用于检测生物物质的方法和材料的制作方法_4

文档序号:9400162阅读:来源:国知局
5] 合成遵循这些步骤:使1克细砂与10ml pH 8. 5 20mM硼酸盐缓冲液混合,并且 使其在室温下搅拌数分钟。接着添加8mg 1,1'_羰基二咪唑至混悬液中,并且使其搅拌 2. 5小时,随后添加0. 125g超支化双-MPA聚酯-16-羟基。在额外2. 5小时之后,添加5mg 1,1' -羰基二咪唑至混悬液中,并且使其搅拌2小时,随后添加12. 5mg肝素钠。使最终混 合物在室温下搅拌3天。分离最终产物,并且保持它的湿润性。
[0086] 实施例6 :合成肝素-[支化]-Septorose(图4B)
[0087]合成遵循这些步骤:使 250mgSepharose?(5wt%于水中)与 10ml pH 8. 5 20mM 硼酸盐缓冲液混合,并且使其在室温下搅拌数分钟。接着添加16mg 1,1'_羰基二咪唑至混 悬液中,并且使其搅拌2小时,随后添加0. 25g超支化双-MPA聚酯-16-羟基。在2. 5小时 之后,添加l〇mg 1,1' -羰基二咪唑至混悬液中,并且使其再搅拌2小时,随后添加25mg肝 素钠。使最终混合物在室温下搅拌3天。分离产物,用25ml DI水冲洗,并且保持它的湿润 性。
[0088] 实施例7:合成肝素-[支化]-PGMA (图4C)
[0089] 合成遵循这些步骤:使50mg PGMA-MV^ 10ml pH 8.5 20mM硼酸盐缓冲液混合, 并且使其在室温下搅拌数分钟。接着添加32mgl,1' -羰基二咪唑至混悬液中,并且使其搅 拌1小时,随后添加〇. 5g超支化双-MPA聚酯-16-羟基。在额外2小时之后,添加20mg 1,1' -羰基二咪唑至混悬液中,并且使其再搅拌2小时,随后添加50mg肝素钠。使最终混 合物在室温下搅拌3天。分离产物,用25mlDI水冲洗,并且保持它的湿润性。
[0090] 实施例8:合成肝素-[支化]-金纳米粒子(图4D)
[0091] 合成遵循这些步骤:使5ml的金纳米粒子于PBS中的溶液与2ml pH 8. 5 20mM硼 酸盐缓冲液混合,并且使其在室温下在玻璃小瓶中搅拌30分钟。接着添加8mg 1,1' -羰基 二咪唑(0. 05mmol,Mff 162. 15)至混悬液中,并且使其搅拌2小时,随后添加0. 133g超支化 双-MPA聚酯-16-羟基。在那之后,添加20mg 1,1'_羰基二咪唑至混悬液中,并且使其搅 拌2小时,随后添加50mg肝素钠。使最终混合物在室温下搅拌过夜。
[0092] 实施例9:合成肝素-[支化]-砂
[0093] 合成将遵循这些步骤:将使1克细砂与10ml pH 8. 5 20mM硼酸盐缓冲液混合,并 且使其在室温下搅拌数分钟。将接着添加8mg 1,1'_羰基二咪唑至混悬液中,并且使其搅 拌2. 5小时,随后添加支链聚(乙二醇)(1. 14_〇1当量0H)。在额外2. 5小时之后,将添加 5mg 1,1' -羰基二咪唑至混悬液中,并且使其搅拌2小时,随后添加12. 5mg肝素钠。将使 最终混合物在室温下搅拌3天。将分离最终产物,并且将保持它的湿润性。
[0094]实施例1〇 :合成肝素-[支化]-Sepharose?
[0095] 合成将遵循这些步骤:将使250mgSepharose?(5wt%于水中)与10ml pH8. 5 20mM硼酸盐缓冲液混合,并且使其在室温下搅拌数分钟。将接着添加16mg 1,1' -羰基二 咪唑至混悬液中,并且使其搅拌2小时,随后添加支链聚(乙二醇)(2. 28mmol当量0H)。在 2. 5小时之后,将添加10mg 1,1' -羰基二咪唑至混悬液中,并且使其再搅拌2小时,随后添 加25mg肝素钠。将使最终混合物在室温下搅拌3天。将分离产物,用25ml DI水冲洗,并 且将保持它的湿润性。
[0096]实施例11 :合成肝素-[支化]-PGMA
[0097] 合成将遵循这些步骤:将使50mg ?6麻-见12与10ml pH 8. 5 20mM硼酸盐缓冲液混 合,并且使其在室温下搅拌数分钟。将接着添加32mg1,1'_羰基二咪唑至混悬液中,并且 使其搅拌1小时,随后添加支链聚(乙二醇)(4.56mmol当量0H)。在额外2小时之后,将 添加20mg1,1'-羰基二咪唑至混悬液中,并且使其再搅拌2小时,随后添加50mg肝素钠。 将使最终混合物在室温下搅拌3天。将分离产物,用25ml DI水冲洗,并且将保持它的湿润 性。
[0098] 实施例12 :合成肝素-[支化]-金纳米粒子
[0099] 合成将遵循这些步骤:将使5ml的金纳米粒子于PBS中的溶液与2ml pH 8. 5 20mM硼酸盐缓冲液混合,并且使其在室温下在玻璃小瓶中搅拌30分钟。将接着添加8mg 1,1'-羰基二咪唑(〇. 〇5mmol,丽162. 15)至混悬液中,并且使其搅拌2小时,随后添加支 链聚(乙二醇)(1. 14mmol当量0H)。在那之后,将添加20mg 1,1'-羰基二咪唑至混悬液 中,并且使其搅拌2小时,随后添加50mg肝素钠。将使最终混合物在室温下搅拌过夜。
[0100] 实施例13:受感染的地表水
