的坏死性肠炎的在饲料中给予 的制品与维吉霉素的比较功效 表12:概述
制品索引是：
研究持续时间是28天并且目标动物是肉鸡。
[0151] 表13 :处理
材料和方法： 实验口粮：配制与在美国普遍使用的饲料混合的非含药的商用类型的鸡起始口粮。从 小鸡到达的那天直至本研究的第28天随意喂食此口粮（呈糊状形式）。饮食制剂被包含于 来源数据中。实验处理饲料由此基础起始饲料制备。记载用于制备处理批次的所有基础饲 料和测试品的量。将处理饲料混合W确保各个的测试品的均匀分布。将饲料在同种处理的 笼子之间分配。
[0152] 收集S个样品：从处理饮食批次的开始、中间和最后中各一个并混合W形成复合 的样品。每次处理从复合品中取出一个复合样品。
[0153] 动物：从Co化-Vantress解卵所，Cleveland,GA购买一天龄的肉鸡雄性小鸡。品 种是Co化XCobb。记录种鸡群信息。在解卵所中，将鸟辨别性别并接受常规疫苗接种。只 有看起来健康的小鸡被使用于该研究。记录没有用于分配的所有鸟的数量和处置。
[0154] 安置：一到达，就将小鸡喂养在化tersime层架式鸡笼中。在安置处喂食鸟处理饲 料。地板空间/动物是0. 63sq.ft/鸟。饲槽空间/鸟是8只鸟/43cmX6.8cm饲槽。 热静态控制煤气炉/空调维持均溫。提供均匀照明。记录笼的简图。
[0155] 鸟的分配和笼随机化：将笼通过在具有等同于处理的块大小（7只笼/块）的层架 鸡笼中定位而分块。该研究在放置鸟时（解化日）值0T0)开始，在所述时间它们被分配 至实验笼。仅选择健康的鸟。在DOT0时，通过笼记录组体重。在该研究的过程中，没有鸟 被替换。
[0156] 疾病诱导：在整个试验中饲料和水是随意可得的。在DOT14时，用含大约5, 000 个巨型艾美球虫的卵囊/鸟的球虫的接种物经口接种所有鸟。球虫的卵囊接种方法描述于 SPRSOP中。在DOT19时开始，给予除了处理1之外的所有鸟产气芙膜梭菌108C化/ml的 肉汤培养物。给予鸟新鲜肉汤培养物每天一次持续3天（在DOT19、20和21时）。
[0157]DOT0、14、21和28的重量：在DOT0、14、21和28时通过笼称重所有鸟。在DOT0 称重饲料并且在DOT14、21和28时称重剩下的饲料。在DOT28时终止试验。
[0158] 坏死性肠炎肠损伤评分：在DOT21时，从各笼选出S只鸟，处死，称重并检查坏死 性肠炎损伤的存在程度。评分基于0-3分，0为正常和3为最严重。
[0159] 管理：彻底检查该装置W确保所有笼具有水并且饲料在每个笼中是可得的。将建 筑物的溫度的范围维持在适合于该龄的鸟的溫度下。均匀的，连续的光照通过垂直沿着墙 悬挂的巧光灯提供。随意给予饲料和水。
[0160] 按照标准操作方法（SOP)，每天检查笼两次。包括的观察是饲料和水的可用性、溫 度控制和任何异常情况。密切监视鸟的任何不正常的反应。
[0161] 当将死亡的鸟从笼中取出时，记录笼号、日期、鸟重、性别、和死亡的可能原因。
[0162] 数据分析：计算笼子重量增加、饲料消耗、饲料转化率、伤损得分和死亡率的平均 值。
[0163] 图8A描绘了第0天-第21天的饲料转化率。大体上，从第0天到第21天，喂食不 同处理的鸟的饲料转化率是处于NE(攻击W诱导坏死性肠炎但不喂食制品的鸟）或VM(攻 击W诱导坏死性肠炎并喂食维吉霉素的鸟）的处理中的那些之间的中间值。然而，喂食制 品D8X的鸟并不遵循运样的模式，其具有统计学上和数字上与在此时间段内不用制品的NE 处理的那些同样差的饲料转化率。
[0164] 图8B描绘了第14天-第21天的饲料转化率。在第14天-第21天期间，喂食处 理DX的攻击的鸟的饲料转化率与处于NE处理（其被攻击但不喂食制品）相比显著较佳并 且统计上等同于加入VM的饮食。
[016引图8C描绘了第0天-第28天的饲料转化率。除了D8X之外的所有制品与不用制 品的肥相比显著较优。制品D和DX是测试的制品中最优的，类似于处于VM处理中的鸟， 但与不给予肥攻击的鸟没有统计差异。
[0166] 图9A描绘了第0天-第28天的重量增加。与没有任何制品的肥对照相比，VM改 善增加。当与VM相比时，D8统计上等同和数字上较优。所有其它制品是不用制品的肥和 VE之间的中间值。
[0167] 图9B描绘了第14天-第28天的重量增加。增加在第14天-第28天遵循如它 们在第0天-第28天所遵循的相似模式，除了D8数字上等同于VM。
