291-298)以及 Singh, Narendra P.，等（Experimental cell researchl75. 1(1988) : 184-191)所描述的彗星试验进行了面对由UV/可见光引起的氧化 应激保护原始培养的角质细胞及其DNA的测定。关键是要显示根据本发明的提取物（SBE) 在细胞模型中的保护活性，并将其与参照抗氧化剂生育酚乙酸酯比较。
[0174]材料和方法
[0175] 所述SBE和生育酚乙酸酯（Ac-Toc)对UVB/UVA/可见光辐射（辐射：290nm-800nm) 的抗氧化性质通过对正常人角质细胞的初级培养物的彗星试验（碱性版本）进行了评估。
[0176] 在500nM的SBE和50 yM的Ac-Toc的浓度评价抗氧化性质。两种产品均以1 %的最 终浓度溶解在四氢呋喃中。所述抗氧化性质已定义为降低在UVB/UVA/可见光（290-800nm) 辐照之后发生的细胞DNA单链断裂的数量的能力，且在与产品于37°C接触120分钟后测定 这些性质。这些福射通过太阳模拟器Suntest CPS+(阿特拉斯材料测试技术BV，Moussy le Boeuf，法国）传递。总辐射剂量为12. OJ/cm2 (灯的额定功率-750W/m2)进行2. 7分钟。阴 性对照包括由THF (1 % )以及由溶解在1 %的THF中的Ac-Toc (50 y M)和的SBE (500nM)处 理的非辐射角质细胞。
[0177]
[0178] 图8显示了根据本发明的提取物（SBE)具有高的抵抗氧化应激的细胞保护能力， 且其比生育酚乙酸酯更好地有助于保护细胞DNA，然而是在小于100倍浓缩的情况下。因此 提取物的体外保护能力比生育酚乙酸酯高出超过1〇〇倍。
[0179] B、羰基化测试
[0180] 在SBE和生育酚乙酸酯的存在下，通过以下的与以上使用的彗星试验相同的UV/ 可见光辐射实验步骤测定角质细胞的羰基化速率。
[0181] 材料和方法
[0182] 角质细胞的培养和辐照
[0183] -正常人的角质（NHK) (T6)-106细胞/条件
[0184] -条件：
[0185] 1%的THF溶剂对照
[0186] _SBE为 200nM
[0187] 生育酚乙酸酯2020yM
[0188] _每种情况进行三次。
[0189]-与KHNs在不同实验条件下接触2小时。
[0190]-通过SuntestCPS+太阳光模拟器（阿特拉斯材料测试技术）在4°C下，以120kJ/ m2的UVB/UVA可见光辐照置于PBS中的细胞。阴性对照保持在4°C持续与辐照相同的时间。
[0191]-胰蛋白酶化（trypsination)福射后的细胞。冲洗结冰的PBS。消除PBS并 在-80 °C立即冰冻细胞颗粒。
[0192]羰基化的测宙
[0193]-蛋白质在细胞裂解后提取且使用Bradford测试测定其浓度。
[0194] -所述蛋白质由2, 4-二硝基苯肼（DNPH)衍生，其与羰基结合。
[0195] -随后在ELISA板（OxyELISA?氧化蛋白质定量试剂盒，密理博）上以450nm测顶 羰基化速率。
[0196] MM.
