瓜蛋白酶生理盐水溶液0. 3ml通过骸上初带注入兔左 膝关节腔，隔3天1次，连续注射3次。术后持续1周肌注青霉素20万单位/天，W防感 染。所有新西兰兔均采用常规饲养，在末次注入木瓜蛋白酶结束后2周随机处死模型组= 只新西兰兔，取左膝关节显示造模成功后开始给药治疗（由实施例5制备，总皂巧含量为 83. 9% )，连续用药4周后，各兔耳缘静脉取血2ml分离血清，一20°C保存备测，将各组新西 兰兔全部处死，用0. 9%氯化钢注射液0. 5ml冲洗，获得动物患膝的关节冲洗液，于一20°C 低溫冰箱中保存待测。取正常对照组膝关节及其余各组造模左侧膝关节待病理观察。 阳07引 4、检测指标及结果
[0079] 4. 1、一般情况
[0080] 实验期间见正常组新西兰兔精神状态良好，毛色无异常变化，膝关节活动自如。造 模后的各组新西兰兔均有不同程度跋行，自发活动明显减少，膝关节活动明显受限，对外界 的刺激的敏感性降低。
[0081] 4. 2、病理观察
[0082] 肉眼观察：正常组兔膝关节软骨外观呈蓝白色，色泽明亮，无裂纹、软化或缺损，触 之较硬，关节液量较少，质地清澈透明。造模2周后，模型组膝关节可见滑膜肿胀增生，关节 液量增多且呈泡沫混浊状，关节软骨失去光泽，发黄、色泽暗淡、关节表面欠规则。造模6周 后，模型组膝关节的损害情况较2周有不同程度加重，表现为滑膜充血肿胀，关节边缘与滑 膜有少许纤维性粘连，软骨面明显凹凸不平，甚至软骨歇裂缺损，用药各组比模型组软骨破 坏情况明显好转。
[0083] 光镜观察：常规切片，肥染色。光镜观察，正常组关节软骨表面光滑，由浅入深可 分为表浅层、移行层、放射层和巧化层，软骨细胞整齐排列呈柱状，未见软骨细胞簇，潮标线 完整。
[0084] 造模2周模型组表现为软骨表面不光滑，深层可出现软骨细胞簇积。造模6周后模 型组软骨破坏情况相比2周组不同程度加重，表现为软骨中、深层有大量簇聚软骨细胞，软 骨面凹凸不平，出现裂缝，软骨剥脱，形成软骨缺损区，可见其表浅层、移行层软骨部分甚至 全层缺损。与模型组组相比，各治疗组软骨破坏情况较轻，表现为软骨细胞排列相对整齐， 软骨表面裂隙较浅，软骨缺损较少或轻。 阳0化]4. 3、血清炎症因子水平
[0086] 用双抗体夹屯、酶联免疫吸附法巧LIsA)检测IL-1P、IL-6、TNFa含量。严格按试 剂盒上方法进行检测。
[0087] 表4惚木总皂巧对骨关节炎兔血清比-16、比-6、TNF-a含量的影响（；+留>n =10)
[0088]
[0089]注：与模型组相比*P< 0. 05,**P< 0. 01 W90] 表5惚木总皂巧对骨关节炎关节冲洗液IL-IP、IL-6、TNF-a含量的影响 (* ±容，n = 10)
[0091]
[0092] 注：与模型组相比*P< 0. 05,叩< 0. 01
[0093] 试验例3惚木总皂巧、惚木皂巧A对痛风性关节炎的影响
[0094] 1、实验动物 阳0巧]SD大鼠，雄性，SPF级，体重180-220g。由西安交通大学动物实验中屯、提供，动物 生产许可证号：SCXK(陕）2007-001。
[0096] 2、实验药品
[0097] 尿酸钢（Sigma)，黄嚷岭氧化酶酶联免疫吸附测定试剂盒（美国R&D公司）
[0098] 3、造模与分组给药
[0099] 取250mg尿酸钢结晶加0. 9%氯化钢注射溶液45ml，再加5ml吐溫80,加热揽拌， 配制成50尿酸钢注射悬液。除正常组外，其余各组大鼠均用戊己比妥钢麻醉，仰邸位固定， 大鼠右踩关节外侧后方穿刺，向关节腔内注入0.2ml尿酸钢混悬液，诱导痛风性关节炎模 型，正常组关节腔内注射等体积生理盐水。于造模当天开始给药（由实施例5制备，总皂巧 含量为83. 9% )，连续给药6天。第7天停止给药，早晨内邮取血，离屯、取血清，检测血清中 肌酢、尿酸含量。用0. 9%氯化钢注射液0. 5ml冲洗，获得动物患膝的关节冲洗液，测定炎症 因子含量。
[0100] 4、检测指标及结果 阳101] 4. 1、血清中肌酢、尿酸含量
[0102] 取血清，检测血清中肌酢、尿酸含量。
[0103] 表6惚木总皂巧对痛风性关节炎大鼠血清中肌酢、尿酸含量和黄嚷岭氧化酶活性 的影响（F+邑n=10) 阳 104]
