. 5 ； LCMS m/z479. 2451 ([M+H+], C22H21F3N403S 分子量 479. 1359)。
[0233]
[0234] N-(3_(5H-苯并[b]嘧啶并[5,4-f]氮杂-11(6H)_基）丙基）-4_氯苯-磺 酉先胺(N-(3-(5H-benzo[bjpyrimido[5, 4-f]azepin-11(6H)-yl)propyl)-4-chloroben zene-sulfonamide)。将 3_(5H_苯并[b]啼啶并[5,4-f]氮杂-11(6H)_基）丙-1-胺 (0.0688,0.267臟〇1)在01^(1.01^)中的溶液冷却至0°(：，用￡七#(37.0 1^，0.267臟〇1)和 4_氯苯磺酰氯化物（0. 056g，0. 267mmol)处理。将所得混合物加温至25°C，并搅拌2h。该 混合物被分配在饱和NaCl水溶液（50mL)和CH 2Cl2(100mL)之间。将有机层用饱和NaCl 水溶液洗涤（3X50mL)，干燥（Na 2S04)，并在真空中浓缩。将残余物溶解于最少量的CH2C12 中，并通过快速色谱法（Si02,0-50%乙酸乙酯-己烷）进行纯化。合并纯化的部分，浓缩， 并将残余物溶解于最少量的乙酸乙酯中，并通过加入已烷进行沉淀，以得到白色固态的目 标化合物（107) (0.0647g，56% )。4 NMR(600MHz，CDC13) S8.59(lH，s)，8. 10(lH，s)，7.7 3 (2H, d, J = 8. 4Hz), 7. 44 (2H, d, J = 8. 4Hz), 7. 22 (1H, td, J = 7. 8, 1. 8Hz), 7. 14 (1H, d, J =8. 4Hz), 7. 11-7. 13(2H, m), 5. 75(1H, br s), 4. 14 (2H, t, J = 6. 6Hz), 3. 00 (2H, q, J = 6.0Hz),2.93(4H,br s),1.92(2H，重复五次，J = 6.6Hz) ;13C NMR(150MHz,CDC13) 5 159.6， 157. 5, 155. 3, 144. 3, 139. 2, 138. 6, 138. 2, 129. 6, 128. 8, 128. 7, 127. 5, 125. 8, 123. 7, 119. 7 ,48. 1,41. 1，33.8,31.7,28.4 ;LCMS m/z 429. 1644([M+H+]，C21H21C1N40 2S分子量429. 1147)。
[0235] 细胞活力的测定（IC5。检测）
[0236] f艮据 Denizot, F.和 R. Lang, Journal of Immunological Methods, 1986. 89(22) :p. 271 - 277上记载的方法进行细胞活力的测定。将H1650肺癌细 胞以每孔150, 000个细胞分配于12孔板上。分配后二十四小时，按照描述将细胞用逐渐增 加的药物浓度和对照进行处理。药物处理后四十八小时，将细胞用100 y L的3-(4, 5-二甲 基噻挫-2-基）_2, 5_ 二苯基四挫溴化物（3_ (4, 5-Dimethylthiazol_2-yl) _2, 5-dipheny ltetrazolium bromide，MTT)进行处理，并在37°C下温育2小时。然后将MTT溶液替换为 300 y L的丙醇并再次等分至96孔板中。使用96孔板读数器一式三份地在600nm处对每个 溶液进行分光光度分析。结果如表1所不。在下表1中直至编号80的实例都取自2013年 2月21日公布的PCT W02013/025882。它们示出了具有三环骨架的化合物的生物活性。
[0237] 表1细胞活力数据
[0238]
[0239]
[0240]
[0241]
[0242]
[0243]菌落形成分析。该分析根据 Sangodkar et al. J Clin Invest2012 ; 122:2637-51 进行。
