0. 33、69.90、68.40、66.61、64. 54ppm为甘露糖环其它碳信号； 5 60. 79、38.Slppm为连接臂-0-邸2-和-CHz-NH-亚甲基碳信号。运些新增信号表明甘露 糖基团与MM连接。中间体PM-M-NDTPA的"CNMR谱与PM-M相比，5 130. 00、122. 17ppm为 1-(P-氨基苄基）-DTPA上苯环的碳信号峰；5 57. 45-54. 3化pm峰为1-(P-氨基苄基）-DTPA 上-CO-CHz-和-CH2-NH2亚甲基碳的特征峰。
[0117] 健康的新西兰大白兔1只，体重为3. 3kg。用氯胺酬（80mg/kg、l.6ml)及地西泮 巧mg/kg、lml)肌肉注射麻醉新西兰大白兔。将其固定在兔手术台上，进行MRI平扫。相 应参数：3DFastTOF-SPGRCE-MRA序列扫描，FlipAngle30。，TE1.6ms,TR4. 5ms,视 野280X280mm，矩阵360X224,层厚I. 0mm，si址70,肥X2。然后使用实施例4中合成的 PM-M-GdNDTPA与HA-DTPA-Gd生理盐水溶液，分别于新西兰兔左、右后肢一、二、S趾樸皮下 注射，每次0.Iml，礼浓度为0. 03mmol/ml。注射显影剂后，5. 5h内每隔15-60min扫描一次， 共扫描10次。 阳1化]实施例4PM-M-GdNDTPA与HA-DTPA-Gd新西兰兔淋己MR造影对比实验结果如图12 所示，图中A:注射造影剂前下肢MR平扫图像；B:注射造影剂15min后下肢MR图像；C:注 射造影剂120min后下肢MR图像；D:注射造影剂4.化后下肢MR图像；R:右侧；L:左侧。 [0119]注射造影剂PM-M-GdNDTPA15min后双侧淋己管和淋己结信号迅速强化；S根一 级淋己管显影清晰，交汇于順窝淋己结；二级淋己管同样显影清晰，由淋己结向腹腔延伸。 注射造影剂120min后，注射HA-DTPA-Gd的右侧淋己结和淋己管信号强明显弱化，而注射 PM-M-GdNDTPA的左侧淋己结和一、二级淋己管仍保持清晰显影。扫描时间延长到4.化后， 左侧淋己结MR图像仍清晰可辨，右侧淋己结已经无显影。 阳120] 信号强化-时间曲线（图13)中，注射PM-M-GdNDTPA的左侧淋己结与注射HA-DTPA-Gd的右侧淋己结同样出现了两个MR信号强化峰，分别出现在15min和120min左 右。15min时两侧淋己结MR信号强化峰值均为4左右，而处于120min的淋己结MR信号强 化峰，左侧淋己结的信号强化率明显高于右侧淋己结，峰值是右侧的3倍左右。在此后3. 5 小时内，左侧淋己结信号强化率降低缓慢，到达5. 5小时时仍有2. 66的信号强化率；右侧淋 己结在4. 5小时后已无强化。证明本发明造影剂PM-M-GdNDTPA优秀的显影能力和长的淋 己组织驻留时间 阳12U 健康的新西兰大白兔1只，体重为3. 34kg。用氯胺酬（80mg/kg、l. 6ml)及地西泮 巧mg/kg、lml)肌肉注射麻醉新西兰大白兔。将其固定在兔手术台上，进行MRI平扫。相 应参数：3DFastTOF-SPGRCE-MRA序列扫描，FlipAngle30。，TE1.6ms,TR4. 5ms,视 野280X280mm，矩阵360X224,层厚I. 0mm，si址70,肥X2。然后使用实施例4中合成的 PM-M-GdNDTPA与PM-GdNDTPA生理盐水溶液，分别于新西兰兔左、右后肢一、二、S趾樸皮下 注射，每次0.Iml，礼浓度为0. 03mmol/ml。注射显影剂后，5. 5h内每隔15-60min扫描一次， 共扫描10次。
