养箱中孵育1小时，采用PH7. 4的PBS溶液润洗细胞，48小时后采用荧光显微镜观 察转染结果并拍照（200倍放大），结果显示，转染细胞中有绿色荧光蛋白表达，表明 DUP-I-S-S-PAMAM-S-S-Clonel可以将DNA递送至细胞内，并有效表达（见图4)。
[0072] 使用实施例5制备的DUP-1-S-S-PLR-S-S-Clonel/DNA基因药物递送系统分别与 前列腺癌细胞LNCaP和PC-3细胞，于37°C，5%CO2培养箱中孵育1小时，采用pH7. 4的PBS 溶液润洗细胞，48小时后采用荧光显微镜观察转染结果并拍照（200倍放大），结果显示，转 染细胞中有绿色荧光蛋白表达，表明DUP-I-S-S-PLR-S-S-Clonel可以将DNA递送至细胞 内，并有效表达（见图4)。
[0073] 使用实施例6制备的DUP-1-S-S-PEI-S-S-Clonel/DNA基因药物递送系统分别与 前列腺癌细胞LNCaP和PC-3细胞，于37°C，5% CO2培养箱中孵育1小时，采用pH7. 4的PBS 溶液润洗细胞，48小时后采用荧光显微镜观察转染结果并拍照（200倍放大），结果显示，转 染细胞中有绿色荧光蛋白表达，表明DUP-I-S-S-PEI-S-S-Clonel可以将DNA递送至细胞 内，并有效表达（见图4)。
[0074] 实施例9 :基因药物递送系统转染前列腺癌细胞后的荧光素酶表达
[0075] 将实施例1制备的DUP-I-S-S-PAMAM-S-S-Clonel基因药物递送载体 溶于适量的PH7. 4的PBS中。将pGL3-Control Vector溶于适量的PBS中，与 DUP-I-S-SPAMAM-S-S-Clonel 按照 N/P 比 1、5、10、15、20、25 混合，涡旋 30s 后，室温孵育 30 分钟，制成DUP-I-S-S-PAMAM-S-S-Clone 1/DNA基因药物递送系统。PAMAM/DNA作为对照。分 别与前列腺癌细胞LNCaP和PC-3,于37°C，5% CO2培养箱中孵育1小时，采用pH7. 4的PBS 溶液润洗细胞，48小时后采用荧光素酶分析系统分析LNCaP细胞中，荧光素酶的表达量， 结果显示，与DUP-I-S-S-PAMAM-S-S-Clonel作用的细胞中荧光素酶表达量均大于PAMAM/ DNA，且在N/P > 15后，均有显著性差异（见图5)。
[0076] 实施例10 :前列腺癌裸鼠移植瘤模型小鼠动物实验
[0077] 使用实施例1制备的DUP-I-S-S-PAMAM-S-S-Clonel基因递释载体，标记1251，制备 具有放射性 125I标记的基因递释载体，对分别接有激素依赖型前列腺癌细胞和非依赖性前 列腺癌细胞的裸鼠移植瘤模型，进行静脉注射，60min后，取血样0. 2ml，乙醚麻醉后处死小 鼠，迅速取脑、心、肝、脾、肺和肾并称重，y-计数仪测定各血样和组织中125I的放射性强 度，通过60min时每克组织和每微升血样中的每分钟衰变数dpm的比值测定器官分布容积 (V d，y L/g)，各器官的初始血容积V。通过查阅文献获得，其中脑，心，肝，脾，肺和肾的V。分 另Ij约为21，148,196, 253,190和114 y 1/g组织。各器官摄取载体的量以每克组织中注射剂 量百分比（％ ID/g tissue)表示，通过以下公式计算：
[0078] % ID/gtissue= [Vd -V0]XI〇-3XC60nin
[0079] 其中C6ftllin为每毫升血液中的注射剂量百分比。
[0080] 以上所述实施例仅表达了本发明的实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能 因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说， 在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范 围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
【主权项】