[016引图10描绘了伤损得分。喂食D8和D8X的鸟的伤损得分与喂食VM的鸟的相比较 低并且与没有用肥攻击的那些鸟相比可能没有统计上的差异。
[0169] 图11描绘了肥死亡率。除了D之外的所有制品与不用制品的肥攻击的鸟相比 降低死亡率并且统计上等同于喂食VM的那些。
[0170] 实施例7 :制品对坏死性肠炎在肉鸡鸟中的影响的影响 本实施例的目的在于在坏死性肠炎（肥）疾病模型中关于在用巨型艾美球虫和产气 芙膜梭菌共感染的肉鸡中的坏死性肠炎（肥）的临床征兆、免疫病理学和细胞因子响应而 评估先前发现的制品的不同制剂和剂量。肥疾病模型被用于此试验（ParkSS，Lillehoj HS等人Immunop曰tholo邑yandcytokineresponsesinbroilerchickensc〇-infected withEimeriamaximaandClostridiumperfringenswiththeuseofananimal modelofnecroticenteritis(在使用坏死性肠炎的动物模型的情况下用巨型艾美球虫 和产气芙膜梭菌共感染的肉鸡中的免疫病理学和细胞因子响应）.AvianDiseases2008; 52:14 - 22;JangSI,LillehojHS等人VaccinationwithClostridiumper打ingens recombinantproteinsincombinationwithMontanide?ISA71VGadjuvantincrease protectionaagainstexperimentalnecroticenteritisincommercialbroiler chicken(用产气芙膜梭菌的重组蛋白与Montanide?ISA71VG佐剂组合的疫苗接种在商 用肉鸡中增加抗实验性坏死性肠炎的保护）.Vaccine2012; 30:5401-5406). 材料和方法制品是呈先前发现有效的制剂的粘±、酵母制品和谷氨酸一钢的渗合 物值），在当前实验中它按四种不同包含比例化35、0. 25、0. 15和0. 05%)被包含，也包含 的是W下制品，其含与先前制品相同的成分但具有在制品（命名为DS、DSF、D8和D8F5) 的制剂中的成分的四种不同制剂。抗生素维吉霉素（VM)也被包括作为处理。鸡是在 Longeneckers解卵所（Eliz油ethtown,PA)解化、通过邮政卡车运输并在起始解卵器装置 中安置的一天龄的肉鸡鸟（Ross/Ross)。将鸟保留在无艾美球虫属的装置中的解卵器圈里 并转移到在隔离的位置中的大的悬挂笼(其中将它们感染和供养直至用于活体攻击感染研 究的实验期结束）里。关于运输、测量体重、感染和收集血液和脾脏的所有方法遵照确立的 用于动物实验的指南。
[0171] 在1-18天龄期间，喂食所有鸟非含药的商用17%粗制蛋白的基础口粮。将饲料与 W不同包含比例（饮食的0. 35、0. 25、0. 15和0. 05%)的D或W饮食的0. 25%包含的制品的 不同制剂值S、DSF、08、D8巧混合。抗生素VM(22ppm)也被包括作为处理。在18天时， 将饲料用商用非含药的饲料(其含有具有如在17%CP口粮中加入的处理制品的24%粗制蛋 白起始饲料）替代。
[0172] 按照确立的方法将艾美球虫种类的虫株维持和繁殖。将巨型艾美球虫（41A)通过 漂浮在5%次氯酸钢上而清洁，用PBS洗涂3次，并且使用血细胞计数器通过台吩兰计算成 活力。卵囊数量仅基于形成抱子的卵囊。在第14天时，使用接种针用10, 000个巨型艾美 球虫食道接种鸡。
[0173] 在艾美球虫属感染后四天，使用接种针各自用lXl〇9CFU产气芙膜梭菌食道接种 肥组的鸟。
[0174] 在刚要用巨型艾美球虫（EM)攻击之前、在用产气芙膜梭菌攻击之后第0天和第2 天称重鸟W计算重量增加。
[01巧]为确定伤损得分，将鸟巧只鸟/组）在产气芙膜梭菌（CP)感染后2天处死。大 约20cm肠段(其在憩室前延伸10cm和在在憩室后延伸10cm)获得并纵向切开。伤损得 分由3个独立的观察者按伤损的严重性的升序从0到4评估。
[0176] 在CP感染后0、2、7和14天的各天中，将全部12只鸟（5/组）取样血清用于抗体 滴度（单独地收集）。对于血清，从单独的鸟获得血液样品（3ml/鸟），允许在4°C凝块过 夜，并收集血清。