[0122] MR结果（图14)显示，在注射造影剂120min后双侧淋己管和淋己结显影清晰；S 根一级淋己管上行后交汇于順窝淋己结，二级淋己管同样显影清晰，由淋己结向腹腔延伸。 Tl加权序列的矢状位层面可观察到淋己结和一二级淋己管的清晰轮廓。PM-M-GdNDTPA显 影效果和时长优于PM-GdNDTPA,证明造影剂中引入甘露糖片段可明显提高造影剂的淋己驻 留能力，是基于甘露糖受体结合策略的成功应用。
[0123] 信号强化-时间曲线（图15)同样证明甘露糖片段提高了造影剂主动祀向淋己组 织的能力，两侧信号强化曲线均出现了两个MR信号强化峰，分别出现在30min和120min左 右进射PM-GdNDTPA的右侧淋己结信号强化率低于注射PM-M-GdNDTPA的左侧。双侧淋己 结信号强化持续时间均超过了地。
[0124] 实施例1-4所合成的大分子造影剂经皮下注射后淋己管和淋己结均能清晰显影， 达到了淋己结和淋己管的清晰绘图和精确定位。与对照品透明质酸为载体的HA-DTPA-Gd 相比，注射该型造影剂的动物体一侧淋己结信号强化率和强化时间均显著增强。而与此 同时，PM-GdNDTPA和PM-M-GdNDTPA在淋己结中的含量显著升高，维持淋己结高信号强 化巧〉2)时间化W上，表明二者比专利CN101862461.B公开的透明质酸为载体的造影剂 HA-DTPA-Gd具有更好的淋己结驻留能力。另外，PM-M-GdNDTPA的载药量在只有PM-GdNDTPA 1/2-1/3水平下仍保持了同PM-GdNDTPA相近的淋己结强化率及强化时间，表明甘露糖基修 饰的聚甘露糖醒酸具有优异的淋己祀向性。
[01巧]本发明所述的W褐藻多糖为载体的大分子MR造影剂表现出显著的淋己滞留水平 差异，原因可能为淋己组织中的甘露糖受体（MB巧对聚甘露糖醒酸（PM)和甘露糖配体的识 别及结合力不同。运一结果符合本论文基于MBP结合策略合成主动祀向性造影剂的设计初 衷。综上，本发明所制备核磁共振造影剂具有更强的淋己组织驻留能力和更长时间、更清晰 的淋己组织显影，对淋己系统疾病的检查、诊断方面有着巨大的临床应用潜力。
【主权项】
1. 一种褐藻多糖为载体的淋巴靶向性磁共振造影剂，其具有以下结构：以褐藻多糖为 载体，其6位羧基通过烷基、芳基或杂环基团为连接臂，分别与甘露糖受体MBP识别基团配 体A以及顺磁性金属螯合物配体B结合，具有以下通式：其中：叫是整数、η 2和η 3是正整数；X为0、N或S ;linker为烷基、芳香基或杂环基；配 体A为甘露糖受体MBP识别基团；配体B为顺磁性金属螯合物。2. 根据权利要求1所述的褐藻多糖为载体的淋巴靶向性磁共振造影剂，其特征在于， 所述的配体A的摩尔含量占所述的褐藻多糖原有羧基的0-40 %，配体B的摩尔含量占所述 的褐藻多糖原有羧基的1-60%，其中配体A的摩尔含量，配体B的摩尔含量以及褐藻多糖原 有羧基中未反应羧基的摩尔含量总和为100%。3. 根据权利要求1所述的褐藻多糖为载体的淋巴靶向性磁共振造影剂，其特征在于， 所述的褐藻多糖载体为聚甘露糖醛酸PM或聚古罗糖醛酸PG，并包括其相应的羧酸盐形式， 分子量为l〇〇-l〇 sDa。4. 根据权利要求1所述的褐藻多糖为载体的淋巴靶向性磁共振造影剂，其特征在于， 与多糖6位羧基通过酰胺键结合的Linker为原子数目1到20的烷基、芳香基或杂环基结 构，再与甘露糖受体MBP识别基团配体A或者顺磁性金属螯合物配体B结合。5. 