包含缓冲的氨基烷基氨基葡糖苷磷酸酯衍生物的组合物及其用于增强免疫应答的用图
【专利说明】包含缓冲的氨基烷基氨基葡糖音磯酸醋衍生物的组合物及 其用于增强免疫应答的用途 发明领域
[0001] 本发明设及包含氨基烷基氨基葡糖巧憐酸醋化合物（AGP)的组合物，W及组合物 在疫苗佐剂中或作为疫苗佐剂或者在预防或治疗性处理中的用途。还公开了使用组合物的 方法。
[0002] 关于联邦赞助研究的声明 本发明的方面依据NIH合约#HHSN272200900008C在美国政府支持下进行，美国政府 在本发明中可W拥有一定权利。
[000引发明背景 氨基烷基氨基葡糖巧憐酸醋（AGP)是Toll样受体4 (化R4)的合成配体。AGP及其经 由IliM的免疫调节效应公开于专利公开例如WO2006/016997、WO2001/090129和/或美 国专利号6, 113, 918中，并且已在文献中得到报道。另外的AGP衍生物公开于美国专利号 7, 129, 219、美国专利号6, 525, 028和美国专利号6, 911，434中。某些AGP充当化R4的激 动剂，而其他的识别为化R4括抗剂。AGP已知可用作疫苗佐剂和免疫调节剂，用于在免疫 接种的动物中刺激细胞因子产生、活化巨隧细胞、促进先天性免疫应答和增强抗体产生。先 前，作为佐剂和/或免疫调节剂的AGP原则上已W水包油乳剂的形式利用，通常使用灭菌的 水和甘油(大约2%)。存在鉴定缓冲液的进行中的需要，所述缓冲液可W与运些AGP-起用 于药物和/或佐剂组合物中。
[0004] 发巧概沐 相应地，本发明提供了包含一种或多种AGP和缓冲液的药物组合物。在本文中公开的 本发明的药物组合物可W导致下述利益中的一种或多种：相对于其他AGP水性制剂，在缓 冲溶液中AGP的最大或增加或改善的稳定性和/或在缓冲溶液中AGP的最大或增加或改善 的效力。
[0005] 还提供的是在约抑7、或生理学正常的抑或药学可接受的抑下，具有改善的稳定 性和/或效力的缓冲AGP组合物。
[0006] 还提供的是用本发明的组合物治疗受试者(或患者例如人或其他哺乳动物）的方 法。
[0007] 依照本发明，提供了包含（i)氨基烷基氨基葡糖巧憐酸醋或其药学可接受的盐，和 (ii)缓冲液的组合物。将缓冲溶液和AGP化合物组合，W形成具有作为免疫调节剂的实用 性的组合物。
[0008] 进一步提供了用于调节受试者(优选人）的免疫应答的方法，其包括给所述受试者 施用有效量的药物组合物。
[0009] 还提供的是用于改善或基本上预防受试者(优选人）中的传染病、自身免疫性疾 病、神经系统疾病或者过敏性或炎性状况的方法，其包括给所述受试者施用有效量的药物 组合物。
[0010] 附图简述 图I显示了夹自连施例的CRX-601和CRX-601降解物的结构。
[0011] Ml显示了在中性或接近生理学的抑下，用CRX-601配制的缓冲液的加速降解速 率。
[001引 Ml显示了对于每种缓冲液，在接近最佳抑下，用CRX-601配制的S种缓冲液的 加速降解速率。
[0013] 图4思示了夹自连施例的CRX-527和CRX-527降解物的结构。
[0014] 图5显示了分别值用在CRX-527和CRX-601中的憐酸盐和肥阳S缓冲液的加速降 解速率。
[0015] 图6显示了在S种缓冲液中配制的CRX-601的长期稳定性。
[0016]图7到9显示了对于每种缓冲液，在接近最佳地下，用CRX-601配制的S种缓冲 液（肥阳S、乙酸盐、巧樣酸盐）中的相对效力。
[0017] 发明详述 氨基院基氨基葡糖巧磯酸酷化合物。AGP是To"样受体4 (IlJM)调节剂。To"样 受体4识别细菌LPS(脂多糖)，并且当活化时，起始先天性免疫应答。AGP是细菌LPS的脂 质A蛋白的单糖模拟物，并且已用在化合物的"酷基链"上的酸和醋键进行开发。用于制 备运些化合物的过程是已知的，且例如公开于WO2006/016997、美国专利号7, 288, 640和 6, 113, 918和WO01/90129中，所述专利在此整体引入作为参考。其他AGP和相关过程公 开于美国专利号7, 129, 219、美国专利号6, 525, 028和美国专利号6, 911，434中。在本发 明的组合物中采用的在酷基链上具有酸键的AGP是已知的，且公开于在此整体引入作为参 考的WO2006/016997中。特别有利的是在WO2006/016997中的段落[0019]直到[0021] 处，根据式（III)阐述且描述的氨基烷基氨基葡糖巧憐酸醋化合物。