[0244] 细胞培养和染色：针对A5491uc和H292细胞，向6孔板的每个孔中各接种500个细 胞，并在药物处理之前先允许其附着24小时。次日，将这些细胞用合适计量的药物或者等 体积的DMS0 (各条件下进行两个平行处理）进行处理。对于每种条件，在初始处理的四天之 后将耗尽的培养基更换为含有相等药剂量的新鲜培养基。初始处理7天（A5491UC)或8天 (H292)之后收获细胞。简言之，将培养基从各孔中吸出，并将细胞用冰冷的PBS洗涤两次， 然后板被置于室温下干燥4小时。将细胞在由10%甲醇和10%冰醋酸在蒸馏水中组成的 固定液中固定1小时，然后在1% (w/V)的溶解于甲醇中的结晶紫中染色过夜。第二天，将 染色溶液从孔中吸出并将板温和地用蒸馏水洗涤，以在菌落计数前除去过量的染色剂。将 菌落在ChemiDoc XRS+(Bio-Rad)上成像并将图片以8-bit TIFF文件输出。菌落用ImageJ 中的Colony Counter插件进行计数，并将菌落尺寸定义为4至400方形像素点且最小的圆 设定为0.6。将平行孔取平均值以得到各个条件下的单个值。A5491UC细胞的结果（菌落 数）示于表2且H292细胞的结果（菌落数）示于表3 :
[0245]表 2
[0246]
[0249]体内癌症模型（In vivo cancer model)
[0250]体内肺癌模型在 Politi et al.，Genes Dev. June 1，2006 20:1496-1510 中有记 载。对EGFR-L858R/CCSP小鼠喂食强力霉素浸渍过的食物颗粒以诱导肿瘤形成。8-12周 后，用Bruker 4. 7T Biospec扫描仪对小鼠成像以确认肺部结瘤的发育。在肿瘤确认后，将 实例30的化合物用DMSO(Sigma)制备并每隔一天以100mg/kg进行i.p.给药两周。处理 后，用MRI对小鼠再次成像，并对每张轴向照片用0sirix4. 1. 1通过可见的肺部不透明物体 的存在计算得到处理前和处理后的肺体积。在两周的处理期内，DMS0对照动物表现出肿瘤 体积20%的增长。在两周的处理期内，用实例30的化合物处理的动物表现出肿瘤体积60% 的减小。
[0251] 如上所述，⑶4+Foxp3+调节性T细胞（Tregs)对自身耐受性是必需的且对动物的 同种异体移植的耐受性诱导是重要的。所需要用于治疗自体免疫和预防移植物排斥的免疫 抑制药物（包括妈调神经磷酸酶抑制剂（calcineurin inhibitors))会非特异性抑制所有 的T细胞，包括Treg。这种对Treg的药理学抑制作用阻止了，而不是促进了，同种异体移植 的耐受性，使个体受制于长期免疫抑制的毒害，包括由于抗肿瘤免疫监管受阻而造成恶性 肿瘤发展的风险增加。因此，对于患有免疫介导疾病（包括移植物排斥）的患者的护理，能 够促进Treg诱导和功能并同时能预防恶性肿瘤的免疫抑制剂具有改革性。
[0252] 经测试，实例30具有从原位CD4T细胞中诱导Treg的能力。这些实验表明，实例 30在原位多细胞系中促进了 Foxp3的上调，所述多细胞系用在共刺激阻断期间在体内刺激 的TGFP和TCR转基因T细胞进行了处理，且在抑制试验中被诱导的Treg功能性抑制了 同种异体T细胞。将5万个⑶原位细胞（⑶62Lhi、⑶25低、⑶4阳性）与2ng/mL TGF 0、 lug/mL抗-CD3、100ng/mL IL-2 -起进行温育，每孔50000APCs且化合物的浓度为10 y M、 5 yM和2.5 yM。将这些细胞温育3天，然后染色以研究⑶4和Foxp3的表达。表达的结果 随在对照（DMS0)孔（通常20-25%Foxp3+)中诱导的％而成倍增加。AKTi，一种小分子的 AKT抑制剂，被用作阳性对照；它诱导了大约四倍的增加。氟哌啶醇（Haloperidol)被用作 特异性对照；它没有诱导统计学上显著的增加。实例30表现出在2. 5 y M时iTregd的大于 2倍的增加。实例27显示出在5 y M时iTreg的2倍的增加。当TGFP浓度降低时，实例 30对iTreg诱导的效应增大。使用或不使用实例30诱导的iTreg的抑制试验的结果表现 出相等的抑制能力，以在没有Treg的情况下诱导的最大增殖的％抑制表示。
