0054] 7. 2唾液量测定：灌胃2周后将无菌的脱脂棉球制成干重为5mg的棉球，放入小鼠 的后颊部，5min后取出，电子天平上称重。唾液分泌量（mg)=棉球湿重-棉球干重。
[0055] 7. 3小鼠唾液腺T细胞亚群含量：小鼠眼眶取抗凝血2mL，取20 μ L⑶4/⑶8FITC/ PE标记抗体加入流式管底部，取100 μ L EDTA抗凝的小鼠外周血加入5mL流式管底部并轻 轻振摇，使其与抗体充分混匀，室温避光孵育20~30min，加入2mL红细胞裂解液，混匀后避 光放置lOmin，溶解红细胞至液体透亮。将样品管以1000 r ·η?η 1离心5min，充分倒去上清 液，加入2mL PBS洗液重悬细胞，1000 r · min 1离心5min，弃去上清液；加入适量标记二抗， 室温避光孵育20min ;加入2mLPBS洗液重悬细胞以1000 r · min 1离心5min，弃上清液；加 入0. 5mL PBS洗液重悬细胞，流式细胞仪检测。
[0056] 8.统计学方法：采用SPSS 15. 0软件进行统计分析。计量资料以X土s表示，采 用t检验，方差不齐用秩和检验，等级资料间比较采用秩和检验，计数资料用X 2检验，以 P〈0. 05为差异有统计学意义。
[0057] 9.结果
[0058] 9. 1各组小鼠饮水量比较：各组小鼠饮水量在造模初期无差别，抗原注射后12d小 鼠饮水量显著增加，模型对照组小鼠饮水量逐渐上升直到实验结束，而枸橼酸托法替布各 剂量组和醋酸泼尼松组小鼠饮水量在一定程度上降低，并维持在一定水平。见表1。
[0059] 9. 2各组小鼠唾液流量变化比较：造模2周后，与空白对照组比较，模型对照组小 鼠唾液流量明显减少（P〈〇. 01)。各给药组与模型对照组比较，均能不同程度增加小鼠唾液 流量（P〈0. 01或P〈0. 05);以枸橼酸托法替布中、高剂量组，醋酸泼尼松组作用较明显，枸橼 酸托法替布低剂量组作用较弱。见表2。
[0060] 表1各组小鼠饮水量对比mL
[0061]
[0062] 表2各组小鼠唾液流量变化比较mg，
[0065] 注：与空白对照组比较，I) P < 0. 01 ;与模型对照组比较，2) P < 0. 01，3) P < 0. 05。
[0066] 实施例3案例
[0067] 选取干燥综合症患者56例。其中女50例，男6例，平均（35± 12)岁。病程6个 月至45个月。诊断标准按照干燥综合症国际分类（诊断）标准（ARA，1993年）。
[0068] 3. 1服药方法
[0069] 采用开放性试验，不设置对照组。枸橼酸托法替布5mg，每日1次口服，连用36周。
[0070] 3. 2观察指标
[0071] 服药前、服药后12、24和36周检测血沉（ESR)、血常规、尿常规、类风湿因子、肝功 能、肾功能、免疫球蛋白（IgG、IgM、IgA)、唾液腺ECT、Schirmer试验、血清蛋白电泳及进行 IOcm目视模拟标尺法分别测定医生和病人对病情程度的评估。试验期间禁用二线抗风湿药 物及糖皮质激素、雷公滕多甙等药物。
[0072] 3. 3疗效评价
[0073] 分为显效、有效和无效3级，血沉、唾液腺ECT、Schirmer试验、免疫球蛋白和γ球 蛋白各项进步50%者定为有效，5项中4项有效者，疗效定为显效。5项中3项有效者，疗效 定为有效。5项中不足3项有效者，疗效定为无效。
[0074] 3. 4不良反应及耐受性评价：记录试验过程中每一个受试者出现的不良反应，0为 无不良反应：1为轻度不良反应，未影响日常生活和工作；2为中度不良反应，影响日常生活 和工作；3为重度不良反应，必须停药。
[0075] 3. 5统计学方法
[0076] 所有数据以；士s表示，采用SPSS10. 0统计分析软件进行数据分析计算，两组间差 异显著性检验采用两独立样本的t检验。以P < 0. 05为显著性。
[0077] 3. 6 结果
[0078] 3. 6. 1枸橼酸托法替布治疗干燥综合症疗效观察
[0079] 表1枸橼酸托法替布治疗干燥综合症疗效观察（％ )
[0081 ] 3. 6. 2托法替布对干燥综合症患者免疫指标的影响
[0082]
[0083] 注：+与治疗前比较差异有显著性，P < 0. 05