[0101] 使1〇〇 y 1来自Lexington, MA的地表水(非可饮用,但澄清)与50 y 1肝素-[支 化]-金纳米粒子溶液混合。所得溶液被指定为溶液A。使100 y 1可饮用清洁水与50 y 1 肝素-[支化]-金纳米粒子溶液混合。所得溶液被指定为溶液B。混合两种溶液A和B。依 次用棉花和肝素-[支化]-砂阻塞两个Pasteur玻璃吸移管。这些吸移管接着用溶液A或 B装载。使溶液在砂上搁置10分钟,随后缓慢迫使它们穿过砂床。其中装载溶液A的管柱 A中的棉花层显示暗红色条带,而其中装载溶液B的管柱B中的棉花层未显示暗红色条带 (图7中的实例)。
[0102] 实施例14 :受感染的地表水
[0103] 使100 y 1来自Lexington, MA的地表水(非可饮用,但澄清)与50 y 1肝素-[支 化]-金纳米粒子溶液混合。所得溶液被指定为溶液C。使100 y 1可饮用清洁水与50 y 1 肝素-[支化]-金纳米粒子溶液混合。所得溶液被指定为溶液D。混合两种溶液C和D。 向溶液C和D中的各个中添加5mg肝素-[支化]-PGMA,并且使其混合。用棉花阻塞两个 Pasteur玻璃吸移管。将溶液C装载至第一吸移管中,而将溶液D装载至第二吸移管中。使 溶液缓慢迀移穿过吸移管。其中装载溶液C的第一吸移管中的出口床显示暗红色至棕色条 带,而其中装载溶液D的第二吸移管中的出口床未显示这个暗色条带(图8中的实例)。
[0104] 实施例15 :受感染的地表水
[0105] 使100 y 1来自Lexington, MA的地表水(非可饮用,但澄清)与50 y 1肝素-[支 化]-金纳米粒子溶液混合。所得溶液被指定为溶液E。使100 y 1可饮用清洁水与50 y 1 肝素-[支化]-金纳米粒子溶液混合。所得溶液被指定为溶液F。混合两种溶液E和F。 向溶液E和F中的各个中添加5mg肝素-捣rose?,并且使其在200rpm下混合5分钟。 用棉花阻塞两个Pasteur玻璃吸移管。将溶液E装载至第一吸移管中,而将溶液F装载至 第二吸移管中。使溶液缓慢迀移穿过吸移管。观察到在第一吸移管和第二吸移管中的两个 床之间的颜色差异。
[0106] 实施例16 :具有已知细菌滴度的水溶液
[0107] 制备大肠杆菌(E. coli)接种物:添加溶原性肉汤(LB) (lmL)至15ml细胞培 养管中。将七(7) yl 的 ONE SHOT? TOP 10 大肠杆菌细胞(Life Technologies, Grand Island, NY)的40%甘油储备物接种至lml LB肉汤中。在37°C下在恒定振荡(约250rpm) 下孵育接种物3小时。接着在2500rpm速度下离心接种物4分钟。分离LB肉汤,并且用 每次lml IX无菌磷酸盐缓冲盐水(PBS) (pH 7. 4)洗涤大肠杆菌细胞两次,接着再混悬于 lmL相同缓冲液中。使用光密度测量,最终细菌滴度被估计为约5X107个细胞/毫升。这 个溶液被标记为溶液84-1。使10 y 1溶液84-1与990 y 1无菌IX PBS混合。所得细菌滴 度被估计在5 X105个细胞/毫升下。这个溶液被标记为溶液84-2。使10 iil溶液84-2与 990 y 1无菌IX PBS混合。所得细菌滴度被估计在5 X 103个细胞/毫升下。这个溶液被标 记为溶液84-3。使10 y 1溶液84-3与990 y 1无菌IX PBS混合。所得细菌滴度被估计在 50个细胞/毫升下。这个溶液被标记为溶液84-4。
[0108] 实施例17 :具有已知细菌滴度的水溶液
[0109] 大肠杆菌(E. coli)滴度与形成的聚集体的颜色强度的关联:使200 y 1各以上溶 液84-1、84-2、84-3、84-4与25 y 1肝素-[支化]-金纳米粒子溶液混合。使所得溶液穿过 96孔过滤板(Millipore MAFCN0B)。接着使用Tecan板读取器读取这些孔中的吸光度值(图 12)。505nm波长下的吸光度读数(Abs.)揭示以下值:1)对于溶液84-l,Abs. 1. 9505 ;2)对 于溶液 84-2, Abs. 1. 8965 ;3)对于溶液 84-3, Abs. 1. 8829 ;4)对于溶液 84-4, Abs. 1. 8527。 515nm波长下的吸光度读数(Abs.)揭示以下值:1)对于溶液84-l,Abs. 1.9434 ;2)对于 溶液 84-2, Abs. 1. 8853 ;3)对于溶液 84-3, Abs. 1. 8764 ;4)对于溶液 84-4, Abs. 1. 8482。 525nm波长下的吸光度读数(Abs.)揭示以下值:1)对于溶液84-1,Abs. 1.9373 ;2)对于 溶液 84-2, Abs. 1. 8750 ;3)对于溶液 84-3, Abs. 1. 8685 ;4)对于溶液 84-4, Abs. 1. 8363。 535nm波长下的吸光度读数(Abs.)揭示以下值:1)对于溶液84-1,Abs. 1.9
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