇脂质体的11/2为I. 2h，可见本利用发明所述线粒体 靶向聚乙二醇化脂质药用材料制备的载药脂质体具有长循环的特点。
[0073] 实施例7 :对比实验
[0074] 将【背景技术】中引用文献的DKD脂质体与利用本发明所述可交联线粒体靶向聚乙 二醇化磷脂药用材料制备的脂质体做以下对比。
[0075] 1、体外药物释放对比实验
[0076] 按照实施例6中的方法制备载紫杉醇的交联线粒体靶向脂质体。
[0077] 按照【背景技术】的文章（L. Jiang et al. Biomaterials 52 (2015) 126-139)中 2. 3 节所述方法制备载紫杉醇DKD脂质体。
[0078] 取载紫杉醇的交联线粒体靶向脂质体和DKD脂质体各0. 5ml，分别与等量牛血清 混合，每种脂质体重复一组，共四组，再分别装入截留分子量为6000~7000的透析袋中，将 一个装有交联线粒体靶向脂质体的透析袋和一个装有DKD脂质体的透析袋分别浸入50ml 含0. 1 %吐温80的磷酸盐缓冲液中，剩下的两个透析袋分别浸入50ml含10mm〇L/L谷胱甘 肽（GSH)和0. 1%吐温80的磷酸盐缓冲液中，37°C恒温振荡。于0. 5、1、2、4、6、12、18、24 小时后取透析介质lml，同时补充Iml新鲜的释放介质。按照【背景技术】文章（L.Jiang et al.Biomaterials52(2015) 126-139)中2. 14节所述高效液相色谱法测定药物释放介质中 的药物浓度，计算药物累计释放量，结果见图4。
[0079] 从图4可知，载紫杉醇的交联线粒体靶向脂质体在血清中更稳定，药物释放缓慢， 加入GSH后脂质体的二硫键断裂，交联结构破坏后，药物释放加快。而DKD脂质体在血清中 稳定性更差，药物释放较快，且不受GSH浓度影响。
[0080] 2、肿瘤治疗效果对比实验
[0081] 按照实施例6的方法制备载紫杉醇的交联线粒体靶向脂质体。
[0082] 按照【背景技术】中的文章（L. Jiang et al. Biomaterials 52 (2015) 126-139)中 2. 3 节所述方法制备载紫杉醇DKD脂质体。
[0083] 按照文章（L. Jiang et al. Biomaterials 52(2015) 126-139)中 2. 12 体内肿瘤治 疗实验方法，对制备的两种载药脂质体进行体内抗肿瘤效果评价，结果见图5。
[0084] 从图5可知，采用本发明所述可交联线粒体靶向聚乙二醇化磷脂药用材料制备的 交联线粒体靶向脂质体能明显减小肿瘤体积，在第25天