根据权利要求1所述的褐藻多糖为载体的淋巴靶向性磁共振造影剂，其特征在于， 所述褐藻多糖的糖醛酸环羧基还以酰胺键连接有甘露糖受体MBP识别基团配体A，为α或 β构型的甘露糖及其衍生物，具体结构如下：其中R可以为烃基、羧基、氨基、羟基、卤素。6. 根据权利要求1所述的褐藻多糖为载体的淋巴靶向性磁共振造影剂，其特征在于， 所述顺磁性金属螯合物配体B由金属螯合剂与顺磁性金属离子螯合而成，金属螯合剂为含 氨基的金属螯合剂，结构如下：或金属螯合剂为不含氨基的金属螯合剂，结构如下：所用顺磁性金属离子为Gd、Mn、Cr、Fe、Co、Ni、La、Tc、Dy或Cu的二价或三价离子。7.-种制备褐藻多糖为载体的淋巴靶向性显影剂的方法，其特征在于，它包括以下步 骤： 第一步：将褐藻多糖和酰化试剂溶解于溶剂中，随后加入甘露糖或加入甘露糖衍生物 搅拌反应l-24h，反应完毕，淬灭反应，溶液经透析袋透析，除去小分子杂质，使用冷冻干燥 法处理得到中间体，甘露糖或甘露糖衍生物、酰化试剂、褐藻多糖所有羧基三者的投料摩尔 比值为 0-0· 999 :0· 001-1 :1 ; 第二步：将上步所述中间体和酰化试剂溶解于去离子水中，加入带氨基基团的金属螯 合剂搅拌反应l_24h，反应完毕淬灭反应，淬灭反应，向其加入金属离子的水溶液，经透析、 冷冻干燥处理后得到最终产品，所述金属螯合剂、酰化试剂、金属离子与褐藻多糖所有羧基 的投料摩尔比值为 〇· 001-100 :〇· 001-100 :〇· 001-100 :1。8. 根据权利要求7所述的制备褐藻多糖为载体的淋巴靶向性显影剂的方法，其特征在 于，两步酰化反应的溶剂为水或DMSO、DMF极性非质子溶剂，反应温度在0至150°C之间。9. 一种制备褐藻多糖为载体的淋巴靶向性显影剂的方法，其特征在于，以采取以下步 骤： 第一步：将褐藻多糖和酰化试剂溶解于溶剂中，随后依次加入烷基二胺类化合物、甘露 糖或甘露糖衍生物搅拌反应l_24h，反应完毕，淬灭反应，溶液经透析后使用冷冻干燥法处 理制得中间体，所述甘露糖或甘露糖衍生物、烷基二胺类化合物、酰化试剂与褐藻多糖所有 羧基的投料摩尔比值为 〇· 001-0. 999 :0· 001-100 :0· 001-100 :1 ; 第二步：将所述中间体和酰化试剂再次溶解于溶剂中，加入金属螯合剂搅拌反应 l-24h ;反应完毕，淬灭反应，向其加入金属离子的水溶液，经透析、冷冻干燥后得到最终产 品，金属螯合剂、酰化试剂、金属离子与褐藻多糖所有羧基的投料摩尔比值为0.001-100: 0.001-100 :0.001-100 :1。10. 权利要求1中所述的造影剂用于制备诊断淋巴系统疾病的试剂中的应用。
【专利摘要】本发明涉及医药学造影剂，特别涉及褐藻多糖为载体的淋巴靶向性造影剂及其制备方法和应用，以褐藻多糖为载体、甘露糖或甘露糖衍生物作为甘露糖受体（MBP）识别基团、顺磁性金属离子螯合物作为核磁共振造影基团制备了水溶性良好的大分子造影剂，提高了淋巴组织结合力，所合成的造影剂分子中引入的甘露糖或者甘露糖衍生物基团达到了与淋巴组织中富集的甘露糖受体结合的目的。同时，本发明造影剂经皮下注射后，淋巴管和淋巴结在核磁共振仪器扫描下均清晰显影，注射该造影剂的动物体一侧淋巴结信号强化率和强化时间显著增强，实现了淋巴结和淋巴管的清晰绘图和精确定位，对淋巴系统疾病的检查、诊断有着巨大意义。
【IPC分类】A61K49/18, A61K49/12
【公开号】CN105343900
【申请号】CN201510588832
【发明人】江涛, 万升标, 尚伟, 张南, 赵洺良
【申请人】中国海洋大学
【公开日】2016年2月24日
【申请日】2015年9月16日