[0253] 为了测试临床相关的体内效应，BALB/c小鼠的心脏被移植到完全同种异体的B6 受体中。而未经处理的动物以8天n = 4的程度排斥它们的移植物，而用实例30以100mg/ kg i. p.处理的小鼠的移植物持续了 18天n = 4, p〈0. 05vs对照，有统计学和临床上的显 著效果。
【主权项】
1. 一种式（I)的化合物：其中： T为苯环或五元或六元的杂芳环； U为苯环或五元或六元的杂芳环； 附带条件是T和U中至少一个是五元或六元的杂芳环； X选自由：-S-、- (CH2-CH2)-和-CH = CH-组成的组中；成的组中； A是附加在Y处作为螺环的3-6元的脂肪族碳环或杂环，并且A可以另外地被选自 〇H、F、氰基、氨基、（C1-C3)烷基氨基、（C1-C3)二烷基氨基、（C 1-C3)烷基、（C1-C3)卤代烷基、 (C 1-C3)卤代烷氧基和（C1-C3)烷氧基中的一种或两种取代基取代； !^、!^、妒和…独立地选自由乩卤素^^^-冊化^扣-^^烷基"心-^^卤代烷基、-OR6、-C(O)R 6、-OC(O)R6、-C(O)NR6R7、-C(O)OR 6、- SR6、-SO2R6和-SO2NR6R 7组成的组 中；9. R6和R 7各自独立地选自由：H和（C「C6)烷基组成的组中； R14为H或（C「C3)烷基； R15和R 16,在每次出现时独立地选自H、0H、氰基、氨基、（C1-C3)烷基氨基、（C 1-C3)二烷 基氨基，（C1-C3)烷基、（C1-C3)卤代烷基、（C 1-C3)卤代烷氧基和（C「C3)烷氧基，或者，R14、R 15 和R16中的两个可以共同形成3-7元的杂环或非芳香碳环，其中，所述3-7元的碳环或杂环 可以另外地被选自〇H、F、氰基、氨基、（C1-C3)烷基氨基、（C1-C 3)二烷基氨基、（C1-C3)烷基、 (C1-C3)卤代烷基、（C1-C3)卤代烷氧基和（C 1-C3)烷氧基中的一种或两种取代基取代； m为1到3的整数； η为2到4的整数；P为〇、1或2 ; q为〇或1 ; t为0、1或2 ; u为0、1或2,附带条件是当Y为' 1时，u为2; V为1、2或3 ; 附带条件是当q为〇且R15和R 16在所有情况下都为H时，η不为4 ; Z 选自由：-NHS02R17, -NHC (O) NRSR9, -NHC (O) OR8，- S (O) 2NRSR9,取代或未取代的环状氨 基甲酸酯，取代或未取代的环脲、环状酰亚胺和氰基胍组成的组中； R8和R9独立地选自H、取代或未取代的（C1-C6)烷基、取代或未取代的（C 3-C7)环烷基和 取代或未取代的（C5-C14)芳基；以及 R17选自苯基和单环杂芳基，所述苯基和单环杂芳基任选地被选自0H、卤素、氰基、硝 基、（C「C3)烷基氨基、（C1-C3)二烷基氨基、（C「C 3)酰胺基、（C1-C3)烷基磺酰基、（C「C3)烷 硫基、（C 1-C3)烷基、（C1-C3)卤代烷基、（C1-C 3)卤代烷氧基和（c「c3)烷氧基中的一种或两 种取代基取代。2. 根据权利要求1所述的化合物，其中，所述化合物的结构式为其中，W10、W11、W12和W 13各自独立地选自N、CH和C-R 3。3. 根据权利要求1所述的化合物，其中，所述化合物的结构式为其中，W2。、W21和W 22各自独立地选自S、0、NH、CH和C-R 3。4. 根据权利要求1所述的化合物，其中，Z选自由-NHSO 2R17、-NHC (0) NR8R9和-NHC (0) OR8组成的组中。5. 根据权利要求4所述的化合物，其中，Z为-NHSO 2R17。6. 根据权利要求5所述的化合物，其中，所述化合物的结构式为：其中，Ar为取代或未取代的苯基、噻吩基、呋喃基或吡咯基。7. 根据权利要求6所述的化合物，其中，所述化合物的结构式为：其中， W10、W11、W12和W 13各自独立地选自N、CH和C-R3; 胃2〇、胃21和^22各自独立地选自5、0、順、〇1和(：-1? 3; R1和R 3独立地选自由：H和卤素组成的组中； 以及 R2和R 4为H。8. 根据权利要求7所述的化合物，其中，X为-CH = CH-或-CH 2CH2-。9. 根据权利要求7所述的化合物，其中，p和q都是零，R 15为H且R 16选自H和OH。10. 