[0084] 3. 6. 3枸橡酸托法替布对于干燥综合症患者唾液腺ECT、Schirmer试验的影响
[0085] 结果以同位素汇报结果为准，Schirmer试验< IOmm为异常。结果发现唾液腺ECT 在治疗 12 周 5. 3 % (3/56)、24 周 14.3% (8/56)、36 周 17.9% (10/56)与治疗前（0/56)比 较差异无显著性，P > 0.05 ;Schirmer试验在治疗12周1.8% (1/56)、24周5. 3% (3/56)、 36周8.9% (5/56)与治疗前（0/56)比较无显著差异性，P > 0.05 ;但是随着服药时间延 长，唾液分泌、泪液分泌改善的患者例数呈增加趋势。
[0086] 3. 6. 4不良反应及耐受性的评价
[0087] 实验过程中不良反应发生在治疗12周内，且程度为轻度，不良反应发生率为 12.5% (7/56)，主要为腹部不适、腹痛、大便次数增多，未经处理继续服药过程中小时。实验 中未发现枸橼酸托法替布对白细胞、血小板、血红蛋白、肝功能、肾功能有明显影响。
[0088] 因此，本实验通过开放性临床实验研究观察枸橼酸托法替布治疗56例干燥综合 症患者临床疗效，发现服用枸橼酸托法替布12周后明显改善了患者临床症状、体征及免疫 指标，特别是血沉以及γ球蛋白值，可能与其抗炎作用有关。
[0089] 以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明做任何形式上的限制，凡是依 据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化，均落入本发明的保护 范围之内。
【主权项】
1. 枸橼酸托法替布及其药用组合物在制备治疗干燥综合症的药物中的应用。2. 如权利要求1所述的枸橼酸托法替布及其药用组合物在制备治疗干燥综合症的药 物中的应用，其特征在于，所述药用组合物经由如下给药途径给药：静脉内、肌肉、口服，皮 肤、滴眼或其组合。3. 如权利要求2所述的枸橼酸托法替布及其药用组合物在制备治疗干燥综合症的药 物中的应用，其特征在于，所述药用组合物口服剂量为：含lmg~20mg托法替布/天。4. 如权利要求2所述的枸橼酸托法替布及其药用组合物在制备治疗干燥综合症的药 物中的应用，其特征在于，所述药用组合物口服剂量为：含3~10mg托法替布/天。5. 如权利要求2所述的枸橼酸托法替布及其药用组合物在制备治疗干燥综合症的药 物中的应用，其特征在于，所述药用组合物口服剂量为：含3~5mg托法替布/天。6. 如权利要求2所述的枸橼酸托法替布及其药用组合物在制备治疗干燥综合症的药 物中的应用，其特征在于，所述药用组合物口服剂量为：含3mg托法替布/天。7. 如权利要求1-6任意一项所述的枸橼酸托法替布及其药用组合物在制备治疗干燥 综合症的药物中的应用，其特征在于，该药用组合物含有任选的药学上可接受形式的托法 替布、和/或任选的药学上可接受的载体或赋形剂。8. 如权利要求1-6任意一项所述的枸橼酸托法替布及其药用组合物在制备治疗干燥 综合症的药物中的应用，其特征在于，该药用组合物含有lmg~20mg托法替布、和/或任选 的药学上可接受的载体或赋形剂。9. 如权利要求1-6任意一项所述的枸橼酸托法替布及其药用组合物在制备治疗干燥 综合症的药物中的应用，其特征在于，所述药物组合物用于制备外分泌功能障碍相关的疾 病治疗的药物。10. 如权利要求1-6任意一项所述的枸橼酸托法替布及其药用组合物在制备治疗干燥 综合症的药物中的应用，其特征在于，所述药用组合物用于治疗至少一种选自以下病症的 药物：包括眼泪分泌减少，干眼综合症，唾液分泌减少，和眼、口干燥综合症。
【专利摘要】本发明公开了枸橼酸托法替布及其药用组合物在制备治疗干燥综合症的药物中的应用，该药用组合物含有枸橼酸托法替布、和/或任选的药学上可接受的载体或赋形剂。本发明药用组合物明显改善口眼干燥的症状。
【IPC分类】A61K31/519, A61P37/02
【公开号】CN105326844
【申请号】CN201510851812
【发明人】徐旭峰, 陈旦凤, 陈斌, 孙卓亚, 胡艳嫔, 张旭
【申请人】宁波立华制药有限公司
【公开日】2016年2月17日
【申请日】2015年11月30日