1. 一种靶向激素依赖性前列腺癌细胞和激素非依赖性前列腺癌细胞的药物递送载体， 其特征在于，该药物递送载体包含： 聚阳离子高分子材料； 靶向激素依赖性前列腺癌细胞的多肽，以双硫键连接于所述聚阳离子高分子材料表 面； 靶向激素非依赖性前列腺癌细胞的多肽，以双硫键连接于所述聚阳离子高分子材料表 面。2. 根据权利要求1所述的一种靶向激素依赖性前列腺癌细胞和激素非依赖性前列 腺癌细胞的药物递送载体，其特征在于，所述的聚阳离子高分子材料选自以下任一：聚酰 胺-胺型树状分支物、聚精氨酸、聚乙烯亚胺、多聚赖氨酸。3. 根据权利要求1所述的一种靶向激素依赖性前列腺癌细胞和激素非依赖性前列腺 癌细胞的药物递送载体，其特征在于，所述的靶向激素依赖性前列腺癌细胞的多肽，其氨基 酸序列如SEQ ID NO. 1所示。4. 根据权利要求1所述的一种靶向激素依赖性前列腺癌细胞和激素非依赖性前列腺 癌细胞的药物递送载体，其特征在于，所述的靶向激素非依赖性前列腺癌细胞的多肽，其氨 基酸序列如SEQ ID NO. 2所示。5. 根据权利要求1至4任一所述的一种靶向激素依赖性前列腺癌细胞和激素非依赖性 前列腺癌细胞的药物递送载体，其特征在于，所述的多肽与聚阳离子高分子材料的摩尔比 为1~5:1 〇6. 根据权利要求1至4任一所述的一种靶向激素依赖性前列腺癌细胞和激素非依赖性 前列腺癌细胞的药物递送载体，其特征在于，所述的多肽与聚阳离子高分子材料的摩尔比 为 4:1〇7. -种靶向激素依赖性前列腺癌细胞和激素非依赖性前列腺癌细胞的药物递送系统， 其特征在于，该药物递送系统包含： 如权利要求1-4任一所述的药物递送载体和药物。8. 根据权利要求1所述的一种靶向激素依赖性前列腺癌细胞和激素非依赖性前列腺 癌细胞的药物递送系统，其特征在于，所述的药物为带负电的基因药物。9. 根据权利要求8所述的一种靶向激素依赖性前列腺癌细胞和激素非依赖性前列腺 癌细胞的药物递送系统，其特征在于，所述的聚阳离子高分子材料与基因药物的N/P比为 1 ~15:1〇10. -种如权利要求1所述的靶向激素依赖性前列腺癌细胞和激素非依赖性前列腺癌 细胞的药物递送载体的制备方法，其特征在于，该方法包括： A、 分别合成靶向激素依赖性前列腺癌细胞的多肽和靶向激素非依赖性前列腺癌细胞 的多肽； B、 将聚阳离子高分子材料与丙酰氨基6-己酸酯反应，生成SPDP活化的聚阳离子高分 子材料； C、 将合成的两种多肽与SPDP活化的聚阳离子高分子材料分别以摩尔比为1~5:1，搅 拌混合，得药物递送载体。11. 根据权利要求10所述的靶向激素依赖性前列腺癌细胞和激素非依赖性前列腺癌 细胞的药物递送载体的制备方法，其特征在于，该方法为： A、 合成如SEQ ID NO. 1和如SEQ ID NO. 2所示的多肽； B、 配制伯氨基浓度为lOmmol/L的聚酰胺-胺型树状分支物的PBS溶液5mL，加入10 y L 丙酰氨基6-己酸酯10mmol/L DMSO溶液，室温下反应2h，加入50iiL lmmol/L甘氨酸溶液， 终止反应，生成SPDP活化的PAMAM ; C、 将多肽与SPDP活化的PAMAM分别以摩尔比为1~5:1，室温下搅拌反应12h后生成 DUP-I-S-S-PAMM-S-S-Clonel，透析除去未反应的肽，得到药物递送载体。12. -种如权利要求1所述的靶向激素依赖性前列腺癌细胞和激素非依赖性前列腺癌 细胞的药物递送载体在制备治疗前列腺癌药物中的应用。
【专利摘要】本发明涉及医药技术领域，本发明的目的在于提供一种靶向前列腺癌的药物递送载体、递送系统及其制备与应用。本发明可以实现双重靶向、同时递送至ADPC和AIPC两种前列腺癌细胞的。本发明的药物递送载体包含：聚阳离子高分子材料；靶向激素依赖性前列腺癌细胞的多肽；靶向激素非依赖性前列腺癌细胞的多肽。本发明的药物递送载体可以介导基因药物到达前列腺癌组织，有效提高了基因药物在前列腺癌细胞内的表达。
【IPC分类】A61K48/00, A61P35/00, A61K47/42, A61K47/34, A61K31/711, A61K31/7105
【公开号】CN105079817
【申请号】CN201510223717
【发明人】高申, 武鑫, 刘继勇, 高静, 丁雪鹰, 朱全刚, 张丽娟, 姚翀, 王晓宇, 台宗光, 丁宝月, 范伟, 王翔, 顾圣莹
【申请人】中国人民解放军第二军医大学
【公开日】2015年11月25日
【申请日】2015年5月5日