2, 2. 25, 3. 68 ，4. 05, 5. 07,及 5. 14 !13C-NMR(CDCl3)S(ppm) = 12. 31，16. 1，16. 12, 17. 67, 25. 67, 26. 44, 2 6. 74, 27. 00, 39. 71, 39. 81, 4. 027, 43. 34, 59. 22, 60. 59, 120. 97, 123. 84, 124. 30, 131. 32, 13 5. 35, 135. 92, 138. 05, 160. 45,及 197. 12。
[0082] 收集在21. 2至21. 4分钟处的分流物，并浓缩成化合物5,淡黄色液体的产物。化 合物5经分析后为4-羟基-5-(11-羟基-3, 7, 11-三甲基-2, 6-十二碳二烯）-2, 3-二 甲氧基-6-甲基-2-环己烯酮，具有分子量408 (分子式：C24H4qO5)。1H-NMR(⑶Cl3) S(ppm) =I. 21，I. 36,I. 67,I. 71，I. 75,I. 94, 2. 03, 2. 07, 2. 22, 2. 25, 3. 68, 4. 05, 5. 71 及 5. 56. 13C-NMR(CDCl3)S (ppm) : 12. 31，16. 1，16. 12, 17. 67, 25. 67, 26. 44, 26. 74, 27. 00, 30.I 0, 40. 27, 43. 34, 59. 22, 60. 59, 71. 8, 120. 97, 123. 84, 124. 30, 131. 32, 134. 61, 135. 92, 138. 05, 160. 45,及 197. 11。
[0083]
[0084] 化合物5 :4-羟基-5-(II-羟基-3, 7, 11-三甲基-2, 6-十二碳二烯）-2,3-二甲 氧基-6-甲基-2-环己烯酮
[0085] 收集在23. 7至24. 0分钟处的分流物，并浓缩成化合物7,淡黄色液体的产物。化 合物7经分析后为4-羟基-2, 3-二甲氧基-5-(11-甲氧基-3, 7, 11-三甲基-2, 6-十二碳 二烯）-6-甲基-2-环己烯酮，具有分子量422 (分子式=C25H42O5)。1H-NMR(CDCl3)S(ppm) =1. 21，1. 36, 1. 71，1. 75, 1. 94, 2. 03, 2. 07, 2. 22, 2. 25, 3. 24, 3. 68, 4. 05, 5. 12, 5. 50，及 5. 61. 13C-NMR(CDCl3)S (ppm) : 12. 31，16. 1，16. 12, 17. 67, 24. 44, 26. 44, 26. 74, 27. 00, 37. 8 1, 39. 81, 40. 27, 43. 34, 49. 00, 59. 22, 60. 59, 120. 97, 123. 84, 124. 30, 135. 92, 138. 05, 160. 45 及 197. 12.
[0086]
[0087] 化合物7 :4_羟基-2, 3-二甲氧基-5-(11-甲氧基-3, 7, 11-三甲基-2, 6-十二碳 二烯）-6_甲基-2-环己烯酮
[0088] 化合物6是化合物1的代谢物，取得自动物实验中喂食化合物1的老鼠的尿液样 本。化合物6经测定为4-羟基-2, 3-二甲氧基6-甲基-5-(3-甲基-2-己烯酸）-2-环己 烯酮，具有分子量312 (分子式：C16H24O6)。化合物4经测定为3, 4-二羟基-2-甲氧基-6-甲 基-5-(3, 7, 11-三甲基-2, 6, 10-十二碳三烯）-2-环己烯酮（分子量376,C23H36O4)，其得 自当化合物1置于高于40°C的条件下达6小时。
[0090] 或者，实例化合物可由4-羟基-2, 3-二甲氧基-6-甲基-2, 5-环己二烯酮或类似 物制得。
[0091]
的其他环己烯酮化合物分离自樟芝或 自适当起始材料以合成或半合成制得。所述技术领域的一般技艺人士可立即地利用适当条 件进行这些合成。
[0092] 实例2 :以化合物1 (4-羟基-2, 3-二甲氧基-6-甲基-5-(3, 7, 11-三甲 基-2, 6, 10-十二碳三烯）-2-环己烯酮）减少脂肪肝状况
[0093] 为模拟人类不健康饮食倾向，例如过度摄取高热量食物，本实例利用喂食高脂肪 饮食的老鼠建构动物模型，从而评估慢性肝脏损伤反应。之后，经由生化测试证实本文所 提供的实例化合物，例如化合物1，4-羟基-2, 3-二甲氧基-6-甲基-5-(3, 7, 11-三甲 基-2, 6, 10-十二碳三烯）-2-环己烯酮（测试化合物）于减少脂肪肝的功效。
[0094] 本测试模拟由高脂肪饮食"代谢症候群"模型所导致的肝脏疾病。即，所述模型不 同于传统以毒性成份例如CCl4，所导致的化学药剂所诱发的模型。本模型有别于由病毒或 酒精所致的模型。