根据权利要求9所述的化合物，其中，所述化合物的结构式为：其中： R1和R 3独立地选自由：H和卤素组成的组中； 以及 R2和R 4为H。11.根据权利要求7所述的化合物，其中，R 15或R 16两者共同形成3-7元的碳环或杂环 B，其中，所述3-7元的碳环或杂环B可以另外地被选自OH、F、氰基、氨基、（C1-C3)烷基氨基、 (C「C 3)二烷基氨基、（C「C3)烷基、（C「C3)卤代烷基、（C「C3)卤代烷氧基和（C「C 3)烷氧基 中的一种或两种取代基取代，所述化合物的结构式为：其中， t为0、1或2 ;并且 Ar为取代或未取代的苯基、噻吩基、呋喃基或吡咯基。12. 根据权利要求11所述的化合物，其中， (a) B为以下结构式所示的五元环：其中，在该五元环中： W1和W 2均为-CH2-，或 W1和W 2中一个为-O-且另一个为-CH 2_，或 W1和W 2中一个为-CH (OH)-且另一个为-CH2-, 并且一个CH2基团上的一个H被芳基磺酰胺取代；或 (b) B为以下结构式所示的六元环：其中，在该六元环中： W1、W2和 W3均为-CH2-，或 W1、W2和W3中一个为-0-且另两个为-CH2-，或 W1、W2和W3中一个为-CH (OH)-且另两个为-CH2-， 并且一个CH2基团上的一个H被芳基磺酰胺取代。13. 根据权利要求7所述的化合物，其中，R 15或R 16两者共同形成3-7元的碳环或杂环 B，其中，所述3-7元的碳环或杂环B可以另外地被选自0H、F、氰基、氨基、（C1-C3)烷基氨基、 (C「C 3)二烷基氨基、（C「C3)烷基、（C「C3)卤代烷基、（C「C3)卤代烷氧基和（C「C 3)烷氧基 中的一种或两种取代基取代，所述化合物的结构式为：t为0、1或2 ;并且 Ar为取代或未取代的苯基、噻吩基、呋喃基或吡咯基。14. 根据权利要求13所述的化合物，其中， (a) B为以下结构式所示的五元环： 其中，在该五元环中：W1和W 2均为-CH2-，或 W1和W 2中一个为-O-且另一个为-CH 2_，或 W1和W 2中一个为-CH (OH)-且另一个为-CH2-, 并且一个CH2基团上的一个H被芳基磺酰胺取代；或 (b) B为以下结构式所示的六元环：其中，在该六元环中： W1、W2和 W3均为-CH2-，或 W1、W2和W3中一个为-0-且另两个为-CH2-，或 W1、W2和W3中一个为-CH (OH)-且另两个为-CH2-， 并且一个CH2基团上的一个H被芳基磺酰胺取代。15. 根据权利要求7-14中任意一项所述的化合物，其中，Ar为苯基或噻吩基，任选地被 选自（C「C3)烷基、卤素、氰基、硝基、（C 1-C3)卤代烷基、（C1-C3)烷基磺酰基、（C 1-C3)卤代烷 氧基和乙酰氨基中的一种或两种取代基取代。16. 根据权利要求1所述的化合物，其中，所述化合物的结构式为：其中，Ar为取代或未取代的苯基、噻吩基、呋喃基或吡咯基，并且虚线表示任选的双键。17. 根据权利要求16所述的化合物，其中，R 15或R 16两者共同形成3-7元的碳环或杂 环B，其中，所述3-7元的碳环或杂环B可以另外地被选自OH、F、氰基、氨基、（C 1-C3)烷基氨 基、（C1-C3)二烷基氨基、（C 1-C3)烷基、（C1-C3)卤代烷基、（C1-C 3)卤代烷氧基和（C「C3)烷 氧基中的一种或两种取代基取代，所述化合物的结构式为：18. 根据权利要求1所述的化合物，其中，R 14或R 15两者共同形成3-7元的碳环或杂环 B，其中，所述3-7元的碳环或杂环B可以另外地被选自OH、F、氰基、氨基、（C1-C3)烷基氨基、 (C「C 3)二烷基氨基、（C「C3)烷基、（C「C3)卤代烷基、（C「C3)卤代烷氧基和（C「C 3)烷氧基 中的一种或两种取代基取代，所述化合物的结构式为：其中， t为0、1或2 ;并且 Ar为取代或未取代的苯基、噻吩基、呋喃基或吡咯基。19. 根据权利要求18所述的化合物，其中， (a) B为以下结构式所示的五元环：其中： W1和W 2均为-CH2-;或 W1和W 2中一个为-O-且另一个为-CH 2_ ;或 W1和W 2中一个为-CH(OH)-且另一个为-CH 2_ ;或 (b) B为以下结构式所示的六元环： 其中：W1、W2和 W3均为-CH2-;或 W1、W2和W3中一个为-0-且另两个为-CH 2_ ;或 W1、W2和W3中一个为-CH (OH)-且另两个为-CH 2_。