r>[0081] 操作步骤如下：
[0082]
[0083] S0D活力计算公式为：
[0084]
[0085] 11、统计学方法。
[0086] 应用SPSS统计软件对实验数据进行分析，结果以均数土标准差（$ )表示，各 组之间差异性采用方差分析，组间比较采用LSD法，p〈0. 05表示有显著性差异，p〈0. 01为极 显著差异。
[0087]二、结果。
[0088] (一）行为学结果。
[0089] 各组大鼠造模中均未见肢体运动障碍和自残现象。造模前测定各组间机械缩足反 射阈值及热缩足反射潜伏期的基础值差异无显著性（P>〇. 05,F3,2S= 2. 15)。
[0090] 1、机械痛敏（MWT)测定结果。
[0091] 在给予糖尿病饮食4周后，糖尿病模型大鼠的机械缩足反射阈值开始降低，但与 对照组相比其降低无统计学意义（P>〇. 05,F3,2S= 2. 67);给予STZ腹腔注射后2周，糖尿 病模型大鼠的机械缩足反射阈值明显降低，与对照组相比具有显著性差异（P〈〇. 01，F3i2S= 21. 87);糖尿病模型大鼠给予长非编码核糖核酸N0NRATT021972小干扰核糖核酸处理后， 机械缩足反射阈值明显增加，与对照相比其差异无统计学意义（P>〇. 〇5，FM4= 1. 67)，而与 糖尿病模型组相比有显著性差异（?〈〇.〇1，匕14= 13.54);而模型+乱序小干扰处理组的与 对照组之间相比有显著性差异（P〈〇. 〇1，匕14= 15. 36)，但与糖尿病模型组相比其差异无统 计学意义（Ρ>〇· 05,Flil4= 2. 96)(见图 1)。
[0092] 2、热痛敏（TWL)测定结果。
[0093] 在给予糖尿病饮食4周后，糖尿病模型大鼠的热缩足反射阈值开始降低，但与对 照组相比其降低无统计学意义（P>〇. 05,F3,2S= 1. 54);给以STZ腹腔注射后2周，糖尿病 模型大鼠组的热缩足反射阈值明显降低，与对照组相比具有显著性差异（P〈〇. 01，F3i2S = 13. 32);糖尿病模型大鼠给予长非编码核糖核酸N0NRATT021972小干扰核糖核酸处理后， 热缩足反射阈值明显增加，与对照组相比其差异无统计学意义（P>〇. 〇5，FM4= 2. 71)，与糖 尿病模型大鼠组相比有显著性差异（p〈〇.〇l，Fl，14= 12.36);而给以模型+乱序小干扰处理 组的与对照组之间相比有显著性差异（P〈〇. 01，FU14= 10.. 76)，但与糖尿病模型组相比其 差异无统计学意义（P>〇. 05,Flil4= 2. 36)(见图2)。
[0094](二）尾神经感觉传导速度结果。
[0095] 在给以糖尿病饮食4周后，糖尿病模型大鼠的尾神经感觉传导速度与对照组相比 无显著性差异（P>〇.〇5,F3,2S= 1.89);给以STZ腹腔注射后2周，糖尿病模型大鼠的尾神 经传导速度明显降低，与对照组相比具有显著性差异（P〈〇. 01，F3,2S= 21.37);糖尿病模型 大鼠给予长非编码核糖核酸N0NRATT021972RNA小干扰RNA处理后，尾神经传导速度与对 照相比其差异没有统计学意义（P>〇. 05,匕14= 1.44)，与糖尿病模型组相比有显著性差异 (p〈0. 01，匕14= 32. 56);而给以模型+乱序小干扰处理组的与对照组之间相比有显著性差 异（p〈0. 01，Flil4= 26. 57)，但与糖尿病模型组相比其差异无统计学意义（p>0. 05,F1ι14= 1. 16)(见图 3)。
[0096](三）逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR)。
[0097]RT-PCR检测长非编码核糖核酸N0NRATT021972表达。
[0098] 采用凝胶成像系统软件分析长非编码核糖核酸N0NRATT021972的RT-PCR结果表 明：糖尿病模型组背根神经节（DRG)中长非编码核糖核酸N0NRATT021972表达水平较对照 组明显增加（P〈〇. 〇l，Flils= 34. 35)，糖尿病模型+长非编码核糖核酸N0NRATT021972小干 扰核糖核酸组与对照组之间差异无统计学意义（P>〇. 05,匕18= 2. 98)，而与糖尿病模型组 之间差异有统计学意义（P〈〇. 01，Flils= 43. 21)。糖尿病模型+乱序小干扰处理组长非编 码核糖核酸N0NRATT021972的表达高于对照组（p〈0. 01，Flils= 15. 71)，而与糖尿病模型组 之间无显著性差异（P>〇. 05,Flils= 3. 28)(见图4)。
[0099](四）酶联免疫吸附剂测定（ELISA)检测大鼠血清TNF-α。