阳10引 注：与模型组相比*P< 0. 05,叩< 0. 01 阳106] 4. 2、冲洗液中炎症因子含量
[0107] 取冲洗液，检测冲洗液IL-1P、IL-6、PGE2含量。
[0108] 表7惚木总皂巧对痛风性关节炎大鼠关节冲洗液IL-1P、IL-6、PGE2含量的影响 (T±sn= 10) 阳 109]
[0110] 注：与模型组相比< 0. 05 阳111] 小结：惚木总皂巧、惚木皂巧A对多种关节炎具有良好的治疗作用。可用于类风湿 性关节炎、骨关节炎、痛风性关节炎的治疗。
[0112] 类风湿关节炎是一种慢性、对称性多关节炎为主要表现的自身免疫性疾病，病变 呈持续、反复发作的过程，其主要病理变化为关节滑膜的慢性炎症，炎细胞浸润，滑膜血管 新生和血管繫的形成，血管繫可向邻近软骨及骨组织侵蚀，导致骨质破坏，关节崎形和功能 丧失。由于其病因及发病机制尚未完全清楚，至今仍无良好的治疗方法。佐剂性关节炎的 关节组织病理及免疫学指标与人类风湿关节炎有许多相似之处，为目前研究类风湿关节炎 及蹄选评价抗炎免疫药物的较理想动物模型型之一。本研究通过大鼠佐剂性关节炎模型， 证明惚木总皂巧、惚木皂巧A可通过抑制炎症因子表达，降低佐剂性大鼠足肿胀率，调整细 胞因子的网络失衡，干预免疫炎症。有效抗炎，缓解佐剂性关节炎大鼠症状。对佐剂性关节 炎大鼠关节软骨破坏起到抑制作用，从而改善了佐剂性关节炎大鼠病情。结果提示：惚木总 皂巧、惚木皂巧A具有减缓类风湿关节炎免疫介导炎症反应，改善滑膜血管新生和软骨破 坏的作用，为其治疗类风湿关节炎提供了实验依据。
[0113] 实验结果提示：惚木总皂巧、惚木皂巧A可W对机体细胞因子进行调节，从而促进 软骨基质合成，抑制软骨基质分解，直接或间接改善了软骨基质代谢，促进损伤关节软骨的 修复，对骨关节炎发挥治疗作用。
[0114] 实验结果提示：惚木总皂巧、惚木皂巧A可W降低高尿酸血症小鼠血清中肌酢、尿 酸水平，防治高尿酸血症发生。同时调节机体细胞因子，有效抗炎，缓解痛风性关节炎症状。 对痛风性关节炎具有防治作用。
[0115] 综上所述，本药物或保健食品可用于多种原因引起的关节炎，具有抗炎、调整细胞 因子的网络失衡、改善软骨基质代谢，促进损伤关节软骨的修复等多种作用，适用于佐剂性 关节炎、痛风性关节炎、骨关节炎等疾病的预防和治疗。
【主权项】
1. 太白橡木总皂苷提取物在制备治疗关节炎的药物中的用途。2. 根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的药物是治疗佐剂性关节炎、骨关节 炎、痛风性关节炎的药物。3. 根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于：所述的提取物中总皂苷的含量为 4. 68%-83, 9%〇4. 根据权利要求1-3任意一项所述的用途，其特征在于：所述的提取物中含有橡木皂 苷A5. 根据权利要求1-3任意一项所述的用途，其特征在于：所述的大白橡木来源于五加 科橡木属植物太白橡木Aralia taibaiensis L的根皮。6. 根据权利要求1-3任意一项所述的用途，其特征在于：所述的药物是由太白橡木总 皂苷提取物为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。7. 根据权利要求6所述的用途，其特征在于：所述的制剂是口服制剂。
【专利摘要】本发明提供了太白楤木总皂苷提取物在制备治疗关节炎的药物中的用途。本发明还提供了楤木皂苷A的新用途。本发明药物用于治疗佐剂性关节炎、骨关节炎、痛风性关节炎，药效明确。本发明药物属于纯天然制剂，不经有机溶剂处理，安全可靠；毒性小，长期使用无不良反应；对各种原因引起的关节炎均有预防和治疗作用。
【IPC分类】A61P19/02, A61K36/25, A61K31/704, A61P19/08, A61P19/06
【公开号】CN105147749
【申请号】CN201510471921
【发明人】郭东艳, 唐志书, 孙静, 汪鋆植, 范妤, 崔春利
【申请人】陕西中医药大学
【公开日】2015年12月16日
【申请日】2013年10月23日
【公告号】CN103520234A, CN103520234B