[0095] 长期高脂肪饮食的建构描述如下：首先，自日本CharlesRiver Laboratories(Kanagawa，日本）取得C57BL/6老鼠，将动物饲养在无特异病原菌（SPF)条 件下。将18只雄性老鼠于出生两天后经由皮下注射链球霉素（STZ)从而发展肝脏损伤。四 周后，供应市售高脂肪鼠类饮食由其任食（CLEAJapan)。在进行处理前将老鼠随机分成三 组。测试化合物以10毫升/公斤的体积量投予老鼠，一天两次达三周。对照组（A组）中， 6只老鼠以插管方式喂食载剂（玉米油SigmaChemicalCo.)。B组的6只老鼠则口服投以 载剂及测试化合物，其剂量为48毫克/公斤，一天两次（每天96毫克/公斤）。表一概述 本实验的时间表。
[0096]表一
[0098]本实验的时间表
[0100] 表二概述处理流程
[0101]表二
[0103] 实验分组及喂食的物质及其剂量
[0106] 组织学分析
[0107] (I)HE染色。HE染色法如下所示：将切自肝脏左侧的肝脏切片，包埋于 Tissue-TekK0CT?化合物（SakuraFinetek，日本）中，以液态氮快速冷冻并储存于_80°C 下。切下5微米切片、风干、在丙酮中固定、再次风干，最后以磷酸盐缓冲液（PBS)洗涤。之 后，根据苏木素及曙红染色方法，将肝脏切片在布恩溶液（Bouinsolution)(福尔马林-醋 酸）预先固定达一周，之后以Li11ie-Mayer's苏木素（MutoPureChemicals，日本）及曙 红溶液（Wako,日本）以目视检测脂质沈淀、发炎、细胞坏死及纤维化；或以Masson's三铬 酸溶液染色以目视检测肝脏纤维化发展过程中多余的细胞介质及胶原蛋白纤维。
[0108] (2)天郎星红染色（SiriusRedStaining)。天郎星红染色法如下所示：将切自 肝脏左侧的肝脏切片，包埋于Tissue-TekO0CT?化合物（SakuraFinetek，日本）中，以 液态氮快速冷冻并储存于_80°C下。切下5微米切片、风干、在丙酮中固定、再次风干，最后 以磷酸盐缓冲液（PBS)洗涤。之后，以Picro-SiriusRedSoultion(WaldeckGmbH&KG，德 国）染色肝脏切片从而观察胶原蛋白沈淀。
[0109] (3)第三型胶原蛋白的免疫组织化学分析。第三型胶原蛋白的免疫组织化学分 析法如下所示：将切自肝脏左侧的肝脏切片，包埋于Tissue-TekO0CT?化合物（Sakura Finetek，日本）中，以液态氮快速冷冻并储存于-80°C下。切下5微米切片、风干、在丙 酮中固定、再次风干，最后以磷酸盐缓冲液（PBS)洗涤。为进行第三型胶原蛋白的免疫组 织化学分析，以0. 03%H2O2处理5分钟从而阻止内生性过氧化酵素活性，然后以Block Ace(DainipponSumitomoPharm，日本）培养10分钟。所述切片在抗-第三型胶原蛋白的最 适稀释液中，于4°C下过夜培养。与合适的二级抗体培养后，利用DAB/H202溶液（Nichirei， 日本）进行受质反应。
[0110] 全血及血浆生化分析
[0111] (1)全血葡萄糖
[0112] 以心脏穿刺法收集血液样本于经肝素处理的注射器（Novo-Heparin5, 000单位 /5毫升，MochidaPharmaceutical，日本），置于冰上并以1，000Xg转速在4°C下离心15 分钟。收集上清液并储存于-80°C下待用。在全血样本中利用GChecker(SankoJunyaku Co.Ltd.，日本）测量血糖。
[0113] (2)血浆天门冬胺酸转胺酶（AST)及丙胺酸转胺酶（ALT)
[0114] 血浆AST及ALT的侦测法如下所示：以心脏穿刺法收集血液样本于经肝素处理的 注射器（Novo-Heparin5, 000 单位 /5 毫升，MochidaPharmaceutical，日本），置于冰上并 以1，000Xg转速在4°C下离心15分钟。收集上清液并储存于-80°C下待用。利用FUJIDRY CHEM700(FujiFilm，日本）测量AST及ALT值。
[0115] 非化学性损伤所致的脂肪肝疾病
[0116] 图1至7业已证实萃取自樟芝的本发明实例化合物（化合物1)有效地减少非化 学性损伤所致的脂肪肝疾病。彼等减少是藉由诸如染色、天狼星红染色及胶原蛋白免疫 染色等组织学分析，及进一步以诸如全血葡萄糖、血浆三酸甘油脂、血浆ALT及血浆AST值 等血浆生化标记评估而得。
[0117] HE染色显示在发炎细胞浸润及巨-及微-多孔脂肪沈淀下肝细胞的型态。图 I(A-D)例示A组及B组肝细胞HE染色切片的代表显微照片，其中图I(A)及I(C)是50倍 放大，而图I(B)及I(D)是200倍放大。如图I(A)及I(B)所示，A组（载剂）肝脏切片中 可见发炎细胞浸润、巨-及微-多孔脂肪沈淀、胆管增生及肝细胞膨胀。如图I(C)及I(D) 所示，相较于A组，B组（测试化合物，化合物1)处理后趋向减少发炎细胞浸润，并趋向减 少巨-多孔脂肪沈淀。
[0118] 天郎星红染色是