一种具有二硫键的可降解微胶囊的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于生物制药领域，尤其涉及一种具有二硫键的可降解微胶囊的制备方法，主要用于负载药物以治疗乙肝。
【背景技术】
[0002]乙型肝炎(hepatitis B)是由乙肝病毒(hepatitis B virus, HBV)引起的一种严重传染性疾病，也是导致肝癌的一种重要致病因素，随着医学技术的飞速发展，目前用于治疗乙肝的药物层出不穷，其中，干扰素(interferon，IFN)是一种具有多种功能的活性蛋白质(主要是糖蛋白)但是普通干扰素具有分子量小、半衰期短、系统分布广以及肾脏清除率高等缺点，从而容易产生抗药性和其他毒副作用。因此，如何使用微胶囊包埋干扰素在细胞内部降解释放，从而对其药物组分进行保护进而增加其在细胞内的驻留时间，改变药物代谢动力学特点，缩小体内血药峰谷浓度差，减少不良反应等问题，有待于解决。
【发明内容】
[0003]为了解决上述问题，本发明提供一种具有二硫键的可降解微胶囊的制备方法，目的是针对治疗乙肝的干扰素药物分子量小、半衰期短、系统分布广以及肾脏清除率高等缺点而开发的载体。
[0004]为此采用如下的技术方案，一种具有二硫键的可降解微胶囊的制备方法，其特征在于采取以下步骤:
A)取150~250mL浓度为0.016 mol/L的MnSO4溶液，加入30~50 mL无水乙醇，在常温下用超声l~2min或在400~600 rpm的转速下磁力搅拌4~5min，使混合液混合均勾；
B)以400~600rpm的转速在磁力搅拌下迅速向步骤A)所得混合液中加入150~250 mL浓度为0.16 mol/L的NH4HCO3溶液，持续搅拌l~2min或超声10~20 S，然后静置至生成的所有微粒完全沉淀；
C)将步骤B)所得混合物在3000rpm下离心，弃去上层清液，得到沉淀，用去离子水洗涤沉淀三次，然后将沉淀物分散在去离子水中备用，所述去离子水的用量以浸没沉淀物为准；
D)将50~150mg聚烯丙基胺盐酸盐溶于l~3mL且Ph=12的NaOH溶液中，磁力搅拌下使其完全溶解待用；
E)将3~5mg异硫氰酸荧光素溶于0.1-0.4 mL的二甲基亚砜中待用；
F)将步骤E)所得的溶液逐滴加入到步骤D)所得的溶液中，继续搅拌至混合均匀，避光反应过夜；
G)用CCl4溶液洗脱步骤F)中未反应的异硫氰酸荧光素，将反应后的溶液转移到截留分子量为3.5 KD的透析袋中，间隔24h更换去离子水，一周后，收集溶液，冷冻干燥，得到异硫氰酸荧光素-聚烯丙基胺盐酸盐的交联物，即FITC-PAH，在4-8°C的低温下保存待用；
H)采用层层组装法，以3，3'-二硫代二丙酸为交联剂，制备二硫键共价交联的(FITC-PAH/DPA)5微胶囊，得到核壳结构的胶体微粒；
I)将步骤H)所制得的胶体微粒用0.1M的HCl溶液，通过振荡器轻微振荡离心管以保持粒子悬浮的状态下处理15~30 min，；
J)以1500rpm的速度离心3min，去除上层清液，加入去离子水，用振荡器震荡分散5min ;重复上述离心清洗步骤3-5次后，得到组成为(FITC-PAH/DPA) 5的微胶囊。
[0005]该方法使用原料为聚烯丙基胺盐酸盐(PAH)、盐酸(HC1)、异硫氰酸荧光素(FITC)、二甲基亚砜(DMS0)、一水合硫酸锰(MnSO4.H2O)、碳酸氢铵(NH4HCO3)、3，3' -二硫代二丙酸(3，3' -Dith1diprop1nic acid，DPA)。制备过程操作简单方便，由于二硫键的结构特点使得微囊具有良好的可降解性，并且模板易去除，方便负载药物，并且产品具有很好的生物相容性以及对环境友好等的特点。
[0006]本发明以MnCO3微粒为模板，3，3' - 二硫代二丙酸(DPA)为交联剂，采用层层组装法制备了二硫键共价交联的(FITC-PAH/DPA) 5微胶囊，这样制得的微胶囊不仅能够在外部环境下保持稳定状态，而且能够在细胞内部定向释放药物，从而对其药物组分进行保护进而增加其在细胞内的驻留时间，改变药物代谢动力学特点，缩小体内血药峰谷浓度差，减少不良反应并且制备方法简单，原料便宜，适合批量生产。
【具体实施方式】
[0007]实施例1:采取以下步骤:
A)取150mL浓度为0.016 mol/L的MnSO4溶液，加入30 mL无水乙醇，在常温下用超声Imin或在400 rpm的转速下磁力搅拌5min，使混合液混合均勾；
B)以400rpm的转速在磁力搅拌下迅速向步骤A)所得混合液中加入150mL浓度为0.16 mol/L的NH4HCO3溶液，持续搅拌2min或超声20 S，然后静置至生成的所有微粒完全沉淀；
C)将步骤B)所得混合物在3000rpm下离心，弃去上层清液，得到沉淀，用去离子水洗涤沉淀三次，然后将沉淀物分散在去离子水中备用，所述去离子水的用量以浸没沉淀物为准；
D)将50mg聚烯丙基胺盐酸盐溶于ImL且Ph=12的NaOH溶液中，磁力搅拌下使其完全溶解待用；
E)将3mg异硫氰酸荧光素溶于0.1mL的二甲基亚砜中待用；
F)将步骤E)所得的溶液逐滴加入到步骤D)所得的溶液中，继续搅拌至混合均匀，避光反应过夜；
G)用CCl4溶液洗脱步骤F)中未反应的异硫氰酸荧光素，将反应后的溶液转移到截留分子量为3.5 KD的透析袋中，间隔24h更换去离子水，一周后，收集溶液，冷冻干燥，得到异硫氰酸荧光素-聚烯丙基胺盐酸盐的交联物，即FITC-PAH，在4-8°C的低温下保存待用；
H)采用层层组装法，以3，3'-二硫代二丙酸为交联剂，制备二硫键共价交联的(FITC-PAH/DPA)5微胶囊，得到核壳结构的胶体微粒；
I)将步骤H)所制得的胶体微粒用0.1M的HCl溶液，通过振荡器轻微振荡离心管以保持粒子悬浮的状态下处理15min，；
J)以1500rpm的速度离心3min，去除上层清液，加入去离子水，用振荡器震荡分散5min ;重复上述离心清洗步骤3次后，得到组成为(FITC-PAH/DPA) 5的微胶囊。
[0008]实施例2:采取以下步骤:
A)取200mL浓度为0.016 mol/L的MnSO4溶液，加入40 mL无水乙醇，在常温下用超声1.5min或在500 rpm的转速下磁力搅拌4.5min，使混合液混合均勾；
B)以500rpm的转速在磁力搅拌下迅速向步骤A)所得混合液中加入200 mL浓度为0.16