[0177] 使用确立的化ISA对血清样品测试抗梭菌属的抗体。简而言之，将微量滴定板用 200ng/孔的重组梭菌属抗原包被过夜，用PBS-0. 05%Tween洗涂并用PBS-1%BSA封闭。 将血清稀释物加入，在连续的溫和摇动下解育，洗涂，结合的Ab用过氧化物酶缀合的兔抗 鸡IgG(sigma)和过氧化物酶特异性的底物检测。光密度（0D)使用微板读数器度io-Rad， Richmond,CA)在 450nm下确定。
[017引使用确立的化ISA对血清样品测试针对a-毒素或化巧的抗原。简单而言之，将 微量滴定板用0. 5嗦/孔a-毒素或化巧毒素的mAB包被过夜，用PBS-0. 05%Tween洗 涂，并用PBS-1%BSA封闭。将鸡血清稀释物加入，在连续的溫和摇动下解育，洗涂，结合的 Ab用过氧化物酶缀合的兔抗a-毒素或化巧毒素和过氧化物酶特异性底物检测。光密度 (0D)使用微板读数器度io-Rad,Richmond,CA)在450nm下确定。
[0179] 对于统计分析，所有值被表示为平均值±SEM。通过邓肯多程检验法遵循AN0VA 使用用于Windows的SPSS15. 0(SPSSInc.，Chicago,IL)在组之间比较体重增加和伤 损得分的平均值。平均值之间的差异在P< 0.05时被认为显著。
[0180] 表14.实验设计
*将鸡在解化后第15天时用1. 0X104个卵囊/鸟的巨型艾美球虫（EM)和在解化后 第19天时用1. 0X1〇9CFU/鸟的产气芙膜梭菌（CP)经口感染。
[0181] 使用220只肉鸡鸟（20/组）并将其安置在Petersime解化器圈中。肥育鸡装置 是80悬挂笼装置，其中所述鸟在第18天时转移。
[0182] 鸡在第0天到达并在同一天移动至化tersime装置中。在第18天时将所述鸡移 动到大笼。将鸟在第14天时用10, 000个巨型艾美球虫的形成抱子的卵囊感染并在第18 天时用1X109CFU的产气芙膜梭菌感染。在第14天、第18天、第20天、第25天、第32天 时收集血液。在第20天时对伤损评分。在第14天、第20天和第25天时确定体重（参见， 例如图1)。
[0183] 如在图12A-B中所示，用含0. 25%的制品D或0. 25%的D8的饮食喂食的鸡与给予 未补充的饮食的感染的鸟（肥对照组）相比从艾美球虫属攻击的那天至CP感染后2天分 别表现出25. 4%或29. 3%的增加的体重增加。
[0184] 如在图13A-B中所示，喂食0. 25%的D8或D8F补充的饮食的鸡与给予未补充的饮 食的感染的鸟（肥对照组）相比分别表现出20. 18%和18. 29%在体重增加中的增加。
[0185] 如在图14中所示，用D(W〇. 25、0. 15或0. 05%包含水平)或DSF、D8和D8F组喂 食的鸟与给予未补充的饮食的感染的鸟相比表现出显著减少的伤损得分。
[0186] 如在图15A中所示，抗a-毒素的血清抗体水平在喂食D(W0. 05%或0. 25%包含 比例）或DSF、D8或D8F(W0. 25%包含比例）或VM组的鸟中与给予未补充的饮食的感染的 鸟（肥对照组）相比在产气芙膜梭菌感染后2天是显著较高的。
[0187] 如在图15B中所示，在产气芙膜梭菌感染后第7天时，在喂食D制剂0. 25或 0. 05%包含)或D8或D8F(W0. 25%包含)或VM补充的饮食的鸟中与肥对照组相比在针对 a-毒素的抗体方面光密度表现了值得注意的增加。
[0188] 如在图16A中所示，抗化巧毒素抗原的血清抗体水平在产气芙膜梭菌感染后2天 时在喂食制品D(W0. 05或0. 25%包含比例）或D8或D8F(W0. 25%包含）或VM的鸟中 与肥对照组相比是较高的，因为所示光密度增加。
[0189] 如在图16B中所示，喂食D制剂（W0. 05和0. 25%包含比例）或DS、DSF、D8和VM 的鸟在产气芙膜梭菌感染后7天时都表现增加的抗化巧毒素抗原的血清抗体响应。
[0190] 如在图17A中所示，血清a-毒素水平在产气芙膜梭菌感染后第2天时在用D (0.25%)喂食的感染的鸟中与未补充的肥感染的对照相比显著较低。血清a毒素的水平 指示梭菌属感染的严重性。此结果可指示由制品通过直接或间接的作用对产气芙膜梭菌a 毒素水平的降低。
[0191] 如在图17B中所示，血清化tB-毒素水平在产气芙膜梭菌感染后第2天时在喂食 D(0.25%)和D8 (0.25%)的肥感染的鸟中与未补充的和感染的肥对照相比是实质上较低 的（尽管并非统计学上显著的）。化巧毒素的