太白楤木总皂苷提取物的新用图_2

文档序号:9426214阅读:来源:国知局
浓缩成浸膏。总皂巧含量为4.68%。
[0023] 实施例2本发明太白惚木提取物的制备
[0024] 取太白惚木AraliataibaiensisL的根皮,加12倍量的50%乙醇回流提取两次, 每次0. 5-2小时,过滤减压浓缩成浸膏。总皂巧含量为11. 56%。
[0025] 实施例3本发明太白惚木提取物的制备
[0026] 取太白惚木AraliataibaiensisL的根皮,加12倍量的70%乙醇回流提取两次, 每次0. 5-2小时,过滤减压浓缩成浸膏。总皂巧含量为16. 82%。
[0027] 实施例4本发明太白惚木提取物的制备
[0028] 取太白惚木AraliataibaiensisL的根皮,加12倍量的90%乙醇回流提取两次, 每次0. 5-2小时,过滤减压浓缩成浸膏。总皂巧含量为12. 38%。
[0029] 实施例5本发明太白惚木提取物的制备
[0030] 取太白惚木AraliataibaiensisL的根皮,加12倍量的70%乙醇回流提取两次, 每次0. 5-2小时,过滤减压浓缩成浸膏,上HPD100大孔树脂,70%乙醇洗脱,收集洗脱液,干 燥。总皂巧含量为83. 9%。
[0031] 实施例6太白惚木正下醇部位单体化合物制备 阳03引取太白惚木AraliataibaiensisL加12倍量的70%乙醇回流提取两次,每次 0. 5-2小时,过滤减压浓缩成浸膏。上HPD100大孔树脂,2-4BV水洗脱除杂,2-4BV70%乙醇 洗脱,收集洗脱液,减压浓缩干燥。继而采用半制备液相分离得到惚木皂巧A
[0033] 分子式兩品4〇18 分子量927. 1
[0034] 惚木皂巧A
[0035] ?' ?
|;0〇36] 该化合物为白色无定形粉末,Molish反应阳性,libermann-Burchard反应 阳性。酸水解后薄层检查,检出有阿拉伯糖、葡萄糖、葡萄糖醒酸和巧元齐墳果酸。 iH-NMR56. 30 (1H,d,J=8.OHz),5. 39 (1H,S),4. 96 (1H,d,J=8.OHz)示巧元连有S个 糖,分别为P-D-化喃葡萄糖、3寸-巧喃阿拉伯糖和P-D-化喃葡萄糖醒酸的端基质子信 号。"C-NMR5 122.8、144. 1示巧元为齐墳果酸型五环S祗,巧元的"C-NMR化学位移与齐墳 果酸比较,C3向低场位移了约10,C28向高场位移了约4,表明该两位已被巧化,为双糖链 皂巧。在anomeric碳区有5 108.6、107.0、95. 7S个碳信号,示巧元连有3个糖,综合分析 108. 6~62. 2的碳信号,进一步确定运S个糖分别为aA-巧喃阿拉伯糖、P-D-化喃葡萄 糖醒酸和P-D-化喃葡萄糖。葡萄糖的端基碳向高场位移了约2,所W葡萄糖应接在巧元 C28位上。该化合物的"C-NMR的数据与己知化合物惚木皂巧A(AralosideA)对照基本一 致W,因此确定化合物为惚木皂巧A(AralosideA)。(1.姜永涛,徐缓绪,陈英杰,等.迂东 惚木化学成分的研究[J].沈阳药学院学报,1991,8:265-268.)