[0197] 图9显示了角质细胞蛋白质的羰基化速率在UV/可见光辐照后显著提高了。通 过加入保护蛋白质抵御氧化的SBE提取物或生育酚乙酸酯，这种提高显著降低了（P值 〈0. 01)。尽管SBE提取物的浓缩小于100倍，但这种保护对于SBE和生育酚乙酸酯是类似 的（P 值 >0.01)。
[0198] 虽然略显不足，但SBE的蛋白质组保护能力与通过彗星试验观察的相同且为生育 酚乙酸酯的100倍，这与以下基于碱性磷酸酶（AP)活性的测量获得的结果对应。
[0199] 使用彗星试验观察的对细胞的保护主要由SBE保护蛋白质组的能力驱动。
[0200]4、SBE提取物的化妆品组合物
[0201] 所述化妆品组合物通常含有0.0001-0. 01重量％的根据本发明的提取物（干燥 的）。
[0202] 乳膏可以具有以下组分（重量％ )，含有根据本发明的提取物的该制剂优选整合 到异壬酸异壬酯中。
[0203]
[0204] 通常地，由于根据本发明的提取物的颜色，这些组合物可以具有从浅粉色至红色 范围的颜色。
[0205] 在本申请的上下文内，这些实施方式显示了细菌运动节杆菌的特别选择作为具有 意想不到的效果的类胡萝卜素（发现于许多种中，包括藻类植物、蓝藻细菌、真菌等）的来 源：
[0206] _相对容易地培养细菌并制备提取物（不像包括盐杆菌的许多极端微生物生物 体）；
[0207] _提取物不同部分之间的协同作用；
[0208] _不同亚型对提取物整体活性的贡献（不像例如耐福射球菌（Deinococcus radiodurans)，仅其类胡萝卜素（deinoxanthin)有贡献）；
[0209]-相对于已知的抗氧化剂，非常强的抗自由基和抗UV活性；
[0210] _与已知的抗氧化剂具有协同作用；
[0211] _从未揭示的对蛋白质组的保护效应，其超过了抗氧化能力：在生化测试以及细 胞培养的上下文中，SBE提取物的抗氧化能力比Trolox的高出4倍，而其保护蛋白质的能 力比Trolox的强出100倍。
【主权项】
1. 化妆品组合物、药物组合物或食品组合物，该组合物含有细菌运动节杆菌 (Arthrobacteragilis)的提取物，所述提取物富含类胡萝卜素。2. 根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，通过将所述细菌培养在由1重量％的胰 蛋白胨和0. 5重量％的酵母提取物组成的培养基中获得所述提取物。3. 根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，所述提取物由稳定期的细胞获得。4. 根据权利要求1-3中任意一项所述的组合物，其特征在于，所述提取物为从细菌颗 粒获得的非极性相。5. 根据权利要求4所述的组合物，其特征在于，优选使用丙酮和/或甲醇提取所述细菌 颗粒，且通过加入优选为己烷的非极性溶剂和优选为NaCl溶液的饱和盐溶液获得所述非 极性相。6. 根据前述权利要求中任意一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物还含有优选 选自以下组的抗氧化剂： -维生素E或其衍生物中的一种，例如Trolox (6-羟基-2, 5, 7, 8-四甲基色满-2-羧 酸）； -N-乙酰半胱氨酸（NAC); -丁基羟基茴香醚（BHA); _维生素C ; -谷胱甘肽； -咖啡酸或酸（E) 3- (3, 4-二羟苯基）-2-丙烯酸； -姜黄素或二阿魏酰甲烷； -槲皮黄酮或槲皮素； _番前红素； -辅酶 QlO (QlO); -尿酸。7. 根据前述权利要求中任意一项所述的组合物，其特征在于，以干重计，所述提取物占 所述组合物的0. 0001-0. 01 %。8. 根据前述权利要求中任意一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物为洗液、乳 膏、凝胶、喷雾、溶液、胶囊或片剂的形式。9. 优选抵抗氧化应激，特别是皮肤细胞老化的美容治疗方法，该方法包括在皮肤上施 用根据权利要求1-8中任意一项所述的组合物。10. 权利要求1-5中任意一项所定义的提取物作为紫外光稳定剂的应用。11. 权利要求1-5中任意一项所定义的提取物作为针对可见光，特别是蓝紫光的保护 剂的应用。12. 权利要求1-5中任意一项所定义的提取物作为自由基清除剂或抗氧化剂的应用。13. 权利要求1-5中任意一项所定义的提取物作为蛋白质保护剂的应用。14. 根据权利要求10所述的提取物的应用或根据权利要求11-13所述的提取物的应 用，其特征在于，所述提取物与优选选自以下列表的另一种抗氧化剂组合使用： -维生素E或其衍生物中的一种，例如Trolox (6-羟基-2, 5, 7, 8-四甲基色满-2-羧 酸）； -N-乙酰半胱氨酸（NAC); -丁基羟基茴香醚（BHA); _维生素C ; -谷胱甘肽； -咖啡酸或酸（E) 3- (3, 4-二羟苯基）-2-丙烯酸； -姜黄素或二阿魏酰甲烷； -槲皮黄酮或槲皮素； _番前红素； -辅酶 QlO (QlO); -尿酸。15.优选来源于细菌运动节杆菌（Arthrobacter agilis)的类胡萝卜素在保护蛋白质 组中的应用。
【专利摘要】本发明涉及含有细菌运动节杆菌的提取物的化妆品组合物、药物组合物或食品组合物，所述提取物富含类胡萝卜素。
【IPC分类】A61K8/49, A61K8/35, A61K8/67, A61K8/46, A61Q19/00, A61K8/99, A61K8/31, A61Q19/08, A61Q17/04
【公开号】CN105073202
【申请号】CN201480018234
【发明人】J-N·托雷尔, F-X·佩莱
【申请人】J-N·托雷尔
【公开日】2015年11月18日
【申请日】2014年4月9日
【公告号】CA2908114A1, WO2014167247A2, WO2014167247A3