[0100] 根据试剂盒标准品的浓度梯度：500pg/ml、250pg/ml、125pg/ml、62. 5pg/ml、 31.25pg/ml、15.625pg/ml、7.8125pg/ml的lg值和其测定的0D值作标准曲线作图，由软 件进行分析得出回归方程式Y= 〇. 259Lg(X) - 0. 315,R2= 0. 962 (Y表示样品TNF-a的 0D值，X表示样品浓度），将Y值带入，得出各组血清TNF-a:糖尿病模型组的TNF-a浓 度明显比对照组增高（p〈〇. 01，FU14= 22.98);而糖尿病模型大鼠给予长非编码核糖核酸 N0NRATT021972小干扰核糖核酸处理后，TNF-a浓度比糖尿病模型组明显降低（p〈〇. 01， 14= 45. 34)，与对照组之间无显著性差异（p>0. 05,F114= 2. 98);糖尿病模型+乱序小干 扰处理组的TNF-a浓度与糖尿病模型组之间无显著差异（p>〇. 05^114= 2. 53)(见图5)。
[0101] (五）氧化应激测定结果。
[0102] 1、过氧化氢酶活性测定结果。
[0103] 结果分析表明，糖尿病模型组过氧化氢酶的活性较对照组明显降低，有统计学意 义（p〈0. 01，Flil4= 26. 76);糖尿病模型+长非编码核糖核酸N0NRATT021972小干扰核糖核 酸组与糖尿病模型组之间差异有显著性意义（P〈〇. 〇1，匕14= 13, 46)，而与对照组之间差异 无统计学意义（P>〇. 05,Flil4= 2. 97)，糖尿病模型+乱序小干扰处理组与糖尿病模型组相 比其差异无统计学意义（P>〇. 05,Flil4= 1. 84)(见图6)。
[0104]2、超氧化物歧化酶活性测定结果。
[0105] 结果分析表明，糖尿病模型组和糖尿病模型+乱序小干扰处理组过超氧化物歧 化酶的活性较对照组明显降低（P〈〇. 01，FU14= 57. 88)，糖尿病模型+长非编码核糖核酸 N0NRATT021972小干扰核糖核酸组与糖尿病模型组之间差异有显著性意义（p〈0. 01，F1i14= 21. 33)，而与对照组之间差异无统计学意义（p>0. 05^114= 3. 01)，糖尿病模型+乱序小干 扰处理组与糖尿病模型组相比其差异无统计学意义（p>〇. 05,匕14= 2. 66)(见图7)。
[0106] 发明人研究发现在注射长非编码核糖核酸N0NRATT021972的小干扰核糖核酸 后，2型糖尿病模型组DRG中长非编码核糖核酸N0NRATT021972的表达降低，同时观察 到在注射干扰试剂后糖尿病大鼠的机械痛和热敏痛阈值升高，且尾神经感觉传导速度增 加，表明长非编码核糖核酸N0NRATT021972小干扰RNA可对神经组织长非编码核糖核酸 N0NRATT021972功能异常及并发疾病产生作用，改善神经的损伤现象。长非编码核糖核酸 N0NRATT021972的小干扰核糖核酸处理后同时可下调降低糖尿病大鼠血清中细胞炎性因 子一肿瘤坏死因子（TNF-a)的含量，增加糖尿病大鼠血清中过氧化氢酶（CAT)和超氧化物 歧化酶（S0D)的活性。因此，长非编码核糖核酸N0NRATT021972小干扰RNA具有对神经组 织长非编码核糖核酸N0NRATT021972功能异常及并发疾病的改善作用。
【主权项】
1. 长非编码核糖核酸N0NRATT021972小干扰RNA在制备神经组织N0NRATT021972功能 异常及相关疾病药物中的应用。2. 长非编码核糖核酸N0NRATT021972小干扰RNA以口服、注射、含片或其它局部或全身 用药剂型药物进行上述疾病的诊断、预防和治疗。
【专利摘要】长非编码核糖核酸NONRATT021972小干扰RNA在制备神经组织NONRATT021972功能异常及相关疾病药物中的应用。实验观察到长非编码核糖核酸NONRATT021972小干扰核糖核酸可抑制2型糖尿病大鼠的痛觉行为反应，改变神经传导速度，降低糖尿病大鼠血清中细胞炎性因子—肿瘤坏死因子(TNF-α)的含量，增加糖尿病大鼠血清中过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性。表明长非编码核糖核酸NONRATT021972小干扰RNA在对神经组织NONRATT021972功能异常及并发疾病中具有作用，可在其诊断、预防和治疗的药物、试剂、制剂中应用。
【IPC分类】A61K48/00, A61P25/00, A61K31/713
【公开号】CN105251018
【申请号】CN201510505334
【发明人】梁尚栋, 彭海英, 涂桂花, 李桂林, 刘双梅, 徐宏, 高云, 徐昌水, 林加日, 虞诗诚, 樊波
【申请人】南昌大学
【公开日】2016年1月20日
【申请日】2015年8月17日