、果胶酶复合酶于温度多30°C下预处理0.5h ;所述复合酶中纤维素酶、果胶酶与药材的质量比均为1:200 ；
[0028]3、中性高浓度乙醇提取与富集:经酶解预处理的药材以其质量10倍量中性体积浓度为80%乙醇用浸渍法提取24h、滤过，得滤液I和滤渣1，滤液I减压回收乙醇后，上HPD-722大孔树脂柱，然后用纯水清洗再用3倍柱床体积体积浓度为80%乙醇洗脱，得洗脱液I ;
[0029]4、酸性低浓度乙醇提取与富集:滤渣I以6倍量含I %硫酸的体积浓度为50%乙醇用浸渍法提取24h、滤过，得滤液2和滤渣2，滤液2减压回收乙醇后，上HPD-722大孔树脂柱，然后用纯水清洗再用4倍柱床体积体积浓度为60%乙醇洗脱，得洗脱液2 ;
[0030]5、酸性高浓度乙醇提取与富集:滤渣2再以6倍量含1%硫酸的体积浓度为80%乙醇用浸渍法提取24h、滤过，得滤液3，滤液3减压回收乙醇后，上HPD-722大孔树脂柱，然后用纯水清洗再用3倍柱床体积体积浓度为80%乙醇洗脱，得洗脱液3 ;
[0031]6、合并:将洗脱液1、洗脱液2和洗脱液3合并后，减压回收乙醇得浓缩液，浓缩液经干燥、粉碎，得两面针共同抗肿瘤成分混合物，混合物占步骤I的药材质量5.6%，其中氯化两面针碱、白屈菜红碱、6-甲氧基-5，6-二氢白屈菜红碱、乙氧基白屈菜红碱、血根碱、别隐品碱和芝麻素等共同抗肿瘤成分占混合物质量35 %，用MTT法测得混合物对H印G-2肝癌细胞的半数抑制浓度为0.05mg/mL，对Hela宫颈癌细胞的半数抑制浓度为0.07mg/mL。
[0032]所述MTT法为:称取两面针共同抗肿瘤成分混合物适量，乙醇溶解后用0.22 μπι微孔滤膜过滤除菌，取滤液适量，加入RPM1-1640培养基，配制系列不同浓度两面针药液。收集对数生长期的IfepG-2肝癌细胞、Hela宫颈癌细胞，PBS洗涤后，RPM1-1640培养基重悬细胞，调整细胞浓度5 X 1VmL,以每孔100 μ L接种于96孔板，培养24h后加药。实验孔每孔加两面针药液100 μ L，阴性对照孔加100 μ L RPM1-1640培养基，每个浓度设5个复孔，于37.5°C、5% 0)2饱湿条件下培养48h后，小心吸弃孔内培养上清液，每孔以PBS洗I次，再将上清液吸弃。每孔加100 μ L完全RPM1-1640培养液和10 μ L MTT液(5mg/mL)，继续培养4h后小心吸去上清液，加入DMSO 150 μ L/孔，平板震荡器振荡5min，充分溶解蓝紫色颗粒，用酶标仪以570nm、630nm波长测定OD值，计算细胞增殖抑制率。抑制率=(阴性对照组OD值-实验组OD值)/阴性对照组OD值X 100 %。NOSA 2.30软件BLiss法计算半数抑制浓度。
[0033]实施例2
[0034]—种多溶剂法提取和大孔树脂法富集两面针共同抗肿瘤成分的方法，包括以下步骤:
[0035]1、药材粉碎:两面针药材清洗、切片、晒干、粉碎至粒径< 2mm ;
[0036]2、酶解预处理:药材中加入其质量6倍量pH 6.0醋酸-醋酸钠缓冲液，用纤维素酶、果胶酶复合酶于温度多30°C下预处理1.5h ;所述复合酶中纤维素酶、果胶酶与药材的质量比均为1:300 ；
[0037]3、中性高浓度乙醇提取与富集:经酶解预处理的药材以其质量8倍量中性体积浓度为60%乙醇用浸渍法提取2h、滤过，得滤液I和滤渣1，滤液I减压回收乙醇后，上HPD-722大孔树脂柱，然后用纯水清洗再用6倍柱床体积体积浓度为60%乙醇洗脱，得洗脱液I ;
[0038]4、酸性低浓度乙醇提取与富集:滤渣I以5倍量含0.5%硫酸的30%乙醇用浸渍法提取2h、滤过，得滤液2和滤渣2，滤液2减压回收乙醇后，上HPD-722大孔树脂柱，然后用纯水清洗再用4倍柱床体积体积浓度为60%乙醇洗脱，得洗脱液2 ;
[0039]5、酸性高浓度乙醇提取与富集:滤渣2再以5倍量含0.5%硫酸的体积浓度为60%乙醇用浸渍法提取2h、滤过，得滤液3，滤液3减压回收乙醇后，上HPD-722大孔树脂柱，然后用纯水清洗再用4倍柱床体积体积浓度为60%乙醇洗脱，得洗脱液3 ;