[0037] T油le1The"C-NMRdataofcompound(S,0 =TMS,inC5D5N)
[0038]
[0039] W下通过具体药效学试验证明本发明的有益效果。
[0040] 试验例1惚木总皂巧提取物、惚木皂巧A对佐剂性关节炎的影响
[0041] 1、实验动物
[0042] SD大鼠,雄性,SPF级,体重200-220g。由西安交通大学动物实验中屯、提供,动物 生产许可证号:SCXK(陕)2007-001。
[00创 2、实验药品
[0044] 惚木总皂巧(由实施例5制备,总皂巧含量为83.9%)、惚木皂巧A,从太白惚木 (AraliataibaiensisL)根皮中提取。
[0045]II型胶原蛋白(Sigma),卡介苗冻干粉(北京天坛生物制品有限公司),IL-1P、 IL-6、TNF-a酶联免疫检测试剂盒(美国R&D公司)
[0046] 3、动物造模与分组给药
[0047] 用0.Immol/L醋酸溶解II型胶原蛋白(2mg/mL,4°C,过夜),再与等量的弗氏完全 佐剂混合,于冰浴中充分乳化制成佐剂,除正常组外,每只大鼠尾根部皮下多点注射胶原蛋 白佐剂0.2mg。造模后14天将SD大鼠随机分随机分为5组,每组10只。各组连续灌胃给 药。正常组灌服生理盐水,每日一次;连续用药4周。 W48] 4、检测指标及结果
[0049] 4. 1、生理状态
[0050]正常对照组大鼠精神状态良好,皮毛有光泽,活动灵活,食量正常,关节活动自如, 无异常状态出现。随着饲养时间的延长,体重逐渐增加。造模大鼠在注射佐剂后2天,尾根 局部出现红肿,逐渐加重,一周后达高峰,尾根部溃扬结挪。且精神萎靡,活动减少,毛发发 黄,干枯,摄食减少。于第10天出现继发性免疫炎症,肢体关节部位变化,最初表现为足趾 小关节部位皮肤红肿,皮溫升高,大便稀,小便清。于14-17天踢关节W及软组织肿胀明显, 体重增加缓慢甚至减轻,耳部出现红斑及结节,尾部出现结节,部分结节破馈,有黄色粘稠 液体渗出,标志造模成功。灌服惚木总皂巧、惚木皂巧A后大鼠精神状态好转,皮毛有光泽, 食量增加,关节红肿减轻,活动灵活,大、小便逐渐正常。耳部、尾部结节减少。 阳051] 4. 2、关节炎指数
[0052]造模14天后每周对各组大鼠进行关节炎指数评分:关节无红肿,0分;小趾关节 稍肿,1分;趾关节和合足趾肿胀,2分;踩关节W下足爪肿胀,3分;踩关节在内全部足爪肿 胀,4分;耳朵一个红斑记0. 5分;尾己一个结节记0. 5分;前肢,一个前肢肿胀记0. 5分。 [005引结果表明:用药1周内,与同期模型组相比关节炎指数评分无明显变化。用药2周 W后,用药组大鼠炎指数评分较模型组降低,与同期模型组相比差异显著(P< 0. 05)
[0054]表1惚木总皂巧对佐剂性关节炎大鼠关节炎指数评分的影响±S,n= 10) 阳化引
[0056]注:与模型组相比*P<0. 05
[0057] 4. 3、关节肿胀度
[0058]每周检测大鼠后肢足肿胀度。
[0059]肿胀度=当次后肢足容积-首次后肢足容积 W60] 结果表明:用药1周内,与同期模型组相比足肿胀无明显变化,甚至有个别加重的 趋势。用药2周W后,用药组大鼠关节肿胀率较模型组降低,与同期模型组相比差异显著(P <0.0巧。
[006U表2惚木总皂巧对佐剂性关节炎大鼠足肿胀度的影响(;±S,n=10)
[0062]
[0063]注:与模型组相比*P<0. 05, **p<0. 01
[0064] 4. 4、血清炎症因子水平 阳0化]用药4周后,各组大鼠均股动脉取血后处死,分离血清,用双抗体夹屯、酶联免疫吸 附法巧LIsA)检测IL-1P、IL-6、TNFa含量。严格按试剂盒上方法进行检测。
[0066] 表3惚木总皂巧对骨佐剂性关节炎大鼠血清IL-1P、IL-6、TNF-a含量的影响 (X±S:,n= 10)
[0067]
[0068] 注:与模型组相比*P<0. 05,叩<0. 01
[0069] 4. 5、滑膜病理变化
[0070] 取双后肢关节浸于10%甲酸溶液48小时,剥离滑膜及软骨组织。常规切片、肥染 色,光学显微镜下观察滑膜组织的病理变化情况。正常组大鼠滑膜细胞结构完整,排列整 齐,无炎症细胞浸润及血管新生;模型组关节滑膜明显增厚,滑膜内大量淋己细胞、中性粒 细胞浸润,有不同程度的血管新生。用药组滑膜组织结构较模型组显著改善,滑膜细胞轻 度增生,滑膜下层及血管周围未见大量淋己细胞浸润。用药组血管新生改善明显。
[0071] 试验例2惚木总皂巧、惚木皂巧A对骨关节炎的影响 阳0巧 1、实验动物
[0073] 健康5-6月龄新西兰兔,雄性,体重2. 2-2.化g。由西安交通大学动物实验中屯、提 供,动物生产许可证号:SCXK(陕)2007-001。
[0074] 2、实验药品
[0075]戊己比妥钢(上海新亚药业有限公司),木瓜蛋白酶(Sigma),青霉素(华北制药)
[0076] 3、造模与分组给药
[0077] 通过兔膝关节腔内注入木瓜蛋白酶,造成骨关节病变模型。将兔用戊己比妥钢 (30m址/g,静脉注射)麻醉后对左后腿膝关节周围剌毛,然后用10%异丙醇消毒皮肤,轻弯 曲膝关节,经关节两侧进针,将4%木
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