[0018] 本发明中采用的氨基烷基氨基葡糖巧憐酸醋化合物具有如下在式1中所示的结 构：
其中 m是0至6n是0至4 ; X是0或S，优选0; Y是O或NH; Z是O或H; 每个Ri、Rz、Rs独立地选自C1 2。酷基和C1-2。烷基； Ra是H或Me; Rs独立地选自-H、-〇H、-(C1-C4)烷氧基、-P〇3RsR9、-〇P〇3R8R9、-S〇3R8、-〇S〇3Rs、-NRsR9、-S咕、-CN、-N02、-C册、-(??和-CONR斯，其中Rs和R9各自独立地选自H和（C1-C4)烷基；和 每个Re和R7独立地是H或PO化。
[0019] 在式1中，正脂肪酷残基（即，仲酷氧基或烷氧基残基，例如Ri〇、R2〇和R3O)与之附 着的3'立体中屯、的构型是R或S，优选R巧日通过C址n-Ingold-Prelog顺序规则指定的）。 Ra和之附着的糖巧配基立体中屯、的构型可W是R或S。所有立体异构体，对映体和非 对映体两者，及其混合物视为落入本发明的范围内。
[0020] 杂原子X和糖巧配基氮原子之间的碳原子数目由变量"n"确定，其可W是0至4 的整数，优选0至2的整数。
[0021] 正脂肪酸Ri、R2和Rs的链长可W为约6至约16个碳，优选约9至约14个碳。链长 可W相同或不同。一些优选实施方案包括其中RUR2和R3是6或10或12或14的链长。
[0022] 式1涵盖L/D-丝氨酷、-苏氨酷、-半脫氨酷酸和醋脂质AGP，激动剂和括抗剂两 者及其同系物（n=l-4)，W及各种簇酸生物电子等排体(即，Rs是能够形成盐的酸性基团；憐 酸醋可W在氨基葡萄糖单位的4或6位上，但优选在4位中）。
[002引在采用式1的AGP化合物的本发明的一个优选实施方案中，n是0,Rs是CO2扎Re是PO3H2，并且R,是H。运种优选AGP化合物如下作为式Ia中的结构阐述：
其中X是0或S;Y是0或NH;Z是0或H;每个Ri、Rz、Rs独立地选自C1 2。酷基和C1-2。 烷基；并且Ra是H或甲基。
[0024] 在式Ia中，正脂肪酷残基（即，仲酷氧基或烷氧基残基，例如Ri〇、R2〇和R3O)与之附 着的3'立体中屯、的构型是R或S，优选R巧日通过C址n-Ingold-Prelog顺序规则指定的）。 Ra和CO2H与之附着的糖巧配基立体中屯、的构型可W是R或S。所有立体异构体，对映体和 非对映体两者，及其混合物视为落入本发明的范围内。
[0025] 式Ia涵盖L/D-丝氨酷、-苏氨酷、-半脫氨酷酸或醋脂质AGP，激动剂和括抗剂两 者。
[0026] 在式I和式la两者中，Z是通过双键附着的0,或各自通过单键附着的两个氨原 子。目P，当Z=Y=O时，化合物是醋连接的；当Z=0和Y=NH时，化合物是酷胺连接的；并且当 Z=H/H和Y=O时，化合物是酸连接的。
[0027] 尤其优选的式1的化合物被称为CRX-601和CRX-527。它们的结构如下阐述：
另外，另一个优选实施方案采用具有所示结构的CRX547。
[0028] 另外其他的实施方案包括AGP例如CRX602或CRX526,对具有更短的仲酷基或烧 基链的AGP提供增加的稳定性。
[0029]缓冲液。在本发明的一个实施方案中，包含AGP的组合物使用两性离子缓冲液进 行缓冲。适当地，两性离子缓冲液是氨基链烧横酸或合适的盐。氨基链烧横酸缓冲液的例 子包括但不限于肥阳S、肥PPS/EPPS、M0PS、M0BS和PI阳S。优选地，缓冲液是药学可接受的 缓冲液，适合于在人中使用，例如用于商业注射产品中。最优选地，缓冲液是肥PES。
[0030] 在本发明的合适实施方案中，AGP使用选自下述的缓冲液进行缓冲： i) 具有约7的抑的肥阳S， ii)具有约5的抑的巧樣酸盐(例如巧樣酸钢)，和 iii)具有约5的抑的乙酸盐(例如乙酸锭)。
[0031] 在本发明的一个优选实施方案中，AGPCRX-601、CRX-527和CRX-547使用具有约 7的pH的肥PES进行缓冲。缓冲液可W与适当量的盐水或其他赋形剂一起使用，W实现所 需等渗性。在一个优选实施方案中，使用0. 9%盐水。
[0032]肥阳S:CAS登记号：7365-45-9 (：化抓〇48 1-赃嗦乙横酸，4- (2-径乙基）- 肥阳S是设计为在约6至约8(例如6. 15 -8. 35)的生理学抑范围内缓冲的两性离子缓 冲液，并且更具体而言更有用的约6. 8至约8. 2的范围，并且如在本发明中，约7至约8或7 至8,且优选约7至小于8。肥阳S通常为白色结晶粉末且具