[0040]6、合并:将洗脱液1、洗脱液2和洗脱液3合并后，减压回收乙醇得浓缩液，浓缩液经干燥、粉碎，得两面针共同抗肿瘤成分混合物，混合物占步骤I的药材质量5.0%，其中氯化两面针碱、白屈菜红碱、6-甲氧基-5，6-二氢白屈菜红碱、乙氧基白屈菜红碱、血根碱、别隐品碱和芝麻素等共同抗肿瘤成分占混合物质量40 %，用MTT法测得混合物对H印G-2肝癌细胞的半数抑制浓度为0.04mg/mL，对Hela宫颈癌细胞的半数抑制浓度为0.06mg/mL。
[0041 ] 所述MTT法同实施例1。
[0042] 实施例3
[0043]—种多溶剂法提取和大孔树脂法富集两面针共同抗肿瘤成分的方法，包括以下步骤:
[0044]1、药材粉碎:两面针药材清洗、切片、晒干、粉碎至粒径< 2mm ;
[0045]2、酶解预处理:药材中加入其质量3倍量pH 5.0醋酸-醋酸钠缓冲液，用纤维素酶、果胶酶复合酶于温度多30°C下预处理Ih ;所述复合酶中纤维素酶、果胶酶与药材的质量比均为1:250 ；
[0046]3、中性高浓度乙醇提取与富集:经酶解预处理的药材以其质量8倍量中性体积浓度为70%乙醇于95°C水浴回流提取20min、滤过，得滤液I和滤渣1，滤液I减压回收乙醇后，上D-101大孔树脂柱，然后用纯水清洗再用4倍柱床体积体积浓度为80%乙醇洗脱，得洗脱液I ;
[0047]4、酸性低浓度乙醇提取与富集:滤渣I以4倍量含0.5 %盐酸的体积浓度为40 %乙醇于95 °C水浴回流提取20min、滤过，得滤液2和滤渣2，滤液2减压回收乙醇后，上D-1OI大孔树脂柱，然后用纯水清洗再用3倍柱床体积体积浓度为70%乙醇洗脱，得洗脱液2 ;
[0048]5、酸性高浓度乙醇提取与富集:滤渣2再以4倍量含0.5%盐酸的体积浓度为70%乙醇于95°C水浴回流提取20min、滤过，得滤液3，滤液3减压回收乙醇后，上D-101大孔树脂柱，然后用纯水清洗再用3倍柱床体积体积浓度为80%乙醇洗脱，得洗脱液3 ;
[0049]6、合并:将洗脱液1、洗脱液2和洗脱液3合并后，减压回收乙醇得浓缩液，浓缩液经干燥、粉碎，得两面针共同抗肿瘤成分混合物，混合物占步骤I的药材质量9.0%，其中氯化两面针碱、白屈菜红碱、6-甲氧基-5，6-二氢白屈菜红碱、乙氧基白屈菜红碱、血根碱、别隐品碱和芝麻素等共同抗肿瘤成分占混合物质量31 %，用MTT法测得混合物对H印G-2肝癌细胞的半数抑制浓度为0.06mg/mL，对Hela宫颈癌细胞的半数抑制浓度为0.08mg/mL。
[0050]所述MTT法同实施例1。
[0051]实施例4
[0052]—种多溶剂法提取和大孔树脂法富集两面针共同抗肿瘤成分的方法，包括以下步骤:
[0053]1、药材粉碎:两面针药材清洗、切片、晒干、粉碎至粒径< Imm ;
[0054]2、酶解预处理:药材中加入其质量3倍量pH 4.5醋酸-醋酸钠缓冲液，用纤维素酶、果胶酶复合酶于温度多30°C下预处理Ih ;所述复合酶中纤维素酶、果胶酶与药材的质量比均为1:200 ；
[0055]3、中性高浓度乙醇提取与富集:经酶解预处理的药材以其质量12倍量中性体积浓度为70%乙醇于90°C水浴回流提取40min、滤过，得滤液I和滤渣1，滤液I减压回收乙醇后，上D-101大孔树脂柱，然后用纯水清洗再用4倍柱床体积体积浓度为80%乙醇洗脱，得洗脱液I ;
[0056]4、酸性低浓度乙醇提取与富集:滤渣I以6倍量含I %盐酸的体积浓度为40 %乙醇于90°C水浴回流提取40min、滤过，得滤液2和滤渣2，滤液2减压回收乙醇后，上D-101大孔树脂柱，然后用纯水清洗再用4倍柱床体积60%乙醇洗脱，得洗脱液2 ;
[0057]5、酸性高浓度乙醇提取与富集:滤渣2再以6倍量含I %盐酸的体积浓度为70%乙醇于90°C水浴回流提取40min、滤过，得滤液3，滤液3减压回收乙醇后，上D-101大孔树脂柱，然后用纯水清洗再用3倍柱床体积体积浓度为80%乙醇洗脱，得洗脱液3 ;
[0058]6、合并:将洗脱液1、洗脱液2和洗脱液3合并后，减压回收乙醇得浓缩液，浓缩液经干燥、粉碎，得两面针共同抗肿瘤成分混合物，混合物占步骤I的药材质量10%，其中氯化两面针碱、白屈菜红碱、6-甲氧基-5，6-二氢白屈菜红碱、