20. 根据权利要求1所述的化合物，其中，所述化合物的结构式为：其中，Ar为取代或未取代的苯基、噻吩基、呋喃基或吡咯基，并且虚线表示任选的双键。21. 根据权利要求20所述的化合物，其中， (a) A为五元环，所述化合物具有结构式：或 (b) A为六元环，所述化合物具有结构式：22. 根据权利要求20所述的化合物，其中， (a)A为四氢呋喃，所述化合物具有结构式：或 (b)A为四氢吡喃，所述化合物具有结构式：23. 根据权利要求3所述的化合物的结构式为：24. 根据权利要求1-5、11-14、18、19或23中任意一项所述的化合物，其中，t为零。25. 根据权利要求2或7-14中任意一项所述的化合物，其中，W ' W11、W12和W 13中一个 为N，其余三个为CH。26. 根据权利要求2或7-14中任意一项所述的化合物，其中，W ' W11、W12和W 13中两个 为N，其余两个为CH。27. 根据权利要求3或7-14中任意一项所述的化合物，其中，W 2°、W21和W22中一个为S， 其余两个为CH。28. 根据权利要求6-14或16-23中任意一项所述的化合物，其中，Ar为苯基或噻吩基， 任选地被选自甲基、卤素、氰基、硝基、三氟甲基、甲基磺酰基、三氟甲氧基和乙酰氨基中的 一种或两种取代基取代。29. 根据权利要求28所述的化合物，其中，Ar为苯基，任选地在3、4或5号位被选自甲 基、卤素、氰基、三氟甲基和三氟甲氧基中的一种或两种取代基取代； R1和R 3独立地选自由H和卤素组成的组中； 以及 R2和R 4为H。30. 权利要求1-14或16-23中任意一项所述的化合物在医药中的应用。31. 权利要求1-14或16-23中任意一项所述的化合物在治疗选自以下疾病中的应用： (a) 癌症 (b) 糖尿病 (c) 自体免疫性疾病 (d) 年龄引发蛋白质毒性疾病 (e) 情绪失调 (f) 寻常痤疮 (g) 实体器官移植排斥反应； (h) 移植物抗宿主病；和 (i) 心脏肥大。32. 根据权利要求31所述的治疗癌症的应用，其中，所述癌症选自由：卵巢癌、胰腺癌、 肾细胞癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、肝细胞癌、神经胶质瘤、白血病、淋巴瘤、结直肠癌和肉 瘤组成的组中。33. 根据权利要求32所述的应用，其中，该方法进一步包括给药一种或多种癌症化疗 剂。34. 根据权利要求33所述的应用，其中，所述一种或多种癌症化疗剂为EGFR抑制剂。35. 根据权利要求34所述的应用，其中，所述化疗剂为埃罗替尼或吉非替尼。36. 权利要求1-14或16-23中任意一项所述的化合物在癌症治疗中恢复对一种或多种 化疗剂的敏感性中的应用。37. 根据权利要求31所述的治疗年龄引发蛋白质毒性疾病的应用，其中，所述疾病选 自由：阿尔茨海默病、帕金森氏病、亨廷顿病和肌萎缩性侧索硬化症组成的组中。38. 根据权利要求31所述的治疗移植物抗宿主病的应用。39. 根据权利要求31所述的治疗自体免疫性疾病的应用，其中，所述疾病为炎症性肠 病。40. -种药物组合物，包括药学上可接受的载体和根据权利要求1-14或16-23中任意 一项所述的化合物。
【专利摘要】本发明公开了一种FOXO转录因子蛋白质的三环化学调节剂。该化合物能有效治疗癌症、年龄引发蛋白质毒性、压力引起的抑郁、炎症和痤疮。该化合物具有以下和类似的物类(i)、(ii)和(iii)，其中，Het为芳香族杂环且Y为多种侧链和环的连接点。这样的化合物的例子为4-氯-N-(3-(10,11-二氢-5H-苯并[b]吡啶并[2,3-f]氮杂-5-基)丙基)苯磺酰胺(iv)。
【IPC分类】A61K31/542
【公开号】CN105073117
【申请号】CN201480009539
【发明人】迈克尔·奥尔迈尔, 大卫·卡斯特里斯基
【申请人】西奈山伊坎医学院
【公开日】2015年11月18日
【申请日】2014年2月19日
【公告号】CA2901493A1, EP2958565A1, WO2014130534A1